使用流式细胞仪分离精子进行仔猪性别控制的研究 被引量：12

1

作者 曾有权 陆阳清 +3 位作者 杨小淦 卢晟盛 张明 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1163-1169,共7页

本研究旨在探索流式细胞仪分离精子在猪性别控制中的应用。使用流式细胞仪分离猪XY精子,而后通过母猪输卵管授精生产"预知"性别的仔猪,并使用吖啶橙染色法检测粗分离对精子核酸含量的影响。结果,成功利用分离获得的猪X和Y精... 本研究旨在探索流式细胞仪分离精子在猪性别控制中的应用。使用流式细胞仪分离猪XY精子,而后通过母猪输卵管授精生产"预知"性别的仔猪,并使用吖啶橙染色法检测粗分离对精子核酸含量的影响。结果,成功利用分离获得的猪X和Y精子对母猪进行输卵管授精,母猪怀孕率、产仔率均为100%;输Y精子母猪产仔雄性率100%(♂6/6),对照母猪产仔雄性率57.14%(♂8/14);3头输X精子母猪产母仔率91.67%(♀11/12),对照母猪产雌性仔猪40%(♀2/5);使用性别分离精子不影响母猪的怀孕率、产仔率,但窝产仔数较低;吖啶橙染色法检测结果表明,流式细胞仪粗分离对猪精子核酸含量没有显著影响(P>0.05)。本研究结果提示,使用流式细胞仪分离精子授精可以有效改变仔猪的性别比例。本研究结果为猪分离精子性别控制技术的推广应用奠定了基础。 展开更多

关键词 流式细胞仪 分离精子 性别控制 仔猪 核酸

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家兔超数排卵的研究 被引量：9

2

作者 杨小淦 江明生 +5 位作者 卢晟盛 朱佳杰 任子利 陆阳清 张明 卢克焕 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2006年第B09期73-77,共5页

为了寻求家兔合理的超排方案,构建获得家兔卵子和胚胎的实验平台,进行3个试验:Ⅰ比较不同剂量(40、50、60、70、80和90 IU)的孕马血清促性腺激素(PM SG)对家兔超排效果的影响;Ⅱ比较不同的促卵泡素(FSH)处理方法(恒量法和递减法)对超排... 为了寻求家兔合理的超排方案,构建获得家兔卵子和胚胎的实验平台,进行3个试验:Ⅰ比较不同剂量(40、50、60、70、80和90 IU)的孕马血清促性腺激素(PM SG)对家兔超排效果的影响;Ⅱ比较不同的促卵泡素(FSH)处理方法(恒量法和递减法)对超排效果的影响;Ⅲ比较手术后重复超排对家兔超排效果的影响。结果显示:(1)经过80 IU的PM SG超排处理后,日本长耳白兔卵巢平均排卵点数和平均回收卵子数都显著高于40、50、60、70和90 IU组(P<0.05);(2)用FSH递减法、恒量法和80 IU PM SG超排处理时,日本长耳白兔卵巢平均排卵点数和平均回收卵子数的差异不显著(P>0.05);(3)进行一次手术后重复超排,手术后重复超排的新西兰兔与术前超排效果相比,卵巢平均排卵点数和平均回收卵子数的差异不显著(P>0.05);(4)激素处理不同品种的家兔,左右两侧卵巢排卵点数和平均回收卵子数的差异均不显著(P>0.05)。结论:(1)应用PM SG进行母兔超排处理时,80 IU剂量的超排效果比较好;(2)应用FSH时,采用递减法和恒量法得到的结果差异不显著,在实践中两种方法均可用;(3)适宜的PM SG剂量(80 IU)对兔子的超排效果与FSH相似,在兔子超排处理时,可用PM SG代替FSH;(4)两次手术过程并不会影响超排效果。 展开更多

关键词 家兔 超数排卵 卵母细胞

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茉莉花渣对广西黑山羊生长性能及血清生化、抗氧化和免疫指标的影响 被引量：3

3

作者 冯明 黄恒 +11 位作者 邓福昌 陆俊致 李叶红 梁琼 黄华莉 胡俊杰 蒋慧敏 王金兴 肖鹏 杨小淦 梁兴伟 曾俊 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第10期109-114,共6页

