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泥鳅β-actin启动子介导的革胡子鲶GH重组基因的构建及启动活性研究
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作者 金铁根 李相赫 +3 位作者 陈阳 薛松磊 徐琪 陈国宏 《水产学杂志》 CAS 2014年第6期1-7,共7页
为获得快速生长的泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus),研究了泥鳅β-actin基因启动子介导的革胡子鲶(Clarias gariepinus)生长激素(growth hormone,GH)重组基因。采用PCR和RT-PCR技术克隆泥鳅β-actin基因近端启动子、3′-UTR及革胡子鲶G... 为获得快速生长的泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus),研究了泥鳅β-actin基因启动子介导的革胡子鲶(Clarias gariepinus)生长激素(growth hormone,GH)重组基因。采用PCR和RT-PCR技术克隆泥鳅β-actin基因近端启动子、3′-UTR及革胡子鲶GH基因编码区,构建一个长为2 418bp的GH重组基因DPRK。首先,构建了以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因的重组表达载体p AF(pβ-actin promoter-EGFP),然后转染DF1真核细胞,同时经酶切线性化后显微注射到斑马鱼(Danio rerio)和泥鳅的受精卵中,以评价泥鳅β-actin启动子的启动活性。其次,将重组基因DPRK显微注射到泥鳅受精卵中。结果显示:泥鳅β-actin启动子能在DF1细胞、斑马鱼和泥鳅的受精卵中启动绿色荧光蛋白的表达;泥鳅的荧光表达率(78.44%)显著高于斑马鱼(29.62%);泥鳅受精卵显微注射DPRK 20d后,在m RNA水平检测到GH基因的表达。这表明泥鳅β-actin基因近端启动子具有显著的启动活性,且重组基因DPRK能在泥鳅体内表达,为下一步泥鳅的基因工程育种奠定了理论基础。 展开更多
关键词 泥鳅 β-actin启动子 革胡子鲶鱼GH基因 显微注射
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大鳞副泥鳅β-actin基因近端启动子的克隆及启动活性分析
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作者 李相赫 徐琪 +3 位作者 俞钦明 童一宇 先友成进 陈国宏 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2014年第4期18-24,共7页
采用PCR技术从大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)基因组中克隆了β-actin基因近端启动子片段DPRK1,并将该基因启动子片段DPRK1定向亚克隆到不含启动子的绿色荧光表达载体pEGFP-N1中,构建了重组荧光表达载体pDPRK1-EGFP。将该载体分... 采用PCR技术从大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)基因组中克隆了β-actin基因近端启动子片段DPRK1,并将该基因启动子片段DPRK1定向亚克隆到不含启动子的绿色荧光表达载体pEGFP-N1中,构建了重组荧光表达载体pDPRK1-EGFP。将该载体分别转染真核细胞293T、CEL及DF1,检测绿色荧光表达情况。重组载体经NdeⅠ酶切线性化后,显微注射到斑马鱼(Danio rerio)的受精卵中。序列分析显示该片段的长度为1 282 bp,含167 bp的5'侧翼序列近端启动子区和共1 115 bp的第1个外显子以及第1个内含子区。5'侧翼序列近端启动子含有CAAT box,CArG motif和TATA box,分别位于转录起始位点(+1)上游的-94、-64和-31处。在将重组载体pDPRK1-EGFP转染293T、CEL及DF1的实验中观察到3种细胞都有很强的绿色荧光,在显微注射到斑马鱼受精卵的实验中也观察到绿色荧光,该结果表明大鳞副泥鳅β-actin基因近端启动子片段DPRK1具有效的启动功能,为下一步创制转基因泥鳅新品系提供了技术支撑。 展开更多
关键词 大鳞副泥鳅( Paramisgurnus dabryanus) Β-ACTIN 启动子 绿色荧光蛋白 显微注射
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