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中国不同年代食品动物大肠杆菌耐药性调查研究 被引量：30
1
作者 宋立 宁宜宝 +4 位作者 沈建忠 范学政 张纯萍 杨承槐 韩剑峰 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2009年第7期692-698,共7页
收集到20世纪70，80，90年代和2000年食品动物大肠杆菌共326株，对不同年代的大肠杆菌进行耐药性、整合子／基因盒测定，结果表明在过去的30多年里，食品动物大肠杆菌耐药性呈逐渐增长的趋势．从1970～2000年，对青霉素类的耐药率从19．... 收集到20世纪70，80，90年代和2000年食品动物大肠杆菌共326株，对不同年代的大肠杆菌进行耐药性、整合子／基因盒测定，结果表明在过去的30多年里，食品动物大肠杆菌耐药性呈逐渐增长的趋势．从1970～2000年，对青霉素类的耐药率从19．0％增长到81．3％；对四环素类药的耐药率从61．9％～63．5％增长到89．5％～93．1％；对氨基糖甙类的耐药率从0-9．5％增长到5．0％～63．1％，对氟喹诺酮类的耐药率从0％增长到50.2％-53．0％；对磺胺类药的耐药率从11．7％～57．1％增长到77．7％～79．7％；对氯霉素的耐药率从39．7％增长到51．8％．整合子的携带率从20世纪70年代的17．5％增长到2000年的79．1％，其中大多数为I型整合子，也有少数Ⅱ型整合子（90年代为4．4％，2000年为11．8％）．在20世纪70和80年代，大多数I型整合子的基因盒编码aadAI基因，比例分别为72．7％和70．0％．20世纪90年代和2000年基因编码dfrA—aadA的占多数，分别为80．0％和74．7％．近4个世纪以来，细菌的多重耐药谱也逐渐增宽．本项研究给兽医从业者滥用抗菌药提出了警示，同时提出中国动物源细菌耐药性的监测和控制是必要的． 展开更多
关键词 大肠杆菌 耐药性 整合子/基因盒 不同年代
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新型甲型H7N9禽流感病毒研究进展 被引量：14
2
作者 汪洋 韩焘 +2 位作者 姜畔 王敏 杨承槐 《中国病毒病杂志》 CAS 2015年第1期67-71,共5页
自2013年3月以来,我国华东地区上海、安徽、江苏、浙江、广东和香港等地先后发生不明原因重症肺炎病例,绝大多数患者曾有活禽鸟接触史,经病原体分离鉴定后,确诊为人感染H7N9禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）[1],由国家卫生和计... 自2013年3月以来,我国华东地区上海、安徽、江苏、浙江、广东和香港等地先后发生不明原因重症肺炎病例,绝大多数患者曾有活禽鸟接触史,经病原体分离鉴定后,确诊为人感染H7N9禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）[1],由国家卫生和计划生育委员会（原卫生部）于2013年3月31日正式通报。截至2014年3月7日全国共确诊H7N9禽流感病例384例,死亡100例,目前病例均为散发，并未见人际间传播。这是H7N9禽流感病毒在人类中的首发，感染者发病急，致死率高；且H7N9禽流感病毒比其他H7亚型的流感病毒对人体具有更强地毒力和致命性[2]。该病毒对人体较好地适应性提示H7N9禽流感病毒对公众健康的威胁不容忽视。因此，我国相关医药卫生及兽医部门应及时做好防控应对措施，以免发生该型流感的广泛流行。 展开更多
关键词 甲型H7N9禽流感病毒 病原学特征 治疗 疫苗
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猪链球菌Ⅱ型四川分离株对抗菌药的敏感性分析 被引量：9
3
作者 宋立 高光 +5 位作者 宁宜宝 杨承槐 万仁玲 张秀英 石谦 张东 《中国兽药杂志》 2005年第10期1-5,共5页
