期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到8篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
鸭坦布苏病毒prM蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定
1
作者 刘亚林 梁真洁 +1 位作者 杨兴淼 曹瑞兵 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第1期98-106,共9页
为制备鸭坦布苏病毒(DTMUV)膜前体蛋白(prM)的单克隆抗体,将原核表达的重组prM蛋白配伍佐剂免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA筛选,获得2株能稳定分泌抗DTMUV prM蛋白单克隆抗... 为制备鸭坦布苏病毒(DTMUV)膜前体蛋白(prM)的单克隆抗体,将原核表达的重组prM蛋白配伍佐剂免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA筛选,获得2株能稳定分泌抗DTMUV prM蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3H4和5C10。2株杂交瘤细胞均能稳定分泌抗体,制备的腹水抗体效价分别为1∶51200和1∶102400。亚型鉴定结果显示,3H4和5C10单克隆抗体的重链均属于IgG2b,轻链均为Kappa型。Western blot和间接免疫荧光试验结果显示,这2株单克隆抗体均能与BHK-21细胞中感染的DTMUV发生特异性反应,而与同属的日本脑炎病毒无交叉反应。微量病毒空斑减少中和试验结果表明,这2株单克隆抗体均具有中和活性。进一步原核表达prM蛋白不同截短体,发现2株单抗针对不同表位,均位于prM蛋白的pr片段上。本研究制备的单克隆抗体3H4和5C10为快速检测DTMUV感染和研究prM蛋白的结构与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 prM蛋白 原核表达 单克隆抗体 B细胞表位
下载PDF
日本脑炎病毒NS1蛋白致脑血管内皮细胞损伤研究 被引量：2
2
作者 潘俊慧 刘亚林 +3 位作者 梁真洁 杨兴淼 谢盛达 曹瑞兵 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1107-1115,共9页
[目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)非结构蛋白NS1的生物学功能。[方法]将JEV NS1基因克隆到pFastbac1载体并将其转化至感受态DH10Bac得到重组杆粒,将重组杆粒转染sf9细胞产生重组杆状病毒,通过病毒感... [目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)非结构蛋白NS1的生物学功能。[方法]将JEV NS1基因克隆到pFastbac1载体并将其转化至感受态DH10Bac得到重组杆粒,将重组杆粒转染sf9细胞产生重组杆状病毒,通过病毒感染High5细胞成功表达了JEV NS1。在人脑微血管内皮细胞(HBMEC)培养液添加外源NS1蛋白,通过光学显微镜观察细胞形态,利用共聚焦显微镜观察JEV NS1蛋白对HBMEC表面唾液酸修饰的影响,IFA检测细胞中组织蛋白酶L的表达;小鼠经尾静脉注射JEV NS1及其N207糖基化位点突变体蛋白NS1 N207Q,分别于24、48和72 h通过伊文思蓝(EB)染色检测2个蛋白对小鼠的血脑屏障(BBB)通透性的影响。[结果]JEV NS1蛋白通过下调人脑内皮细胞表面的唾液酸修饰和上调组织蛋白酶L表达损伤内皮糖萼;动物试验表明NS1蛋白能够破坏小鼠的血脑屏障;NS1 N207Q蛋白处理对细胞表面唾液酸修饰的影响不显著,体内处理对小鼠的血脑屏障无明显损伤。[结论]JEV NS1蛋白具有损伤人脑微血管内皮细胞的生物学功能,突变N207位点可导致其损伤功能减弱,可为JEV亚单位疫苗候选抗原的优化提供新思路。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 NS1蛋白 唾液酸修饰 组织蛋白酶L 脑血管内皮损伤 N207Q突变
下载PDF
鹅星状病毒1型抗体间接ELISA检测方法的建立及临床应用 被引量：5
3
作者 佟贺 王雯 +5 位作者 杨兴淼 郭昭 孙榕泽 徐小燕 董永毅 曹瑞兵 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2022年第12期72-79,共8页
