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鼻咽癌人源抗独特型单链抗体的制备及筛选 被引量：13
1
作者 何小鹃 李官成 +2 位作者 朱建高 李跃辉 周国华 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期124-129,共6页
背景与目的:抗独特型抗体作为肿瘤抗原替代物可用于肿瘤治疗,这已在临床试验中得到证实。但由于目前所使用的抗独特型抗体多为鼠源性,用于人体可产生人抗鼠抗体反应,从而影响疗效。本实验拟构建噬菌体人源抗独特型抗体库,并从中筛选出... 背景与目的:抗独特型抗体作为肿瘤抗原替代物可用于肿瘤治疗,这已在临床试验中得到证实。但由于目前所使用的抗独特型抗体多为鼠源性,用于人体可产生人抗鼠抗体反应,从而影响疗效。本实验拟构建噬菌体人源抗独特型抗体库,并从中筛选出能模拟鼻咽癌相关抗原的β型抗独特型单链抗体scFv(Ab2βscFv),以解决鼠源性抗独特型抗体用于临床所产生的人抗鼠抗体反应。方法:体外致敏并用EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)转化鼻咽癌患者的外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC),用RT-PCR分别扩增VH和VL基因并连接成scFv基因,将scFv基因与载体fUSE5连接后,转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型scFv库。在用单抗FC2对文库进行4轮筛选后,用SandwichELISA和结合抑制法从中筛选出β型Ab2scFv。结果:用单抗FC2体外致敏并经EBV转化的10例鼻咽癌患者的PBMC中,8例有鼻咽癌抗独特型抗体产生。经PCR分别扩增出5种VH(γ、μ)和7种VL(κ、λ)基因,经连接组成14种scFv基因。在与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061,得到库容为1.5×108的初级噬菌体抗独特型抗体库。经富集筛选后,从中随机挑取270个克隆进行ELISA筛选,得到91个Ab2scFv单克隆,阳性率为33.7%。再用结合抑制法从中初步筛选出5个可能为β型的Ab2scFv。 展开更多
关键词 鼻咽癌 人源抗独特型单链抗体 噬菌体呈现技术 EB病毒 免疫治疗
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酶联免疫吸附夹心法检测血小板活化因子 被引量：12
2
作者 姚新生 孙万邦 +1 位作者 王燕妮 李官成 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期38-39,共2页
关键词 血小板活化因子 ELISA 双抗体夹心法
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葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响 被引量：11
3
作者 韩江全 李官成 +5 位作者 周晓兰 朱选平 梁恒 李继中 林冬融 赖敏 《中西医结合心脑血管病杂志》 2008年第10期1179-1181,共3页
目的探讨葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。40只SD雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组、小剂量葛根素治疗组(小剂量组)、大剂量葛根素治疗组(大剂量组)。应用TTC染色观察梗死体积... 目的探讨葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。40只SD雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组、小剂量葛根素治疗组(小剂量组)、大剂量葛根素治疗组(大剂量组)。应用TTC染色观察梗死体积,应用免疫组化染色及TUNEL染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达及凋亡细胞数。结果大、小剂量组梗死体积和凋亡细胞数明显少于缺血组(P<0.01),Bcl-2明显多于缺血组(P<0.01),小剂量组Bax少于缺血组(P<0.05),大剂量组Bax明显少于缺血组(P<0.01)。大剂量组梗死体积和凋亡细胞数少于小剂量组(P<0.05),Bcl-2多于小剂量组(P<0.05)。大、小剂量组Bax无统计学意义(P>0.05)。结论葛根素可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,疗效与剂量有关。 展开更多
