TLR2/TLR9激动剂对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用

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作者 程浩 杨赟 +6 位作者 孙红武 邓炎 李郭成 曹静文 魏静 迟宇 李海波 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期829-836,共8页

目的评价toll-like receptor(TLR)2/TLR9激动剂对肺部感染鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)小鼠的保护作用。方法将6~8周龄雌性C57小鼠分为PBS组、Pam_(2)CSK_(4)(Pam)组、CpG ODN(CpG)组和Pam+CpG组,以不同剂量滴鼻免疫后24 ... 目的评价toll-like receptor(TLR)2/TLR9激动剂对肺部感染鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)小鼠的保护作用。方法将6~8周龄雌性C57小鼠分为PBS组、Pam_(2)CSK_(4)(Pam)组、CpG ODN(CpG)组和Pam+CpG组,以不同剂量滴鼻免疫后24 h进行Ab肺部致死性感染,观察小鼠生存率。构建亚致死剂量Ab肺部感染模型,测定感染后小鼠血液、肺脏、肝脏、肾脏和脾脏的细菌定植量,并取小鼠肺脏和肾脏进行HE染色,分析病理损伤程度。探索免疫1、3、7 d后对小鼠Ab感染的保护作用,明确保护时间窗。Pam+CpG体外刺激A549上皮细胞和RAW264.7细胞,考察两种细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。结果与PBS组比较,Pam+CpG组能显著提高Ab致死感染小鼠的生存率(P<0.05,P<0.01),降低亚致死感染后小鼠血液(P<0.01)、肺脏(P<0.01)、肝脏(P<0.05)、肾脏(P<0.01)和脾脏(P<0.01)的细菌定植量,减轻感染导致的病理损伤;在感染之前1 d或3 d免疫均可显著提高小鼠的生存率(P<0.05),其中免疫后3 d保护效果最好。与PBS、Pam、CpG组比较,Pam+CpG组可以显著促进A549上皮细胞和R AW264.7细胞对Ab的杀伤或吞噬作用(P<0.01)。结论TLR2/TLR9激动剂合用对Ab致死和亚致死感染均具有显著的保护作用,可能的机制是其促进了肺上皮细胞和巨噬细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 TLR2 TLR9 滴鼻免疫 肺部感染

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以新型脂肽为佐剂的LP-LNP构建及其对mRNA疫苗的增效作用

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作者 曹静文 迟宇 +6 位作者 李郭成 程浩 邓炎 魏静 朱吉 高英英 李海波 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第17期1925-1933,共9页

目的构建以新型脂肽为佐剂的递送系统脂肽-脂质纳米颗粒(lipopeptide-lipid nanoparticle,LP-LNP),初步探究其对mRNA疫苗的增效作用。方法设计并合成2种新型脂肽SS-10和SQ18,微流控技术将编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluores... 目的构建以新型脂肽为佐剂的递送系统脂肽-脂质纳米颗粒(lipopeptide-lipid nanoparticle,LP-LNP),初步探究其对mRNA疫苗的增效作用。方法设计并合成2种新型脂肽SS-10和SQ18,微流控技术将编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)、萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,F-luc)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)的mRNA包载到LP-LNP中,构建以新型脂肽为佐剂的mRNA递送系统;利用动态光散射法表征LP-LNP的粒径、多分散系数;利用HEK-Blue TM mTLR2报告细胞检测其Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)的激活作用,筛选最优脂肽掺入比;将优选的LP-LNP-eGFP-mRNA转染至HEK293T细胞,荧光显微镜观察eGFP的表达;利用活体成像技术考察LP-LNP-F-luc-mRNA在小鼠体内的表达水平;流式细胞术评价LP-LNP-OVA-mRNA免疫小鼠后诱导引流淋巴结中树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟水平以及交叉递呈抗原的能力。结果脂肽SQ18和SS-10分别以0.50%、0.75%的摩尔比掺入后,得到的LP-LNP平均粒径分别为127和121 nm,平均多分散系数分别为0.11和0.08,包封率均在90%以上,且体外安全性好;该配方条件下激活TLR2的能力显著强于阳性对照Pam 2 CSK 4(P<0.01);优选的LP-LNP均可以实现有效的体外转染,其中SQ18以0.50%掺入制备的LP-LNP体内转染效果显著优于传统LNP(P<0.01),且可以显著促进引流淋巴结DCs的成熟以及抗原的交叉递呈(P<0.05)。结论以新型脂肽为佐剂的LP-LNP可以增强mRNA的递送能力,进一步提高mRNA疫苗的免疫效果。 展开更多

