期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到80篇文章
< 1 2 … 4 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
孟鲁司特钠联合氯雷他定治疗小儿过敏性紫癜疗效观察 被引量：21
1
作者 宋艳 张炜灵 杜丽琴 《海南医学》 CAS 2020年第16期2096-2098,共3页
目的观察孟鲁司特钠联合氯雷他定治疗过敏性紫癜患儿的临床疗效,并探讨其对患儿血清白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法选择2018年8月至2020年1月期间深圳市宝安区人民医院儿科收治的94例过敏性紫癜患儿为研究对象... 目的观察孟鲁司特钠联合氯雷他定治疗过敏性紫癜患儿的临床疗效,并探讨其对患儿血清白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法选择2018年8月至2020年1月期间深圳市宝安区人民医院儿科收治的94例过敏性紫癜患儿为研究对象,按随机数表法将患儿分为A组(n=31)、B组(n=30)、C组(n=33),分别接受氯雷他定、孟鲁司特钠以及氯雷他定+孟鲁司特钠治疗,总疗程为4周。比较三组患儿治疗前及治疗后的血清IL-2、IL-6水平;记录患儿临床症状消失时间,疗程结束后评价临床疗效。结果三组患儿治疗后,血清IL-2水平上升,IL-6水平降低,且C组IL-2、IL-6水平分别为(20.87±3.28)pg/mL、(10.54±2.52)pg/mL,明显优于A组的(12.64±2.48)pg/mL、(16.48±3.29)pg/mL和B组的(14.38±2.01)pg/mL、(15.28±3.82)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);C组患儿的皮疹、消化道症状及关节痛消失时间分别为(5.15±1.24)d、(3.22±0.84)d、(3.32±1.08)d,均明显短于A组的(8.23±2.09)d、(6.31±1.30)d、(7.42±1.97)d和B组的(7.95±2.13)d、(5.54±1.63)d、(6.93±2.53)d,差异均有统计学意义(P<0.05);C组患儿治疗总有效率为93.94%,明显高于A组的77.42%和B组的80.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论孟鲁司特钠联合氯雷他定治疗小儿过敏性紫癜可以有效调节炎症因子水平,缩短病程,进而提高临床疗效。 展开更多
关键词 儿童 过敏性紫癜 孟鲁司特钠 氯雷他定 炎症因子 疗效
下载PDF
木薯原料生产燃料乙醇 被引量：15
2
作者 黄日波 陈东 +3 位作者 王青艳 申乃坤 韦宇拓 杜丽琴 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期888-891,共4页
以下介绍了我国木薯原料生产燃料乙醇的最新进展,并对我国的木薯资源分布作了分析,特别强调了木薯资源占全国总产量的65%以上的广西壮族自治区在我国发展木薯原料燃料乙醇过程中所起的重要作用,在此基础上对我国发展木薯原料燃料乙醇所... 以下介绍了我国木薯原料生产燃料乙醇的最新进展,并对我国的木薯资源分布作了分析,特别强调了木薯资源占全国总产量的65%以上的广西壮族自治区在我国发展木薯原料燃料乙醇过程中所起的重要作用,在此基础上对我国发展木薯原料燃料乙醇所遇到的困难和挑战进行了分析,并根据国内外的科技进展对如何克服这些困难提出了几个可能的解决方案。 展开更多
关键词 木薯 燃料乙醇 转基因木薯 废糟液处理
原文传递
合成耐高温α-淀粉酶基因在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达 被引量：11
