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HPV16型E6蛋白的B细胞线性表位预测及分析 被引量：6
1
作者 杨恩 张燕 +2 位作者 侯柏龙 杜王琪 张丽芳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第3期220-223,227,共5页
目的对高危型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus)16型E6蛋白的B细胞线性表位进行预测。方法以HPV16型E6蛋白(P03126)的全长氨基酸序列为基础,采用EXPASY网站上的生物信息学软件和DNAstar软件包中的Protean软件分析E6蛋白的二级结构,跨... 目的对高危型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus)16型E6蛋白的B细胞线性表位进行预测。方法以HPV16型E6蛋白(P03126)的全长氨基酸序列为基础,采用EXPASY网站上的生物信息学软件和DNAstar软件包中的Protean软件分析E6蛋白的二级结构,跨膜趋势及其亲水性,表面可及性,抗原性,极性和柔韧性等特性。综合以上参数预测HPV16型E6蛋白的B细胞线性表位,并进一步进行同源性匹配分析。结果综合多个参数分析显示B细胞线性表位可能位于E6蛋白N端2-7、9-19、30-36、45-49、105-109、119-125和148-158区段及其附近,进一步同源性匹配分析支持其中区段2-7、9-19、119-125及148-158为可能的B细胞线性表位,其中区段148-158(RSSRTRRETQL)为HPV16型E6蛋白所特有的序列,而区段2-7(HQKRTA)、9-19(FQDPQERPRKL)与HPV9型E6蛋白具有同源性,区段119-125(PEEKQRH)与HPV31型E6蛋白具有同源性。结论综合分析预测HPV16型E6蛋白的B细胞线性表位可能位于E6蛋白N端2-7、9-19、119-125及148-158区段,为HPV16型E6蛋白的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 HPV16型 E6蛋白 B细胞线性表位 预测 同源性匹配分析
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人宫颈癌SiHa细胞荷瘤裸鼠模型的建立及鉴定 被引量：6
2
作者 侯柏龙 杜王琪 +5 位作者 熊一融 蔡一奇 宋易玲 林晓云 薛向阳 张丽芳 《温州医科大学学报》 CAS 2016年第2期92-96,共5页
目的:建立人宫颈癌SiHa细胞裸小鼠体表荷瘤模型,并对其成瘤特性进行分析和鉴定。方法:将5×10~6/mL、1×10~7/mL及5×10~7/mL 3个浓度的SiHa细胞悬液分别在3组裸小鼠背部右腋近上肢皮下接种,建立人宫颈癌裸小鼠体表荷瘤模型... 目的:建立人宫颈癌SiHa细胞裸小鼠体表荷瘤模型,并对其成瘤特性进行分析和鉴定。方法:将5×10~6/mL、1×10~7/mL及5×10~7/mL 3个浓度的SiHa细胞悬液分别在3组裸小鼠背部右腋近上肢皮下接种,建立人宫颈癌裸小鼠体表荷瘤模型,观察荷瘤裸鼠的成瘤率并测量肿瘤的大小,5周后取肿瘤组织经病理学方法观察其组织学特性,并采用PCR及免疫组织化学方法对肿瘤组织的HPV16E7 DNA表达进行检测。结果:3组裸小鼠接种SiHa细胞的成瘤率均为100%,5周后肿瘤大小分别达到(77.29±28.34)mm^3、(178.91±61.55)mm^3和(305.11±12.62)mm^3。3个浓度组间肿瘤体积大小差异有统计学意义(P<0.001)。病理学大体观察可见SiHa肿瘤的生长均以局部浸润为主;组织切片观察新生肿瘤细胞特点呈现体积大、核大深染及易见核分裂相的病理性特征;SiHa新生肿瘤组织经PCR检测证实了HPV16E7 DNA阳性,并经免疫组织化学检测证实了HPV16E7蛋白表达阳性。结论:成功建立了SiHa细胞荷瘤裸鼠模型,为人宫颈癌肿瘤靶向治疗及生物学特性研究提供了理想的动物模型。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 动物模型 BALB/c-nu裸小鼠 SIHA细胞
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弓形虫棒状体蛋白2和膜表面蛋白1复合抗原优势表位免疫原性研究 被引量：2
3
作者 吕金辉 汪文寰 +4 位作者 熊一融 杜王琪 叶璐璐 张丽芳 李文姝 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期32-38,共7页
目的分析弓形虫棒状体蛋白2（ROP2）和膜表面蛋白1（SAGl）复合抗原免疫优势表位的免疫原性。方法利用生物信息学技术预测和筛选出弓形虫复合抗原ROP2-SAG1免疫优势T、B淋巴细胞表位组合，将优势表位相应基因片段克隆至pET32a（＋）载... 目的分析弓形虫棒状体蛋白2（ROP2）和膜表面蛋白1（SAGl）复合抗原免疫优势表位的免疫原性。方法利用生物信息学技术预测和筛选出弓形虫复合抗原ROP2-SAG1免疫优势T、B淋巴细胞表位组合，将优势表位相应基因片段克隆至pET32a（＋）载体并转化至表达感受态（大肠埃希菌Rosetta菌株）中诱导表达，通过离子螯合亲和层析柱（Ni—NTA）纯化表达产物，经SDS—PAGE鉴定表达产物纯化效果。以纯化的优势表位蛋白作为免疫原，皮下多点注射日本大耳兔，设pET32a（＋）载体蛋白和PBS为对照，以纯化的优势表位蛋白作包被抗原，ELISA法检测第0、2和4周免疫兔血清中表位特异性抗体IgG的产生时间及效价，免疫斑点实验验证免疫兔血清多克隆抗体的特异性。以纯化的优势表位免疫BALB／c小鼠，酶联免疫斑点分析技术检测免疫鼠脾细胞7干扰素产生能力。结果在原核表达体系中获得了相对分子质量为30000的优势表位融合表达产物。纯化的表位蛋白免疫大耳白兔血清中可检测到相应的表位特异性抗体IgG，其抗体水平随着免疫次数的增加而呈现逐渐升高的趋势，优势表位免疫组第2、4周兔血清抗体显著高于载体pET32a（＋）蛋白对照组（1．454±0．098比0．616±0．084，F=0．000，P〈0．05；2．299±0．224比1．580±0．192，F=0．112，P〈O．05），第4周的免疫血清多克隆抗体效价可达1：40960。免疫斑点实验证实多克隆抗体针对优势表位具有良好的特异性。原核体系制备的优势表位蛋白免疫鼠脾细胞受3种不同的CTL表位肽刺激产生的7干扰素水平，分别为表位肽1[（19．333±1．528）／10万细胞]、表位肽2[（40．333±1．528）／10万细胞]、表位肽3E（70．667±1．890）／10万细胞]，与PBS免疫对照组[表位肽1（1．033±0．150）／10万细胞、表位肽2（1．045±0．110）／10万细胞、表位肽3（1．041± 展开更多