关键词 脂质纳米颗粒 mRNA疫苗 佐剂 脂肽

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不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果研究

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作者 张珊珊 李郭成 +6 位作者 冯壤 薛若怡 段浩 曹宇 刘婧怡 李海波 高英英 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期957-963,共7页

目的比较不同免疫方式、不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果。方法构建重组质粒,经诱导表达纯化获得重组PKF,分别联合氢氧化铝、AS03肌注(intramuscular,im)免疫以及LTK63、LP1-34滴鼻(intranasally,in)免疫小鼠,共分为7组:PBS组... 目的比较不同免疫方式、不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果。方法构建重组质粒,经诱导表达纯化获得重组PKF,分别联合氢氧化铝、AS03肌注(intramuscular,im)免疫以及LTK63、LP1-34滴鼻(intranasally,in)免疫小鼠,共分为7组:PBS组;肌注免疫组:PKF(im)组、PKF+Al(im)组、PKF+AS03(im)组;滴鼻免疫组:PKF(in)组、PKF+LTK63(in)组、PKF+LP1-34(in)组。ELISA检测免疫后小鼠血清中特异性IgG以及黏膜部位sIgA的水平;构建鲍曼不动杆菌肺部感染亚致死模型,测定攻毒后小鼠血液和肺部细菌定植量,评价疫苗保护作用。结果肌注免疫组中,AS03辅助PKF诱导最高的特异性IgG抗体水平(P<0.01);滴鼻免疫组中,LTK63显著提升肺泡灌洗液中特异性sIgA水平(P<0.01);攻毒后细菌定植量检测结果显示,PKF+AS03肌注组细菌定植量与单用PKF组相当,而滴鼻组中LTK63可以显著降低细菌定植量(P<0.01)。结论LTK63可以辅助PKF更好地发挥对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用,表明疫苗介导的黏膜免疫应答对保护感染可能更加重要。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 佐剂 PKF 免疫效果

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基于PBP2a特异性识别的电化学免疫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

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作者 曹宇 段浩 +4 位作者 张珊珊 李郭成 李海波 刘明 高英英 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期270-276,共7页

目的构建一种高性能的电化学免疫传感器用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测。方法制备MWCNT-PDA-AuNPs纳米复合物修饰至金电极表面,将MRSA标志蛋白PBP2a的抗体连接于纳米复合物表面,用牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异性位点,得到一种... 目的构建一种高性能的电化学免疫传感器用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测。方法制备MWCNT-PDA-AuNPs纳米复合物修饰至金电极表面,将MRSA标志蛋白PBP2a的抗体连接于纳米复合物表面,用牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异性位点,得到一种检测MRSA的电化学免疫传感器。通过对传感器构建过程关键因素的考察确定最优条件,考察其线性范围及检出限,最后对传感器性能进行评价。结果通过CV、EIS表征分析确定传感器的成功构建;明确最优构建条件为:MWCNT-PDA∶AuNPs混合比例为1∶2,材料干燥温度为37℃,抗体孵育时间为1 h,样本孵育时间为30 min;MRSA在20 CFU/ml~2.0×10^(7)CFU/ml范围内浓度对数值与DPV峰电流值呈良好的线性关系,回归方程为I(μA)=-6.72lgC+84.26(R^(2)=0.9878),检出限为1 CFU/ml;传感器不易被杂质蛋白干扰,其对低、中、高浓度MRSA重复测定结果RSD分别为4.18%、3.59%、4.38%(n=8),保存20 d内,传感器电信号不低于初始的92%;传感器对低、中、高浓度MRSA样本检测回收率与平板计数法基本一致。结论该电化学免疫传感器构建简便,检测迅速、准确,灵敏度高,具有良好的特异性、重复性和稳定性,可以作为MRSA临床检测的备选方法。 展开更多