关键词 葛根素 脑缺血再灌注 凋亡
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肝癌相关肿瘤标志物研究新进展 被引量：12
4
作者 宋婕 李官成 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2011年第1期54-58,共5页
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤之一,其发病隐匿,恶性程度高,病死率高,因此早期诊断对于提高患者的生存率至关重要。目前临床上主要运用甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)结合影像学及病理学检查进行肝癌的早... 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤之一,其发病隐匿,恶性程度高,病死率高,因此早期诊断对于提高患者的生存率至关重要。目前临床上主要运用甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)结合影像学及病理学检查进行肝癌的早期诊断;但是AFP对于肝癌筛查的特异性及敏感性均不十分理想。随着分子生物学的不断发展,多种新的标志物被相继发现,这些标志物涉及肝癌的蛋白质抗原、酶和同工酶、细胞因子、相关基因等几个方面,故成为肝癌研究的热点,并有望改变肝癌早期诊断和疗效监测的现状。 展开更多
关键词 肝细胞癌 早期诊断 肿瘤标志物 进展
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肿瘤基因工程抗体研究进展 被引量：3
5
作者 何小鹃 李官成 《国外医学（肿瘤学分册）》 2002年第4期245-248,共4页
综述单链抗体、抗体融合蛋白、抗独特型抗体、双特异性抗体的研究进展 ,显示它们在临床肿瘤治疗方面的良好应用前景。
关键词 抗体 基因工程 肿瘤 治疗 单链抗体 抗体融合蛋白 抗独特型抗体 双特异性抗体
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趋化因子MCP-3基因和B7基因共转染诱导抗大肠癌主动免疫 被引量：8
6
作者 胡锦跃 朱建高 +3 位作者 李官成 王文蒙 李跃辉 孙去病 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第2期77-81,共5页
目的:探讨趋化因子MCP-3(monocyte chemotactic protein-3)和B7基因共转染诱导抗大肠癌主动免疫的可能性。方法:用脂质体将小鼠MCP-3和B7(B7.1)基因导入小鼠大肠癌CMT93细胞,G418筛选抗性克隆,RT-PCR检测B7和MCP-3的表达,趋化实验检测MC... 目的:探讨趋化因子MCP-3(monocyte chemotactic protein-3)和B7基因共转染诱导抗大肠癌主动免疫的可能性。方法:用脂质体将小鼠MCP-3和B7(B7.1)基因导入小鼠大肠癌CMT93细胞,G418筛选抗性克隆,RT-PCR检测B7和MCP-3的表达,趋化实验检测MCP-3的功能。体内实验观察基因修饰瘤细胞(CMT93/B7+MCP-3)的成瘤性、免疫小鼠后所诱导的针对CMT93的免疫保护及其作为疫苗治疗已形成肿瘤的疗效。结果:RT-PCR检测发现CMT93/B7+MCP-3瘤细胞有B7和MCP-3的表达,而且所表达的MCP-3有良好的趋化活性。CMT93/B7+MCP-3的成瘤性显著下降(P<0.01)。经CMT93/B7+MCP-3免疫的小鼠获得对CMT93的免疫保护(P<0.05)。作为疫苗CMT93/B7+MCP-3能抑制接种早期肿瘤的生长。结论:共转染MCP-3和B7基因能有效诱导抗大肠癌主动免疫,共转染的瘤细胞作为疫苗治疗已形成的肿瘤有一定的疗效。 展开更多
关键词 大肠癌 基因转移 趋化因子 MCP-3 B7 免疫基因治疗 动物实验
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鼻咽癌组织cDNA文库的构建及抗原基因的筛选 被引量：4
7
作者 舒峻 李官成 何小鹃 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期54-58,共5页
