乳腺癌发生过程中p53、BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb蛋白异常表达 被引量：9

1

作者 杨举伦 史爱学 +3 位作者 邹红 李涛 杨海捷 蔡琳 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期277-281,共5页

目的探讨p53、BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb基因蛋白异常表达在乳腺癌发生中的作用。方法选取同时存在浸润癌、导管内癌、不典型增生和单纯性增生的乳腺癌档案蜡块,应用免疫组化SP法检测p53、BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb基因蛋白在各例的异常表... 目的探讨p53、BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb基因蛋白异常表达在乳腺癌发生中的作用。方法选取同时存在浸润癌、导管内癌、不典型增生和单纯性增生的乳腺癌档案蜡块,应用免疫组化SP法检测p53、BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb基因蛋白在各例的异常表达。结果(1)在24.3%(17/70)的乳腺癌及其癌旁不典型增生中检测到突变型p53蛋白表达,分别在2.9%(2/69)、6.3%(4/63)、5.1%(3/59)、5.4%(3/56)的乳腺癌及其癌旁不典型增生中分别检测到BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb表达缺失。(2)在44.6%的病例同时检测到2种基因蛋白异常表达,在5.4%的病例同时检测到3种基因蛋白异常表达,在3.6%的病例同时检测到4种基因蛋白异常表达。结论(1)p53、BRCA1、BRCA2、PTEN、Rb蛋白异常表达可出现于乳腺癌发生的早期阶段,可能在乳腺癌发生过程中起作用。(2)多种抑癌基因的失活共同参与了乳腺癌的发生。 展开更多

关键词 蛋白异常表达 BRCA1 BRCA2 PTEN 发生过程 乳腺癌 突变型p53蛋白表达 免疫组化S-P法 不典型增生 RB基因蛋白 同时检测 单纯性增生 导管内癌 表达缺失 早期阶段 抑癌基因 癌发生 浸润癌 病例 癌旁

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散发性乳腺癌及乳腺不典型导管增生组织BRCA1基因启动子区甲基化分析 被引量：8

2

作者 杨海捷 王丽 +4 位作者 魏万里 陈玥 江自然 李学锋 杨举伦 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期141-145,153,共6页

目的了解散发性乳腺癌及癌旁增生组织、乳腺不典型导管增生组织BRCA1基因启动子区甲基化状态,探讨其与乳腺癌发生的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)结合巢式PCR技术,研究23例散发性乳腺癌及其癌旁增生组织、6例乳腺不典型导管增生... 目的了解散发性乳腺癌及癌旁增生组织、乳腺不典型导管增生组织BRCA1基因启动子区甲基化状态,探讨其与乳腺癌发生的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)结合巢式PCR技术,研究23例散发性乳腺癌及其癌旁增生组织、6例乳腺不典型导管增生组织及5例健康成人女性外周血淋巴细胞中BRCA1基因启动子区甲基化状态。结果5例健康成人女性外周血淋巴细胞均表现BRCA1基因启动子区甲基化阴性;23例原发性乳腺癌组织中,BRCA1基因启动子区CpG岛甲基化率为65.22%(15/23);癌旁增生组织检出CpG岛甲基化者11例,甲基化率为47.83%(11/23),且均为癌组织阳性患者;6例乳腺不典型导管增生组织中,BRCA1基因启动子区CpG岛甲基化阳性者2例,甲基化率为33.33%(2/6);统计学检验结果表明,乳腺癌、癌旁增生组织之间,BRCA1基因启动子区甲基化阳性率无显著差异。结论BRCA1基因启动子区CpG岛甲基化是散发性乳腺癌发生过程中的早期事件,可能在乳腺癌发生中和乳腺增生病癌变过程中起重要生物学作用。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 乳腺不典型导管增生 甲基化 BRCA1基因

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龙血竭乙醇液与云南白药气雾剂治疗急性软组织损伤的临床对照研究 被引量：6