为了探究茉莉花渣对广西黑山羊生长性能及血清生化指标、抗氧化和免疫指标的影响,试验将28只体重为24 kg左右的4月龄健康广西黑山羊随机分为两组(对照组和试验组),每组14只,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂用10%茉莉花渣替代基础日粮中6... 为了探究茉莉花渣对广西黑山羊生长性能及血清生化指标、抗氧化和免疫指标的影响,试验将28只体重为24 kg左右的4月龄健康广西黑山羊随机分为两组(对照组和试验组),每组14只,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂用10%茉莉花渣替代基础日粮中6%玉米和4%豆粕的试验日粮,两组日粮营养水平相近,精粗比均为43∶57,预试期7 d,正试验30 d;试验结束后,比较两组的生长性能(终末体重、总增重、平均日增重、平均日采食量和料重比)、经济效益(增重收益和毛收益)及血清生化指标[总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)水平,丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性及总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、三酰甘油(TG)、胆固醇(CHOL)、钙离子、镁离子、铁离子、磷离子、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)浓度]、抗氧化指标[总抗氧化能力(T-AOC),总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)浓度]和免疫指标[免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、补体蛋白3(C3)、补体蛋白4(C4)、酸性磷酸酶(ACP)和溶菌酶(LZM)水平]。结果表明:两组的终末体重、总增重、平均日增重、平均日采食量和料重比均差异不显著(P>0.05),但试验组的增重收益和毛收益均高于对照组,分别提高了11.81%和18.08%。试验组血清ALP活性、钙离子浓度、T-AOC和T-SOD活性及IgA、IgM、IgG、IL-4、C4水平显著高于对照组(P<0.05),BUN和MDA浓度显著低于对照组(P<0.05),其他血清生化指标、抗氧化指标和免疫指标在两组间差异不显著(P>0.05)。说明用10%茉莉花渣替代基础日粮中6 展开更多

关键词 茉莉花渣 广西黑山羊 生长性能 血清生化指标 抗氧化能力 免疫能力

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水牛免疫乳抑菌试验 被引量：3

4

作者 唐东平 杨炳壮 +4 位作者 岳惠芬 王士长 贺海平 卓永同 杨小淦 《动物科学与动物医学》 2003年第1期27-29,共3页

用奶水牛免役乳抗体提取物进行抑菌试验 ,免疫乳中的抗体表现出较强的抑菌效力。当提取物中的Ig以终浓度为 1.0 mg/ m L 加入到霍乱弧菌和伤寒杆菌的培养液中时 ,能有效地抑制霍乱弧菌和伤寒杆菌的生长。

关键词 水牛 免疫乳抑菌 试验 继代培养 霍乱弧菌 伤寒杆菌

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猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究 被引量：5

5

作者 任子利 赵彦玲 +3 位作者 杨小淦 陆阳清 卢晟盛 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期921-931,共11页

本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较... 本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%～80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5～1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%～80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。 展开更多

关键词 猪 化学辅助去核 脱羰秋水酰碱 手工体细胞核移植

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基于基因组重测序的广西地方猪种遗传多样性和选择信号分析 被引量：1

6

作者 黎旺长 刘玮玮 +1 位作者 龙佳佳 杨小淦 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2415-2422,共8页

【目的】基于全基因组重测序研究分析广西地方猪种与西方商业猪种的遗传结构,挖掘出广西地方猪种的选择基因,为我国地方猪种质资源的保存和利用打下基础。【方法】对广西地方猪种(巴马香猪、东山猪和陆川猪)和西方商业猪种(杜洛克猪、... 【目的】基于全基因组重测序研究分析广西地方猪种与西方商业猪种的遗传结构,挖掘出广西地方猪种的选择基因,为我国地方猪种质资源的保存和利用打下基础。【方法】对广西地方猪种(巴马香猪、东山猪和陆川猪)和西方商业猪种(杜洛克猪、长白猪和大白猪)共60头猪个体进行基因组重测序分析,经质控后分别进行猪种亲缘关系、主成分层次、连锁不平衡衰减、群体遗传结构、系统发育进化树及群体遗传分化指数(Fst)等分析。【结果】西方商业猪种与广西地方猪种间的群体遗传关系较远,西方商业猪种群体聚集在一起,而广西地方猪种群体较分散;构建的系统发育进化树显示,6个猪种聚类成3个分支,其中,东山猪单独聚为一支,巴马香猪和陆川猪聚为一支,而杜洛克猪、大白猪和长白猪聚类在另一分支上。广西地方猪种组均被选择的位点共有641个受选择区域,最终定位注释到108个基因,其中Cenpp基因的受选择区域高达25个。这些基因显著注释到自然杀伤细胞分化正向调控、翻译抑制因子活性、mRNA调控元件结合、肽激素加工、正调控细胞迁移参与新生血管生成、电压门控离子通道活性及离子跨膜转运调控等GO功能条目;KEGG信号通路富集分析发现显著富集于内吞作用、cGMP-PKG信号、胆汁分泌、肌醇磷酸盐代谢和磷脂酰肌醇信号系统等通路上。【结论】广西地方猪种与西方商业猪种间存在明显差异,但广西地方猪种内部存在较高的近交现象,部分猪种可能受到西方商业猪种的影响,而导致其血统不纯。广西地方猪种共有641个受选择信号区域,定位注释到的108个基因主要参与离子跨膜转运、磷脂酰肌醇信号系统、正调控细胞迁移及新生血管生成等通路,其中Mrps27基因可能与广西地方猪种独特的生长发育有关。 展开更多