构建人鼻咽癌组织cDNA文库 ,以SEREX方法从cDNA文库中筛选鼻咽癌抗原基因。采用确诊鼻咽癌患者新鲜活检癌组织构建cDNA文库 ,测定原始文库滴度 ,进行蓝白筛选以确定文库的重组率。以建库组织来源患者的自身血清 ,采用“一对一”的血清... 构建人鼻咽癌组织cDNA文库 ,以SEREX方法从cDNA文库中筛选鼻咽癌抗原基因。采用确诊鼻咽癌患者新鲜活检癌组织构建cDNA文库 ,测定原始文库滴度 ,进行蓝白筛选以确定文库的重组率。以建库组织来源患者的自身血清 ,采用“一对一”的血清学方法筛选所构建的cDNA文库 ,阳性克隆经PCR检测鉴定后进行序列分析。经测定原始文库滴度为 7 2 8× 10 6 pfu mL ,含 3 6 4× 10 6 个重组子 ,重组率为 94 % ,扩增文库滴度为 3 8× 10 9pfu mL ,cDNA插入片段大小在 0 5～ 3 0kb之间。文库经三轮血清学筛选共获得 2 3个阳性克隆 ,分别代表了 16个独立的cDNA插入片段 (抗原基因 )。其中 10个与已知基因高度同源 ,另外 6个基因与GenBank中已知基因的部分同源 ,其中有 3个是新基因。利用SMART技术构建了高质量的人鼻咽癌组织cDNA表达文库 ,有利于以cDNA文库为基础的进一步的实验研究。应用SEREX技术初步筛选鼻咽癌组织cDNA文库 ,共得到 16个鼻咽癌相关抗原基因 ,其中有 3个是新基因 ,可能为鼻咽癌的免疫学研究提供新的研究分子。 展开更多
关键词 鼻咽癌 CDNA文库 抗原基因 表达文库
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抗人成骨肉瘤单克隆抗体-人血清白蛋白-甲氨蝶呤偶联物的抗肿瘤作用 被引量：10
8
作者 詹新立 周江南 +2 位作者 赵自平 蒋欣 李官成 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期345-347,共3页
目的　应用化学交联法制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体 (OSMcAb) 人血清白蛋白(HSA) 甲氨蝶呤 (MTX)偶联物并进行体外细胞毒性实验。方法　采用碳二亚胺、活化酯及SPDP法制备OSMcAb HSA MTX间接偶联物 ;同时应用活化酯法制备出OSMcAb MTX ... 目的　应用化学交联法制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体 (OSMcAb) 人血清白蛋白(HSA) 甲氨蝶呤 (MTX)偶联物并进行体外细胞毒性实验。方法　采用碳二亚胺、活化酯及SPDP法制备OSMcAb HSA MTX间接偶联物 ;同时应用活化酯法制备出OSMcAb MTX ;并进行体外靶细胞结合实验、细胞毒性实验和集落形成抑制实验。结果　化学交联法制备出的偶联物的性质及药物含量稳定。抗体蛋白活性保存良好。集落形成抑制实验中 ,OSMcAb HSA MTX、OSMcAb MTX的IC5 0 (μg/L)分别为 2 .5 5 0± 0 .114、2 .710± 0 .14 5 ,它们杀伤作用均明显大于游离MTX(IC5 0为 5 .5 10± 1.5 2 9) (P <0 .0 5 )。 2 4h细胞毒性实验中 ,OSMcAb HSA MTX、OSMcAb MTX的对MG 63细胞、T2 4细胞的IC5 0 (μg/L)分别为 66.5 :3 785和 79.8:3 0 2 5 ,偶联物杀伤作用在靶细胞明显强于非靶细胞 (P <0 .0 1)。结论　以化学交联法制备OSMcAb HSA MTX偶联物方法可行 ;偶联物OSMcAb HSA MTX在体外具有良好的抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 抗人成骨肉瘤单克隆抗体 人血清白蛋白 甲氨蝶呤 偶联物 抗肿瘤作用
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鼻咽癌抗独特型疫苗的制备及临床研究 被引量：8
9
作者 李官成 谢鹭 +4 位作者 符红普 周国华 朱建高 周建华 孙去病 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2000年第3期193-197,共5页