3

作者 余德文 杨宇 +4 位作者 杨海捷 刘丹 王红 胡国蓉 余玲波 《中华保健医学杂志》 2013年第2期181-182,共2页

目的研究龙血竭乙醇液外用治疗急性软组织损伤的临床疗效及不良反应。方法将急性软组织损伤患者148例随机分为两组,治疗组75例用龙血竭粉与75%乙醇液以1:2比例稀释涂敷患处,对照组73例用云南白药气雾剂外喷患处.两组疗程均为14d。结果... 目的研究龙血竭乙醇液外用治疗急性软组织损伤的临床疗效及不良反应。方法将急性软组织损伤患者148例随机分为两组,治疗组75例用龙血竭粉与75%乙醇液以1:2比例稀释涂敷患处,对照组73例用云南白药气雾剂外喷患处.两组疗程均为14d。结果两组治疗方法对急性软组织损伤均有良好的治疗作用,治疗组疗效优于对照组。结论龙血竭乙醇液外用治疗急性软组织损伤具有快速祛瘀、消肿、镇痛和加速受损组织修复作用,值得推广。 展开更多

关键词 龙血竭 软组织损伤 云南白药气雾剂

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多指标联合对严重创伤后脓毒症患者预后的预测价值

4

作者 杨晖 杨海捷 潘险峰 《中国急救医学》 CAS CSCD 2024年第4期337-342,共6页

目的探讨影响严重创伤后脓毒症患者预后的相关危险因素,构建Nomogram预测模型,评估模型的临床应用价值。方法选取2017年1月至2023年5月收住联勤保障部队第九二○医院急诊重症监护病房(ICU)的严重创伤后脓毒症患者100例进行回顾性分析。... 目的探讨影响严重创伤后脓毒症患者预后的相关危险因素,构建Nomogram预测模型,评估模型的临床应用价值。方法选取2017年1月至2023年5月收住联勤保障部队第九二○医院急诊重症监护病房(ICU)的严重创伤后脓毒症患者100例进行回顾性分析。根据临床结局将患者分为死亡组(n=42)和存活组(n=58),收集两组受伤机制、受伤类别、感染部位、住院时间、住ICU时间、机械通气时间、入ICU时急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分、格拉斯哥昏迷评分(GCS)及序贯器官衰竭评估(SOFA)评分,第7天降钙素原(PCT)、累积液体平衡量(CFB)和中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR),比较两组患者组间差异,对有统计学意义指标进行单因素和多因素Logistic回归分析确立影响严重创伤后脓毒症患者死亡的独立危险因素,构建Nomogram预测模型,应用R软件绘制列线图,采用受试者工作特征(ROC)曲线和校准曲线对模型预测效能进行验证,采用决策曲线分析(DCA)评估模型的临床净收益。结果入ICU第7天PCT(95%CI 2.067~10.432,OR=4.644,P<0.001)和第7天CFB(95%CI 1.529~6.079,OR=3.048,P=0.002)是严重创伤后脓毒症患者死亡的独立危险因素,GCS评分(95%CI 0.054~0.459,OR=0.158,P=0.001)是与预后相关的独立危险因素。根据多因素Logistic回归分析结果建立Nomogram模型,经验证,预测模型的一致性指数(C-index)为0.902,校准曲线与拟合曲线反应好,AUC为0.902,敏感度85.7%,特异度87.9%;DCA评估模型的临床应用价值,最大净获益阈值概率区间为12.0%~100.0%,模型具有高净获益值。结论入ICU第7天PCT和第7天累积液体平衡量是严重创伤后脓毒症患者死亡的独立危险因素,GCS评分是与预后相关的独立危险因素,在此基础构建的Nomogram模型具有良好的预测效能和临床应用价值。 展开更多

关键词 严重创伤 脓毒症 Nomogram模型 危险因素 预后 降钙素原 累积液体平衡 格拉斯哥昏迷评分(GCS)

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运用噬菌体展示随机肽库筛选与内毒素结合的高亲和性多肽 被引量：4