3
作者 韦宇拓 汪嵘 +3 位作者 杜丽琴 陆坚 黄鲲 黄日波 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期65-69,共5页
PFA是来源于Pyrococcus furious的一种耐高温α-淀粉酶,为了使PFA能够在巴斯德毕赤酵母中高效表达,根据巴斯德毕赤酵母密码子的偏好性对PFA的基因序列进行密码子优化,人工合成耐高温淀粉酶PFA基因pfa,并连接到巴斯德毕赤酵母中表达载体p... PFA是来源于Pyrococcus furious的一种耐高温α-淀粉酶,为了使PFA能够在巴斯德毕赤酵母中高效表达,根据巴斯德毕赤酵母密码子的偏好性对PFA的基因序列进行密码子优化,人工合成耐高温淀粉酶PFA基因pfa,并连接到巴斯德毕赤酵母中表达载体pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K-pfa。重组质粒线性化后转化到巴斯德毕赤酵母菌株GS115中,重组菌株在摇瓶中用甲醇诱导表达,分泌表达酶活最高为220 U／L。 展开更多
关键词 耐高温性能 Α-淀粉酶 巴斯德毕赤酵母 基因表达
下载PDF
单宁酶基因在黑曲霉ST31中的克隆与表达 被引量：9
4
作者 黄小凤 韦宇拓 +3 位作者 韦传东 杜丽琴 庞宗文 黄日波 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期74-77,共4页
利用PCR扩增得到米曲霉(Aspergillus oryzae)单宁酶(tannase)基因的编码序列,经DNA测序证实单宁酶基因已成功克隆,然后将其连接到黑曲霉的表达载体ANED2-SP2上构建单宁酶基因表达载体.将构建好的单宁酶基因表达载体通过原生质转化法导... 利用PCR扩增得到米曲霉(Aspergillus oryzae)单宁酶(tannase)基因的编码序列,经DNA测序证实单宁酶基因已成功克隆,然后将其连接到黑曲霉的表达载体ANED2-SP2上构建单宁酶基因表达载体.将构建好的单宁酶基因表达载体通过原生质转化法导入黑曲霉菌株ST31中进行表达研究.结果表明重组菌株的单宁酶活力最高为104.02 U/ml发酵液,比原始出发菌株米曲霉提高2～3倍.研究构建了黑曲霉的高效转化体系,提高了黑曲霉表达系统的应用水平,为其它新酶的研究提供有价值的参考. 展开更多
关键词 单宁酶 黑曲霉 克隆 表达 黑曲霉菌株 酶基因 基因表达载体 PCR扩增 DNA测序 编码序列
下载PDF
肖和印运用祛风宁肺散治疗小儿咳嗽变异性哮喘经验 被引量：12
5
作者 杜丽琴 陈艳霞 +7 位作者 郭凯 张丽 龙小雅 毛娜 王红娟 杨兵宾 黄长婷 肖和印 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1161-1162,1180,共3页
咳嗽变异性哮(cough variant asthma,CVA)以慢性咳嗽为主要症状,长期咳嗽不愈,严重影响患儿生活质量,临证时按咳嗽辩证论治收效甚微。中国中医科学院望京医院肖和印主任医师在前人的用药经验基础上,根据自己多年的临床实践自拟方"... 咳嗽变异性哮(cough variant asthma,CVA)以慢性咳嗽为主要症状,长期咳嗽不愈,严重影响患儿生活质量,临证时按咳嗽辩证论治收效甚微。中国中医科学院望京医院肖和印主任医师在前人的用药经验基础上,根据自己多年的临床实践自拟方"祛风宁肺散",随症加减治疗小儿咳嗽变异性哮喘临床效果显著。 展开更多
关键词 小儿咳嗽变异性哮喘 祛风宁肺散 经验 肖和印
下载PDF
高糖土壤微生物宏基因组文库的构建及β-葡萄糖苷酶基因鉴定 被引量：9
6
