为探讨去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(Bone m arrow m esenchym a l stem ce lls,M SC s)成纤维细胞集落生成单位(CFU-F s)、细胞周期、成骨分化能力和成脂分化能力的变化,选用3月龄和6月龄健康雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术,建立...为探讨去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(Bone m arrow m esenchym a l stem ce lls,M SC s)成纤维细胞集落生成单位(CFU-F s)、细胞周期、成骨分化能力和成脂分化能力的变化,选用3月龄和6月龄健康雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松动物模型,动物实验分为4组:(1)3月龄正常组(con tro l-3);(2)3月龄卵巢切除组(OVX-3);(3)6月龄正常组(con tro l-6);(4)6月龄卵巢切除组(OVX-6)。采用密度梯度离心方法分别获取各组M SC s,体外培养,选用第3~4代M SC s用于实验。倒置相差显微镜观察CFU-F s;流式细胞技术检测细胞周期、细胞增殖指数(pro liferation index,P I)和细胞凋亡指数(apoptotic index,A I))。加入成骨诱导剂,采用碱性磷酸酶活性蛋白检测法(IFCC推荐法)检测M SC s碱性磷酸酶(a lka line phosphatase,ALP)分泌量;采用同位素标记方法检测骨钙素(O steoca lc in,OCN)分泌量;茜素红染色观察钙结节形成。加入成脂诱导剂,油红O染色观察M SC s内脂滴形成;RT-PCR方法检测M SC s脂蛋白脂酶(lipoprote in lipase,LPL)mRNA的表达。结果表明:与相应对照组比较,OVX-3组和OVX-6组CFU-F s、P I值明显降低(P<0.05),A I值明显增加(P<0.05);OVX-6组CFU-F s、P I值的降低和A I值的增加都明显大于OVX-3组(P<0.05)。成骨诱导表明:与相应对照组比较,OVX-3组和OVX-6组ALP、BGP分泌量以及钙结节形成的数量均明显降低(P<0.05),OVX-6组的降低最为明显。成脂诱导表明:与相应对照组比较,OVX-3组和OVX-6组,LPL mRNA的表达量明显增加(P<0.05),OVX-6组LPL mRNA的表达量的增加明显高于其他各组(P<0.05)。结论:去卵巢骨质疏松大鼠M SC s增殖能力明显下降,向成骨细胞分化能力下降,向脂肪细胞分化能力增强,其中6OVX组M SC s的变化最明显。提示:去卵巢骨质疏松大鼠M SC s向成骨细胞分化能力的降低和向脂肪细胞分化能力的增强,可能与绝经后骨质疏松症的发生相关。展开更多