关键词 广西地方猪种 西方商业猪种 遗传多样性 选择信号 基因组重测序

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猪手工体细胞核移植电融合/激活参数的优化 被引量：4

7

作者 任子利 赵彦玲 +3 位作者 杨小淦 陆阳清 卢晟盛 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1246-1252,共7页

通过对猪体细胞核移植中电融合及联合化学激活对猪重构胚发育能力进行探讨,为广西巴马小型猪的手工克隆搭建平台。利用手工克隆(HMC)技术对猪体细胞核移植胚胎采用不同的电融合方法和融合后化学激活不同时间,研究猪手工克隆胚胎的发育... 通过对猪体细胞核移植中电融合及联合化学激活对猪重构胚发育能力进行探讨,为广西巴马小型猪的手工克隆搭建平台。利用手工克隆(HMC)技术对猪体细胞核移植胚胎采用不同的电融合方法和融合后化学激活不同时间,研究猪手工克隆胚胎的发育能力。结果表明:(1)对重构胚进行一步法电融合时,参数2(180V·mm-1,30μs×1次)与参数1(160·mm-1,30μs×1次)两组间的融合率差异显著(65.31%vs58.33%,P<0.05);(2)对重构胚进行两步法融合时,参数3(第一次:180V·mm-1,10μs×1次,融合60min后进行第二次融合;第二次:85V·mm-1,80μs×1次)和参数4(第一次:200V·mm-1,10μs×1次,融合60min后进行第二次融合;第二次:85V·mm-1,80μs×1次)两组间的总融合率差异不显著(75.88%vs81.20%,P>0.05);(3)采用参数4与采用参数2融合的重构胚其分裂率和囊胚率均差异不显著((79.98%vs72.66%)和(13.14%vs9.36%),P>0.05);(4)在电激活和CHX+CB联合激活4、5、6h这3组中,其分裂率和囊胚率均差异不显著(P>0.05)。相对而言,重构胚采用参数4的两步融合法和CHX+CB激活5h效果较好。 展开更多

关键词 猪 卵母细胞 手工克隆 体细胞核移植

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猪单个卵母细胞体外转录体系的建立 被引量：3

8

作者 杨小淦 江明生 +6 位作者 卢晟盛 刘红波 任子利 吕培茹 张明 陆阳清 卢克焕 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期31-37,共7页

利用switching mechanism at 5′end of RNA transcript(SMART)技术对猪单个体外成熟培养的MⅡ期卵母细胞进行了扩增,在此基础上,利用T7体外转录技术进行体外转录,aRNA浓度达到1.962μg。通过联合SMART技术和T7体外转录技术,mRNA浓度扩... 利用switching mechanism at 5′end of RNA transcript(SMART)技术对猪单个体外成熟培养的MⅡ期卵母细胞进行了扩增,在此基础上,利用T7体外转录技术进行体外转录,aRNA浓度达到1.962μg。通过联合SMART技术和T7体外转录技术,mRNA浓度扩增了2.3×104倍左右,这个数量级已基本能满足cDNA array等通量筛选研究的需求。本研究为珍贵和微量的生物材料进行高通量筛选研究提供了一个有效的体系。 展开更多

关键词 猪卵母细胞 SMART技术 T7体外转录技术

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罗汉果甜苷V对持续光照小鼠脂肪积累的缓解作用 被引量：2

9

作者 刘嘉昊 王金兴 +6 位作者 胡俊杰 冯明 蒋慧敏 李孟琪 卢克焕 杨小淦 梁兴伟 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2624-2633,共10页