5

作者 杨海捷 段光杰 +3 位作者 刘友生 陈锐 余德文 杨宇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第24期2262-2266,共5页

目的从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定。方法以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步... 目的从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定。方法以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步确证。挑选结合力强的克隆进行DNA测序,推导出呈现的多肽序列,应用生物信息学软件进行多肽序列分析和同源性分析。结果经4轮亲和筛选从噬菌体展示随机十二肽库中筛选获得了86个克隆,挑选12个结合力强的克隆进行DNA序列测序及生物信息学分析,结合本项目组的噬菌体展示随机七肽库筛选结果推导出呈现的多肽序列为HWQWPHWSPPP(命名为P11肽)。检索相关数据库发现此肽序列未被申请专利,体内约908种蛋白与其结构相匹配,其中包含有与LPS相互作用的位点。结论通过对噬菌体展示随机肽库的淘选,获得与LPS结合的高亲和性多肽,为进一步以这些多肽为先导物进行定向进化研究提供了实验依据和结构基础。 展开更多

关键词 内毒素 噬菌体展示随机肽库 多肽 生物信息学

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胃癌细胞株hTERT基因启动子区甲基化分析 被引量：3

6

作者 程永波 房殿春 +1 位作者 杨海捷 罗元辉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期187-189,共3页

目的检测人端粒酶反转录酶(hTERT)基因启动子区甲基化状态。方法采用TRAP法检测细胞端粒酶活性,免疫荧光法观察hTERT表达;选择hTERT启动子中-692～-403bp共290bp为靶序列,采取亚硫酸氢钠修饰和测序法(BSP)检测2种胃癌细胞株中靶序列甲... 目的检测人端粒酶反转录酶(hTERT)基因启动子区甲基化状态。方法采用TRAP法检测细胞端粒酶活性,免疫荧光法观察hTERT表达;选择hTERT启动子中-692～-403bp共290bp为靶序列,采取亚硫酸氢钠修饰和测序法(BSP)检测2种胃癌细胞株中靶序列甲基化状态并作分析。结果端粒酶和hTERT在SGC-7901和BGC-823胃癌细胞株中都有表达;PCR扩增产物测序测出-634～-403bp共232bp,经比对与亚硫酸氢钠转化前源序列对应良好,此序列段26个CpG胞嘧啶中,BGC-823细胞株有25个发生甲基化,SGC-7901细胞株全部发生甲基化,经检索此序列段含2个MZF-2结合域即2个锌指基序,但仅可结合MZF-2一个转录调节因子。结论高甲基化改变了DNA的空间结构可能是hTERT启动子高甲基化上调hTERT表达的原因之一,从而阻断了MZF-2与锌指基序的结合。 展开更多

关键词 人端粒酶反转录酶 甲基化 MZF-2

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内毒素结合肽及其突变体的表达纯化和抗内毒素／脂多糖活性研究 被引量：3

7

作者 孙亚丽 刘友生 +2 位作者 杨海捷 王长松 马建洲 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期291-295,共5页