作者 陆坚 杜丽琴 +3 位作者 庞浩 马贵 韦宇拓 黄日波 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期30-35,共6页
采用宏基因组技术构建了高糖土壤微生物的DNA文库，该文库约含9万个克隆，文库外源DNA总容量为3．1×10%^9bp。利用活性筛选策略，对文库进行筛选，获得11个β-葡萄糖苷酶的阳性克隆，并对其中2个表达β-葡萄糖苷酶的克隆进行亚克... 采用宏基因组技术构建了高糖土壤微生物的DNA文库，该文库约含9万个克隆，文库外源DNA总容量为3．1×10%^9bp。利用活性筛选策略，对文库进行筛选，获得11个β-葡萄糖苷酶的阳性克隆，并对其中2个表达β-葡萄糖苷酶的克隆进行亚克隆和序列分析，获得两个编码新型B一葡萄糖苷酶的基因分别命名为：Mn6印引和Mn6印3日。生物信息学分析表明：“unbgl3A基因由2241个碱基对组成，unbgl3B基因由2292个碱基对组成。在核苷酸水平上，unbgt3A、unbgl3B与已知数据库中的β-葡萄糖苷酶基因没有任何相似性。在氨基酸水平上，与GenBank数据库中已知β-葡萄糖苷酶的相似性分别为73％~1169％。 展开更多
关键词 高糖土壤 未培养微生物 宏基因组文库 Β-葡萄糖苷酶
下载PDF
肠膜明串珠菌ATCC 12291蔗糖磷酸化酶的酶学性质及转糖苷分子改造 被引量：7
7
作者 何贺贺 林厚民 +4 位作者 寇力丹 覃凤兰 韦宇拓 黄日波 杜丽琴 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第20期122-129,共8页
根据GenBank数据库公布的肠膜明串珠菌ATCC 12291中蔗糖磷酸化酶基因序列,构建重组表达质粒pQE-lmsp.在大肠杆菌Escherichia coli M15/pREP4中诱导表达,镍亲和层析纯化蛋白,进行酶学性质测定和重组酶转糖苷活性的研究.以蔗糖为底物对LMs... 根据GenBank数据库公布的肠膜明串珠菌ATCC 12291中蔗糖磷酸化酶基因序列,构建重组表达质粒pQE-lmsp.在大肠杆菌Escherichia coli M15/pREP4中诱导表达,镍亲和层析纯化蛋白,进行酶学性质测定和重组酶转糖苷活性的研究.以蔗糖为底物对LMsp进行酶学性质分析,其最适温度和最适pH值分别为40℃和6.5;Km值和Vmax值分别为(34.16±1.219)mmol/L和(370.5±6.049)μmol/(mg·min).当以葡萄糖-1-磷酸为供体时,对于大多数单糖及其糖醇类受体均具有转糖苷活性,尤其对L-阿拉伯糖具有75%的转化效率.然后通过对LMsp进行同源建模和氨基酸序列比对分析,进行分子改造,并比较酶学性质及转糖苷活性的变化.获得7个单点和联合的突变体T180A、T219V、P236S、T180A-T219V、T180A-P236S、T219V-P236S、T180A-T219V-P236S,其中突变体T180A、P236S对L-山梨糖的转糖苷活性分别有13.7%和15%的提高.本研究通过对LMsp的研究,发现其具有良好的酸碱稳定性和对L-阿拉伯糖的高转糖苷活性,并且获得了对于L-山梨糖转糖苷活性提高的突变体,丰富了有关于蔗糖磷酸化酶的性质,并且对该酶的分子改造提供了经验依据. 展开更多
关键词 肠膜明串珠菌 蔗糖磷酸化酶 酶学性质 转糖苷功能 分子改造
下载PDF
差异柠檬酸杆菌GXW-1 β-葡萄糖苷酶的酶学性质及分子改造 被引量：7
8
作者 江民华 林厚民 +4 位作者 尹金阳 王子龙 庞浩 黄日波 杜丽琴 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期363-374,共12页
