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人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞O_2^-和H_2_O_2损伤的保护作用 被引量：30
1
作者 李天威 孔乐凯 +1 位作者 熊文 杨翰仪 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1998年第2期130-132,共3页
目的：研究人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞自由基损伤的保护作用。方法：应用O-2和H2O2对培养大鼠皮层神经细胞损伤模型。结果：与损伤组比较，人参皂甙保护组的乳酸脱氢酶（LDH）释放量显著减少（P<0．01）；而细胞存活率显著增高... 目的：研究人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞自由基损伤的保护作用。方法：应用O-2和H2O2对培养大鼠皮层神经细胞损伤模型。结果：与损伤组比较，人参皂甙保护组的乳酸脱氢酶（LDH）释放量显著减少（P<0．01）；而细胞存活率显著增高（P＜0．01）。结论：人参皂甙能保护培养大鼠皮层神经细胞少受自由基损伤。 展开更多
关键词 人参皂甙 神经细胞培养 自由基 实验药理
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氧自由基对CAT、SOD和GPX的氧化修饰研究 被引量：26
2
作者 姜招峰 杨翰仪 《北京联合大学学报》 CAS 2003年第3期12-17,共6页
　以氧自由基产生系统作用于CAT、SOD和GPX,探索氧自由基的氧化修饰对CAT、SOD和GPX结构与功能的影响。结果:CAT被氧自由基氧化修饰后,改变了酶蛋白二级结构(α-螺旋百分含量减少)、空间构象(ΔCp减少,分子粒晶直径增大)、辅基Fe(Ⅲ)微... 　以氧自由基产生系统作用于CAT、SOD和GPX,探索氧自由基的氧化修饰对CAT、SOD和GPX结构与功能的影响。结果:CAT被氧自由基氧化修饰后,改变了酶蛋白二级结构(α-螺旋百分含量减少)、空间构象(ΔCp减少,分子粒晶直径增大)、辅基Fe(Ⅲ)微环境及酶、底物的亲和力和催化活性。过氧化氢 羟自由基系统可以使SOD酶蛋白氨基酸残基氧化产生羰基,并使SOD活性降低。过氧化氢 羟自由基可在His对SOD作用背景上更为严重地损伤SOD(活性降低幅度更大)。氧自由基对GPX有损伤作用:氧自由基可使GPX酶蛋白氨基酸残基氧化产生羰基,并可使GPX酶蛋白二级结构发生变化(α-螺旋百分含量减少),这些可能是使GPX活性下降的原因。结果提示:氧自由基的氧化修饰,可对抗氧化酶CAT、SOD和GPX造成损伤。氧自由基使酶蛋白结构和辅基的微环境与价态发生变化,可能是酶活性降低的原因。 展开更多
关键词 氧自由基损伤 CAT SOD GPX 氧化修饰 活性 酶 羰基 病理过程
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海马及皮层的氧自由基损伤与大鼠学习能力和记忆能力的关系 被引量：12
3
作者 姜招峰 周翔 杨翰仪 《中国行为医学科学》 CAS CSCD 2001年第4期286-288,共3页
目的　探讨海马及皮层的氧自由基损伤与大鼠学习能力和记忆能力的关系。方法　分别制备海马和皮层氧自由基损伤的大鼠模型 ,采用条件性回避反应法分析海马损伤模型和皮层损伤模型的学习能力改变和记忆能力改变的差异。结果　皮层损伤模... 目的　探讨海马及皮层的氧自由基损伤与大鼠学习能力和记忆能力的关系。方法　分别制备海马和皮层氧自由基损伤的大鼠模型 ,采用条件性回避反应法分析海马损伤模型和皮层损伤模型的学习能力改变和记忆能力改变的差异。结果　皮层损伤模型学习能力的下降甚于记忆能力的下降 ;而海马损伤模型记忆能力的下降甚于学习能力的下降。结论　皮层和海马在学习和记忆均有作用 ,且皮层偏重于学习功能 。 展开更多
关键词 皮层损伤 海马损伤 学习 记忆
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甲氨碟呤脂质体的几种制备方法比较 被引量：12
4