【目的】探究罗汉果甜苷V(MV)缓解持续光照导致小鼠脂肪积累的作用,为罗汉果在畜禽健康养殖中的应用提供参考依据。【方法】以15周龄雄性C57BL/6小鼠为研究对象,随机分为对照组(12 h光照∶12 h黑暗)、持续光照组(24 h光照)及持续光照添... 【目的】探究罗汉果甜苷V(MV)缓解持续光照导致小鼠脂肪积累的作用,为罗汉果在畜禽健康养殖中的应用提供参考依据。【方法】以15周龄雄性C57BL/6小鼠为研究对象,随机分为对照组(12 h光照∶12 h黑暗)、持续光照组(24 h光照)及持续光照添加MV处理组(每日灌胃100 mg/kg的MV),试验周期为5周。试验期间监测小鼠体质量和采食量,并检测其体脂率和能量代谢水平;试验结束后处死小鼠,采集腹股沟白色脂肪(iWAT)和附睾白色脂肪(e WAT)进行称重,通过苏木精—伊红(H-E)染色观察脂肪细胞形态学特征,并以实时荧光定量PCR检测脂肪组织中脂肪代谢及能量代谢相关基因的表达情况。【结果】在整个试验过程中,各处理组小鼠的体质量与采食量均无显著差异(P>0.05),但持续光照能导致小鼠体脂率极显著升高(P<0.01,下同),而氧气消耗量、二氧化碳排出量及产热量等基础代谢参数均极显著降低,iWAT和eWAT的百分比及细胞直径均极显著增大;iWAT和eWAT中的脂肪合成相关基因(Fabp4、Pparg2和Zfp423)相对表达量极显著上调,脂肪分解相关基因Lpl相对表达量极显著下调,能量代谢基因(Sirt1和Ppargc1a)相对表达量显著(P<0.05)或极显著下调,炎症反应相关基因Nfkb1相对表达量极显著上调。经MV处理后能使持续光照小鼠上述变化指标均恢复至正常水平,即MV能有效改善持续光照导致的小鼠能量代谢紊乱、缓解脂肪累积,以及缓解脂肪代谢、能量代谢及炎症反应相关基因的异常表达。【结论】持续光照会在不改变能量摄入的情况下导致机体脂肪积累,影响机体的正常代谢和健康。MV通过调控Sirt1、Ppargc1a等重要代谢相关基因表达,改善机体代谢紊乱,并通过促进脂肪分解和抑制脂肪合成相关基因表达,有效缓解持续光照导致的小鼠脂肪积累。 展开更多

关键词 罗汉果甜苷V(MV) 持续光照 小鼠 脂肪积累 代谢紊乱

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精原干细胞更新分化的影响因素 被引量：2

10

作者 李莲军 卢晟盛 +2 位作者 黎宗强 杨小淦 卢克焕 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第1期77-82,共6页

精原干细胞可以体外培养、冷冻保存、遗传操作及移植,因而在医学、生物学及动物科学方面均有广泛应用前景。根据现有资料阐述一些因素,包括c Kit受体及其配体SCF、白血病抑制因子(LIF)、维生素A(VA)、表皮生长因子(EGF)、胶质细胞源神... 精原干细胞可以体外培养、冷冻保存、遗传操作及移植,因而在医学、生物学及动物科学方面均有广泛应用前景。根据现有资料阐述一些因素,包括c Kit受体及其配体SCF、白血病抑制因子(LIF)、维生素A(VA)、表皮生长因子(EGF)、胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、激素和温度,对精原干细胞更新分化的影响。 展开更多

关键词 精原干细胞 干细胞因子 白血病抑制因子 VA 表皮生长因子 胶质细胞源神经营养因子

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鸡输卵管上皮细胞体外分离培养的研究 被引量：2

11

作者 杨文豪 孙娟娟 +10 位作者 莫丽芬 谢龙 陈东阳 濮黎萍 彭腊如 黄振文 杨小淦 许惠艳 张明 卢克焕 陆阳清 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1089-1093,共5页