目的 :制备具有内影像特征的抗独特型抗体 ,用于鼻咽癌病人的主动免疫治疗以探讨其抗肿瘤效应。方法 :用杂交瘤技术制备针对Ab1可变区的抗独特型单抗 (Ab2 ) ,免疫同系动物诱导产生免疫应答 ,并用氢氧化铝凝胶沉淀法制成抗独特型疫苗 ,... 目的 :制备具有内影像特征的抗独特型抗体 ,用于鼻咽癌病人的主动免疫治疗以探讨其抗肿瘤效应。方法 :用杂交瘤技术制备针对Ab1可变区的抗独特型单抗 (Ab2 ) ,免疫同系动物诱导产生免疫应答 ,并用氢氧化铝凝胶沉淀法制成抗独特型疫苗 ,对 19例晚期鼻咽癌放疗病人作主动免疫治疗 ,9例放疗加生理盐水注射为对照组 ,用ELISA检测治疗前后病人血清抗体和细胞因子水平。用原位Northern杂交检测外周血单个核细胞 (PBMC)IL 2mRNA的表达。结果 :用抗鼻咽癌单抗FC2、HNL5 (Ab1)为免疫原 ,获得了两株抗独特型单抗 2H4和 5D3(Ab2 )。用Ab2免疫小鼠诱导产生了能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3)。并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。用Ab2治疗的病人无一例有过敏或其他毒副反应 ,血清中Ab3、抗肿瘤抗体 (Ab1’)水平均有不同程度的增高 ,但也产生了人抗鼠抗体 (HAMA)。血清细胞因子TNF α、IFN γ和IL 2水平在大多数治疗组病人中升高 ,而对照组Ab1’、IFN γ、TNF α和IL 2血清水平均未升高。病人血清的IL 2水平含量与PBMCIL 2mRNA的表达呈正相关关系 (r=0 882 9)。结论 :(1) 2H4、5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,能模拟鼻咽癌相关抗原在同系鼠诱导体液和细胞免疫反应。 (2 ) 展开更多
关键词 鼻咽癌 抗独特型抗体 主动免疫疗法
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葛根素对大鼠缺血侧皮质、纹状体区神经元凋亡及胶质细胞源性神经生长因子的影响 被引量：7
10
作者 韩江全 李均 +7 位作者 李官成 胡泳涛 周晓兰 朱选平 梁恒 李继中 林冬融 赖敏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第19期1912-1913,共2页
目的观察葛根素(Puerarin,Pue)对局灶性脑缺血大鼠海马区胶质源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响,进一步探讨Pue的神经保护作用。方法制作大鼠局灶性大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery... 目的观察葛根素(Puerarin,Pue)对局灶性脑缺血大鼠海马区胶质源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响,进一步探讨Pue的神经保护作用。方法制作大鼠局灶性大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,30只SD雄性大鼠被系统抽样随机分为假手术组、缺血组、Pue组。应用TTC染色观察梗死体积,TUNEL染色检测凋亡细胞数,免疫组化方法观察Pue组及缺血组GDNF阳性细胞数,并进行图像分析。结果假手术组、缺血组及Pue组的神经凋亡细胞分别为(3.1±2.12)、(63.7±12.05)及(31.1±7.23);Pue组的凋亡细胞数较缺血组明显减少(P<0.01)。假手术组、缺血组及Pue组的GDNF阳性细胞含量分别为(99.33±3.44)、(117.87±7.77)及(133.11±4.78)。与假手术组相比,缺血组及Pue组GDNF阳性细胞均显著增加;且Pue组阳性细胞数显著高于缺血组(P<0.01)。结论Pue的神经保护作用可能与其能提高内源性GDNF的表达水平有关。 展开更多
关键词 葛根素 胶质源性神经营养因子 脑缺血 免疫组织化学 大鼠
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趋化因子MCP-3协同B7诱导小鼠抗宫颈癌的主动免疫效果 被引量：8
11
作者 吴宜林 陶光实 +3 位作者 陆琳 胡锦跃 林秋华 李官成 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第2期98-101,共4页