鹅星状病毒1型(GAstV-1)是雏鹅内脏和关节痛风的重要病原,严重危害我国养鹅业的健康发展。建立血清学方法可以快速、准确地检测出GAstV-1的感染,有利于对该病的防控。本研究通过大肠杆菌表达GAstV-1的衣壳蛋白VP70,以纯化的重组GAstV-1... 鹅星状病毒1型(GAstV-1)是雏鹅内脏和关节痛风的重要病原,严重危害我国养鹅业的健康发展。建立血清学方法可以快速、准确地检测出GAstV-1的感染,有利于对该病的防控。本研究通过大肠杆菌表达GAstV-1的衣壳蛋白VP70,以纯化的重组GAstV-1衣壳蛋白rVP70包被酶标板、通过棋盘滴定法对抗原包被浓度、血清稀释度、酶标抗体稀释度以及各反应时间进行优化,建立检测GAstV-1抗体的间接ELISA。应用该方法对临床鹅血清样品进行了检测和分析。ELISA优化的条件是,抗原包被浓度2μg/mL、4℃包被12 h,以10%脱脂乳为封闭液,一抗血清最佳稀释度为1∶100,酶标抗体最佳稀释度为1∶6 000,一抗和二抗反应时间均为0.5 h;待检样本的样本OD_(450)值/阳性对照OD_(450)值(S/P)≥0.28判定为阳性。应用该间接ELISA对2021年江苏省各地区的180份临床鹅血清样本进行GAstV-1抗体检测,阳性率约65.5%。本研究应用rVP70蛋白为包被抗原建立的抗体检测方法可特异敏感地检出鹅感染GAstV-1,可为该病的临床防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 雏鹅痛风 鹅星状病毒 抗体 间接ELISA 血清流行病学
下载PDF
日本脑炎病毒感染仔猪扁桃体的细胞嗜性研究 被引量：3
4
作者 张秋婷 关如婷 +5 位作者 潘俊慧 杨兴淼 谢盛达 余都 王学飞 曹瑞兵 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期315-321,共7页
[目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染猪扁桃体的组织和细胞嗜性。[方法]筛选JEV抗原、抗体均为阴性的健康商品仔猪3头,通过颈部皮下及静脉注射接种JEV NJ2008株,每头共2×10^(7) TCID50·mL... [目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染猪扁桃体的组织和细胞嗜性。[方法]筛选JEV抗原、抗体均为阴性的健康商品仔猪3头,通过颈部皮下及静脉注射接种JEV NJ2008株,每头共2×10^(7) TCID50·mL^(-1),对照仔猪1头注射生理盐水2 mL。饲养观察1周,期间采集鼻拭子、血液和扁桃体等组织样品。通过qPCR、组织切片免疫组化和免疫荧光等方法检测病毒。[结果]3头接毒仔猪体温均正常,试验仔猪7 d中均未观察到明显的临床症状。3头接种JEV NJ2008仔猪从接毒当天开始出现了2 d的病毒血症,并从持续7 d采集的鼻腔拭子中检出JEV。JEV主要感染猪软腭扁桃体,从攻毒仔猪的咽扁桃体、咽鼓管扁桃体、会咽扁桃体的免疫组化检测中未发现JEV阳性细胞。在软腭扁桃体中,JEV感染细胞主要分布于淋巴滤泡的周边和弥散淋巴组织中,JEV抗原阳性细胞多为不规则形态,细胞核较大,着色较淡,具有巨噬细胞或树突状细胞的特征。CD11b、CD163和MHCⅡ细胞表面标志物的检测结果显示,JEV阳性细胞多为巨噬细胞或树突状细胞等抗原提呈细胞。[结论]在JEV感染早期的1周内,仔猪扁桃体呈现持续性感染,其中JEV阳性细胞多为巨噬细胞或树突状细胞等抗原提呈细胞,此结果为研究JEV在扁桃体持续感染中的机制奠定基础。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 仔猪 扁桃体 细胞嗜性
下载PDF
猪源T细胞免疫球蛋白黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)多克隆抗体制备与鉴定
5
作者 焦文龙 杨兴淼 +2 位作者 梁真洁 潘俊慧 曹瑞兵 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2022年第10期116-121,共6页
为了探究猪源T细胞免疫球蛋白黏蛋白域蛋白-1(sTIM-1)的生物学功能,制备sTIM-1多克隆抗体,通过软件分析sTIM-1蛋白抗原表位及亲水性,并设计引物,以sTIM-1基因为模板扩增sTIM-1黏蛋白功能域编码基因(sTIM-1-M),成功构建了重组表达质粒pET... 为了探究猪源T细胞免疫球蛋白黏蛋白域蛋白-1(sTIM-1)的生物学功能,制备sTIM-1多克隆抗体,通过软件分析sTIM-1蛋白抗原表位及亲水性,并设计引物,以sTIM-1基因为模板扩增sTIM-1黏蛋白功能域编码基因(sTIM-1-M),成功构建了重组表达质粒pET28a-sTIM-1-M,并在大肠杆菌Rosetta 2中诱导表达。以纯化的重组蛋白sTIM-1-M与佐剂混合免疫新西兰大白兔制备多抗血清。SDS-PAGE及Western blot证实了该重组蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达,分子量约为36 kDa。经Western blot与免疫荧光试验(IFA)验证sTIM-1多抗血清可特异性识别293T细胞表达的sTIM-1。免疫沉淀(IP)结果显示制备的多抗血清可与sTIM-1蛋白互作。以上数据表明本研究制备的sTIM-1多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。sTIM-1多克隆抗体的制备为进一步研究sTIM-1参与病毒入侵细胞的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪源TIM-1 黏蛋白功能域 原核表达 多克隆抗体
下载PDF
鸭圆环病毒实时定量PCR检测方法的建立及流行毒株全基因组遗传变异分析
6
作者 赵韵笛 杨兴淼 +1 位作者 李靖红 曹瑞兵 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2022年第12期98-105,共8页