鸡输卵管上皮细胞是卵清蛋白的主要分泌细胞,是研究输卵管特异表达蛋白调控的重要工具。在以往的研究中,多采用普通DMEM培养液对鸡输卵管上皮细胞进行分离与培养,容易造成其自身特性在体外培养过程中的改变。本研究我们优化了细胞分离方... 鸡输卵管上皮细胞是卵清蛋白的主要分泌细胞,是研究输卵管特异表达蛋白调控的重要工具。在以往的研究中,多采用普通DMEM培养液对鸡输卵管上皮细胞进行分离与培养,容易造成其自身特性在体外培养过程中的改变。本研究我们优化了细胞分离方法,发现从输卵管漏斗部组织分离的输卵管上皮细胞增殖较快;用鸡输卵管上皮细胞培养基相比DMEM更适合促进细胞生长;与胰酶相比,用Accutase消化酶进行细胞传代,有利于输卵管上皮细胞特性维持。对所获得的输卵管上皮细胞鉴定发现,己烯雌酚能促进卵清蛋白的表达,说明分离培养的细胞保持了鸡输卵管上皮细胞特性。本研究建立的方法为输卵管特异表达蛋白调控以及家禽生物反应器的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡 输卵管上皮细胞 卵清蛋白 家禽生物反应器

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罗汉果甜苷对高脂饮食小鼠皮下脂肪沉积的影响 被引量：1

12

作者 王司原 崔可欣 +1 位作者 杨小淦 梁兴伟 《当代畜禽养殖业》 2022年第3期24-29,共6页

脂肪沉积对家畜生产性能有重要影响,皮下脂肪沉积直接影响瘦肉率。当前关于脂肪沉积的研究是畜牧生产领域亟待解决的热点问题。然而,寻找行之有效、安全便捷的脂肪沉积调节对策仍需要科研工作者们的不断努力。罗汉果是我国西南地区的经... 脂肪沉积对家畜生产性能有重要影响,皮下脂肪沉积直接影响瘦肉率。当前关于脂肪沉积的研究是畜牧生产领域亟待解决的热点问题。然而,寻找行之有效、安全便捷的脂肪沉积调节对策仍需要科研工作者们的不断努力。罗汉果是我国西南地区的经济作物,其主要活性成分罗汉果甜苷具有食药兼备的生理功能,有消炎、抗氧化等药理作用,同时被广泛用作食品甜味剂。研究表明,罗汉果甜苷具有调节小鼠机体代谢、减轻非酒精性脂肪肝及体重过增的效果。本试验旨在探索罗汉果甜苷对高脂饮食小鼠皮下脂肪沉积的影响,为其在畜牧生产中的应用提供理论支持。结果表明,罗汉果甜苷可以显著抑制高脂饮食造成的小鼠体重、体脂率增加及瘦肉率的降低。同时,小鼠皮下脂肪形态显著改善,细胞内脂肪含量明显降低,脂肪直径分布明显恢复。RNA-seq结果显示,罗汉果甜苷可以显著恢复高脂饮食造成的小鼠皮下脂肪基因表达差异,差异基因富集到脂肪酸的生物合成、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)通路等,并使血清脂肪酸类代谢产物的改变得到缓解。罗汉果甜苷具有改善高脂饮食引起的小鼠皮下脂肪沉积的作用。 展开更多

关键词 罗汉果甜苷 脂肪沉积 瘦肉率 RNA-SEQ

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瘦素对水牛卵母细胞体外成熟和体外受精胚胎发育的影响 被引量：2

13

作者 陆阳清 罗茜 +4 位作者 江明生 叶丹娜 杨小淦 许慧艳 卢克焕 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期697-700,共4页

【目的】探讨瘦素在水牛体外胚胎生产体系中的作用机理,提高体外胚胎生产效率,为利用分离精子加速水牛品种改良及良种群的扩繁奠定基础。【方法】分别在水牛卵母细胞成熟培养液和胚胎培养液中添加瘦素,研究其对水牛卵母细胞体外成熟率... 【目的】探讨瘦素在水牛体外胚胎生产体系中的作用机理,提高体外胚胎生产效率,为利用分离精子加速水牛品种改良及良种群的扩繁奠定基础。【方法】分别在水牛卵母细胞成熟培养液和胚胎培养液中添加瘦素,研究其对水牛卵母细胞体外成熟率和体外受精胚胎发育率的影响。【结果】在水牛卵母细胞体外成熟液阶段,添加瘦素不仅能促成熟,还能提高其胚胎发育潜能;在体外受精后的胚胎培养阶段,添加瘦素也能显著提高囊胚发育率,二者的最佳瘦素浓度均为10ng/mL。在最佳瘦素浓度(10ng/mL)下,常规精子体外受精后的囊胚发育率从19.7%(空白对照组)提高到27.0%,分离精子体外受精后的囊胚发育率从12.3%(空白对照组)提高到17.4%。【结论】瘦素能促进水牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育,并以添加10ng/mL瘦素的促进效果最明显。 展开更多