对四川省不同地区链球菌病病死猪体内分离的7株链球菌Ⅱ型进行抗菌药敏感性试验,用链球菌兰氏D群C55914作为对照,比对菌为肺炎链球菌质控菌株ATCC49619。在32种抗菌药中,选择29种药物进行纸片法药敏试验。试验结果表明:7株链球菌耐药谱... 对四川省不同地区链球菌病病死猪体内分离的7株链球菌Ⅱ型进行抗菌药敏感性试验,用链球菌兰氏D群C55914作为对照,比对菌为肺炎链球菌质控菌株ATCC49619。在32种抗菌药中,选择29种药物进行纸片法药敏试验。试验结果表明:7株链球菌耐药谱非常相似,对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、奥格门丁、卡那霉素、红霉素、壮观霉素、氯霉素、氟苯尼考、头孢氨苄、头孢拉定、头孢他定、头孢呋辛、头孢曲松、环丙沙星、氧氟沙星、二氟沙星、沙拉沙星、达氟沙星、恩诺沙星、复方新诺明、万古霉素、亚安培南均敏感;对阿米卡星、新霉素、庆大霉素3株敏感,4株中敏;对四环素和多西环素2株中敏,5株耐药;对链霉素1株中敏,6株耐药。用21种药物进行最小抑菌浓度(M IC)测定,结果7株均对青霉素、氨苄西林、卡那霉素、红霉素、头孢他定、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻呋、环丙沙星、达氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、沙拉沙星、恩诺沙星、磺胺六甲氧嘧啶敏感,1株对新霉素和阿米卡星中敏,2株耐药;所有菌株对四环素、土霉素、多西环素、链霉素均耐药。两种方法总体结果一致。 展开更多
关键词 猪链球菌Ⅱ型 耐药性测定
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猪源大肠杆菌血清型 耐药性 整合子调查 被引量：8
4
作者 宋立 宁宜宝 +5 位作者 张秀英 赵辉 杨承槐 王琴 范学政 张纯萍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第5期14-15,共2页
分别在北京地区采集正常猪泄殖腔拭子50份,河南123份,分离到大肠杆菌150株,分离率为86.7%。菌株血清型分布广,呈地区性、多样性和可变性。北京菌株耐药率低,除对四环素为73.8%外,对其他21种药物耐药率均在16.7%以下;河南地区菌株耐药率... 分别在北京地区采集正常猪泄殖腔拭子50份,河南123份,分离到大肠杆菌150株,分离率为86.7%。菌株血清型分布广,呈地区性、多样性和可变性。北京菌株耐药率低,除对四环素为73.8%外,对其他21种药物耐药率均在16.7%以下;河南地区菌株耐药率高,对青霉素类、磺胺甲基异口恶唑高达75.0%以上。北京地区菌株整合子携带率为18.6%,河南地区为75.7%。整合子携带频率与细菌耐药性相关。 展开更多
关键词 猪源大肠杆菌 血清型 耐药性 整合子
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鸡传染性支气管炎病毒基因型与血清型相关性初步研究 被引量：8
5
作者 汪洋 李俊平 +4 位作者 杨承槐 李启红 黄建华 于静 夏业才 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期845-848,共4页
为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因型与血清型之间的相关性,本研究以国内不同地区的17株IBV分离株、2株疫苗株(M41、W93)和1株强毒株(X株)为研究对象,经RT-PCR扩增获得20株IBV的S1基因并进行测序。将其分别与GenBank中的20株国内外参... 为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因型与血清型之间的相关性,本研究以国内不同地区的17株IBV分离株、2株疫苗株(M41、W93)和1株强毒株(X株)为研究对象,经RT-PCR扩增获得20株IBV的S1基因并进行测序。将其分别与GenBank中的20株国内外参考IBV株的S1基因进行序列比较,绘制S1基因系统进化树。结果表明:这20株IBV与20株参考病毒株可分为3个基因型:LX4型、Mass型和X型,其中本研究中绝大多数IBV株属于LX4型。根据这一基因分型结果,从这3个基因型中分别选取差异性较大的6株IBV,即X型的X株,Mass型中的M41、W93、333-3株,LX4型中的DC07-1、333-7株,将其分别免疫SPF鸡制备高免血清,进行血清交叉中和试验,计算IBV各病毒株间抗原性的相关系数(R)。结果表明:6株IBV经血清交叉中和试验可分为3个血清型:333-3、M41、W93株为同一血清型,DC07-1、333-7株为同一血清型,X株为另外一个血清型。以上结果表明:IBV的基因分型与血清分型相一致。这为目前IBV的分型提供一定的参考依据,对今后鸡传染性支气管炎的防控具有一定的意义。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 基因型 血清型 相关性