目的使内毒素结合肽(EBP)及其突变体mEBP在E．coli DH5α中表达,纯化后鉴定其抗内毒素／脂多糖(LPS)活性。方法(1)将含PinpointXa3-EBP及其突变体PinpointXa3-mEBP的工程菌DH5α活化,加入异丙硫半乳糖苷(IPTG)诱导其表达生物素融合蛋白... 目的使内毒素结合肽(EBP)及其突变体mEBP在E．coli DH5α中表达,纯化后鉴定其抗内毒素／脂多糖(LPS)活性。方法(1)将含PinpointXa3-EBP及其突变体PinpointXa3-mEBP的工程菌DH5α活化,加入异丙硫半乳糖苷(IPTG)诱导其表达生物素融合蛋白。分离纯化表达产物,因子Xa酶切融合蛋白分离目的肽EBP和mEBP。采用亲和层析及反相高效液相色谱法纯化目的肽,用氨基末端10个氨基酸残基序列分析法鉴定突变体mEBP。(2)分离正常人外周血单核细胞(PBMC),用5 mg／L异硫氰酸荧光素(FITC)-LPS+不同浓度EBP或mEBP(均为2．0、5．0、12．5 mg／L)刺激PBMC,检测其平均荧光强度。用1 mg／L LPS+3种浓度(同前)EBP或mEBP刺激PBMC,5 h后取上清液,检测肿瘤坏死因子(TNF)α和白细胞介素(IL)6浓度。(3)将25只昆明小鼠分为正常对照组(5只):腹腔注射等渗盐水0．2 ml;模型组(5只):小鼠造成20％TBSAⅢ度烧伤,伤后腹腔注射LPS(1 mg／kg);治疗组(15只):小鼠同前致伤后,腹腔注射多黏菌素B(PMB,5 mg／kg)或EBP或mEBP(后两者均为10 mg／kg)。6 h后检测各组小鼠血清TNF-α、IL-6浓度及肝组织中TNF-αmRNA的表达水平。结果(1)纯化后的目的肽EBP、mEBP纯度均达98％以上,mEBP氨基末端10个氨基酸残基序列分析符合预期结果。(2)随着mEBP或EBP浓度的增加,PBMC表面的平均荧光强度逐渐减弱;且在同一浓度下,加入mEBP后平均荧光强度的减弱程度较加入EBP明显。与用1 mg／L LPS刺激PBMC比较,加入1 mg／L LPS+12．5 mg／L EBP以及1 mg／L LPS+3种浓度mEBP刺激后, PBMC培养上清液中IL-6及TNF-α的水平均明显降低(P<0．01)。(3)与模型组比较,治疗组小鼠血清IL-6、TNF-α水平均明显降低(P<0．01),其中10 mg／kg mEBP治疗组两指标低于等浓度EBP治疗组(P<0．05)。(4)小鼠肝组织TNF-αmRNA表达水平:正常对照组相对灰度值为0．25,模型组为0．93,10 mg／kg mEBP治疗组为0．51,10 mg／kg EBP治疗组为0．77,5 mg／kg PMB 展开更多

关键词 基因表达 内毒素类 内毒素结合肽 突变体 纯化

原文传递

从七肽噬菌体展示库中筛选内毒素结合蛋白质配基 被引量：2

8

作者 杨海捷 段光杰 +2 位作者 朱崇涛 余德文 刘友生 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第6期1101-1104,共4页

目的:研究从噬菌体展示库中筛选内毒素结合蛋白质配基,为其在内毒素致病作用机理及在内毒素血症防治研究中的应用奠定基础。方法:以内毒素为靶分子从随机七肽噬菌体展示库中筛选内毒素的高亲和力噬菌体配体,通过ELISA鉴定,DNA测序及相... 目的:研究从噬菌体展示库中筛选内毒素结合蛋白质配基,为其在内毒素致病作用机理及在内毒素血症防治研究中的应用奠定基础。方法:以内毒素为靶分子从随机七肽噬菌体展示库中筛选内毒素的高亲和力噬菌体配体,通过ELISA鉴定,DNA测序及相关软件分析。结果:所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405 nm可达1.965通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列,认为FHENWPS肽段中包含有与内毒素分子发生亲和结合的一个共有序列。该序列展示肽的等电点为5.36,具有双嗜性,这有利于肽与LPS分子表面的位点相互作用从而产生亲和吸附。结论:运用亲和筛选方法从肽库中筛选内毒素结合蛋白质配基是可行的。 展开更多

