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多重实时PCR快速同时检测沙门菌和志贺菌 被引量：40
1
作者 石晓路 扈庆华 +6 位作者 张佳峰 李庆阁 王冰 林一曼 庄志雄 刘小立 张顺祥 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1053-1056,共4页
目的建立改良分子信标-多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法,应用于食源性致病菌的快速诊断。方法根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因,分别设计一对引物和改良分子信标探针,用同色荧光标记,用于同体系检测沙门... 目的建立改良分子信标-多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法,应用于食源性致病菌的快速诊断。方法根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因,分别设计一对引物和改良分子信标探针,用同色荧光标记,用于同体系检测沙门菌。志贺菌根据ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,加入沙门菌检测体系中,建立三重实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于同时对沙门菌、志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果改良分子信标-多重实时PCR反应体系DNA灵敏度为69-93 fg／μl,菌液灵敏度为32-64 CFU／ml或1-2 CFU／PCR反应体系,无交叉反应。该反应体系同时检测134株沙门菌和67株志贺菌,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰。对细菌性食物中毒样本等共1100份同时进行沙门菌和志贺菌检测,569份沙门菌实时PCR阳性,其中551份沙门菌培养阳性;42份志贺菌实时PCR阳性,其中41份志贺菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需时间2 h至1 d。结论改良分子信标-多重实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于沙门菌和志贺菌食物中毒的快速诊断,伤寒、痢疾等肠道传染病的初筛及预防医学门诊的健康人群体检,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。 展开更多
关键词 沙门菌 志贺菌 多重实时聚合酶链反应 同步检测
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多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立 被引量：33
2
作者 刘光明 李庆阁 +4 位作者 王群力 梁基选 陈伟铃 栾国彦 苏文金 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期493-497,共5页
根据商品化转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子 (Nos)的序列特点 ,设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针 ,建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分 35S启动子和Nos终止子... 根据商品化转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子 (Nos)的序列特点 ,设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针 ,建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分 35S启动子和Nos终止子的方法 .并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等 11份实物样品进行了检测 ,其中有 5份样品结果阳性 .结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测出 35S和Nos双组分 ,较常规PCR技术更为简便、快速、准确 ,有很好的应用前景 . 展开更多
关键词 多重荧光PCR 35S NOS 转基因作物 荧光双链探针 花椰菜花叶病毒启动子 极癌农杆菌终止子 检测方法
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新型铕络合物用于HBsAg的时间分辨荧光免疫检测 被引量：29
3
作者 朱艳冰 李庆阁 +1 位作者 王桂兰 袁景利 《标记免疫分析与临床》 CAS 2002年第3期157-160,共4页
利用稳定的新型铕荧光络合物BHHCT与Eu3 + 标记羊抗人HBsAb和Eu3 + 标记BSA -SA ,建立定量测定血清HBsAb的Eu3 + -BHHCT -HBsAb -TRFIA法和Eu3 + -BHHCT -BSA -SA -TRFIA法。结果表明 ,这两种方法最低检出值分别为 0 .2ng/mL和 0 .0 5ng... 利用稳定的新型铕荧光络合物BHHCT与Eu3 + 标记羊抗人HBsAb和Eu3 + 标记BSA -SA ,建立定量测定血清HBsAb的Eu3 + -BHHCT -HBsAb -TRFIA法和Eu3 + -BHHCT -BSA -SA -TRFIA法。结果表明 ,这两种方法最低检出值分别为 0 .2ng/mL和 0 .0 5ng/mL ,标准曲线范围均为 0 - 10 0ng/mL ,批内变异系数CV均小于10 % ,后者回收率为 85 % - 115 %。用Eu3 + -BHHCT -BSA -SA -TRFIA法与ELISA法同时检测 118份血清样品 。 展开更多