作者 李俐 张桂荣 +3 位作者 马颖哲 吴山力 杨成君 杨翰仪 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2003年第1期18-20,共3页
目的探讨脂质体的制备方法 ,以便在具体工作中根据不同的目的选择适当的制备方法。方法采用逆相蒸发法、注射法、薄膜法和超声法制备包裹了甲氨喋呤和环胞苷的脂质体。对各种方法的关键步骤进行了讨论。结果被包物质如不稳定 ,采用薄膜... 目的探讨脂质体的制备方法 ,以便在具体工作中根据不同的目的选择适当的制备方法。方法采用逆相蒸发法、注射法、薄膜法和超声法制备包裹了甲氨喋呤和环胞苷的脂质体。对各种方法的关键步骤进行了讨论。结果被包物质如不稳定 ,采用薄膜法轻轻振摇超过 10h ,包封率可比短时间或震荡激烈提高。被包物质如经过短时间的超声和有机溶剂处理 ,采用逆相蒸发法 ,可获得较高包封率。结论根据被包物质的性质及具体工作不同 ,选择适当的脂质体制备方法 。 展开更多
关键词 脂质体 包封率 逆相蒸发法
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儿茶酚胺递质在缺血性脑损害中的作用机制 被引量：14
5
作者 陈光辉 母敬郁 +1 位作者 饶明俐 杨翰仪 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期56-58,共3页
儿茶酚胺递质在缺血性脑损害中的作用机制陈光辉，母敬郁，饶明俐，杨翰仪儿茶酚胺（ＣＡ）递质包括多巴胺（ＤＡ）、去甲肾上腺素（ＮＥ）、肾上腺素（Ｅ）。越来越多的研究表明，缺血再灌流后ＣＡ递质介导了缺血性神经元损害。异常信... 儿茶酚胺递质在缺血性脑损害中的作用机制陈光辉，母敬郁，饶明俐，杨翰仪儿茶酚胺（ＣＡ）递质包括多巴胺（ＤＡ）、去甲肾上腺素（ＮＥ）、肾上腺素（Ｅ）。越来越多的研究表明，缺血再灌流后ＣＡ递质介导了缺血性神经元损害。异常信号传递引起的细胞内游离Ｃａ２＋超载... 展开更多
关键词 儿茶酚胺 脑损害 缺血性脑损害
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一氧化氮和氧自由基对培养大鼠皮层神经细胞的损伤 被引量：12
6
作者 李晓梅 姚路禹 +2 位作者 李天威 杨翰仪 窦春艳 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1999年第1期21-22,共2页
目的：探讨一氧化氮（ＮＯ）和氧自由基（Ｏ－２）对培养大鼠皮层神经细胞的损伤作用及两种损伤因素间的关系。方法：应用原代大鼠皮层神经细胞培养方法，研究外源性损伤因素的作用。结果：①以硝普钠（ＳＮＰ）为ＮＯ供体的损伤组较对... 目的：探讨一氧化氮（ＮＯ）和氧自由基（Ｏ－２）对培养大鼠皮层神经细胞的损伤作用及两种损伤因素间的关系。方法：应用原代大鼠皮层神经细胞培养方法，研究外源性损伤因素的作用。结果：①以硝普钠（ＳＮＰ）为ＮＯ供体的损伤组较对照组的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放量显著增高，而细胞存活率显著降低，加入ＳＯＤ后ＳＮＰ的损伤作用减轻。②Ｏ－２损伤组的结果与ＮＯ损伤组结果相似，同时应用Ｏ－２和ＮＯ组对神经细胞的损伤作用显著高于单独应用Ｏ－２组或ＮＯ组。结论：ＮＯ和Ｏ－２都能造成培养的大鼠皮层神经细胞损伤。 展开更多
关键词 一氧化氮 氧自由基 神经细胞培养
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白细胞介素2（IL—2）脂质体的制备及其包封率测定 被引量：6
7
作者 裴瑾 吕延成 杨翰仪 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1996年第3期319-320,共2页
本文利用逆相蒸发法、薄膜法和超声法分别采用二种膜材包裹ＩＬ—２，制备出ＩＬ—２的大单层脂质体（ＬＵＶｓ）、多层脂质体（ＭＬＶｓ）和小单层脂质体（ＳＵＶｓ），并对其进行了包封率测定。结果表明，逆相蒸发法制备的ＩＬ—２大... 本文利用逆相蒸发法、薄膜法和超声法分别采用二种膜材包裹ＩＬ—２，制备出ＩＬ—２的大单层脂质体（ＬＵＶｓ）、多层脂质体（ＭＬＶｓ）和小单层脂质体（ＳＵＶｓ），并对其进行了包封率测定。结果表明，逆相蒸发法制备的ＩＬ—２大单层脂质体包封率最高（３４．５２±１．１２％）。 展开更多