关键词 水牛 瘦素 卵母细胞 体外受精 胚胎发育

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BRL饲细胞及血清浓度对体外小鼠精原干细胞的影响 被引量：1

14

作者 李莲军 卢晟盛 +3 位作者 黎宗强 杨小淦 韦英明 卢克焕 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2004年第3期238-242,共5页

分别以大鼠肝细胞(BRL)或小鼠胚胎成纤维细胞(STO)为饲养层,采用含5%、10%及20%胎牛血清的培养液,培养6日龄小鼠生精上皮细胞,研究饲养层和血清浓度对精原干细胞生物学行为的影响。结果表明:在培养的第1周内,2个及4个连成串的精原细胞... 分别以大鼠肝细胞(BRL)或小鼠胚胎成纤维细胞(STO)为饲养层,采用含5%、10%及20%胎牛血清的培养液,培养6日龄小鼠生精上皮细胞,研究饲养层和血清浓度对精原干细胞生物学行为的影响。结果表明:在培养的第1周内,2个及4个连成串的精原细胞合胞体数量明显增加,同时大多数精原细胞逐渐退化。培养1周后,大多数精原细胞经短暂的存活及分裂活动后退化消失,培养体系中仅保留下少量单个及由细胞间桥相连的双个及4个成串或成团的A型精原细胞。这些细胞在随后的培养过程中,不表现明显的分裂活动,呈圆球形,表达碱性磷酸酶。不同条件培养体系中的精原细胞及精原干细胞的生物学行为无明显不同,培养20～30d时均有少量精原干细胞存活。这说明BRL细胞能用作饲养层促进精原干细胞存活,但对其更新性增殖没有明显作用;培养液中高浓度胎牛血清对精原干细胞存活和增殖无明显影响,但能促进睾丸体细胞增殖。 展开更多

关键词 精原干细胞 BRL饲养层 胎牛血清 体外培养 小鼠

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不同发育天数及囊胚类型对猪孤雌激活胚胎冷冻效果的研究 被引量：1

15

作者 许惠艳 胡林林 +1 位作者 杨小淦 卢克焕 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2013年第15期37-39,共3页

实验比较不同发育天数所得的早期囊胚和扩张囊胚的冷冻效果,以期找出冷冻前胚胎最佳发育时期及囊胚类型。以猪孤雌激活胚胎为材料,分别取培养到第5、6、7天所得的早期囊胚(EB)和扩张囊胚(B)进行玻璃化冷冻保存,解冻后对其复苏率和内细... 实验比较不同发育天数所得的早期囊胚和扩张囊胚的冷冻效果,以期找出冷冻前胚胎最佳发育时期及囊胚类型。以猪孤雌激活胚胎为材料,分别取培养到第5、6、7天所得的早期囊胚(EB)和扩张囊胚(B)进行玻璃化冷冻保存,解冻后对其复苏率和内细胞团数损伤进行观察和统计。结果表明:发育第5天所获早期囊胚和扩张囊胚复苏率(32.26%、44.78%)好于第6天(22.45%、35.09%)和第7天(8.33%、32.65%),各发育天数所获扩张囊胚复苏率差异不显著(P>0.05),发育至第5天和6天的早期囊胚复苏率显著高于第7天(P<0.05);在内细胞团损伤比例上,虽各组差异不显著(P>0.05),但第5天和第6天组损伤低于第7天组。结果提示,在孤雌激活后第5天选取扩张囊胚进行冷冻,解冻后所得冷冻效果好。 展开更多

关键词 孤雌激活 冷冻阶段 猪

原文传递

水牛性控精液微生物分析 被引量：1

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作者 陆阳清 黄卫红 +6 位作者 韩晓慧 蒙冰 许惠艳 杨小淦 卢晟盛 许典新 卢克焕 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2010年第21期20-23,共4页