关键词 铕荧光络合物 时间分辨荧光免疫分析法 乙型肝炎病毒表面抗原 定量测定
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改良分子信标-实时PCR快速检测副溶血弧菌 被引量：21
4
作者 扈庆华 郑薇薇 +4 位作者 石晓路 李庆阁 王冰 庄志雄 刘小立 《现代预防医学》 CAS 2004年第3期441-443,共3页
目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FA... 目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断 。 展开更多
关键词 分子信标 实时PCR 快速检测 副溶血弧菌 食物中毒
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我国森林火灾监测体系现状及展望 被引量：23
5
作者 闫德民 李庆阁 《森林防火》 2017年第3期27-30,54,共5页
森林火灾是一种突发性强、危害性大的自然灾害,监测是预防森林火灾发生和控制林火蔓延的有效手段。对森林火灾监测技术体系进行了全面分析和总结,包括近地监测、航空监测、卫星监测、雷达监测及无线传感器网络技术等。未来我国森林火灾... 森林火灾是一种突发性强、危害性大的自然灾害,监测是预防森林火灾发生和控制林火蔓延的有效手段。对森林火灾监测技术体系进行了全面分析和总结,包括近地监测、航空监测、卫星监测、雷达监测及无线传感器网络技术等。未来我国森林火灾监测体系应将各种监测措施有效集成,结合最新技术,逐步建成预测精准、防控有效的森林火灾监控体系。 展开更多
关键词 森林火灾 监测体系 卫星监测 航空监测 无线传感器网络
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改良分子信标-实时PCR快速检测志贺菌 被引量：21
6
作者 吴平芳 石晓路 +9 位作者 郑琳琳 扈庆华 李庆阁 张佳峰 庄志雄 刘小立 张顺祥 王冰 贺连华 林一曼 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第4期394-395,468,共3页
目的:建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法,应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法:根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于... 目的:建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法,应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法:根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于对志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果:改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为93 fgμ/l,菌液灵敏度为64 cfu/m l或2 cfu/PCR反应体系,无交叉反应。此反应体系检测67株志贺菌,均出现特异的荧光信号。对细菌性食物中毒样本等共657份样品进行志贺菌检测,42份志贺菌实时PCR阳性,其中41份志贺菌细菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需2 h^1 d时间。结论:改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于志贺菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段,对于提高肠道门诊的工作效率有重要意义。 展开更多
关键词 志贺菌 改良分子信标 实时PCR 检测
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双重实时PCR快速同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌 被引量：19
7
作者 扈庆华 郑薇薇 +6 位作者 石晓路 李庆阁 王冰 庄志雄 刘小立 贺连华 吴平芳 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1004-1007,共4页
目的建立改良分子信标双重实时PCR同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌的快速方法,应用于霍乱监测、副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)和副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因(T... 目的建立改良分子信标双重实时PCR同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌的快速方法,应用于霍乱监测、副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)和副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因(TDH)的保守序列,分别设计引物和改良分子信标探针,以10种细菌作对照,建立双重实时PCR改良分子信标检测体系,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和霍乱监测。结果改良分子信标双重实时PCR反应体系DNA灵敏度为102.4～166.6fgμl,菌液灵敏度为32～64CFUml或3～6CFUPCR反应体系,无交叉反应。此反应体系同时检测40株副溶血弧菌和50株霍乱弧菌,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰。对3起细菌性食物中毒共48份样品和100份海产品进行检测,9份副溶血弧菌实时PCR阳性,其中7份副溶血弧菌细菌培养阳性,其余样品都为阴性。从样品处理到检测结果仅需1天时间。结论改良分子信标双重实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于霍乱和副溶血弧菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。 展开更多