【目的】筛选鉴定1株产β-葡萄糖苷酶的菌株,克隆、表达该菌株中的β-葡萄糖苷酶基因,研究重组酶的酶学性质并进行分子改造。【方法】在自然界中采集土样,筛选到1株具有β-葡萄糖苷酶活性的菌株,对野生菌进行16S rDNA鉴定,比对分析Gen B... 【目的】筛选鉴定1株产β-葡萄糖苷酶的菌株,克隆、表达该菌株中的β-葡萄糖苷酶基因,研究重组酶的酶学性质并进行分子改造。【方法】在自然界中采集土样,筛选到1株具有β-葡萄糖苷酶活性的菌株,对野生菌进行16S rDNA鉴定,比对分析Gen Bank数据库中与野生菌同属的β-葡萄糖苷酶基因序列,设计简并引物PCR扩增基因保守区;设计引物扩增目的基因,以pQE30为表达载体构建重组质粒,转化至大肠杆菌中进行诱导表达;采用镍亲和层析对重组酶进行纯化,研究其酶学性质;采用易错PCR和定点随机突变相结合的方法对野生型β-葡萄糖苷酶进行分子改造。【结果】一个来自于差异柠檬酸杆菌GXW-1的β-葡萄糖苷酶基因被克隆并在大肠杆菌中表达。酶学性质研究结果表明该β-葡萄糖苷酶CBGL的最适温度为45°C,最适p H为6.0,V_(max)值是(0.1704±0.0073)μmol/(mg·min),K_(cat)值为(0.2380±0.0102)/s。CBGL能水解α-pNPG、甜菊苷、黄豆苷和染料木苷。对野生酶进行分子改造,获得V_(max)是野生酶2.54倍的突变体W147F。【结论】CBGL不仅具有β-1,4-糖苷键水解能力,还可能具有一定的α-糖苷键水解酶活性。此外,CBGL还能够水解天然底物甜菊苷、黄豆苷和染料木苷。这些特性表明该β-葡萄糖苷酶在理论研究及在工业中有一定的应用价值。 展开更多
关键词 差异柠檬酸杆菌GXW-1 Β-葡萄糖苷酶 酶学性质 酶分子改造
原文传递
张爱玲小说“意象化”客观叙事 被引量：6
9
作者 杜丽琴 《昆明师范高等专科学校学报》 2008年第2期48-51,共4页
意象在西方现代小说家笔下只是诸多叙事技巧中的一种,不一定成为小说中的主要叙事方式,但在张爱玲手中意象则成为最重要的叙事方式。张爱玲的"意象化"客观叙事是一种既能继承中外文学传统,又能满足现代读者阅读习惯的叙事方... 意象在西方现代小说家笔下只是诸多叙事技巧中的一种,不一定成为小说中的主要叙事方式,但在张爱玲手中意象则成为最重要的叙事方式。张爱玲的"意象化"客观叙事是一种既能继承中外文学传统,又能满足现代读者阅读习惯的叙事方式。从叙事角度考察张爱玲小说意象兼顾了意象意义的分析,更重要的是从"意象化"客观叙事带来的形式美进行剖析,由此把握张爱玲小说的文体风格及其对中国现代小说史的贡献。 展开更多
关键词 张爱玲 现代小说 意象化 客观叙事 文体风格 叙事方式
下载PDF
途径工程生产1,3-丙二醇的研究进展 被引量：4
10
作者 杨登峰 韦宇拓 +1 位作者 杜丽琴 黄日波 《现代化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第11期24-26,共3页
利用基因工程技术生产1,3-丙二醇,特别是途径工程的利用已取得了重大突破.利用生物技术生产1,3-丙二醇的成本比化学法的低25%,它将逐步实现工业化生产.介绍了一步法生产1,3-丙二醇的超级基因工程菌所需的3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)、甘油3... 利用基因工程技术生产1,3-丙二醇,特别是途径工程的利用已取得了重大突破.利用生物技术生产1,3-丙二醇的成本比化学法的低25%,它将逐步实现工业化生产.介绍了一步法生产1,3-丙二醇的超级基因工程菌所需的3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)、甘油3-磷酸酶(GPP2)、甘油脱水酶(dhaB)和1,3-丙二醇氧化还原酶(dhaT),并对关键酶dhaB进行了分析,同时介绍了穿梭质粒和甘油-3-磷酸酶积累对生产的影响.最后,对今后的研究重点和策略进行了探讨. 展开更多
关键词 1 3-丙二醇 基因工程菌 途径工程 甘油脱水酶