研究针对目前分离水牛X和Y精子性别控制过程中,容易导致微生物快速繁殖进而污染性控精液的问题,对水牛新鲜及冷冻性控精液中的微生物进行分析研究,以期改进水牛分离精子保存方法。结果表明:新鲜采集的水牛精液、常规冷冻精液及分离后的... 研究针对目前分离水牛X和Y精子性别控制过程中,容易导致微生物快速繁殖进而污染性控精液的问题,对水牛新鲜及冷冻性控精液中的微生物进行分析研究,以期改进水牛分离精子保存方法。结果表明:新鲜采集的水牛精液、常规冷冻精液及分离后的冷冻精液中,平均菌落密度分别为10 619个/mL、293个/mL和18935个/mL,三者差异显著(P<0.05)。新鲜精液检测到的菌落中,革兰氏阳性球菌占48%,阴性杆菌占41%,阳性杆菌占9%,霉菌占2%;性控冷冻精液中的菌落100%为革兰氏阴性杆菌。对性控冻精菌落药敏检测发现,菌落对妥布霉素和庆大霉素均呈现耐药性,而对丁胺卡那霉素以及药物环丙氟哌酸药物敏感性较强。本研究结果,为改进水牛分离精子稀释液以及冷冻保存液中的抗生素使用提供了有价值的参考。 展开更多

关键词 性控精液 微生物 水牛

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猪早期孤雌胚组蛋白乙酰化与组蛋白去乙酰化酶基因mRNA表达水平相关性研究 被引量：1

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作者 赵彦玲 任子利 +3 位作者 宁淑芳 杨小淦 卢晟盛 卢克焕 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1224-1231,共8页

【目的】探讨猪孤雌胚早期发育过程中组蛋白H4K5乙酰化水平与组蛋白去乙酰化酶(HDAC1)基因mRNA表达水平之间的关系。【方法】收集早期猪孤雌胚(2-细胞、4-细胞、桑椹胚和囊胚),运用细胞免疫组化和激光共聚焦显微镜,通过检测这些胚胎的... 【目的】探讨猪孤雌胚早期发育过程中组蛋白H4K5乙酰化水平与组蛋白去乙酰化酶(HDAC1)基因mRNA表达水平之间的关系。【方法】收集早期猪孤雌胚(2-细胞、4-细胞、桑椹胚和囊胚),运用细胞免疫组化和激光共聚焦显微镜,通过检测这些胚胎的相对荧光强度来评判其H4K5的乙酰化水平;运用实时定量PCR的方法检测猪早期孤雌胚发育过程中HDAC1基因mRNA表达的动态变化。【结果】从2-细胞到囊胚开始,其H4K5的乙酰化均在细胞核内表达,且各阶段表达量逐步提高,至囊胚期达最高(分别为1124.77±127.78、1305.81±184.23、1795.19±318.67及2149.63±529.47),差异显著(P<0.05);从2-细胞到囊胚,其HDAC1基因mRNA表达逐步降低(分别为1.00±0、0.91±0.009、0.85±0.008及0.67±0.006),各阶段差异显著(P<0.05)。【结论】从2-细胞到囊胚,其H4K5的乙酰化水平与HDAC1基因mRNA表达水平之间呈负相关。 展开更多

关键词 猪 孤雌激活胚 组蛋白乙酰化 实时定量PCR 组蛋白去乙酰化酶(HDAC1) mRNA表达

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有无卵丘细胞对猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻的影响 被引量：1

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作者 王彩玲 陆之泽 +4 位作者 李孟琪 陆阳清 杨小淦 卢晟盛 卢克焕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2580-2584,共5页

本研究探讨卵丘细胞对猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响。根据卵丘细胞层数将体外收集的猪卵母细胞分成对照组、A组(3层以上卵丘细胞)、B组(2~3层以上卵丘细胞)、C组(裸卵),研究卵母细胞玻璃化冷冻后的存活率、成熟率和孤雌激活后发... 本研究探讨卵丘细胞对猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响。根据卵丘细胞层数将体外收集的猪卵母细胞分成对照组、A组(3层以上卵丘细胞)、B组(2~3层以上卵丘细胞)、C组(裸卵),研究卵母细胞玻璃化冷冻后的存活率、成熟率和孤雌激活后发育潜能的变化。结果表明:玻璃化冷冻后B组和A组的卵母细胞存活率显著高于C组(p<0.01);冻融后的卵母细胞在成熟率方面的表现为:A、B、C三组的成熟率分别为22.17%、27.2%和18.15%,其中B组的成熟率显著高于C组(p<0.05),但均明显低于对照组(p<0.01)。通过进一步的孤雌激活发现,冻融后卵母细胞的卵裂率、4~8细胞卵裂率和囊胚率在3组中均无显著性差异(p>0.05),均显著低于对照组(p<0.01),但B组与其中两组相比具有上升趋势。综上所述,玻璃化冷冻时保留部分卵丘细胞可以降低冷冻对猪GV期卵母细胞造成的损伤。 展开更多