关键词 噬菌体展示肽库 内毒素 多肽 配基 亲和

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苯扎贝特致横纹肌溶解综合征1例 被引量：2

9

作者 刘晓丽 王红 +1 位作者 杨海捷 朱琴 《中华保健医学杂志》 2013年第2期113-113,193,共2页

1临床资料老年男性,84岁,因＂心慌、胸闷15d＂于2011年5月5日入院。入院查体：生命体征平稳,慢性病容,口唇轻度紫绀,心界向左下扩大,心律失常,心房颤动节律,双下肢无水肿。入院后：三酰甘油3.29mmol/L,肌酸激酶（CK）64U/L,肌酸激酶同... 1临床资料老年男性,84岁,因＂心慌、胸闷15d＂于2011年5月5日入院。入院查体：生命体征平稳,慢性病容,口唇轻度紫绀,心界向左下扩大,心律失常,心房颤动节律,双下肢无水肿。入院后：三酰甘油3.29mmol/L,肌酸激酶（CK）64U/L,肌酸激酶同工酶（CK-MB）20U/L,乳酸脱氢酶201U/L,血糖9.4mmol/L；心电图检查提示：“心房纤颤，陈旧j性前壁心肌梗死”，结合病史诊断考虑“冠心病、心房颤动、2型糖尿病”。 展开更多

关键词 横纹肌溶解综合征 苯扎贝特

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E2-2基因腺病毒载体的构建及其对EPCs生长、增殖及ID1表达的影响 被引量：2

10

作者 刘晓丽 杨海捷 +3 位作者 苏勇 谭志胜 朱琴 王红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第16期1664-1669,共6页

目的构建转录因子E2-2基因腺病毒载体,观测内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)过表达E2-2基因对DNA结合抑制因子-1(inhibitor of DNA binding/differentiation,ID1)表达的影响。方法分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR... 目的构建转录因子E2-2基因腺病毒载体,观测内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)过表达E2-2基因对DNA结合抑制因子-1(inhibitor of DNA binding/differentiation,ID1)表达的影响。方法分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR法扩增E2-2基因CDs全长DNA,克隆入载体pTG19-T后,亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack/E2-2重组载体,与pAdEasy-1骨架质粒同源重组形成重组病毒pAd/E2-2,经293细胞包装,获具高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。将该病毒感染EPCs,倒置显微镜观测经感染的EPCs的GFP表达情况。CCK-8(cell count kit-8)法检测病毒pAd/E2-2对EPCs生长、增殖的影响。RT-PCR、Western blot分别检测经感染的EPCs中E2-2与ID1基因及其编码蛋白的表达情况,并予以定量分析。结果分离、培养并鉴定到小鼠骨髓EPCs。克隆到2013 bp的E2-2基因,并获得高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。CCK-8法检测表明,与对照比较,过表达E2-2的EPCs的生长、增殖速度减慢,48h开始变得尤为明显(P<0.01);RT-PCR、Western blot及定量分析结果显示,E2-2能下调ID1的表达,与对照比较,差异具统计学意义(P<0.01)。结论分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs,克隆出E2-2基因,证实E2-2能明显抑制EPCs的生长、增殖,并能下调ID1基因的表达。 展开更多

关键词 EPCS E2-2基因 ID1基因 腺病毒

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HCCR-2反义核酸对肝癌HepG2细胞的作用 被引量：1

11

作者 郭军 房殿春 +3 位作者 杨仕明 杨海捷 张树荣 余松涛 《中华消化外科杂志》 CAS CSCD 2009年第3期209-212,共4页

目的研究反义HCCR-2真核表达载体对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法构建反义HCCR-2真核表达载体（反义载体组），转染肝癌HepG2细胞，G418筛选阳性克隆，同样方法获得空载体pIRES2-EGFP稳定表达的细胞株（空载体组），取肝癌HepG2... 目的研究反义HCCR-2真核表达载体对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法构建反义HCCR-2真核表达载体（反义载体组），转染肝癌HepG2细胞，G418筛选阳性克隆，同样方法获得空载体pIRES2-EGFP稳定表达的细胞株（空载体组），取肝癌HepG2细胞为对照（肝癌HepG2组），用MTT法、流式细胞仪、透射电镜观察反义HCCR-2转染前后肝癌HepG2细胞生长曲线、细胞周期、细胞凋亡及细胞形态的变化。采用单因素方差分析和χ^2检验比较各组差异。结果反义载体组、空载体组、肝癌HepG2组HCCR-2 mRNA表达水平分别为0．39±0．04、0．62±0．06、0．72±0．03，3组比较差异有统计学意义（F=43．701，P〈0．05）；细胞凋亡率分别为13．30％、2．51％、2．07％，反义载体组与空载体组、肝癌HepG2组比较，差异有统计学意义（χ^2=6．793，8．721，P〈0．05）；反义载体组细胞生长减慢，阻滞于G0／G1期。结论HCCR-2反义核酸真核表达载体能抑制HCCR-2 mRNA的表达，促进细胞凋亡，HCCR-2蛋白可能参与肝癌细胞的周期调控，并与细胞的生长增殖有关。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 HCCR-2 反义核酸 细胞增殖