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鸡新城疫-鸡传染性支气管炎-禽流感-产蛋下降综合征四联灭活油乳剂疫苗的研制与免疫试验 被引量：5
6
作者 亢文华 郝俊峰 +5 位作者 张仲秋 宁宜宝 宋立 韩剑锋 杨承槐 赵德明 《中国兽药杂志》 2005年第7期23-26,共4页
用鸡新城疫LaSota株,鸡传染性支气管炎H120株,产蛋下降综合征127株和禽流感病毒HB1(H9N2)株做为抗原制成油乳剂灭活联苗,并对其进行了物理性状、纯净、安全性、灭活效果、保存期和免疫效力等方面的检验。证明所制备疫苗完全符合质量标准... 用鸡新城疫LaSota株,鸡传染性支气管炎H120株,产蛋下降综合征127株和禽流感病毒HB1(H9N2)株做为抗原制成油乳剂灭活联苗,并对其进行了物理性状、纯净、安全性、灭活效果、保存期和免疫效力等方面的检验。证明所制备疫苗完全符合质量标准;鸡体对该疫苗4种抗原均产生了良好的免疫应答;攻毒试验证明,免疫鸡能良好地抵抗同种强毒的攻击;所制备疫苗于2～8℃保存12个月后,其免疫效力没有下降。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎 产蛋下降综合征 鸡新城疫 灭活油乳剂疫苗 免疫试验 研制 免疫效力 禽流感病毒 物理性状 灭活效果 质量标准 免疫应答 攻毒试验 安全性 保存期 免疫鸡 抗原 制备 证明 联苗 鸡体 强毒
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表达H9亚型禽流感病毒HA基因重组鸭肠炎病毒的构建 被引量：7
7
作者 孙莹 张兵 +8 位作者 李岭 黄小洁 侯力丹 刘丹 李启红 李俊平 王乐元 李慧姣 杨承槐 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第23期4398-4405,共8页
【背景】H9亚型禽流感病毒(AIV)存在宿主范围扩大、毒力增强的趋势,并为其他亚型AIV重排提供基因,给养禽业和公共卫生造成极大威胁。水禽不仅是流感病毒的宿主,更是其天然储存库,在禽流感病毒的传播和变异中发挥着重要作用。因此有效控... 【背景】H9亚型禽流感病毒(AIV)存在宿主范围扩大、毒力增强的趋势,并为其他亚型AIV重排提供基因,给养禽业和公共卫生造成极大威胁。水禽不仅是流感病毒的宿主,更是其天然储存库,在禽流感病毒的传播和变异中发挥着重要作用。因此有效控制水禽感染对养禽业健康发展、公共卫生安全具有重要意义。鸭肠炎病毒(DEV)属于疱疹病毒,能感染鸭、鹅等雁形目禽类,可引起产蛋下降及高死亡率。DEV基因组大,免疫原性好,具有开发成活疫苗载体的潜力。【目的】构建缺失gE基因、表达H9亚型AIV HA基因的重组病毒rDEV-△gE-HA,探讨重组病毒rDEV-△gE-HA作为防治DEV-AIV的二联重组活载体疫苗的可行性。【方法】以H9N2亚型禽流感病毒HA基因作为靶基因,构建含有HA基因表达盒的转移载体pT-gE-HA,将其与携带绿色荧光蛋白标记的重组rDEV-△gE-GFP共转染CEF细胞后,进行蚀斑筛选、纯化表达HA基因的重组病毒rDEV-△gE-HA;利用PCR、基因测序鉴定重组病毒;在CEF中连续传代重组病毒20次,测定外源基因传代稳定性。以10^3 TCID50免疫易感鸭,分析重组病毒rDEV-ΔgE-HA对致死性DEV强毒攻毒保护效果;将不同剂量(10^3-10^6TCID50)rDEV-△gE-HA免疫鸭,免疫后14、21、28 d分别采集血清,测定H9血凝抑制(HI)抗体,并在免疫后28 d,以108EID50的剂量静脉注射H9N2AIV(A/duck/GD/08),攻毒后2 d,采集喉拭子,进行病毒分离试验。【结果】将构建的转移质粒载体pT-gE-HA与rDEV-△gE-GFP共转染CEF细胞,经过3轮蚀斑筛选,获得纯化的重组病毒rDEV-△gE-HA。PCR鉴定及基因测序结果显示,HA基因成功地插入到DEV基因组中,替换了绿色荧光蛋白。重组病毒在CEF中至少能稳定传代20代。重组病毒rDEV-ΔgE-HA以10^3 TCID50免疫易感鸭,能抵抗致死性DEV强毒攻击。重组病毒rDEV-Δg E-HA免疫易感鸭后14 d,各剂量免疫组均能检测到H9 HI抗体效价;免疫后21日,各组抗体� 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 H9亚型禽流感病毒 HA 重组病毒
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鸡抗REV血清的制备与检定 被引量：7
8