下载PDF
酿酒酵母蔗糖关键代谢途径suc2基因的敲除及其蔗糖代谢特性的变化分析 被引量：6
11
作者 张志凯 汤宏赤 +4 位作者 樊少林 尹金阳 林丽华 庞浩 杜丽琴 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期622-628,共7页
蔗糖基生物质是热带和亚热带地区重要的生物质材料,因而在微生物发酵和微生物代谢原料中具有重要的地位。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)具有以蔗糖为原料进行代谢的能力,在酿酒酵母的基因组中蔗糖水解酶基因共有6个结构基因。本... 蔗糖基生物质是热带和亚热带地区重要的生物质材料,因而在微生物发酵和微生物代谢原料中具有重要的地位。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)具有以蔗糖为原料进行代谢的能力,在酿酒酵母的基因组中蔗糖水解酶基因共有6个结构基因。本研究以酿酒酵母INVSC1为出发菌株,首先利用基因敲除技术构建suc2基因缺失菌株,然后将suc2基因回补,从而研究suc2基因对酿酒酵母蔗糖关键代谢途径及蔗糖代谢特性的影响。以蔗糖为碳源的发酵培养基中,在静置条件下发酵,suc2基因缺失菌株失去了利用蔗糖代谢的能力,回补菌株则恢复了对蔗糖的代谢;而且回补菌株对蔗糖的利用率及乙醇产量均比出发菌株有所提高。suc2基因是酿酒酵母蔗糖代谢的关键基因,对蔗糖的代谢具有决定性作用,可以作为蔗糖代谢途径改造的一个关键点。 展开更多
关键词 酿酒酵母 suc2基因 蔗糖代谢 基因敲除
原文传递
酿酒酵母gpd1和hor2基因在大肠杆菌中的共表达 被引量：5
12
作者 杜丽琴 韦宇拓 +2 位作者 陈发忠 罗兆飞 黄日波 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期385-389,共5页
利用途径工程的方法,在大肠杆菌中构建一条新的产甘油的代谢途径。从酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)克隆3_磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)和3_磷酸甘油酯酶基因(hor2 ) ,并将两个基因串连到启动子trc的下游,构建由trc启动子控制的能高效... 利用途径工程的方法,在大肠杆菌中构建一条新的产甘油的代谢途径。从酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)克隆3_磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)和3_磷酸甘油酯酶基因(hor2 ) ,并将两个基因串连到启动子trc的下游,构建由trc启动子控制的能高效表达的多顺反子重组质粒pSE_gpd1_hor2 ,将重组质粒导入大肠杆菌BL2 1菌株中,构建得到的重组菌株GxB_gh能将葡萄糖转化为甘油。结果表明重组菌株GxB_gh以葡萄糖为底物进行发酵,甘油产量为4 6 6 7g L ,葡萄糖的转化率为4 2 87%。这为利用工程菌绿色生产甘油进行了前期的探索,也为进一步构建能生产1,3_丙二醇的工程菌打下了良好的基础。 展开更多
关键词 甘油 3-磷酸甘油脱氢酶 3-磷酸甘油酯酶 多顺反子 工程菌
下载PDF
酿酒酵母蔗糖酶基因的克隆、异源表达及重组酶学性质研究 被引量：3
13
作者 杜丽琴 杨键 +3 位作者 朱绮霞 杨登峰 韦宇拓 黄日波 《广西科学》 CAS 2008年第2期184-188,共5页