目的 :探讨趋化因子MCP 3能否增强B7基因诱导小鼠抗宫颈癌主动免疫的效果。方法 :实验组 :将pCMV/MCP 3以基因药物的方式肌注 615小鼠 ,同时用B7+U14细胞疫苗在同一部位免疫小鼠 ,再将野生型U14移植入已免疫的小鼠。对照组A :用B7+U14... 目的 :探讨趋化因子MCP 3能否增强B7基因诱导小鼠抗宫颈癌主动免疫的效果。方法 :实验组 :将pCMV/MCP 3以基因药物的方式肌注 615小鼠 ,同时用B7+U14细胞疫苗在同一部位免疫小鼠 ,再将野生型U14移植入已免疫的小鼠。对照组A :用B7+U14细胞疫苗 +生理盐水同时免疫 615系小鼠 ;对照组B :用pCMV/MCP 3 +野生型U14免疫小鼠 ;其它处理同治疗组。观察 3组小鼠的成瘤情况、生存期。用以上 3种方案分别处理小鼠 ,2周后分别取脾T淋巴细胞用MTT法体外检测其对U14的杀伤率。结果 :经方差分析比较 3组在移植U14后不同时程瘤体平均体积有显著性差异 (F =91.86,P <0 .0 0 1)。3组平均生存期分别为 10 0 ,63 ,3 7d ,经Kaplan Meier曲线比较 ,差异具显著性 (P <0 .0 1)。体外检测经MCP 3和B7+U14疫苗处理的小鼠 ,其T淋巴细胞在不同效靶比对U14的杀伤效率均明显高于经MCP 3和U14疫苗处理者 (F =4 0 62 ,P <0 .0 0 1)。结论 :趋化因子MPC 3能增强B7基因修饰的U14细胞疫苗的抗肿瘤效果 。 展开更多
关键词 宫颈癌 U14 基因B7 趋化因MCP-3 免疫治疗
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抗大肠癌噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定 被引量：6
12
作者 朱建高 胡锦跃 +4 位作者 李官成 李跃辉 周国华 李小玲 孙去病 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期18-22,共5页
应用 3种方法 (肿瘤细胞膜表面和胞内、裸鼠体内和组织切片 ) ,从全人源化的抗大肠癌噬菌体初级抗体库中筛选肿瘤特异性的噬菌体单链抗体 (Sc Fv) .在肿瘤细胞经过 3轮亲和选择 ,回收结合胞膜和内化进入胞内的噬菌体 ,得到抗肿瘤噬菌体... 应用 3种方法 (肿瘤细胞膜表面和胞内、裸鼠体内和组织切片 ) ,从全人源化的抗大肠癌噬菌体初级抗体库中筛选肿瘤特异性的噬菌体单链抗体 (Sc Fv) .在肿瘤细胞经过 3轮亲和选择 ,回收结合胞膜和内化进入胞内的噬菌体 ,得到抗肿瘤噬菌体单链抗体的富集倍数为 430倍 ;荷瘤裸鼠体内注入初级抗体库后 ,在不同时刻点处死裸鼠 ,回收肿瘤组织内的噬菌体 ,其回收率在 2 4 h时最高 ;初级抗体库与大肠癌组织切片亲和选择后 ,从冰冻组织切片上比从石蜡组织切片上回收得到的噬菌体高出约 1 .6倍 .从上述方法挑选单克隆 ,经 ELISA筛选抗大肠癌阳性噬菌体克隆株 ,分离得到 5个对大肠癌细胞反应较好的单克隆噬菌体单链抗体 .进一步用细胞 ELISA检测对各种肿瘤细胞的特异性反应 ,其中 4个对大肠癌细胞有很好的特异性 ,1个克隆对所有肿瘤细胞均有反应 .因此 ,3种方法用于筛选抗大肠癌噬菌体初级抗体库是有效的 ,具有推广和应用价值 . 展开更多
关键词 噬菌体呈现技术 大肠癌 单链抗体 筛选 噬菌体抗体
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活化Toll样受体4诱导静脉血管内皮细胞介导非耐受性炎症反应 被引量：7
13
作者 王文蒙 李刚 +4 位作者 罗俊卿 张宇 孙瑞利 李官成 胡锦跃 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2009年第2期127-130,共4页
目的:通过分析活化Toll样受体4(TLR4)对人脐静脉内皮细胞分泌炎性细胞因子的影响,探讨静脉内皮细胞在炎症反应中的作用。方法:逆转录聚合酶链式反应检测TLR4和细胞因子信使核糖核酸(mRNA)在人脐静脉内皮细胞中的表达,流式细胞分析检测T... 目的:通过分析活化Toll样受体4(TLR4)对人脐静脉内皮细胞分泌炎性细胞因子的影响,探讨静脉内皮细胞在炎症反应中的作用。方法:逆转录聚合酶链式反应检测TLR4和细胞因子信使核糖核酸(mRNA)在人脐静脉内皮细胞中的表达,流式细胞分析检测TLR4及其辅助受体CD14的蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清中细胞因子的表达水平。结果:TLR4配体脂多糖诱导了人脐静脉内皮细胞中TLR4的基因和蛋白表达上调以及CD14的蛋白表达上调。活化TLR4显著上调人脐静脉内皮细胞中炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β和IL-8的基因表达以及IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的蛋白表达,并呈剂量依赖关系。活化TLR4诱导的细胞因子上调依赖NF-κB信号传导途径,信号传导阻滞剂能抑制细胞因子的表达上调。而且初次活化后TLR4的再次活化仍然诱导高水平的炎性细胞因子。结论:活化TLR4诱导静脉内皮细胞分泌炎性细胞因子,介导非耐受性炎症反应,提示静脉内皮细胞是重要的炎症效应细胞。 展开更多