作者 李俊平 杨承槐 +3 位作者 李启红 夏业才 黄建华 陈永忠 《中国兽药杂志》 2011年第9期15-18,共4页
用网状内皮组织增生症病毒(REV)HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISAI、FA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种(或亚型)病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫... 用网状内皮组织增生症病毒(REV)HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISAI、FA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种(或亚型)病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫荧光试验(IFA)的效价为1∶2000,用于IFA检测REV的染色效果与REV单抗(11B18和11B54的混合物)相当。试验结果表明,该批血清1000倍稀释可作为一抗,用于REV的间接免疫荧光检测。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 抗血清 间接免疫荧光试验
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实时荧光PCR技术快速鉴别检测H5、H9、H7亚型禽流感灭活疫苗的研究 被引量：5
9
作者 韩剑锋 宁宜宝 +1 位作者 宋立 杨承槐 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期953-957,共5页
选取H5、H9、H7亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)血凝素(hemagglutinin,HA)基因保守序列,利用PrimerExpress2.0软件设计了各自亚型的特异性引物和Taqman MGB探针,利用实时荧光RT-PCR一步法建立了H5、H9、H7亚型禽流感灭活疫... 选取H5、H9、H7亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)血凝素(hemagglutinin,HA)基因保守序列,利用PrimerExpress2.0软件设计了各自亚型的特异性引物和Taqman MGB探针,利用实时荧光RT-PCR一步法建立了H5、H9、H7亚型禽流感灭活疫苗的鉴别检测方法,该方法特异性好,重复性佳,对其他疫苗无交叉反应。结果表明实时荧光PCR方法为禽流感灭活疫苗提供了一种特异、敏感、快速和简洁的鉴别检测方法。 展开更多
关键词 实时荧光PCR 禽流感灭活疫苗 鉴别检测
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禽用活病毒载体疫苗的研究进展
10
作者 王丽华 宋亚芬 +3 位作者 张兵 张乾义 赵永达 杨承槐 《中国兽药杂志》 2024年第8期70-79,共10页
疫苗接种是家禽疾病防控最有效的策略之一,随着分子生物学的发展,重组DNA技术被广泛用于许多新型家禽疫苗的构建和生产中。就近年来常用的火鸡疱疹病毒、鸭瘟病毒、传染性喉气管炎病毒、禽痘病毒、新城疫病毒等活病毒载体疫苗研究进展... 疫苗接种是家禽疾病防控最有效的策略之一,随着分子生物学的发展,重组DNA技术被广泛用于许多新型家禽疫苗的构建和生产中。就近年来常用的火鸡疱疹病毒、鸭瘟病毒、传染性喉气管炎病毒、禽痘病毒、新城疫病毒等活病毒载体疫苗研究进展进行综述,分析其临床应用、优缺点等,为开发更加安全有效的家禽活病毒载体疫苗提供参考。 展开更多
关键词 家禽 病毒载体 疫苗
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鸡传染性法氏囊病病毒BC6/85株VP2基因的原核表达、纯化及鉴定 被引量：6
11
作者 刘丹 杨承槐 +4 位作者 吴华伟 李启红 高金源 陈建 郎洪武 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第5期17-21,共5页