原文传递

老年多器官功能不全综合征患者免疫功能探讨 被引量：1

12

作者 苏勇 沈珠甫 +3 位作者 华丕虹 周玉梁 杨宇 杨海捷 《放射免疫学杂志》 CAS 2012年第1期71-73,共3页

目的:检测老年多器官功能不全综合征(MODSE)患者的细胞免疫、体液免疫指标,了解其免疫水平及其与疾病的关系。方法:将老年患者根据诊断分为MODSE组(46例)和对照组(40例),用双/三色直接免疫荧光标记全血溶血法检测细胞免疫CD3^+、CD3^+CD... 目的:检测老年多器官功能不全综合征(MODSE)患者的细胞免疫、体液免疫指标,了解其免疫水平及其与疾病的关系。方法:将老年患者根据诊断分为MODSE组(46例)和对照组(40例),用双/三色直接免疫荧光标记全血溶血法检测细胞免疫CD3^+、CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+、CD4^+/CD8^+、NK、CIK指标;用免疫比浊法检测体液免疫C3,C4,CH50,IgG,IgA,IgM指标。结果:两组患者CD3^+,NK,IgA差异有统计学意义(P<0.05)。两组免疫功能比较有明显差异:对照组CD3^+高,MODSE组NK、IgA高。结论:MODSE组患者存在免疫功能低下。 展开更多

关键词 免疫功能 细胞免疫 体液免疫 多器官功能不全综合征

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预处理对在体大鼠冠脉血管内皮细胞的保护及机制探讨 被引量：1

13

作者 谭志胜 杨海捷 陈代陆 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第16期2072-2074,共3页

目的探讨缺血预处理(IPC)对缺血再灌注(I/R)所致的血管内皮细胞(VEC)损伤是否有保护作用及蛋白激酶C(PKC)在其中的作用。方法实验大鼠分为5组:对照组、缺血再灌注组(I/R组)、预处理组(IPC组)、多黏菌素B(PKC抑制剂)+I/R组、多黏菌素B+IP... 目的探讨缺血预处理(IPC)对缺血再灌注(I/R)所致的血管内皮细胞(VEC)损伤是否有保护作用及蛋白激酶C(PKC)在其中的作用。方法实验大鼠分为5组:对照组、缺血再灌注组(I/R组)、预处理组(IPC组)、多黏菌素B(PKC抑制剂)+I/R组、多黏菌素B+IPC组。测定各组一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、循环内皮细胞(CEC)、丙二醛(MDA),并作冠脉VEC透射电镜观察。结果I/R后血浆中NO明显减少,ET明显升高,NO/ET值明显降低,CEC明显增多,MDA明显升高(P<0.05或P<0.01)。IPC能逆转上述改变,使血浆中NO增多,ET降低,NO/ET值恢复,CEC数量减少,MDA含量降低(P<0.05或P<0.01)。PKC的抑制剂多黏菌素B并不加重I/R的上述改变,但是能阻断IPC的作用。电镜显示:I/R后VEC的超微结构严重损伤,IPC能明显减轻VEC的结构损伤。结论I/R导致VEC结构和功能的严重损伤,IPC能减轻I/R后VEC的结构和功能损伤,PKC可能参与了这一过程。 展开更多