关键词 脂质体 包封率 白细胞介素2
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超氧化物歧化酶脂质体制备方法包封率的比较 被引量：10
8
作者 李俐 马颖哲 +2 位作者 闫晓凯 张桂荣 杨翰仪 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期535-536,共2页
目的 :研究超氧化物酶 ( SOD)脂质体最佳制备方法 ,为进一步研究 SOD脂质体防病、抗衰老的药理作用打下基础。方法 :采用冻融法、逆相蒸发法、钙融合法、逆相蒸发法与钙融合法联合法 ,分别制备 SOD脂质体 ,并对 4种方法的包封率进行了... 目的 :研究超氧化物酶 ( SOD)脂质体最佳制备方法 ,为进一步研究 SOD脂质体防病、抗衰老的药理作用打下基础。方法 :采用冻融法、逆相蒸发法、钙融合法、逆相蒸发法与钙融合法联合法 ,分别制备 SOD脂质体 ,并对 4种方法的包封率进行了比较。结果 :逆相蒸发法与钙融合法联合制备 SOD脂质体法包封率最大。结论 :逆相蒸发法与钙融合法联合法为最佳制备 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 脂质体 包封率
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氧自由基对大鼠海马及皮层的损伤作用 被引量：8
9
作者 姜招峰 周翔 杨翰仪 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期158-160,共3页
目的　探讨氧自由基对大鼠海马和皮层的损伤作用。方法　制备海马和皮层氧自由基损伤的大鼠模型 ,分析氧自由基代谢变化 ,核DNA损伤情况 ,蛋白质和脂质的损伤情况 ,以及组织结构变化等。结果　氧自由基可造成组织细胞核 DNA损伤 (DNA单... 目的　探讨氧自由基对大鼠海马和皮层的损伤作用。方法　制备海马和皮层氧自由基损伤的大鼠模型 ,分析氧自由基代谢变化 ,核DNA损伤情况 ,蛋白质和脂质的损伤情况 ,以及组织结构变化等。结果　氧自由基可造成组织细胞核 DNA损伤 (DNA单链断裂增加 )、蛋白质损伤(羰基增加、ATPase活性下降、无活性或 /和低活性 SOD增加 )和脂质损伤 (LPO增加、自由基总量增加 )以及组织细胞结构损伤。结论　氧自由基可造成广泛的脑组织损伤。 展开更多
关键词 皮层 海马 氧自由基 生物大分子 脑组织损伤 动物实验
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谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋毒作用的研究 被引量：10
10
作者 熊文 王友联 +2 位作者 李晓玫 裴瑾 杨翰仪 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1997年第6期600-602,共3页
为更清楚地了解药物对神经元的损伤和保护作用，在体外对新生大鼠（０～１ｄ）海马神经细胞进行原代培养，建立了谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋性神经毒损伤模型。通过检测神经细胞乳酸脱氢酶泄漏率和在相差显微镜下对神经细胞形态... 为更清楚地了解药物对神经元的损伤和保护作用，在体外对新生大鼠（０～１ｄ）海马神经细胞进行原代培养，建立了谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋性神经毒损伤模型。通过检测神经细胞乳酸脱氢酶泄漏率和在相差显微镜下对神经细胞形态变化的观察，发现只有发育成熟的神经元对谷氨酸兴奋毒损伤最敏感，神经元的兴奋毒损伤对谷氨酸在一定范围内有剂量依赖性或接触时间依赖性关系，提示谷氨酸通过与其受体结合造成神经元兴奋毒损伤。 展开更多
关键词 谷氨酸 海马 神经细胞培养 兴奋毒