为了解近年来鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)的流行现状,本研究在DuCV的Rep基因保守区内设计一对特异性荧光定量引物,建立SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。结果显示:该方法最低可检测到拷贝数为3.46×10^(1)copies/μL的... 为了解近年来鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)的流行现状,本研究在DuCV的Rep基因保守区内设计一对特异性荧光定量引物,建立SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。结果显示:该方法最低可检测到拷贝数为3.46×10^(1)copies/μL的目的基因,比常规PCR灵敏;选取Ct值最低的阳性样品进行全基因组扩增及进化分析,成功扩增出1988 bp的病毒全基因,序列分析结果显示该病毒基因型为DuCV-1,亚型为1 b。本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法为DuCV的流行病学调查提供了有效的监测手段,同时通过分析不同基因型的遗传进化特点与Cap蛋白氨基酸位点突变特征,为DuCV感染的防控研究提供参考。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 基因进化 定量PCR 检测
下载PDF
日本脑炎病毒sfRNA靶向PKR和IFITM2的翻译抑制细胞干扰素应答
7
作者 杨兴淼 徐昊 曹瑞兵 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第3期29-39,共11页
本研究旨在探究日本脑炎病毒(JEV)感染细胞后产生非编码亚基因组RNA(sfRNA)的生物学功能。应用Northern blot检测JEV感染细胞产生sfRNA的动态特征;通过Western blot和qPCR检测JEV感染细胞中PKR、IFITM2等干扰素刺激基因的表达;通过体外... 本研究旨在探究日本脑炎病毒(JEV)感染细胞后产生非编码亚基因组RNA(sfRNA)的生物学功能。应用Northern blot检测JEV感染细胞产生sfRNA的动态特征;通过Western blot和qPCR检测JEV感染细胞中PKR、IFITM2等干扰素刺激基因的表达;通过体外转录制备JEV sfRNA,转染细胞研究其功能。实验结果表明:JEV感染Huh7细胞后期可下调PKR、IFITM2的表达,与sfRNA产生的时间规律一致;将体外转录制备的JEV sfRNA转染细胞后可下调IFN-α刺激细胞中IFITM2、PKR蛋白的含量,但其mRNA水平与对照组差异不显著,推测JEV sfRNA抑制其翻译过程;SL-Ⅱ区域缺失的JEV sfRNA不能有效下调干扰素诱导细胞中IFITM2和PKR蛋白的表达。因此,本研究发现JEV sfRNA在翻译阶段抑制PKR和IFITM2蛋白的表达,为病毒增殖营造有利环境。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 sfRNA ISG PKR IFITM2
下载PDF
基因Ⅰ型和Ⅲ型日本脑炎病毒sfRNA亚型鉴定及遗传演化分析
8
作者 杨兴淼 徐昊 曹瑞兵 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第9期67-73,共7页
旨在探究基因Ⅰ型和Ⅲ型日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染细胞产生的黄病毒亚基因组RNA(subgenomic flaviviral RNA,sfRNA)亚型与演化趋势。应用高分辨率Northern blot检测Ⅰ型和Ⅲ型JEV感染细胞产生sfRNA亚型特征;... 旨在探究基因Ⅰ型和Ⅲ型日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染细胞产生的黄病毒亚基因组RNA(subgenomic flaviviral RNA,sfRNA)亚型与演化趋势。应用高分辨率Northern blot检测Ⅰ型和Ⅲ型JEV感染细胞产生sfRNA亚型特征;对美国国立生物技术信息中心(NCBI)收录的99条JEV sfRNA序列通过Mega X软件进行多序列比对及遗传演化分析,用Megalign软件进行核苷酸相似性比较及变异分析。结果表明:Ⅰ型和Ⅲ型JEV感染细胞产生特征相似的4种亚型sfRNA;JEV sfRNA序列10440、10673、10853位核苷酸差异具有基因型特异性(位点说明以JEV HEN0701为例,GenBank:FJ495189.1);Ⅰ型10477位核苷酸的变化相较于Ⅲ型更有利于sfRNA PK1结构的碱基配对;Ⅰ型和Ⅲ型sfRNA组间核苷酸序列相似性为79.2%~100%,Ⅰ型sfRNA组内核苷酸序列相似性为81.6%~100%,Ⅲ型sfRNA组内核苷酸序列相似性为85.6%~100%;Ⅰ型和Ⅲ型sfRNA核苷酸变异以碱基转换为主。本研究发现JEV sfRNA存在一定差异,但同种基因型sfRNA遗传距离接近,结果为揭示JEV基因型差异提供了新思路。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 基因型 亚基因组RNA(sfRNA) 亚型
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部