关键词 缺血再灌注损伤 缺血预处理 血管内皮细胞 蛋白激酶C

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内毒素结合肽的改良、原核表达及纯化 被引量：1

14

作者 孙亚丽 刘友生 杨海捷 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期42-46,共5页

目的:对人内毒素结合肽(endotoxinbindingpeptide,EBP)进行改良,获得突变体mEBP(mutateofendotoxinbindingpeptide,mEBP)基因并进行原核表达,纯化获得高纯度的mEBP。方法:应用PCR定点诱变方法获得mEBP基因,构建PinpointXa3/mEBP融合表... 目的:对人内毒素结合肽(endotoxinbindingpeptide,EBP)进行改良,获得突变体mEBP(mutateofendotoxinbindingpeptide,mEBP)基因并进行原核表达,纯化获得高纯度的mEBP。方法:应用PCR定点诱变方法获得mEBP基因,构建PinpointXa3/mEBP融合表达载体,在BL21(DE3)pLysS宿主菌进行表达,溶菌酶裂解法提取包涵体,融合蛋白经PinpointTMXa纯化后,由factorXa酶切,获得目的肽,RPHPLC纯化获得高纯度的mEBP。结果:应用PCR定点诱变技术完成了EBP第5,18位谷氨酰胺→赖氨酸的定点突变,且通过原核表达,色谱纯化获得了高纯度的mEBP。结论:成功获得高纯度的mEBP,为下一步的抗内毒素功能检测奠定基础。 展开更多

关键词 内毒素结合肽 突变 表达 纯化

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人子宫颈癌基因-2干扰抑制HepG2肝癌细胞mRNA的表达

15

作者 郭军 房殿春 +3 位作者 杨云丽 杨海捷 范宗江 刘苗 《昆明医学院学报》 2009年第10期26-29,共4页

目的利用构建的特异性针对HCCR-2的干扰质粒RNAi-H1,研究HCCR-2干扰对HepG2肝癌细胞mRNA的影响.方法将干扰质粒用脂质体法转染HepG2细胞,经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.Real-timePCR检测HCCR-2mRNA表达水平.结果R... 目的利用构建的特异性针对HCCR-2的干扰质粒RNAi-H1,研究HCCR-2干扰对HepG2肝癌细胞mRNA的影响.方法将干扰质粒用脂质体法转染HepG2细胞,经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.Real-timePCR检测HCCR-2mRNA表达水平.结果Real-time PCR结果表明HepG2-H1mRNA表达明显减少.结论HCCR-2干扰可以抑制HepG2肝癌细胞mRNA的表达. 展开更多

关键词 人子宫颈癌基因-2 RNA干扰 肝癌

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脂多糖结合蛋白与脂多糖结合位点模拟肽的筛选

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作者 杨海捷 杨韶艳 +3 位作者 刘晓丽 谭志胜 郭军 王红 《中华保健医学杂志》 2013年第5期415-418,共4页

目的应用噬菌体随机12肽库筛选脂多糖结合蛋白(LBP)与脂多糖结合位点的多肽序列。方法以脂多糖为固相筛选分子,对噬菌体12肽库进行4轮亲合筛选,采用酶联免疫吸附法鉴定筛选后的噬菌体克隆与脂多糖的结合活性,取结合活性较高的克隆进行DN... 目的应用噬菌体随机12肽库筛选脂多糖结合蛋白(LBP)与脂多糖结合位点的多肽序列。方法以脂多糖为固相筛选分子,对噬菌体12肽库进行4轮亲合筛选,采用酶联免疫吸附法鉴定筛选后的噬菌体克隆与脂多糖的结合活性,取结合活性较高的克隆进行DNA测序,推导其多肽序列并与LBP序列比对,再进行竞争抑制实验检测筛选噬菌体与LBP竞争结合的效力。结果选取的86个噬菌体克隆中,多数结合实验鉴定阳性,取20个亲和力最高的克隆测序,得到20条不同编码的12肽序列,20条多肽与LBP一级结构有不同程度同源性,均为模拟肽。12个噬菌体克隆有较高的竞争抑制率。结论用噬菌体12肽库成功筛选出LBP与脂多糖结合位点模拟肽,为进一步以这些多肽为先导物进行定向进化研究提供了实验依据和结构基础。 展开更多