关键词 卵丘细胞 猪 GV期卵母细胞 玻璃化冷冻

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广西巴马小型猪供核细胞的传代培养和冷冻保存及肌肉成纤维细胞HDAC1基因的mRNA的表达 被引量：1

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作者 任子利 赵彦玲 +3 位作者 杨小淦 陆阳清 卢晟盛 卢克焕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1366-1376,共11页

本试验旨在建立猪颗粒细胞、胎儿成纤维细胞和新生巴马小型猪不同组织来源成纤维细胞的分离及传代培养技术体系和冷冻保存方法,并比较猪卵丘/颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞HDAC1基因的mRNA表达的差异,从分子水平上鉴定新生巴... 本试验旨在建立猪颗粒细胞、胎儿成纤维细胞和新生巴马小型猪不同组织来源成纤维细胞的分离及传代培养技术体系和冷冻保存方法,并比较猪卵丘/颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞HDAC1基因的mRNA表达的差异,从分子水平上鉴定新生巴马小型猪肌肉成纤维作为供体细胞的可行性。运用组织块贴壁培养方法分离不同来源的组织细胞进行培养,并比较了常规冷冻保存和微量冷冻保存对细胞复苏率的影响,同时,运用实时定量PCR的方法检测猪卵丘/颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞HDAC1基因mRNA表达的动态变化。研究结果表明:(1)猪颗粒细胞单层细胞的生长需要5～6d;用组织块法获得猪胎儿成纤维细胞单层的生长时间为10～11d;用组织块法可以成功地对新生巴马小型猪的肌肉、肺、肾脏、心、睾丸组织的成纤维细胞进行分离和传代培养,肾和睾丸组织的成纤维细胞贴壁生长后,长满形成单层细胞需要12～13d,而肺、肌肉和心脏组织的则需要15～16d。(2)细胞的微量冷冻保存效果优于常规冷冻保存(P<0.05)。(3)猪卵丘/颗粒细胞与新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞HDACl mRNA的相对表达量为1.000比0.985,两者差异不显著(P>0.05)。新生广西巴马小型猪不同组织来源的成纤维细胞的分离及传代培养和微量冷冻法,丰富了这种猪体细胞的分离培养种类,为其体细胞核移植研究提供了丰富的供体细胞,并从表观遗传的角度分析,鉴定了新生巴马小型猪胎儿成纤维细胞与猪卵丘/颗粒细胞一样适合作供体,为核移植前的供体细胞鉴定提供了新的方法。 展开更多

关键词 巴马小型猪 传代培养 微量冷冻保存 实时荧光定量PCR 组蛋白乙酰化 mRNA水平检测

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绿色荧光蛋白在α-1,3半乳糖基转移酶敲除猪组织器官的表达分析 被引量：1

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作者 李智方 冯冲 +6 位作者 纪慧丽 石宁宁 宋小凤 赵勤丽 龙川 潘登科 杨小淦 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1211-1217,共7页

猪是人类异种器官移植的理想供体,然而猪-人的异种器官移植会产生剧烈的排斥反应。虽然已制备的α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除(Galactosyltransferase gene knockout,GTKO)猪可有效缓解猪-人异种器官移植引起的超急性免疫排斥,但缺少报... 猪是人类异种器官移植的理想供体,然而猪-人的异种器官移植会产生剧烈的排斥反应。虽然已制备的α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除(Galactosyltransferase gene knockout,GTKO)猪可有效缓解猪-人异种器官移植引起的超急性免疫排斥,但缺少报告基因直观示踪移植后的细胞迁移及器官排斥状态。本文将CAG启动子驱动增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达载体导入GTKO猪耳成纤维细胞,通过体细胞核移植技术制备了EGFP猪。利用双荧光蛋白观测镜、荧光显微镜及定量PCR扩增观察、检测和分析克隆猪各组织器官中EGFP蛋白和转录本的表达状况。结果显示,EGFP蛋白及转录本在克隆猪各组织器官中均有表达,但在肝脏和中枢神经系统中表达较弱。本文成功获得了各组织器官表达EGFP的GTKO猪,为EGFP示踪异种细胞组织移植奠定了基础。 展开更多

关键词 GTKO 增强型绿色荧光蛋白 猪 异种移植

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