关键词 血管内皮细胞 TOLL样受体4 细胞因子 炎症 脂多糖
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太空诱变宫颈癌细胞的生物学研究 被引量：5
14
作者 杨丞 李官成 +3 位作者 李跃辉 胡锦跃 肖艳 张志杰 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期380-386,共7页
目的:研究太空诱变宫颈癌细胞的生物学特性。方法:将搭载于“神舟四号”飞船飞行返地后的宫颈癌Caski细胞进行单克隆化,观察细胞形态、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长曲线初步筛选出变异株并测定其倍增时间、流式细胞仪检测细胞周... 目的:研究太空诱变宫颈癌细胞的生物学特性。方法:将搭载于“神舟四号”飞船飞行返地后的宫颈癌Caski细胞进行单克隆化,观察细胞形态、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长曲线初步筛选出变异株并测定其倍增时间、流式细胞仪检测细胞周期、软琼脂细胞集落培养和裸鼠成瘤实验检测空间诱变细胞的恶性表型。结果:单克隆化后获得1440株细胞克隆,发现空间诱变株出现多种细胞形态;MTT法筛选出4株变异株,其中有两株编号为44F10和17E3的细胞克隆生长速度快于对照组,其细胞周期分布改变,G1期细胞减少,S期细胞增多;而另两株编号为48A9和31F2的细胞克隆生长速度慢于对照组,其细胞周期分布规律与以上两株相反;地面正常对照细胞,地面模拟对照细胞,44F10,17E3,48A9和31F2细胞的平均倍增时间依次为56.54,58.44,52.96,51.46,101.76和88.47h,其中44F10和17E3与对照细胞组比较平均倍增时间降低但无统计学意义,而48A9和31F2与对照细胞之间的差异有统计学意义(P<0.05);软琼脂细胞集落形成率依次为9.7%,9.3%,14.7%,12.1%,0和0.1%,诱变细胞与对照细胞之间的差异有统计学意义(P<0.01);将6组细胞分别注射入裸鼠体内,47d后处死动物,各组裸鼠成瘤率为100%;剥离出肿瘤组织并称重,各组瘤块平均重量依次为0.066,0.066,0.175,0.249,0.011和0.018g,变异组与两对照组的细胞成瘤能力比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:实验证明空间环境可影响肿瘤细胞的生理特性,并且诱导细胞的变异是多向性的。 展开更多
关键词 空间环境 肿瘤细胞 宫颈癌 生物学特性
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鼻咽癌抗独特型抗体诱导的体液和细胞免疫应答 被引量：6
15
作者 李官成 朱建高 +1 位作者 周国华 孙去病 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期134-137,共4页
目的探讨抗独特型抗体(Ab2)2H4和5D3模拟抗原诱导免疫应答的能力。方法用Ab2免疫Balb/c小鼠获得抗血清 ,以ELISA检测其Ab3,WesternBlot分析其识别抗原的分子质量。用迟发型超敏反应(DTH)和淋巴细胞增殖试验 ,检测Ab2诱发细胞免疫反应的... 目的探讨抗独特型抗体(Ab2)2H4和5D3模拟抗原诱导免疫应答的能力。方法用Ab2免疫Balb/c小鼠获得抗血清 ,以ELISA检测其Ab3,WesternBlot分析其识别抗原的分子质量。用迟发型超敏反应(DTH)和淋巴细胞增殖试验 ,检测Ab2诱发细胞免疫反应的能力。结果2H4,5D3免疫同系动物产生的含有抗抗独特型抗体(Ab3)的抗血清 ,可特异性地与靶细胞结合。FC2(Ab1)和经2H4免疫的Ab3可识别相对分子质量(Mr)相同约68000的抗原 ,且不同于HNL5(Ab1)和5D3免疫的Ab3所识别的抗原(Mr80000)。在DTH试验中 ,所致小鼠足垫肿大的程度 ,2H4和5D3实验组均显著高于对照组。而在淋巴细胞增殖试验中 ,Ab2免疫鼠脾T细胞在体外对靶细胞或Ab2的再次刺激呈现明显的细胞增殖反应 ,而无关肿瘤细胞或抗体的刺激则不能引起细胞增殖。结论抗独特型抗体2H4和5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,能模拟不同分子质量的鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫应答。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 鼻咽癌 体液免疫 细胞免疫