关键词 脂多糖结合蛋白 噬菌体肽库 模拟肽

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内毒素结合肽模拟肽P11的体外活性研究

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作者 杨海捷 段光杰 +2 位作者 朱江 陈锐 刘友生 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期309-315,共7页

目的对从噬菌体展示随机肽库筛选获得的内毒素结合肽模拟肽进行体外拈抗内毒素活性鉴定。方法采用FMOC固相合成法化学合成内毒素结合肽模拟肽P11，并进行拮抗内毒素活性和细胞毒性测定。结果亲和ELISA检测显示P11与LPS有较高的亲和力，... 目的对从噬菌体展示随机肽库筛选获得的内毒素结合肽模拟肽进行体外拈抗内毒素活性鉴定。方法采用FMOC固相合成法化学合成内毒素结合肽模拟肽P11，并进行拮抗内毒素活性和细胞毒性测定。结果亲和ELISA检测显示P11与LPS有较高的亲和力，通过生长曲线和流式细胞学分析细胞周期显示P11对人U937细胞生长无明显影响。流式细胞检测显示P11呈剂量依赖性抑制FITC—LPS与人外周血单核细胞（PBMC）结合。细胞因子生成抑制实验显示10μg/mlP11可显著抑制LPS诱导PBMC和U937细胞TNF—αmRNA转录和蛋白表达。结论体外活性鉴定结果表明化学合成的模拟肽P11可抑制LPS诱导的炎性反应。 展开更多

关键词 脓毒血症 内毒素结合肽 模拟肽 生物活性

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飞行员非阵发性房室交界性心动过速1例

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作者 杨韶艳 杨海捷 张学凡 《航空军医》 2000年第6期265-265,共1页

1 临床资料 患者男性,31岁,歼-6飞行员,飞行时间1000h。无明显诱因突发心悸,伴头晕、恶心、持续约3min来诊。就诊时症状已缓解。查体:生命体征平稳。心电图示:心率88次/min,律齐。Ⅱ、Ⅲ、aVF导联P波侄倒置,Ⅱ、Ⅲ导联还可见房性融合波... 1 临床资料 患者男性,31岁,歼-6飞行员,飞行时间1000h。无明显诱因突发心悸,伴头晕、恶心、持续约3min来诊。就诊时症状已缓解。查体:生命体征平稳。心电图示:心率88次/min,律齐。Ⅱ、Ⅲ、aVF导联P波侄倒置,Ⅱ、Ⅲ导联还可见房性融合波。其余导联为窦性P波,P-R间期0.10s。 展开更多

关键词 异位交界性心动过速 飞行员 病例报告 心电图

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飞行员服用西沙必利致心律失常1例

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作者 杨海捷 张学凡 《航空军医》 2000年第4期170-170,共1页

1 临床资料 患者,男,24岁,歼击机飞行员,飞行时间1600h。该飞行员患慢性浅表性胃炎伴胆汁返流,但不影响飞行。2000年1月患者听说西沙必利治胃病效果好,遂自购西沙必利2盒,每次口服10 mg,每日3次,自觉效果非常显著。服药数日后,在一次打... 1 临床资料 患者,男,24岁,歼击机飞行员,飞行时间1600h。该飞行员患慢性浅表性胃炎伴胆汁返流,但不影响飞行。2000年1月患者听说西沙必利治胃病效果好,遂自购西沙必利2盒,每次口服10 mg,每日3次,自觉效果非常显著。服药数日后,在一次打篮球中曾出现轻度头晕、乏力。航医检查其脉搏为61次/min,血压100/70 mmHg(该飞行员平时安静状态下脉搏77次/min,血压115/75 mmHg),认为是疲劳所致,未在意,建议其适当休息。此后断续服用西沙必利。 展开更多

关键词 西沙必利 药物过敏

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