以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到蔗糖酶基因(suc2),并将其克隆到表达载体pSE380中,将得到的重组质粒pSE-suc2转化进E.coli BL21中,利用镍金属螯合层析方法分析测定其酶学性质。重组菌株的SDS-PAG... 以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到蔗糖酶基因(suc2),并将其克隆到表达载体pSE380中,将得到的重组质粒pSE-suc2转化进E.coli BL21中,利用镍金属螯合层析方法分析测定其酶学性质。重组菌株的SDS-PAGE结果显示重组蔗糖酶基因(suc 2)有60kDa目的蛋白出现,纯化的SDS-PAGE分析得到均一的蛋白条带;重组蔗糖酶的Km值为47.73mmol/L,最大反应速率为79.59mg还原糖mg-1蛋白min-1,最适温度为42℃,最适pH值为5.5,Zn2+、Cu2+对重组蔗糖酶酶活有较强的抑制作用,Ba2+、Mg2+、Mn2+对重组蔗糖酶酶活稍有激活作用。 展开更多
关键词 蔗糖酶 克隆 表达 酶学性质
下载PDF
绿色木霉葡聚糖内切酶Ⅰ基因的定点突变及酶学性质的研究 被引量：3
14
作者 陈祺 韦宇拓 +2 位作者 杜丽琴 黄艳燕 黄日波 《广西农业生物科学》 CSCD 2008年第B06期1-7,共7页
将绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅠ基因eg1亚克隆到表达载体pSE380,构建出重组质粒pSE380-eg1,转化到大肠杆菌JM109中表达,利用金属亲和层析对EGI进行纯化,纯化后的酶比活力达到3.8U/mg,其最适反应温度为48℃,最适pH为5.2。同时对EGⅠ的氨基... 将绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅠ基因eg1亚克隆到表达载体pSE380,构建出重组质粒pSE380-eg1,转化到大肠杆菌JM109中表达,利用金属亲和层析对EGI进行纯化,纯化后的酶比活力达到3.8U/mg,其最适反应温度为48℃,最适pH为5.2。同时对EGⅠ的氨基酸残基G291位进行随机定点突变,筛选到一株突变酶G291S,其比活力为野生酶的2.2倍,Km值为野生酶的0.66倍,最适反应温度和最适反应pH值未发生改变。 展开更多
关键词 绿色木霉 葡聚糖内切酶Ⅰ 大肠杆菌 随机定点突变
下载PDF
链霉菌GXT6 β-葡萄糖苷酶的酶学性质及葡萄糖耐受性分子改造 被引量：7
15
作者 郑芳芳 王金佩 +4 位作者 林宇 王子龙 韦宇拓 黄日波 杜丽琴 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1839-1852,共14页
【目的】从经过全基因组测序的链霉菌GXT6中克隆、表达一个编码糖基水解酶家族3的新β-葡萄糖苷酶基因,研究重组酶的酶学性质并进行相关葡萄糖耐受性的氨基酸残基的分子改造,提高其对葡萄糖的耐受性。【方法】根据链霉菌GXT6的全基因测... 【目的】从经过全基因组测序的链霉菌GXT6中克隆、表达一个编码糖基水解酶家族3的新β-葡萄糖苷酶基因,研究重组酶的酶学性质并进行相关葡萄糖耐受性的氨基酸残基的分子改造,提高其对葡萄糖的耐受性。【方法】根据链霉菌GXT6的全基因测序结果,对其中一个注释为糖基水解酶的基因设计引物,PCR扩增目的基因,以p SE380为表达载体构建重组质粒,转化至大肠杆菌中诱导表达;采用镍亲和层析技术纯化重组蛋白质,对目的蛋白质进行酶学性质研究;采用定点饱和突变的方法对重组酶进行相关氨基酸残基的分子改造。【结果】从链霉菌GXT6中克隆到一个编码糖基水解酶家族3的新β-葡萄糖苷酶基因,并在大肠杆菌中表达。酶学性质研究结果表明该β-葡萄糖苷酶的最适温度为40°C,最适p H为6.0,Km值为(0.4712±0.0180) mmol/L,Vmax值为(128.000±1.741)μmol/(min·mg),葡萄糖抑制常数Ki值为(1.8880±0.1307)mmol/L。