关键词 实时PCR 副溶血弧菌 霍乱弧菌 同时检测 食物中毒 快速诊断 改良 分子信标 DNA 保守序列
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分子信标用于结核分枝杆菌的均相荧光PCR检测 被引量：10
8
作者 李庆阁 梁基选 +1 位作者 栾国彦 张洋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期385-386,共2页
关键词 分子信标 结核分枝杆菌 均相荧光 PCR 结核病
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厦门地区遗传性耳聋流行病学调查 被引量：16
9
作者 王旭东 洪拥军 +2 位作者 陈艺文 黄秋英 李庆阁 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第6期753-758,共6页
目的调查厦门地区遗传性耳聋的发生率及热点基因突变,探讨在厦门地区开展遗传性耳聋检测的必要性和意义。方法采集2015年12月至2016年2月厦门市中山医院就诊的132名耳聋患者唾液并提取DNA,应用探针熔解曲线技术检测4个常见耳聋基因的20... 目的调查厦门地区遗传性耳聋的发生率及热点基因突变,探讨在厦门地区开展遗传性耳聋检测的必要性和意义。方法采集2015年12月至2016年2月厦门市中山医院就诊的132名耳聋患者唾液并提取DNA,应用探针熔解曲线技术检测4个常见耳聋基因的20个突变位点,包括GJB2(c.35del G,c.167del T,c.176-191del16bp,c.235del C,c.299-300del AT)、GJB3(c.538 C>T,c.547 G>A)、SLC26A4(c.749 T>C,c.754 T>C,c.919-2 A>G,c.1174 A>T,c.1226 G>A,c.1229 C>T,c.1707+5 G>A,c.1975 G>C,c.2027 T>A,c.2162 C>T,c.2168 A>G)和线粒体DNA 12S r RNA(m.1494 C>T,m.1555 A>G)。结果 132名耳聋患者中,共检测出耳聋基因异常者42例(31.8%),其中22例携带GJB2基因突变,16例携带SLC26A4基因突变,4例携带线粒体基因m.1555A>G均质性突变。在这些基因异常的患者中,GJB2基因的c.235del C(15.9%,21/132)及SLC26A4基因的c.919-2A>G(10.6%,14/132)为厦门地区的两大热点突变。结论厦门地区耳聋患者中常见耳聋基因突变以GJB2基因突变、SLC26A4基因突变为主。因此,该地区应将遗传性耳聋检测纳入遗传咨询、产前诊断及新生儿筛查,尤其是新生儿药物性耳聋和PDS综合征等迟发性耳聋的基因检测,从而有效的降低耳聋的发生。 展开更多
关键词 耳聋 基因 熔解曲线 流行病学
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分子信标探针用于PCR检测对虾白斑杆状病毒 被引量：10
10
作者 章晓波 徐洵 +2 位作者 李庆阁 徐丽美 public.xm.fj.cn 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期277-280,共4页
将对虾白斑杆状病毒的一段特异性DNA设计成分子信标探针 ,用于该病毒的PCR检测 .温度与荧光强度之间的关系表明 ,所设计探针的发夹既可以形成也可以打开 ,符合PCR对分子信标探针的要求 .结果表明 ,在PCR同时加入分子信标探针不影响PCR扩... 将对虾白斑杆状病毒的一段特异性DNA设计成分子信标探针 ,用于该病毒的PCR检测 .温度与荧光强度之间的关系表明 ,所设计探针的发夹既可以形成也可以打开 ,符合PCR对分子信标探针的要求 .结果表明 ,在PCR同时加入分子信标探针不影响PCR扩增 ,分子信标探针只能与目的DNA杂交 ,具有较高的特异性 .随着PCR循环数的增加以及含目的DNA的质粒拷贝数的增加 。 展开更多
关键词 对虾 白斑杆状病毒 PCR 分子信标探针
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氯化血红素的催化荧光测定 被引量：12
11
作者 李庆阁 许金钩 +1 位作者 黄贤智 陈国珍 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1996年第12期1375-1378,共4页
在碱性溶液中氯化血红素转化为高铁血红素，后者可催化过氧化氢氧化荧光供氢体反应，据此建立了氯化血红素的荧光测定方法。对测定条件包括缓冲溶液类型、酸度、荧光供氢体类型及过氧化氢和荧光供氧体的加入量等进行了考察，在0～3．52... 在碱性溶液中氯化血红素转化为高铁血红素，后者可催化过氧化氢氧化荧光供氢体反应，据此建立了氯化血红素的荧光测定方法。对测定条件包括缓冲溶液类型、酸度、荧光供氢体类型及过氧化氢和荧光供氧体的加入量等进行了考察，在0～3．52μg／L范围内，测定氯化血红素的工作曲线为y＝9．62＋94．36x，线性相关系数为0.9992，相对标准偏差为5.8％，检测限为0.01μg／L。另外，通过考察十六烷基三甲基溴化铵的影响，证明该试剂可作为荧光反应的有效终止剂。本文结果为将氯化血红素发展为免疫分析的标记物提供了直接根据。 展开更多
关键词 氯化血红素 荧光分析 胶束 免疫分析
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探针熔解分析法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药突变的应用和评价 被引量：9
12