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鼻咽癌中生长因子细胞因子mRNA差异表达分析 被引量：4
16
作者 谢鹭 许亮国 +3 位作者 蓝轲 何志巍 李官成 姚开泰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期448-450,453,共4页
目的 :考察鼻咽癌中差异表达的生长因子 细胞因子 ,推测鼻咽癌发生中可能存在的免疫机制。方法 :采用cDNA阵列杂交技术 ,同时对 98个己知与肿瘤相关的生长因子 细胞因子在鼻咽癌、正常鼻咽组织及其他几种头颈部鳞癌中的mRNA表达水平... 目的 :考察鼻咽癌中差异表达的生长因子 细胞因子 ,推测鼻咽癌发生中可能存在的免疫机制。方法 :采用cDNA阵列杂交技术 ,同时对 98个己知与肿瘤相关的生长因子 细胞因子在鼻咽癌、正常鼻咽组织及其他几种头颈部鳞癌中的mRNA表达水平进行筛查 ,筛选出在鼻咽癌中差异表达的生长因子 细胞因子基因。结果 :在鼻咽癌中上调的基因包括 :早期生长应答蛋白 1,肝癌来源生长因子 ,白介素 1β ,血小板来源生长因子A链 ,干细胞因子 ,畸胎瘤来源生长因子 ,干扰素诱导肽、蛋白 ,干扰素调节因子及干扰素受体等 ;在鼻咽癌中下调的基因有 :TGF β 2等。 结论 :鼻咽癌细胞可能自分泌或促进分泌大量生长因子 ,鼻咽癌侵润淋巴细胞分泌的细胞因子主要为Th1细胞型。 展开更多
关键词 鼻咽癌 生长因子 细胞因子 CDNA阵列 MRNA
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DNA疫苗与肿瘤免疫治疗 被引量：5
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作者 罗晨 李官成 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2006年第4期333-335,339,共4页
DNA疫苗因其能诱发有效及持久的免疫反应而被广泛应用于恶性肿瘤的免疫治疗。已构建出多种肿瘤DNA疫苗,包括TAAs全长DNA疫苗、TAAs表位DNA疫苗、肿瘤融合DNA疫苗。肿瘤DNA疫苗可以激发肿瘤特异性的细胞/体液免疫反应及延长实验动物的生... DNA疫苗因其能诱发有效及持久的免疫反应而被广泛应用于恶性肿瘤的免疫治疗。已构建出多种肿瘤DNA疫苗,包括TAAs全长DNA疫苗、TAAs表位DNA疫苗、肿瘤融合DNA疫苗。肿瘤DNA疫苗可以激发肿瘤特异性的细胞/体液免疫反应及延长实验动物的生存期。肿瘤DNA疫苗在动物试验中的有效性为其在临床治疗中的应用提供了理论依据。 展开更多
关键词 DNA疫苗 免疫治疗 肿瘤相关抗原
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MicroRNA-33a靶向Twist1调节宫颈癌细胞的侵袭 被引量：6
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作者 胡佳 桂艳红 +1 位作者 谢平丽 李官成 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1060-1067,共8页
目的:研究转录因子Twist1在宫颈癌组织中的表达及其在宫颈癌细胞进展过程中的作用。方法:免疫组织化学检测32对临床宫颈癌组织及正常宫颈组织中Twist1的表达情况,并运用RNA干扰技术沉默宫颈癌He La细胞内Twist1后检测细胞的侵袭能力以... 目的:研究转录因子Twist1在宫颈癌组织中的表达及其在宫颈癌细胞进展过程中的作用。方法:免疫组织化学检测32对临床宫颈癌组织及正常宫颈组织中Twist1的表达情况,并运用RNA干扰技术沉默宫颈癌He La细胞内Twist1后检测细胞的侵袭能力以及侵袭相关基因表达的变化;采用Pearson相关性检验分析Twist1与micro RNA-33a(mi R-33a)在宫颈癌组织内的关系,并分析mi R-33a对Twist1的调节关系及其对细胞侵袭能力的影响。结果:Twist1在宫颈癌组织和正常宫颈组织中表达的阳性率分别为75.0%(24/32)和21.9%(7/32),二者表达差异具有统计学意义(P<0.05);Twist1 sh RNA能显著减低He La细胞的体外侵袭能力。宫颈癌组织中mi R-33a的表达较正常组织减低(P<0.05),并与Twist1呈负相关(r=-0.661,P<0.05);而宫颈癌细胞内过表达mi R-33a可减低Tiwst1的表达(P<0.05),并减弱细胞的体外侵袭能力。结论:Twist1在宫颈癌的侵袭转移过程中发挥着重要的作用,mi R-33a为上游调控Twist1的表达及细胞侵袭能力的抑癌基因。 展开更多