该BGL3-GXT6能够水解黄豆苷、染料木苷、甜茶苷、虎杖苷、淫羊藿苷。还对BGL3-GXT6中与葡萄糖耐受性可能相关的氨基酸残基位点81-Trp和233-Trp进行了定点饱和突变,获得了25个具有酶活的突变酶并对其进行酶学性质研究。其中W233位点饱和突变后获得的突变酶的Km和葡萄糖抑制常数Ki值与重组酶BGL3-GXT6相比均发生明显变化,葡萄糖耐受性有不同程度的提高,最高的提高了209倍。【结论】本研究获得的BGL3-GXT6对天然底物甜茶苷、黄豆苷、染料木苷、虎杖苷和淫羊藿苷具有水解功能,这些特性表明该β-葡萄糖苷酶在理论研究及在工业中有一定的应用价值。 展开更多
关键词 链霉菌GXT6 Β-葡萄糖苷酶 酶学性质 酶分子改造 葡萄糖耐受性
原文传递
蔗糖富集环境土壤微生物宏基因组分析及蔗糖水解相关酶基因克隆 被引量：4
16
作者 杜丽琴 庞浩 +2 位作者 胡媛媛 韦宇拓 黄日波 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期403-407,共5页
蔗糖水解酶是蔗糖转化生成生物质能源的关键酶,且还具有重要的转糖苷功能.针对蔗糖富集的土壤环境,利用未培养的宏基因组技术对蔗糖水解相关的酶基因进行克隆.首先使用微生态分子技术对蔗糖富集的土壤样品进行分析,在可信区间为95%的情... 蔗糖水解酶是蔗糖转化生成生物质能源的关键酶,且还具有重要的转糖苷功能.针对蔗糖富集的土壤环境,利用未培养的宏基因组技术对蔗糖水解相关的酶基因进行克隆.首先使用微生态分子技术对蔗糖富集的土壤样品进行分析,在可信区间为95%的情况下,样品覆盖率为20%(C指数为0.2),Species richness指数为235.0,Shannon index为5.2889,说明这个蔗糖富集样品中的微生物来源具有广泛性.然后使用宏基因组技术构建这个土壤样品中微生物的DNA文库,成功构建一个包含约100000个克隆的大片段DNA Fosmid文库.对文库中的Fosmid质粒进行随机测序,发现质粒的外源DNA与已报道的DNA都没有同源性,文库所克隆的DNA都来源于仍没有被研究的微生物.使用蔗糖作为唯一碳源对文库进行筛选,获得了能水解蔗糖的克隆.在蔗糖水解能力最强的两个克隆中所包含的蔗糖水解酶与GenBank数据库中已知蔗糖酶的相似性分别为38%和68%. 展开更多
关键词 宏基因组 环境DNA DNA文库 细菌多样性统计技术 蔗糖水解酶
原文传递
宏基因组文库中的组成型启动子在大肠杆菌中的克隆 被引量：4
17
作者 杜丽琴 陆坚 +3 位作者 谭慧敏 韦宇拓 杨辉 黄日波 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1013-1018,共6页
启动子是决定基因表达水平的重要因素之一。组成型表达启动子被认为是工业上表达重要蛋白质的理想启动子。本研究利用蔗糖为唯一碳源的基本培养基对榨糖废水浸润的土壤微生物宏基因组文库进行筛选,获得两个阳性克隆。对其中一个克隆的... 启动子是决定基因表达水平的重要因素之一。组成型表达启动子被认为是工业上表达重要蛋白质的理想启动子。本研究利用蔗糖为唯一碳源的基本培养基对榨糖废水浸润的土壤微生物宏基因组文库进行筛选,获得两个阳性克隆。对其中一个克隆的柯斯质粒进行亚克隆,利用在线启动子预测和序列比对工具对其中一个亚克隆子进行分析,获得一个启动子序列。然后,利用PCR方法将该启动子和地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因一起克隆到T载体上。结果表明该启动子在不加诱导剂的条件下能够在大肠杆菌中启动外源基因的高效表达。本研究结果为在生物领域中组成型启动子的应用研究提供了基础。 展开更多