作者 胡思玉 牛建军 +2 位作者 权胜卯 黄建炜 李庆阁 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期935-939,共5页
目的 评价PMA技术检测MTB对INH耐药突变的价值,调查INH耐药突变发生特征.方法 MTB标准株H37Rv来自国家结核病参比实验室,1株INH敏感株和1株katG S315TACC突变株来自厦门市疾病预防控制中心,7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株来自深圳... 目的 评价PMA技术检测MTB对INH耐药突变的价值,调查INH耐药突变发生特征.方法 MTB标准株H37Rv来自国家结核病参比实验室,1株INH敏感株和1株katG S315TACC突变株来自厦门市疾病预防控制中心,7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株来自深圳慢性病防治中心、河南省疾病预防控制中心、中国人民解放军第309医院和厦门市疾病预防控制中心.707份MTB临床分离株来自厦门市疾病预防控制中心、厦门市第一医院和漳州市疾病预防控制中心,126份MTB涂阳痰标本来自厦门市同安区疾病预防控制中心.MTB标准株H37Rv、7株MTB INH耐药株和833份临床标本均采用厦门致善结核分枝杆菌异烟肼耐药突变检测试剂盒热裂解法提取基因组DNA,1株INH敏感株和1株katG S315T ACC突变株采用AxyPrepTM细菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA.熔解曲线分析所检标本与野生型对照在katG315位密码子、inhA启动子区（- 17～-8位点）、ahpC启动子区（-44～-30以及-15 ～3位点）及inhA94位密码子的熔解温度（Tm值）差异判断标本是否发生INH耐药突变.3×105拷贝/反应的野生株和katG S315T ACC突变株以10倍梯度稀释至300拷贝/反应,分析PMA技术的灵敏度.用PMA技术检测7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株,评价特异性,并就其中5种耐药突变进行重复性检验.测序验证PMA技术对833份标本INH耐药性的临床检测效能.结果 PMA技术从核酸提取到结果判断可在3小时内完成,在标准96孔实时PCR仪器上可同时检测46份标本.对野生株和katG S315T ACC突变株的灵敏度均为300拷贝/反应,能够同时区分9种INH耐药相关点突变或缺失,5种耐药突变的Tm值标准偏差均在0.5℃之内.检出的162份突变标本与测序验证结果均一致.临床标本验证突变率为19.4％（ 162/833）,在所检出的14种INH耐药突变katGS315T（ AGC →ACC）、inhA启动子区- 15C→T和katG S315N （AGC→AAC）这3种突变� 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 异烟肼 抗药性 细菌 突变 聚合酶链反应
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实时聚合酶链反应熔解曲线法快速检测耐多药结核分枝杆菌 被引量：9
13
作者 王峰 崔运勇 +4 位作者 胡思玉 桂静 杨慧 李庆阁 刘小立 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期888-893,共6页
目的应用实时PCR熔解曲线法快速检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性，并与比例法检测结果进行比较。方法收集深圳市2007--2009年耐药监测项目、全国耐药基线调查项目和深圳市慢性病防治中心门诊患者临床分离株311株，采用实时PCR熔解曲线... 目的应用实时PCR熔解曲线法快速检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性，并与比例法检测结果进行比较。方法收集深圳市2007--2009年耐药监测项目、全国耐药基线调查项目和深圳市慢性病防治中心门诊患者临床分离株311株，采用实时PCR熔解曲线法检On,0rpoB基因耐药突变热点区、ahpC启动子区（硝～30及-15～-3位点）、inhA启动子区（-7～-8位点）、inhA94和katG315位耐药突变，并与耐药基因测序及表型药敏试验结果进行比较。以比例法药敏试验结果作为MTB药敏试验的金标准，评价实时PCR熔解曲线法的敏感度、特异度与金标准的符合率。结果实时PCR熔解曲线法2～3h即可完成检测，扩增和结果判定在1个反应管内完成。检测利福平耐药的敏感度为97．8％，特异度为97．1％，准确性为97．4％；检测异烟肼耐药的敏感度为86．6％，特异度为98．7％，准确性为92．6％。对耐多药MTB的检测敏感度为88．6％，特异度为100．O％，重复性为100．0％。结论实时PCR熔解曲线法检测MTB对利福平和异烟肼耐药性，与比例法检测结果比较具有很好的一致性，且具有快速、准确的优点，有较好的临床应用价值。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 抗药性 多药 利福平 异烟肼 突变 聚合酶链反应
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改良分子信标—实时PCR快速检测霍乱弧菌 被引量：8
14
作者 扈庆华 郑薇薇 +5 位作者 石晓路 叶宝英 李庆阁 王冰 庄志雄 刘小立 《中国热带医学》 CAS 2004年第4期499-501,共3页
