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季节对内蒙古地区犊牛成活率和日增重的影响 被引量：5
1
作者 牛华锋 李安岩 +2 位作者 任彦宇 石小平 徐明 《家畜生态学报》 北大核心 2017年第10期38-42,86,共6页
为研究牧区季节因素对犊牛初生重、成活率和日增重的影响,本试验从内蒙古地区32个奶牛场收集了11.2万次产犊记录、5.5万头母犊牛的实际生产数据,整理、分析得到该地区犊牛初生重、成活率和日增重的季节性变化规律。结果表明:1)温暖月份(... 为研究牧区季节因素对犊牛初生重、成活率和日增重的影响,本试验从内蒙古地区32个奶牛场收集了11.2万次产犊记录、5.5万头母犊牛的实际生产数据,整理、分析得到该地区犊牛初生重、成活率和日增重的季节性变化规律。结果表明:1)温暖月份(5、6月份)犊牛初生重最高,寒冷月份(12、1、2月份)犊牛初生重最低(P<0.05);2)寒冷月份(1、2月份)的接产成活率显著低于其他月份(P<0.05);3)11、12月份犊牛哺乳期发病率显著高于410月份(P<0.05);2月份发病成活率显著低于310月份(P<0.05);4)710月份日增重显著高于12月份到次年4月份(P<0.05)。综合上述结果,冷应激对犊牛的影响大于热应激,犊牛冷应激的临界温度为10℃。 展开更多
关键词 季节 成活率 日增重 犊牛
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牛巴贝斯虫病ELISA诊断方法的建立 被引量：3
2
作者 李安岩 刘爱红 +5 位作者 王锦明 朱海 马米玲 任巧云 关贵全 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期62-67,共6页
以BORCT蛋白为包被抗原,优化最佳反应条件,确定阈值并测定其交叉反应,建立了一种特异性检测牛巴贝斯虫抗体的间接ELISA方法。利用该方法测定了试验感染的2头牛的抗体动态曲线,并对我国四川、甘肃、新疆3个省(自治区)的314份牛血清样品... 以BORCT蛋白为包被抗原,优化最佳反应条件,确定阈值并测定其交叉反应,建立了一种特异性检测牛巴贝斯虫抗体的间接ELISA方法。利用该方法测定了试验感染的2头牛的抗体动态曲线,并对我国四川、甘肃、新疆3个省(自治区)的314份牛血清样品进行了检测。结果显示,经MedCalc 12.7.3.0软件分析86份阴性血清和69份阳性血清的检测结果,确定29.6%抗体比率为该方法的阳性阈值,对应的敏感性和特异性分别为94.2%和96.5%,并且与其他巴贝斯虫、泰勒虫和无浆体阳性血清均无交叉反应。对试验感染动物的检测结果显示,感染后的第6天出现特异性抗体,第12天达到最高值,一直持续到第270天。野外样品检测结果显示,3个省份均有牛巴贝斯虫的分布,平均阳性率为46.82%。 展开更多
关键词 牛巴贝斯虫 BORCT 酶联免疫吸附试验 特异性 敏感性
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环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白的亚细胞定位分析 被引量：2
3
作者 岑双庆 李有全 +11 位作者 李亚琼 李安岩 何海宁 刘志杰 陈泽 杨吉飞 关贵全 牛庆丽 刘爱红 任巧云 罗建勋 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期800-804,共5页
为研究微线体-棒状体蛋白在环形泰勒虫裂殖体及其在感染环形泰勒虫裂殖体的淋巴细胞中表达情况及亚细胞定位,应用Western-blot验证了该蛋白多克隆抗体的特异性;通过条件摸索找出最佳比例的固定剂和最佳一抗、二抗的工作浓度;利用优化好... 为研究微线体-棒状体蛋白在环形泰勒虫裂殖体及其在感染环形泰勒虫裂殖体的淋巴细胞中表达情况及亚细胞定位,应用Western-blot验证了该蛋白多克隆抗体的特异性;通过条件摸索找出最佳比例的固定剂和最佳一抗、二抗的工作浓度;利用优化好的条件对微线体-棒状体蛋白进行间接免疫荧光试验,用激光共聚焦技术确定该蛋白在环形泰勒虫裂殖体和其在感染的淋巴细胞中表达及亚细胞定位。结果表明,微线体-棒状体蛋白主要定位于环形泰勒虫裂殖体的表面,而在宿主淋巴细胞细胞质中分布较少。 展开更多
关键词 环形泰勒虫 微线体-棒状体蛋白 间接免疫荧光试验 亚细胞定位
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牛巴贝斯虫棒状体相关蛋白1C端的克隆与表达 被引量：1
4
作者 李安岩 刘爱红 +5 位作者 王锦明 朱海 马米玲 任巧云 关贵全 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期588-593,共6页
用生物信息学方法,对牛巴贝斯虫棒状体相关蛋白(rhoptry-associated protein-1,RAP-1)的编码基因进行分析,并与其他巴贝斯虫和泰勒虫对应序列进行比对,以筛选出抗原性、特异性良好的RAP-1基因C端区域,设计特异引物,对基因进行克隆和原... 用生物信息学方法,对牛巴贝斯虫棒状体相关蛋白(rhoptry-associated protein-1,RAP-1)的编码基因进行分析,并与其他巴贝斯虫和泰勒虫对应序列进行比对,以筛选出抗原性、特异性良好的RAP-1基因C端区域,设计特异引物,对基因进行克隆和原核表达,并应用Western-blot对重组蛋白的反应原性与特异性进行了分析。结果表明,目的蛋白的分子质量为51ku,可溶性表达量为1.51mg/mL,只与牛巴贝斯虫阳性血清发生特异性反应,而与其他巴贝斯虫、泰勒虫和无浆体阳性血清无交叉反应,预期可作为ELISA诊断方法的候选抗原,为牛巴贝斯虫病诊断方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 牛巴贝斯虫 棒状体相关蛋白 原核表达 特异性
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莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myo A和mlc的克隆表达与多克隆抗体制备
5
作者 王锦明 刘爱红 +9 位作者 任巧云 马米玲 刘志杰 李安岩 李有全 赵帅阳 张浩浩 殷宏 罗建勋 关贵全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期2175-2182,共8页