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自由基介导兴奋性氨基酸对培养皮层神经细胞毒性的研究 被引量：7
11
作者 母敬郁 熊文 +2 位作者 杨世杰 李天威 杨翰仪 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期2-4,共3页
本文在体外对新生大鼠（０～１ｄ）大脑皮层神经细胞进行原代培养的基础上，建立谷氨酸（Ｇｌｕ）对培养的皮层神经细胞兴奋毒损伤模型。通过检测乳酸脱氢酶释出率和形态学观察，证实了Ｇｌｕ对神经细胞存在兴奋毒作用。通过测定不同条... 本文在体外对新生大鼠（０～１ｄ）大脑皮层神经细胞进行原代培养的基础上，建立谷氨酸（Ｇｌｕ）对培养的皮层神经细胞兴奋毒损伤模型。通过检测乳酸脱氢酶释出率和形态学观察，证实了Ｇｌｕ对神经细胞存在兴奋毒作用。通过测定不同条件下Ｇｌｕ兴奋毒对培养的神经细胞造成损伤时细胞膜脂质过氧化物（ＬＰＯ）浓度，发现膜ＬＰＯ浓度与Ｇｌｕ剂量及作用时间紧密相关，表明Ｇｌｕ对神经细胞兴奋毒作用有自由基产生并介导了神经细胞的损伤。 展开更多
关键词 谷氨酸 神经细胞 毒性 兴奋毒 自由基 氨基酸
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氧化修饰的β_2-糖蛋白-1诱导抗心磷脂抗体的产生 被引量：7
12
作者 时彤 魏征人 +1 位作者 李晓梅 杨翰仪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第7期359-360,共2页
目的：探讨蛋白质的氧化修饰与体内抗磷脂抗体产生的关系。方法：首先，在体外以次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶氧化系统氧化大鼠β_2-GP1，然后以氧化的β_2-GP1（oxβ_2－GP1）免疫同种大鼠，最后以ELISA方法检测被免疫大鼠β_2-GP1血清中的... 目的：探讨蛋白质的氧化修饰与体内抗磷脂抗体产生的关系。方法：首先，在体外以次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶氧化系统氧化大鼠β_2-GP1，然后以氧化的β_2-GP1（oxβ_2－GP1）免疫同种大鼠，最后以ELISA方法检测被免疫大鼠β_2-GP1血清中的抗心磷脂抗体（ACA）。结果：氧化的β_2-GP1免疫的大鼠血清中产生高滴度的ACA。结论：β_2－GP1的氧化修饰在ACA的产生上可能起十分重要的作用。 展开更多
关键词 β2-糖蛋白1 抗磷脂抗体综合征 氧化修饰 ACA
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超氧阴离子自由基诱导皮层神经细胞Cu/ZnSOD基因表达的研究 被引量：5
13
作者 姜招峰 何湘平 +1 位作者 刘传缋 杨翰仪 《北京联合大学学报》 CAS 2003年第3期9-11,共3页
　目的:探讨超氧阴离子自由基对神经细胞Cu ZnSOD基因表达的影响。方法:以产超氧阴离子自由基系统(XO X)作用于原代培养的新生大鼠大脑皮层神经元,分析SOD含量、SOD活性和SODmRNA丰度。结果:SOD含量随超氧阴离子自由基作用时间的延长显... 　目的:探讨超氧阴离子自由基对神经细胞Cu ZnSOD基因表达的影响。方法:以产超氧阴离子自由基系统(XO X)作用于原代培养的新生大鼠大脑皮层神经元,分析SOD含量、SOD活性和SODmRNA丰度。结果:SOD含量随超氧阴离子自由基作用时间的延长显著增加,第5天后增加的变化趋于稳定,第7天达每毫克蛋白质(1 24±0 23)μg;SOD活性在开始的1～5d呈上升状态,第5天为每毫克蛋白质(5 30±0 44)U,第6天开始显著下降为每毫克蛋白质(2 15±0 32)U,且稳定至第7天的每毫克蛋白质(2 08±0 73)U;SODmRNA的相对丰度显著高于对照组。结论:超氧阴离子自由基可诱导培养的神经细胞Cu ZnSOD基因表达;SOD活性变化和SOD含量变化并不平行,可能是在超氧阴离子自由基作用一定时间后,细胞内出现了无活性或 和低活性的SOD。 展开更多
关键词 超氧阴离子自由基 诱导 皮层神经细胞 Cu/ZnSOD 基因表达 活性 老年性痴呆 氧化修饰