为获得可用于鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体检测的重组抗原VP2蛋白,根据GenBank中发表的IBDV VP2序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV经典标准攻毒株(BC6/85株)的VP2基因,插入质粒pET-32a中构建重组表达质粒pET-32a-VP2,经... 为获得可用于鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体检测的重组抗原VP2蛋白,根据GenBank中发表的IBDV VP2序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV经典标准攻毒株(BC6/85株)的VP2基因,插入质粒pET-32a中构建重组表达质粒pET-32a-VP2,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。重组蛋白纯化后,Western-blot检测表明具有良好的反应原性。本研究为下步建立IBDV抗体的间接ELISA方法及新型疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 VP2基因 克隆 原核表达
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牛支原体NM001株单克隆抗体的制备与鉴定
12
作者 刘莹 王静文 +3 位作者 张敏 陈小云 王磊 杨承槐 《中国兽药杂志》 2024年第2期34-39,共6页
为获得抗牛支原体NM001株单克隆抗体,并评价其特性,以牛支原体分离株NM001作为抗原免疫6周龄BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术和间接ELISA方法筛选到2株能稳定分泌抗牛支原体的单克隆抗体细胞,命名为2C5和7G3。其细胞上清的间接ELISA抗体效价... 为获得抗牛支原体NM001株单克隆抗体,并评价其特性,以牛支原体分离株NM001作为抗原免疫6周龄BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术和间接ELISA方法筛选到2株能稳定分泌抗牛支原体的单克隆抗体细胞,命名为2C5和7G3。其细胞上清的间接ELISA抗体效价分别为6.4×10^(3)和1.2×10^(4)。经亚型测定,单抗2C5和7G3均属于IgG1类,轻链均是λ型。制备腹水并对单抗进行纯化和特性鉴定,两株单抗的间接ELISA抗体效价分别为1.02×10^(5)和4.09×10^(5),且两株单抗与无乳支原体、山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体、牛巴氏杆菌均无交叉反应。Western Blot结果显示,2株单抗均能特异性识别牛支原体全菌蛋白中的相应蛋白。试验表明,单抗2C5和7G3能够与牛支原体发生特异性反应,从而为牛支原体血清学检测提供一定的物质基础。 展开更多
关键词 牛支原体 单克隆抗体 特异性
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非洲马瘟病毒(AV1311株)核糖核酸标准物质的研制
13
作者 苏佳 张敏 +5 位作者 白洪旭 张兵 赵炜 薛青红 杨承槐 陈晓春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期308-315,共8页
标准物质是分子生物学诊断技术的金标准。针对国内无非洲马瘟病毒标准物质的现状,以其AV1311株为原料,通过病毒培养、灭活、分装、特性检验等,成功制备非洲马瘟病毒(AV1311株)核糖核酸标准物质。同时,建立数字PCR方法,对标准物质进行均... 标准物质是分子生物学诊断技术的金标准。针对国内无非洲马瘟病毒标准物质的现状,以其AV1311株为原料,通过病毒培养、灭活、分装、特性检验等,成功制备非洲马瘟病毒(AV1311株)核糖核酸标准物质。同时,建立数字PCR方法,对标准物质进行均匀性评估、稳定性考察及9家实验室联合定值,并进行临床试用。结果显示,组内和组间无统计学差异,样品均匀;-20℃保存可稳定6个月,4℃保存可稳定7 d,25℃保存可稳定24 h,可冻融5次,需干冰运输;标准物质认定值为(6.9±1.1)×10^(3)copis/μL;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样品互通性良好;最终通过全国标准物质管理委员会评审,获得国家二级标准物质证书[GBW(E)091272]。综上,本标准物质定值准确,均匀性好,量值稳定,为做好国内非洲马瘟防范工作提供了物质基础。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 核糖核酸标准物质 检测 定值 数字PCR