目的　建立改良分子信标—实时PCR检测霍乱弧菌的快速方法 ,应用于霍乱监测。　方法　根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位 (ctxA)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对... 目的　建立改良分子信标—实时PCR检测霍乱弧菌的快速方法 ,应用于霍乱监测。　方法　根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位 (ctxA)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测霍乱弧菌的实时PCR反应体系 ,应用于霍乱监测。　结果　霍乱弧菌改良分子信标检测体系检测 12种细菌 ,只有霍乱弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为10 2 4fg/ul ,菌液灵敏度为 3 2cfu/ml或 3cfu/PCR反应体系。对 10 0份海产品和 3 0份腹泻病人大便标本进行检测 ,结果都为阴性。检测时间仅需 2h。　结论　改良分子信标—实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强 ,可用于霍乱的快速诊断 。 展开更多
关键词 检测方法 霍乱弧菌 分子信标-实时PCR 流行病学
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荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究 被引量：9
15
作者 马艳艳 李辉 +2 位作者 赵东阳 李静 李庆阁 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2011年第6期451-454,共4页
目的对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价检测能力及在国境口岸的应用价值。方法应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离结核分枝杆菌,以传统药物敏感性试验为标准,获得该方法的灵敏性、特异性... 目的对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价检测能力及在国境口岸的应用价值。方法应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离结核分枝杆菌,以传统药物敏感性试验为标准,获得该方法的灵敏性、特异性。结果对347例结核病人临床分离培养样本,传统药物敏感性试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本。荧光PCR熔解曲线法检出269例利福平敏感标本,78例利福平耐药标本,灵敏性为93.42%,特异性为97.42%,符合率为96.54%。结论荧光PCR熔解曲线法检测速度快速、灵敏度高、特异性强,可用于结核分枝杆菌利福平耐药突变的快速检测,适于国境口岸对耐多药结核病的快速筛查。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 熔解曲线法 利福平 检测
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探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变 被引量：7
16
作者 张婷 付军 +5 位作者 王国治 陈保文 杨蕾 卢锦标 许晔 李庆阁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期412-417,共6页
目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以... 目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以及含常见耐药突变的质粒以不同突变比例混合考察试剂盒检测不均一耐药样本的能力,并使用23株非结核分枝杆菌标准株考察试剂盒的分析特异性,最后使用241份临床分离株对试剂盒进行临床评价。结果该试剂盒可以将9种耐药相关突变与1种野生型多态性与野生型进行区分。可以检测到低至5个拷贝的野生型基因组DNA。当突变比例为30%或更高时,试剂盒可以将其与野生型进行区分。23种非结核分枝杆菌的结果显示该试剂盒有良好的特异性。和比例法药敏试验进行对比,该试剂盒的临床灵敏度为卡那霉素90.0%(9/10),阿米卡星80.0%(8/10),卷曲霉素85.7%(6/7);特异性为卡那霉素98.8%(85/86),阿米卡星98.8%(85/86),卷曲霉素96.6%(86/89)。试剂盒检测结果与测序结果一致。结论该试剂盒灵敏度高、特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌注射类二线药常见的耐药突变,有望应用于临床。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 注射类二线药 耐药突变 探针熔解曲线法
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大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒型AmpC酶基因型的检测分析 被引量：7
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作者 郑港森 刘赞赞 +4 位作者 张加勤 黄朝阳 马晓波 李庆阁 宋秀宇 《国际检验医学杂志》 CAS 2015年第11期1505-1506,共2页
目的：针对该院临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒型 AmpC 酶基因型进行研究分析。方法收集2011年7月至2012年8月对头孢西丁不敏感无重复临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共176株，采用聚合酶链反应（PCR）法和扩增全基因序列分析... 目的：针对该院临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒型 AmpC 酶基因型进行研究分析。方法收集2011年7月至2012年8月对头孢西丁不敏感无重复临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共176株，采用聚合酶链反应（PCR）法和扩增全基因序列分析大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产 AmpC 酶基因型。