关键词 电化学免疫传感器 MRSA PBP2A MWCNT-PDA-AuNPs

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基于聚磷腈可降解电活性材料的合成及其降解行为研究 被引量：4

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作者 陈才 高康莉 +2 位作者 邓兆静 李郭成 韩国志 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第2期2013-2018,共6页

以六氯环三磷腈为原料,加热开环聚合制备了聚二氯磷腈,再分别以苯胺五聚体为功能单元、甘氨酸乙酯和赖氨酸为调节基团,通过两步亲核取代反应,合成了两种可用于神经支架工程材料的可降解电活性高分子聚[(甘氨酸乙酯/苯胺五聚体)磷腈](PG... 以六氯环三磷腈为原料,加热开环聚合制备了聚二氯磷腈,再分别以苯胺五聚体为功能单元、甘氨酸乙酯和赖氨酸为调节基团,通过两步亲核取代反应,合成了两种可用于神经支架工程材料的可降解电活性高分子聚[(甘氨酸乙酯/苯胺五聚体)磷腈](PGAP)和聚[(赖氨酸/苯胺五聚体)磷腈](PLAP)。通过红外、热重、核磁、循环伏安、紫外等对聚合物进行了全面的表征。在此基础上,重点研究了氨基酸类侧链取代基对聚磷腈降解行为的影响。研究结果表明,侧链氨基酸类取代基的类型和比例对此高分子材料的降解行为有着关键性影响。其降解速率随着取代基比例的增加而加快,此外,随着氨基酸侧链基团极性的增加,降解速率增加。 展开更多

关键词 聚磷腈 电活性 PGAP PLAP 降解

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不同免疫方式对新冠DNA疫苗应答效果的影响 被引量：2

6

作者 刘畅 李郭成 +6 位作者 金喆 薛若怡 刘婧怡 冯壤 金滋力 邹全明 李海波 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期170-176,184,共8页

目的探究气管灌注和电脉冲肌肉导入2种免疫方式对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)DNA疫苗免疫应答的影响。方法利用真核表达载体pVAX-1,设计并构建p RBD、p S-2P和p S-2P.3513种SARS-CoV-2 DNA疫苗。在第0、2和4周采用气管灌注以及电脉冲肌肉... 目的探究气管灌注和电脉冲肌肉导入2种免疫方式对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)DNA疫苗免疫应答的影响。方法利用真核表达载体pVAX-1,设计并构建p RBD、p S-2P和p S-2P.3513种SARS-CoV-2 DNA疫苗。在第0、2和4周采用气管灌注以及电脉冲肌肉导入2种方式免疫小鼠。末次免疫后2周,ELISA检测血清及阴道灌洗液特异性IgG抗体水平,肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、鼻腔灌洗液(nasal solution,NS)以及阴道灌洗液(vaginal wash)特异性sIgA抗体水平;ELISpot检测免疫后小鼠脾细胞分泌特异性IFN-gamma的水平。结果气管灌注及电脉冲肌肉导入2种方式免疫SARS-CoV-2DNA疫苗,仅气管灌注免疫可诱导特异性呼吸道黏膜sIgA应答,而电脉冲肌肉导入诱导了更强的细胞免疫应答。与气管灌注pRBD相比,气管灌注pS-2P和p S-2P.351可诱导更强的黏膜免疫应答和细胞免疫应答。结论气管灌注和电脉冲肌肉导入2种免疫方式均可诱导特异性体液免疫以及细胞免疫应答,电脉冲肌肉导入诱导了更强的细胞免疫应答,而气管灌注在诱导呼吸道黏膜免疫应答方面更具优势。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 DNA疫苗 气管灌注 电脉冲肌肉导入 免疫应答