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基于真核CMV启动子构建猪瘟病毒感染性cDNA克隆与病毒拯救
14
作者 关飞虎 王静 +6 位作者 宋亚芬 温立佳 田野 蒋颖 杨承槐 张辉 张乾义 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期561-567,607,共8页
为建立猪瘟病毒(CSFV)反向遗传操作系统,本研究将CSFV石门株(SM)全基因组克隆至pBAC11载体中,并采用重叠延伸PCR方法在病毒基因组5'端和3'端分别加入CMV真核启动子序列和RzBGH序列,并将其基因组nt2809的碱基C突变为T,将原有的Af... 为建立猪瘟病毒(CSFV)反向遗传操作系统,本研究将CSFV石门株(SM)全基因组克隆至pBAC11载体中,并采用重叠延伸PCR方法在病毒基因组5'端和3'端分别加入CMV真核启动子序列和RzBGH序列,并将其基因组nt2809的碱基C突变为T,将原有的AfeⅠ酶切位点突变消失作为拯救病毒的遗传标记。将构建的质粒转染PK-15细胞培养后,收集细胞上清盲传3代后通过RT-PCR扩增蛋白编码基因,并经间接免疫荧光试验(IFA)鉴定。RT-PCR鉴定结果显示扩增到CSFV特异性基因;IFA结果显示接种病毒的细胞出现绿色荧光。表明病毒拯救成功,将其命名为BAC-rSM。将BAC-rSM株在PK-15细胞中连续传18代,将第18代病毒经RT-PCR扩增E2基因,并对遗传标记的位点经Afe I酶切和鉴定,分析BAC-rSM病毒的遗传稳定性,结果显示第18代BAC-rSM株遗传标记稳定存在,表明拯救的病毒具有遗传稳定性。将BAC-rSM和SM株病毒分别以MOI 1感染PK-15细胞,在感染后不同时间点收获病毒并测定病毒滴度,结果显示BAC-rSM和SM株生长动力学特征基本一致。对第18代BAC-rSM株与SM株进行全基因组序列比对分析,利用在线软件npsa-prabi.ibcp.fr/对Erns和E2蛋白二级结构预测,采用荧光定量PCR(qPCR)对BAC-rSM和SM株感染PK-15细胞中IFN-βmRNA的转录水平。全基因测序比对分析结果显示,BAC-rSM株基因组共存在46个碱基突变,经预测其Erns和E2的突变导致各自的二级结构改变;qPCR检测结果显示,相对SM感染的PK-15细胞,BAC-rSM感染后8 h和24 h PK-15细胞中IFN-βmRNA的转录水平显著或极显著降低(P<0.05、P<0.01)。本研究建立了一种简单、操作方便的CSFV反向遗传操作系统的方法,为进一步开展CSFV的分子生物学、毒力决定因素、分子发病机制、疫苗开发和病毒与宿主相互作用的研究提供了新的技术方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 CMV启动子 感染性克隆 反向遗传操作系统
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血清Ⅲ型马立克病病毒单克隆抗体的制备及在疫苗蚀斑计数中的应用
15
作者 李文超 刘丹 +5 位作者 杨承槐 李启红 李欣 张莹 毛娅卿 李俊平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期258-263,共6页
通过制备马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)血清Ⅲ型特异性单克隆抗体,并对其特性进行鉴定,为建立鸡马立克病(Marek’s disease,MD)二价活疫苗间接免疫荧光蚀斑计数方法奠定基础。以纯化的MDV血清Ⅲ型HVT Fc-126株免疫BALB/c小... 通过制备马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)血清Ⅲ型特异性单克隆抗体,并对其特性进行鉴定,为建立鸡马立克病(Marek’s disease,MD)二价活疫苗间接免疫荧光蚀斑计数方法奠定基础。以纯化的MDV血清Ⅲ型HVT Fc-126株免疫BALB/c小鼠,采用常规单克隆抗体技术,经间接免疫荧光方法筛选杂交瘤细胞株;选取1株制备MDVⅢ型单克隆抗体,建立MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数方法。结果筛选出2株稳定分泌抗MDV血清Ⅲ型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并选择1D2株单抗建立了检测MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数方法,可快速准确地计数二价活疫苗中血清Ⅲ型病毒的蚀斑形成单位数(Plaque forming unit,PFU),与琼脂覆盖法相比,敏感性和特异性大大提高。因此,制备的MDV单克隆抗体具有良好的血清型特异性,可用于MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数。 展开更多