结果 PCR 结果显示，AmpC 酶基因（ampC 基因）阳性率为18．2％主要以 DHA 型为主，阳性率为59．4％，CIT 型为37．5％，EBC 为3．1％；其中，大肠埃希菌 ampC 基因阳性率为11．4％，以CIT 型为主，阳性率为77．8％，DHA 型和 EBC 型阳性率均为11．1％；肺炎克雷伯菌 ampC 基因阳性率为23．7％，以 DHA 型为主，阳性率为78．3％，CIT 型为21．7％。基因序列结果显示，DHA 型有18株为 DHA‐1基因型和1株摩根摩根菌 ampC 基因型，一致率97．0％，CIT 型有10株为 CMY‐2基因型，1株 CMY‐42基因型和1株 CMY‐4基因型；EBC 型为阴沟肠杆菌 ampC 基因型，一致率为99．0％。将32株基因序列提交 GenBank ，均被接受，其登录号为 KJ127248～ KJ127279。结论该院临床分离大肠埃希菌 ampC 基因主要以 CMY‐2型为主，而肺炎克雷伯菌主要以 DHA‐1型为主。 展开更多
关键词 Β-内酰胺酶 质粒 大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌
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胶束增敏的辣根过氧化物酶催化荧光反应测定葡萄糖的研究 被引量：6
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作者 李庆阁 赵一兵 +2 位作者 许金钩 黄贤智 陈国珍 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1994年第9期896-898,共3页
采用葡萄糖氧化酶-辣根过氧化物酶-对羟基苯丙酸-过氧化体系测定葡萄糖,阳离子胶束十六烷基三甲基溴化铵对生荧反应具有催化和增敏作用,可用于1μl样品中葡萄糖的测定,线性范围0.5～50μg,线性相关系数γ=0.9966,相对标准偏差为0.73％,... 采用葡萄糖氧化酶-辣根过氧化物酶-对羟基苯丙酸-过氧化体系测定葡萄糖,阳离子胶束十六烷基三甲基溴化铵对生荧反应具有催化和增敏作用,可用于1μl样品中葡萄糖的测定,线性范围0.5～50μg,线性相关系数γ=0.9966,相对标准偏差为0.73％,检测限为0.46μg。 展开更多
关键词 葡萄糖 荧光反应 过氧化物酶 催化
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人乳头瘤病毒分子检测方法研究进展
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作者 甘舒扬 廖逸群 李庆阁 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期357-368,共12页
[背景]人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是最常见的性传播病原体之一.高危型HPV的持续感染与高度宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌的发生密切相关,70%的宫颈癌病例是由HPV-16和HPV-18两种高危型... [背景]人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是最常见的性传播病原体之一.高危型HPV的持续感染与高度宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌的发生密切相关,70%的宫颈癌病例是由HPV-16和HPV-18两种高危型引起的.HPV分子检测具备灵敏度高、检测时间短和临床适用性好的技术优势,目前已成为宫颈癌筛查的主要方案.[进展]本文从检测技术原理、检测技术的性能评价、检测技术的优势与不足等方面对HPV分子检测技术研究进展进行综述,为临床宫颈癌筛查工作选择合适的HPV检测及基因分型技术提供支持.[展望]选择适合的HPV检测技术用于宫颈癌筛查需要全面考虑每种技术的应用场景、检测能力和成本负担.将宫颈癌筛查与HPV疫苗接种和宫颈治疗相结合,有望降低宫颈癌的发病率和死亡率,并实现世界卫生组织在全球范围内加速消除宫颈癌的最终目标. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 宫颈癌 分子检测
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荧光PCR和PFGE在副溶血弧菌食物中毒诊断中的应用研究 被引量：6
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作者 兰全学 李庆阁 +3 位作者 扈庆华 石晓路 王冰 林一曼 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第16期3001-3002,共2页
[目的]探讨荧光PCR和脉冲场电泳(PFGE)在副溶血弧菌食物中毒调查中的应用。[方法]对中毒样品进行荧光PCR检测,副溶血弧菌临床分离株基因组DNA经NotI酶切,通过PFGE获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。[结果]部分样品荧... [目的]探讨荧光PCR和脉冲场电泳(PFGE)在副溶血弧菌食物中毒调查中的应用。[方法]对中毒样品进行荧光PCR检测,副溶血弧菌临床分离株基因组DNA经NotI酶切,通过PFGE获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。[结果]部分样品荧光PCR检测结果呈阳性,同起食物中毒菌株PFGE图谱一致。[结论]荧光PCR可以快速准确的鉴定病原体。PFGE具有很强的菌株同源性分析能力,适用于食物中毒病原菌学鉴定和传染源溯源。荧光PCR和PFGE在食物中毒的快速诊断中可发挥重要作用。 展开更多
关键词 荧光PCR 脉冲场电泳 副溶血弧菌食物中毒
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