关键词 弓形虫 ROP2-SAG1 表位 免疫原性
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同型半胱氨酸作为辅助因子参与血脂及纤维蛋白原对急性缺血性卒中发病的影响
4
作者 罗丽 朱文君 杜王琪 《中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生》 2022年第5期62-66,共5页
研究血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)和血脂各项指标对急性缺血性卒中(acute ischemic stroke,AIS)发生的影响,比较溶栓前后纤维蛋白原(fibrinogen,Fib)水平。方法:采用病例-对照回顾性分析,将2019年1月至2021年10月泰兴市人民医院... 研究血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)和血脂各项指标对急性缺血性卒中(acute ischemic stroke,AIS)发生的影响,比较溶栓前后纤维蛋白原(fibrinogen,Fib)水平。方法:采用病例-对照回顾性分析,将2019年1月至2021年10月泰兴市人民医院急诊入院的117例AIS患者列为病例组,同期年龄相当的体检和门诊健康人群71例为对照组。独立样本t检验比较两组Hcy、脂蛋白a(lipoprotein a,Lpa)、甘油三脂(triglyceride,TG)、总胆固醇(totalcholesterol,TC)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,ApoA1)、载脂蛋白B(apolipoprotein B,ApoB)水平,同时比较26例AIS患者溶栓前后Fib变化。绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,根据ROC曲线确定各指标最佳临界值及曲线下面积(area under the curve,AUC),同时根据AUC分析Hcy及血脂各指标与AIS发病相关性。结果:泰兴地区女性在AIS的发病比例显著高于男性(P<0.05);病例组Hcy,TC,LDL,ApoB浓度显著高于对照组,HDL,ApoA1显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Hcy,TC,LDL,ApoB浓度升高对AIS有一定诊断价值,AUC面积皆大于0.55,但灵敏度不高;Fib在AIS患者溶栓后升高。结论:高血清Hcy作为辅助因子与高TC,LDL,ApoB及纤维蛋白原交互作用可致AIS发生,Fib对AIS患者溶栓效果评价具有一定意义。 展开更多
关键词 急性缺血性卒中 同型半胱氨酸 辅助因子 血脂 纤维蛋白原
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金黄色葡萄球菌蛋白A Z结构域的原核表达及多克隆抗体的制备
5
作者 林晓云 侯柏龙 +6 位作者 熊一融 叶璐璐 杜王琪 陈韶 薛向阳 朱珊丽 张丽芳 《温州医学院学报》 CAS 2015年第1期1-5,共5页
目的:制备金黄色葡萄球菌蛋白A(Sp A)Z结构域的原核表达蛋白及其多克隆抗体,并对其进行特异性鉴定。方法:3段Sp A-Z结构域经柔性肽(GS)串联连接构成三串联体(Sp A-3Z),经原核密码子优化后全基因合成,克隆至p ET21a(+)载体,构建p ET21a(+... 目的:制备金黄色葡萄球菌蛋白A(Sp A)Z结构域的原核表达蛋白及其多克隆抗体,并对其进行特异性鉴定。方法:3段Sp A-Z结构域经柔性肽(GS)串联连接构成三串联体(Sp A-3Z),经原核密码子优化后全基因合成,克隆至p ET21a(+)载体,构建p ET21a(+)/Sp A-3Z重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western Blot法分析鉴定;纯化的Sp A-3Z重组蛋白免疫日本大耳白兔,并分别于免疫前和免疫后采集血清,用ELISA法检测其多克隆抗体的反应和效价,并用Western Blot法分析多克隆抗体结合天然Sp A的特异性。结果:成功构建了p ET21a(+)/Sp A-3Z重组质粒;该重组质粒在原核表达系统表达并获得纯化的Sp A-3Z重组蛋白,SDS-PAGE电泳显示该蛋白的分子质量约为21 k Da,与理论分子量大小相符;日本大耳白兔经该蛋白免疫后可产生特异性的多克隆血清Ig G抗体,效价可达1:40 000;Western Blot法检测结果显示,在分子质量约42 k Da(天然Sp A蛋白)处出现单一条带,提示兔多克隆血清抗体可识别天然Sp A。结论:Sp A-3Z原核蛋白有较好的免疫原性和抗原性,制备的Sp A-3Z兔多克隆血清抗体Ig G效价高、特异性好,可进一步用于Sp A-Z相关的生物学和免疫学等功能研究。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 蛋白A 多克隆抗体
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