关键词 马立克病病毒 血清型 单克隆抗体 二价疫苗 蚀斑计数
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根癌农杆菌介导伪狂犬病毒gD基因转化玉米的研究 被引量：3
16
作者 胡建广 祁喜涛 +1 位作者 杨承槐 娄高明 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第6期771-774,共4页
将克隆的猪伪狂犬病毒保护性抗原基因gD插入质粒pBA002,构建了植物表达载体pBA-gD。利用根癌农杆菌LBA4404介导,将该基因导入甜玉米自交系1132,转化获得84株转基因系。经过点杂交、Southern杂交分析,有23个转基因株系基因组检测到gD基... 将克隆的猪伪狂犬病毒保护性抗原基因gD插入质粒pBA002,构建了植物表达载体pBA-gD。利用根癌农杆菌LBA4404介导,将该基因导入甜玉米自交系1132,转化获得84株转基因系。经过点杂交、Southern杂交分析,有23个转基因株系基因组检测到gD基因稳定整合。Northern杂交显示有5个转基因株系的目标基因正确表达。 展开更多
关键词 玉米 伪狂犬病 GD基因 根癌农杆菌介导
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Ⅰ群禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备和鉴定 被引量：4
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作者 侯力丹 陈晓春 +5 位作者 薛麒 邓永 孔冬妮 杨承槐 刘丹 李俊平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期41-46,共6页
在同源性分析基础上,确定了12个血清型penton蛋白同源性最高的2段基因并通过linker进行连接,以该串联基因原核表达蛋白为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备并筛选到2株可分泌FAdV-Ⅰpenton蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系(Mab-penton-6#和M... 在同源性分析基础上,确定了12个血清型penton蛋白同源性最高的2段基因并通过linker进行连接,以该串联基因原核表达蛋白为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备并筛选到2株可分泌FAdV-Ⅰpenton蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系(Mab-penton-6#和Mab-penton-9#)。2株单克隆抗体小鼠腹水经间接免疫荧光等鉴定,可识别FAdV-Ⅰ的所有血清型代表毒株,与鸡减蛋综合征病毒、禽白血病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽呼肠孤病毒等均不发生反应,特异性良好,效价分别为1∶8000和1∶4000,最终选取Mab-penton-6#大量制备单克隆抗体。本试验成功研制出FAdV-I的penton蛋白单克隆抗体,为FAdV-Ⅰ检测方法的建立奠定了良好基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒I群 单克隆抗体 penton蛋白
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致病性大肠杆菌HPI毒力岛及其水平转移的研究进展 被引量：1
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作者 邹宏 罗干 +4 位作者 陈玲 杜鹏飞 张乾义 杨承槐 田野 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3430-3437,共8页