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抗β_2GPI抗体与抗磷脂抗体综合征的相关性研究 被引量：7
14
作者 曹文华 杨翰仪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期233-234,共2页
目的：探讨αβ２ＧＰＩ在抗磷脂抗体综合征中诱导抗体产生的机制。方法：随机抽取活动期ＳＬＥ患者６０例，采用ＥＬＩＳＡ法测定血清中αβ２ＧＰＩ。结果：发现与正常对照组相比ＳＬＥ组αβ２ＧＰＩ水平明显升高（Ｐ＜０００１）... 目的：探讨αβ２ＧＰＩ在抗磷脂抗体综合征中诱导抗体产生的机制。方法：随机抽取活动期ＳＬＥ患者６０例，采用ＥＬＩＳＡ法测定血清中αβ２ＧＰＩ。结果：发现与正常对照组相比ＳＬＥ组αβ２ＧＰＩ水平明显升高（Ｐ＜０００１）。以ｘ＋３ｓ为正常值上限，阳性率高达９５％，显示αβ２ＧＰＩ与ＳＬＥ有显著相关性。结论：αβ２ＧＰＩ是抗磷脂肮体综合征的重要标志。 展开更多
关键词 β2糖尿白-I 抗磷脂抗体 综合征 APS dβ2GPI
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单克隆抗体偶联脂质体的制备及其与胃癌细胞特异结合研究 被引量：6
15
作者 汪冰 杨翰仪 《沈阳药学院学报》 CSCD 1994年第1期17-20,共4页
本文采用戊二醛法，把抗胃癌细胞的单克隆抗体与脂质体偶联，脂质体内包裹的示踪物质为［α一３２ｐ］ｄＡＴＰ，与胃癌细胞进行了结合研究，发现此靶向脂质体与胃癌细胞的结合率在１２％以上，而非特异抗体标记的脂质体或单纯脂质体与... 本文采用戊二醛法，把抗胃癌细胞的单克隆抗体与脂质体偶联，脂质体内包裹的示踪物质为［α一３２ｐ］ｄＡＴＰ，与胃癌细胞进行了结合研究，发现此靶向脂质体与胃癌细胞的结合率在１２％以上，而非特异抗体标记的脂质体或单纯脂质体与胃癌细胞的结合率在６％以下．对戊二醛法偶联的有关问题进行了探讨． 展开更多
关键词 脂质体 单克隆抗体 戊二醛法
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脑缺血及再灌流期间生物膜磷脂代谢特点 被引量：6
16
作者 母敬郁 陈光辉 +2 位作者 陈文华 杨翰仪 饶明俐 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期144-146,共3页
本文利用大白鼠４血管结扎法建立脑缺血再灌流模型，同时制备脑组织线粒体和微粒体组分，检测假手术组，缺血１５ｍｉｎ，再灌ｌｈ、ｌｄ和３ｄ各组生物膜主要磷脂的含量变化，发现再灌流时磷脂代谢变化比缺血期幅度大，并且线粒体主要... 本文利用大白鼠４血管结扎法建立脑缺血再灌流模型，同时制备脑组织线粒体和微粒体组分，检测假手术组，缺血１５ｍｉｎ，再灌ｌｈ、ｌｄ和３ｄ各组生物膜主要磷脂的含量变化，发现再灌流时磷脂代谢变化比缺血期幅度大，并且线粒体主要组成磷脂和微粒体主要组成磷脂代谢变化规律并不一致，证明磷脂代谢异常导致了生物膜功能丧失，造成了神经元的损伤。 展开更多
关键词 脑缺血 再灌流 线粒体 微粒体 磷脂 生物膜
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β_2糖蛋白I与重组乙型肝炎表面抗原的结合特性 被引量：6
17
作者 高普均 郭延军 +4 位作者 曲立科 时彤 张洪雁 董春娥 杨翰仪 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2002年第1期31-33,共3页
目的 研究 ＨＢｓＡｇ与β２糖蛋白Ｉ（β２ＧＰ　Ｉ）的结合特性，探讨 β２ＧＰ Ｉ参与 ＨＢＶ感染的机制。方法 采用酶联免疫吸附实验，研究标记的人β２ＧＰ Ｉ与重组ＨＢｓＡｇ的结合特性。结果 标记的人β２ＧＰ Ｉ与ＨＢｓＡｇ... 目的 研究 ＨＢｓＡｇ与β２糖蛋白Ｉ（β２ＧＰ　Ｉ）的结合特性，探讨 β２ＧＰ Ｉ参与 ＨＢＶ感染的机制。方法 采用酶联免疫吸附实验，研究标记的人β２ＧＰ Ｉ与重组ＨＢｓＡｇ的结合特性。结果 标记的人β２ＧＰ Ｉ与ＨＢｓＡｇ有高度亲和力，并可以被过量的未标记人β２ＧＰ Ｉ所抑制。结论 β２ＧＰ Ｉ与ＨＢｓＡｇ的结合特性可能是β２ＧＰ Ｉ介导乙肝病毒感染肝细胞的结构基础。 展开更多