关键词 启动子 组成型 宏基因组文库 克隆 α- 淀粉酶基因
下载PDF
重组大肠杆菌的高密度发酵和甘油生产条件的初步研究 被引量：4
18
作者 杜丽琴 韦宇拓 +1 位作者 陈发忠 黄日波 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期7-10,共4页
在摇瓶中进行重组大肠杆菌菌株BL21高密度发酵条件的研究,考察了葡萄糖浓度、盐离子浓度、温度、接种量、发酵时间等对该菌株生产甘油的影响。初步确定底物浓度为2.5%,盐离子浓度0.2%,温度为37℃,接种量为2%,经24h的摇瓶发酵,甘油产量... 在摇瓶中进行重组大肠杆菌菌株BL21高密度发酵条件的研究,考察了葡萄糖浓度、盐离子浓度、温度、接种量、发酵时间等对该菌株生产甘油的影响。初步确定底物浓度为2.5%,盐离子浓度0.2%,温度为37℃,接种量为2%,经24h的摇瓶发酵,甘油产量最高达6.8g/L。在30L发酵罐实验中、按初步确定的优化条件发酵26h,甘油产量可达46.67g/L,是LB/葡萄糖培养基中甘油产量的2.06倍。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 甘油 发酵条件
下载PDF
标准模块化设计在基因工程实验课程教学中的应用 被引量：4
19
作者 韦宇拓 杜丽琴 +2 位作者 陆坚 卢春花 梁晓夏 《安徽农业科学》 CAS 2012年第18期9959-9960,共2页
针对目前基因工程实验课程存在的不足,根据该课程内容的特点进行模块化设计,将相关的实验课程划分成多个可以独立授课的模块,每一个模块都包含标准化的基础实验技能,而这些模块又可以组成系统一体化的综合实验,让学生先按照顺序掌握基... 针对目前基因工程实验课程存在的不足,根据该课程内容的特点进行模块化设计,将相关的实验课程划分成多个可以独立授课的模块,每一个模块都包含标准化的基础实验技能,而这些模块又可以组成系统一体化的综合实验,让学生先按照顺序掌握基本模块的实验操作基本技能,并对单个模块的实验技能进行考核,合格后才能进入下一步实验,这将可以大大提高基因工程实验课的教学效果,并促进学生对理论知识的掌握和实验技能的提高。 展开更多
关键词 基因工程 实验课程 模块化
下载PDF
牛链球菌L-(+)-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达 被引量：4
20
作者 张黎 韦宇拓 +2 位作者 黄彦 杜丽琴 黄日波 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期24-28,共5页
利用PCR方法从牛链球菌(Streptococcus bovis)基因组DNA中扩增出了L(+)乳酸脱氢酶基因(ldh),并将其连接到表达载体pSE380上,得到重组质粒pSEldh,将重组质粒转化到大肠杆菌菌株JM109。利用SDS-PAGE分析ldh表达产物的分子量为36KD,重组菌... 利用PCR方法从牛链球菌(Streptococcus bovis)基因组DNA中扩增出了L(+)乳酸脱氢酶基因(ldh),并将其连接到表达载体pSE380上,得到重组质粒pSEldh,将重组质粒转化到大肠杆菌菌株JM109。利用SDS-PAGE分析ldh表达产物的分子量为36KD,重组菌株的乳酸脱氢酶酶活力为168.2U/mL,最适反应温度25℃,最适作用pH为5.0,重组质粒的稳定性达99.9%。 展开更多
关键词 L-乳酸 L-(+)-乳酸脱氢酶 克隆 表达 牛链球菌 L-(+)-乳酸 脱氢酶基因 大肠杆菌 链球菌 基因组DNA
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 4 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部