致病性大肠杆菌作为肠杆菌科成员和人兽共患病病原体之一,在一定条件下可通过多种途径引起人和动物感染并引发不同的大肠杆菌病病型。由于致病性大肠杆菌的血清型和毒力因子众多、耐药趋势严峻、存在生物被膜等因素导致大肠杆菌病的流... 致病性大肠杆菌作为肠杆菌科成员和人兽共患病病原体之一,在一定条件下可通过多种途径引起人和动物感染并引发不同的大肠杆菌病病型。由于致病性大肠杆菌的血清型和毒力因子众多、耐药趋势严峻、存在生物被膜等因素导致大肠杆菌病的流行趋势复杂且疫苗研发困难,给国内外的畜禽养殖业带来一定的经济损失。高致病性岛(high-pathogenicity island,HPI)最早发现于耶尔森菌,被证实是其毒力表型所必需的基因组岛,为强毒力岛。由于细菌的水平转移机制让该毒力岛在其他肠杆菌科中被广泛检出。其中HPI毒力岛也在致病性大肠杆菌如肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhage Escherichia coli,EHEC)、产志贺毒素大肠杆菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)等中被大量检出,被证实影响致病性大肠杆菌毒力,参与致病性大肠杆菌铁元素摄取和介导宿主免疫反应等。为进一步了解HPI毒力岛在致病性大肠杆菌中的铁元素调控机理、致病特性、介导的细胞免疫反应和水平转移途径,现从HPI毒力岛结构、如何调控耶尔森菌素铁载体、HPI毒力岛致病性及调控细胞免疫反应、HPI毒力岛的水平转移进行概述,以期望为大肠杆菌的致病机理及大肠杆菌病的防控提供帮助。 展开更多
关键词 人兽共患病病原 致病性大肠杆菌 HPI毒力岛 水平转移
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一株牛支原体的分离鉴定及致病性初步研究 被引量：5
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作者 刘莹 杨承槐 +1 位作者 陈小云 王磊 《中国兽药杂志》 2021年第3期6-10,共5页
对采集到的疑似牛支原体肺炎肺组织病料进行病原的分离,并对分离株进行形态学、生化和分子生物学鉴定,结果显示成功分离获得1株牛支原体,命名为NM001。该分离株的菌落形态呈典型的“荷包蛋状”,不能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿... 对采集到的疑似牛支原体肺炎肺组织病料进行病原的分离,并对分离株进行形态学、生化和分子生物学鉴定,结果显示成功分离获得1株牛支原体,命名为NM001。该分离株的菌落形态呈典型的“荷包蛋状”,不能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素。PCR能够扩增出牛支原体特异的P48基因条带,16S rRNA基因序列与Ningxia-1序列同源性为99.03%。将该分离株接种2头6月龄犊牛均出现明显的临床症状,剖检后胸腔中少量淡黄色渗出液,肺脏出现肉样实变。试验结果表明,分离到的牛支原体NM001株对牛具有较强的致病性,为牛支原体攻毒模型的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 牛支原体 分离 鉴定 致病性
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坦布苏病毒的致病性研究进展 被引量：1
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作者 李钰钰 张桂铭 +3 位作者 王丽华 焦培荣 宋亚芬 杨承槐 《中国兽药杂志》 2023年第3期81-89,共9页
自2010年以来,坦布苏病毒病给我国水禽养殖业造成了巨大的经济损失。坦布苏病毒病是由坦布苏病毒引起的一种急性传染病,感染该病的鸭、鹅等禽类常出现采食量下降、腹泻、神经障碍、卵巢出血破裂、产蛋严重下降等临床症状。就坦布苏病毒... 自2010年以来,坦布苏病毒病给我国水禽养殖业造成了巨大的经济损失。坦布苏病毒病是由坦布苏病毒引起的一种急性传染病,感染该病的鸭、鹅等禽类常出现采食量下降、腹泻、神经障碍、卵巢出血破裂、产蛋严重下降等临床症状。就坦布苏病毒对不同细胞的感染性及对禽类和哺乳动物的致病性进行综述,以期为坦布苏病毒的致病性研究和综合防控提供参考。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 致病性 细胞 禽类 哺乳动物
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