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第二代Grubbs催化剂配体的合成及优化 被引量：3

7

作者 李郭成 高康莉 +1 位作者 邓兆静 韩国志 《化工时刊》 CAS 2015年第3期18-21,共4页

Grubbs催化剂是一种用于烯烃复分解反应的配位化合物,其中的配体对于催化剂的催化性能、稳定性有很大的影响。目前,N-杂环卡宾(N-heterocyclic carbenes,NHC)是第二代Grubbs催化剂中的一个关键配体。本文以乙二醛为原料,通过取代、还原... Grubbs催化剂是一种用于烯烃复分解反应的配位化合物,其中的配体对于催化剂的催化性能、稳定性有很大的影响。目前,N-杂环卡宾(N-heterocyclic carbenes,NHC)是第二代Grubbs催化剂中的一个关键配体。本文以乙二醛为原料,通过取代、还原、环化等反应,合成了一种氮杂环卡宾的前驱体1,3-二取代-2-羧基咪唑啉。在此基础上,对部分关键合成环节进行了优化。研究结果表明,在乙二醛-双-(2,4,6三甲基苯基)亚胺的合成过程中,随着反应温度的升高,产率逐渐升高,后有所降低。在3-(2,4,6三甲基苯基)-2-羧基咪唑啉的合成过程中,反应时间对收率影响最大。 展开更多

关键词 Grubbs催化剂 氮杂环卡宾 合成 优化

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一种冠醚金属卟啉化合物的合成及其阴离子识别机制 被引量：2

8

作者 耿欣 陈才 +3 位作者 李郭成 高康莉 邓兆静 韩国志 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期171-176,共6页

合成了一种冠醚化卟啉化合物(1)及其Hg2+配合物(3),通过紫外光谱研究了冠醚卟啉化合物中卟啉单元与汞离子的配合性能,并采用核磁共振研究了其在溶液中的分子组装机制。利用冠醚环的离子识别行为以及冠醚环与卟啉环的协同作用,研究了冠... 合成了一种冠醚化卟啉化合物(1)及其Hg2+配合物(3),通过紫外光谱研究了冠醚卟啉化合物中卟啉单元与汞离子的配合性能,并采用核磁共振研究了其在溶液中的分子组装机制。利用冠醚环的离子识别行为以及冠醚环与卟啉环的协同作用,研究了冠醚金属卟啉化合物的阴离子识别检测,并对其机制进行了探讨。相比于5-(4-羧基苯基)-10,15,20-三苯基卟啉,冠醚卟啉化合物中的卟啉单元配合汞离子之后,其紫外吸收中的S带由415 nm红移至440 nm处。对于冠醚金属卟啉化合物而言,当其中的冠醚单元配合其特征金属阳离子之后,随着阴离子的不同,其紫外吸收光谱和颜色也呈现不同的特征,为阴离子的可视化识别提供了一种新的思路。 展开更多

关键词 冠醚 卟啉 合成 阴离子 可视化识别

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全反式维甲酸纳米乳的制备及其疫苗佐剂效应评价 被引量：1

9

作者 金喆 冒灵 +8 位作者 刘畅 刘婧怡 薛若怡 冯壤 李郭成 金滋力 孙红武 邹全明 李海波 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期816-823,共8页

目的制备装载全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,atRA)的纳米乳佐剂,评价其黏膜佐剂效应。方法使用低能乳化法制备包裹有维甲酸的纳米乳,利用动态光散射仪、扫描电子显微镜、透射电子显微镜等对其理化性质进行表征;与BMDCs、脾淋巴... 目的制备装载全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,atRA)的纳米乳佐剂,评价其黏膜佐剂效应。方法使用低能乳化法制备包裹有维甲酸的纳米乳,利用动态光散射仪、扫描电子显微镜、透射电子显微镜等对其理化性质进行表征;与BMDCs、脾淋巴细胞或肠系膜淋巴结细胞共孵育后用流式细胞术检测其促淋巴细胞成熟和分化的能力;小鼠肌注给药后,表征其诱发注射部位急性炎症情况;ELISA检测脾淋巴细胞分泌IL-4、IL-17A等细胞因子的表达水平以及血清与肠黏膜部位抗原特异性抗体的滴度,初步评价维甲酸纳米乳作为黏膜疫苗佐剂的效应。结果成功制备了平均粒径27.23 nm,Zeta电位-25.8 mV,装载0.998 mg/ml全反式维甲酸的纳米乳,与抗原物理混合后通过肌肉注射免疫小鼠,在注射部位诱导了与铝佐剂相当的IL-6与IL-15的水平,形成了有利于免疫响应的炎症微环境,在诱导高水平血清抗原特异性IgG的同时,在肠黏膜部位还诱导了高水平的抗原特异性sIgA抗体。结论维甲酸纳米乳具有良好的黏膜佐剂活性,肌肉注射后可激活体液与肠黏膜抗原特异性抗体应答,为后续研究通过肠道入侵人体病原体的疫苗提供新思路。 展开更多