关键词 β2糖蛋白Ⅰ 重组乙型肝炎表面抗原 乙型肝炎病毒 结合特性 HBV感染
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甲基化聚乙二醇（5000）修饰超氧化物歧化酶的研究 被引量：6
18
作者 母敬郁 麦荫乔 +2 位作者 李小梅 杨翰仪 石育原 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1995年第2期139-141,共3页
本实验以牛血为原料获得比活大于８０００ＩＵ／ｍｇ的铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ），采用活性酯法将甲基化聚乙二醇（ｍＰＥＧ，ＭＷ＝５０００）与Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ交联，获得分子量约为８６０００的ｍＰＥＧ—ＳＯＤ交联... 本实验以牛血为原料获得比活大于８０００ＩＵ／ｍｇ的铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ），采用活性酯法将甲基化聚乙二醇（ｍＰＥＧ，ＭＷ＝５０００）与Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ交联，获得分子量约为８６０００的ｍＰＥＧ—ＳＯＤ交联物，利用邻苯三酚自氧化法测得经ｍＰＥＧ修饰的酶稳定性增加，表现为对加热，ｐＨ变化和胃蛋白酶破坏的耐受力增大，更便于作为药用酶的临床使用。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 甲基化聚乙二醇 蛋白质化学修饰
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乙型肝炎病毒嗜肝性机制研究进展 被引量：4
19
作者 高普均 曲立科 杨翰仪 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2001年第1期3-4,共2页
关键词 乙型肝炎病毒 嗜肝性 肝细胞 受体
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人酸性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌的高效表达 被引量：5
20
作者 刘青 万敏 +5 位作者 卫红飞 吴秀丽 张培因 王燕媚 杨翰仪 王丽颖 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期1-5,共5页
目的 :探讨人酸性成纤维细胞生长因子 (acidic fibroblast growth factor,a FGF)在大肠杆菌中高效表达的方法及重组人 a FGF的生物学活性。方法 :1通过 PCR法扩增人 a FGF引入点突变 ,对其密码子进行改造 ;2构建 a FGF- p ET- 2 8a重组... 目的 :探讨人酸性成纤维细胞生长因子 (acidic fibroblast growth factor,a FGF)在大肠杆菌中高效表达的方法及重组人 a FGF的生物学活性。方法 :1通过 PCR法扩增人 a FGF引入点突变 ,对其密码子进行改造 ;2构建 a FGF- p ET- 2 8a重组质粒并在大肠杆菌 BL2 1 (DE3)中表达 ;3重组蛋白的纯化及生物学活性研究。结果 :通过 PCR扩增 ,将设计的核酸水平突变引入到 a FGF DNA中 ,使其自起始密码 ATG后的前 5 0个碱基均为原核细胞偏爱密码子、并保持原氨基酸序列不变 ,成功地实现了重组人 a FGF在大肠杆菌中的高效表达 ,并通过降低培养温度使大肠杆菌中可溶性目的蛋白的含量大幅增加 ,原核表达的 a FGF亦具有天然生物学活性。结论 :通过对 a FGF DNA碱基进行改造 ,可大幅度提高 a FGF在大肠杆菌中的表达量 。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子1/分析 大肠杆菌 重组 遗传 聚合酶链反应
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