【目的】克隆和表达莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白GAP45(gliding associated protein 45,GAP45)、GAP50(gliding associated protein 50,GAP50)、肌球蛋白A(Myosin A,Myo A)和肌球蛋白轻链(myosin lightchain,MLC)基因及制备兔源性多克隆... 【目的】克隆和表达莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白GAP45(gliding associated protein 45,GAP45)、GAP50(gliding associated protein 50,GAP50)、肌球蛋白A(Myosin A,Myo A)和肌球蛋白轻链(myosin lightchain,MLC)基因及制备兔源性多克隆抗体。【方法】利用末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA中扩增gap45、gap50、myo A及mlc基因,将获得的全长或基因的部分序列构建pGEX-4T-1原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)pLys中用IPTG诱导表达;融合蛋白经纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,并用ELISA测定抗体的效价及反应性。【结果】获得了gap45、gap50、myo A和mlc基因的全长分别为664、1391、773和2 538 bp,开放阅读框长度分别为567、1194、606和2 514 bp,制备的多克隆抗体具有较好的特异性,效价高于1:25 600。【结论】克隆了滑动体组件蛋白gap45、gap50、myo A和mlc基因的全长,并制备了多克隆抗体,为筛选巴贝斯虫疫苗和诊断用抗原和药物靶位、研究其生物学入侵机制奠定了基础。 展开更多
关键词 巴贝斯虫 RACE 滑动体 克隆 表达 多克隆抗体
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莫氏巴贝斯虫actin,aldolase和trap基因的克隆表达与多克隆抗体的制备
6
作者 王锦明 杨吉飞 +10 位作者 李安岩 刘爱红 任巧云 马米玲 刘志杰 李有全 赵帅阳 张浩浩 殷宏 罗建勋 关贵全 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期900-906,共7页
利用末端快速扩增技术从莫氏巴贝斯虫cDNA中扩增actin,aldolase和trap基因的5′和3′末端,经过序列装配后将获得的全序列插入pGEX-4T-1原核表达载体,将构建的原核表达载体转化至BL21(DE3)pLysS中,经IPTG诱导、表达后,将纯化的融合蛋白... 利用末端快速扩增技术从莫氏巴贝斯虫cDNA中扩增actin,aldolase和trap基因的5′和3′末端,经过序列装配后将获得的全序列插入pGEX-4T-1原核表达载体,将构建的原核表达载体转化至BL21(DE3)pLysS中,经IPTG诱导、表达后,将纯化的融合蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,并用ELISA和Western-blot测定抗体的效价和反应性。结果表明,获得的actin,aldolase和trap基因的全长分别为1 110、1 199和2 254bp,开放阅读框长度分别为1 005、1 074和2 100bp。制备的多克隆抗体具有良好的特异性。为筛选巴贝斯虫病疫苗、诊断用抗原和药物靶位,以及研究巴贝斯虫入侵宿主细胞的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 莫氏巴贝斯虫 RACE 克隆 表达 多克隆抗体
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环形泰勒虫微线体-棒状体基因的原核表达及表达产物的免疫原性分析
7
作者 岑双庆 李有全 +11 位作者 陈泽 张晓 李安岩 何海宁 刘志杰 杨吉飞 关贵全 牛庆丽 刘爱红 任巧云 罗建勋 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期599-604,共6页
为了解环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白的生物学特性,通过生物信息学分析,选取环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白特异性和抗原性最高的一段开放阅读框进行RT-PCR扩增,将所获基因片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1中进行表达,将表达产物纯化后免... 为了解环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白的生物学特性,通过生物信息学分析,选取环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白特异性和抗原性最高的一段开放阅读框进行RT-PCR扩增,将所获基因片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1中进行表达,将表达产物纯化后免疫家兔制备该蛋白的多克隆抗体。通过SDS-PAGE和Western-blot分析该基因的原核表达情况和表达产物的反应原性。生物信息学分析发现,该蛋白第470~650位氨基酸残基的特异性和抗原性最高。对诱导条件的摸索发现,在37℃、1.0mmol/L IPTG条件下诱导6h表达量最高,表达产物大小为43ku。Western-blot结果显示,该蛋白能被环形泰勒虫阳性的牛血清所识别,具有很好的反应原性。本研究制备的多克隆抗体为后期研究微线体-棒状体蛋白与宿主细胞的相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 环形泰勒虫 微线体-棒状体蛋白 原核表达 WESTERN-BLOT
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