关键词 全反式维甲酸 肠黏膜免疫 IGA OVA

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一种卟啉-螺吡喃化合物的合成及其离子响应行为研究 被引量：1

10

作者 高康莉 邓兆静 +1 位作者 李郭成 韩国志 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1323-1327,共5页

合成了一种卟啉-螺吡喃化合物,并对其结构进行详细表征。在此基础上,通过紫外光谱研究了其光致异构与离子响应特征,并提出了一种解释卟啉环与螺吡喃之间耦合行为的新机制。研究结果表明,金属离子会诱导合成的卟啉-螺吡喃分子产生新的构... 合成了一种卟啉-螺吡喃化合物,并对其结构进行详细表征。在此基础上,通过紫外光谱研究了其光致异构与离子响应特征,并提出了一种解释卟啉环与螺吡喃之间耦合行为的新机制。研究结果表明,金属离子会诱导合成的卟啉-螺吡喃分子产生新的构象,从而影响螺吡喃的光致异构。此外,随着离子半径以及亲电能力的不同,卟啉-螺吡喃衍生物的光学特性也产生明显差异。这种卟啉-螺吡喃化合物为构建新型离子探针提供了一种思路。 展开更多

关键词 螺吡喃 卟啉 光致异构 离子响应

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基于紫外光谱的N-2,4-二硝基苯基吡啶季铵盐的开环

11

作者 邓兆静 高康莉 +1 位作者 李郭成 韩国志 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1379-1385,共7页

吡啶季铵盐的开环是有机合成中的一个重要的多步串联反应,应用领域广阔。但目前对其开环机理尚存一些争议。基于开环前后,其分子共轭结构的差异,利用紫外光谱对吡啶季铵盐的开环反应过程进行了研究,并对形成其关键中间体1-苯胺基-5-苯... 吡啶季铵盐的开环是有机合成中的一个重要的多步串联反应,应用领域广阔。但目前对其开环机理尚存一些争议。基于开环前后,其分子共轭结构的差异,利用紫外光谱对吡啶季铵盐的开环反应过程进行了研究,并对形成其关键中间体1-苯胺基-5-苯亚胺基-1,3-戊二烯的影响因素进行了优化。此外,将超声辐射引入吡啶季铵盐的开环过程,提升了开环的效率,开环速率提高了94%。 展开更多

关键词 N-二硝基苯基吡啶盐 开环 苯胺基-苯亚胺基-戊二烯 紫外光谱

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微米级PS-PEDOT核壳型导电微球的合成与拉曼表征

12

作者 王普 李郭成 +2 位作者 邓兆静 高康莉 韩国志 《功能高分子学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期272-277,共6页

以分散聚合法制备的微米级聚苯乙烯(PS)微球为模板、3,4-乙烯二氧噻吩(EDOT)为单体、过硫酸铵(APS)为引发剂,通过氧化聚合制备了PS-PEDOT核壳型复合导电微球。采用扫描电镜、透射电镜等对导电微球的形貌和结构进行了表征,重点采用拉曼... 以分散聚合法制备的微米级聚苯乙烯(PS)微球为模板、3,4-乙烯二氧噻吩(EDOT)为单体、过硫酸铵(APS)为引发剂,通过氧化聚合制备了PS-PEDOT核壳型复合导电微球。采用扫描电镜、透射电镜等对导电微球的形貌和结构进行了表征,重点采用拉曼光谱研究了其核壳结构特征。并研究了超声分散、溶液pH以及单体配比对导电微球形貌的影响。实验结果表明:超声的引入可提高导电微球的单分散性,改善微球的形貌。随着pH的降低或单体配比的增加,导电聚合物在PS微球表面的负载量随之增加,当m(EDOT)/m(PS)由0.60增加到1.25时,导电微球的平均粒径由1.76μm增加到1.91μm。 展开更多

关键词 微米级 聚苯乙烯 EDOT 导电微球 拉曼表征

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