关键词 宫颈癌 TWIST1 RNA干扰 microRNA-33a 细胞侵袭
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鼻咽癌患者血清中自身抗体的初步检测 被引量：6
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作者 童永清 黄建 +3 位作者 周国华 李跃辉 胡锦跃 李官成 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期233-237,共5页
目的:探讨鼻咽癌患者血清中是否存在抗鼻咽癌自身抗原的抗体,为寻找鼻咽癌新的肿瘤标志物提供依据。方法:制备Epstein-Barr病毒阴性的鼻咽癌细胞株CNE1细胞板,酶联免疫吸附实验(ELISA)分析其与32例鼻咽癌患者血清和54例正常血清反应的... 目的:探讨鼻咽癌患者血清中是否存在抗鼻咽癌自身抗原的抗体,为寻找鼻咽癌新的肿瘤标志物提供依据。方法:制备Epstein-Barr病毒阴性的鼻咽癌细胞株CNE1细胞板,酶联免疫吸附实验(ELISA)分析其与32例鼻咽癌患者血清和54例正常血清反应的差异性;提取CNE1总蛋白,Western印迹分析其与鼻咽癌患者血清反应是否存在特异性的蛋白质。结果:ELISA分析显示鼻咽癌患者血清平均滴度(0.904±0.032)明显高于正常人血清平均滴度(0.736±0.028)(P<0.01);Western印迹分析发现鼻咽癌患者血清与正常人血清相比,部分阳性条带一致,但条带强度增加,还发现出现了部分新的阳性条带,这些条带可能属于鼻咽癌相关抗原或鼻咽癌特异性抗原。结论:鼻咽癌患者血清中存在抗鼻咽癌自身抗原的抗体,这些抗体并非针对Epstein-Barr病毒,为寻找鼻咽癌血清肿瘤标志物提供了依据。 展开更多
关键词 鼻咽癌 肿瘤标志物 自身抗体
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全人源抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定 被引量：5
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作者 黄建 肖艳 +5 位作者 童永清 郭锋杰 周国华 李跃辉 胡锦跃 李官成 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期256-259,共4页
目的:构建人源抗肝癌噬菌体单链抗体库,从中筛选抗肝癌单链抗体(scFv),并对其特异性进行鉴定。方法:采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库。对初级抗体库进行亲和富集及ELISA筛选,获得的阳性克隆进行免疫组... 目的:构建人源抗肝癌噬菌体单链抗体库,从中筛选抗肝癌单链抗体(scFv),并对其特异性进行鉴定。方法:采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库。对初级抗体库进行亲和富集及ELISA筛选,获得的阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序。结果:scFv基因与载体连接后得到库容量为1.0×108的初级噬菌体抗体库。对抗体库进行3轮正负淘选和富集后,随机挑取2798个克隆进行ELISA,发现3个克隆对HepG2呈强阳性反应,而与QSG-7701等人正常细胞系呈弱阳性或不反应。对克隆SA3进行免疫细胞化学鉴定,结果与ELISA一致。免疫组织化学鉴定表明SA3与肝癌组织和肝组织阳性率的差别有统计学意义。结论:构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌噬菌体抗体库。通过淘选富集、ELISA和免疫组织化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆,为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 EB病毒转化 噬菌体抗体库 肝肿瘤 单链抗体
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