吉林省汉坦病毒宿主动物携带病毒的遗传进化分析 被引量：7

1

作者 范胜涛 高晓龙 +10 位作者 李元果 应瑛 国娇 张钊伟 刘红 吴静 杨松涛 赵永坤 秦川 高玉伟 夏咸柱 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期467-471,475,共6页

目的对吉林省汉坦病毒（Hantavirus，Hv）宿主动物携带病毒进行遗传进化分析。方法采集吉林省不同地区鼠肺样品，应用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence assay，IFA）鉴定出HV感染的阳性样本，利用Trizol试剂提取病毒RNA，RT... 目的对吉林省汉坦病毒（Hantavirus，Hv）宿主动物携带病毒进行遗传进化分析。方法采集吉林省不同地区鼠肺样品，应用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence assay，IFA）鉴定出HV感染的阳性样本，利用Trizol试剂提取病毒RNA，RT-PCR法扩增阳性样本中M和S片段基因，并进行测序，应用DNASTAR软件对M和S片段基因的核苷酸同源性进行分析，并与汉城病毒（Seoulvirus，SEOV）参考株进行比较；利用MegAligh软件进行蛋白序列中氨基酸差异性分析；利用MEGA5.0软件进行系统发生分析。结果共捕获719只啮齿动物，其中褐家鼠（R.norvegicus）555只，黑线姬鼠（A.agrarius）74只，小家鼠（胍m12sclzllzs）90只，HV抗原阳性率为1.39％（10／719）；10份阳性样本中，7份来自褐家鼠，2份来自小家鼠，1份来自黑线姬鼠。用全长s引物扩增得到的10株病毒全长s基因片段，经同源性分析比较发现，各序列间的核苷酸同源性在92.8％～95.1％之间，与其他SEOV核苷酸同源性在90.2％～94.7％之间；用M引物扩增得到的部分基因片段，经同源性分析比较发现，各序列间的核苷酸同源性在96.5％～99.5％之间，而与其他SEOV核苷酸同源性在91.5％～97.7％之间；10株病毒全部属于SEOV。黑线姬鼠G蛋白365～769位点问有5个氨基酸差异位点（V494L、C546S、Y626C、M630L和V637I），小家鼠G蛋白365～769位点问主要有5个氨基酸差异位点（C378G／R、F420L、Q436P／R、E535G／A和C589G／W），但同种间在378、436、535和589位点也有差异；黑线姬鼠N蛋白1～430位点间存在P298L变异；小家鼠N蛋白变异位点较多，主要在M24K／N、A37D、1140M、M173K、D192E、L219V、P229A、D237E、H265Y、V284L、T333S、A389G和V425E变异。分离得到的10株病毒根据不同的来源地可分为两个不同的进化分支。结论研究表明吉林省宿主动物携带的HV仍以SEOV为主，其遗传进化呈现多 展开更多

关键词 汉坦病毒 遗传 进化 汉城病毒

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H4N6亚型禽流感病毒分离与氨基酸序列测定 被引量：6

2

作者 解林红 高晓龙 +6 位作者 耿海东 李元果 徐钰 吴长江 高玉伟 夏咸柱 王铁成 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第5期385-388,共4页

目的对候鸟类流感病毒进行主要氨基酸位点变化分析和HA、NA遗传进化分析。方法在上海自然保护区采集候鸟粪便标本337份,采用PCR检测H4N6核酸;同时将粪便标本接种SPF鸡胚分离病毒;收集72h尿囊液做血凝试验,阳性标本进行全基因测序,并做... 目的对候鸟类流感病毒进行主要氨基酸位点变化分析和HA、NA遗传进化分析。方法在上海自然保护区采集候鸟粪便标本337份,采用PCR检测H4N6核酸;同时将粪便标本接种SPF鸡胚分离病毒;收集72h尿囊液做血凝试验,阳性标本进行全基因测序,并做主要氨基酸位点和遗传进化分析。结果共分离出2株流感病毒,经测序鉴定为H4N6亚型,HA裂解位点序列为NIPEKASR/G,且均未发生Q226L、G228S变异;NA序列存在117T、198N、314S等氨基酸变异。遗传进化分析显示2株H4N6亚型分离株HA和NA基因属于欧亚谱系的不同进化分支,亲缘关系较远。结论分离自上海自然保护区候鸟粪便的2株H4N6亚型流感病毒均属于低致病性禽流感病毒,奥司他韦类NA抑制剂存在一定耐药性,对其传播风险应予以关注。 展开更多

关键词 候鸟 H4N6 血凝抑制 禽流感病毒

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犬瘟热病毒检测方法研究进展 被引量：6

3

作者 李天松 王磊 +8 位作者 王胜乐 姜雪 许微微 李元果 高玉伟 王铁成 黄耕 赵永坤 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第4期305-308,共4页

犬瘟热病毒属副粘病毒科麻疹病毒属成员,食肉目各科动物均有感染报道,但主要感染犬、狼、貂、狐等动物,发病率、死亡率较高,给养殖业带来巨大的经济损失。因此注射疫苗、尽早诊断本病并及时采取相应的防治措施是减少损失的有效手段。本... 犬瘟热病毒属副粘病毒科麻疹病毒属成员,食肉目各科动物均有感染报道,但主要感染犬、狼、貂、狐等动物,发病率、死亡率较高,给养殖业带来巨大的经济损失。因此注射疫苗、尽早诊断本病并及时采取相应的防治措施是减少损失的有效手段。本文阐述了犬瘟热病毒的检测方法,以期为该病毒的研究提供参考。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 检测方法 血清学 PCR 综述

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7株野鸟源新城疫病毒F基因和HN基因遗传变异分析 被引量：5

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作者 李胜楠 王海军 +8 位作者 高晓龙 李元果 国娇 陈迪 王铁成 于志君 高玉伟 夏咸柱 王全凯 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第12期1057-1060,1067,共5页

目的了解野生鸟类新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）感染情况,分析NDV的基因型与遗传变异特点。方法采用HA试验和RT-PCR检测野生鸟类新城疫病毒感染情况,对新城疫病毒分离株的融合蛋白基因（F基因）和血凝素-神经氨酸酶基因（H... 目的了解野生鸟类新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）感染情况,分析NDV的基因型与遗传变异特点。方法采用HA试验和RT-PCR检测野生鸟类新城疫病毒感染情况,对新城疫病毒分离株的融合蛋白基因（F基因）和血凝素-神经氨酸酶基因（HN基因）进行遗传进化分析,了解F和HN基因相关分子特性。结果 7株NDV的F基因序列分析表明显示其编码区核苷酸为1 662bp,编码553个氨基酸。F基因碱性裂解位点序列为112G-K/RQ-G-R-L117,均符合新城疫弱毒特征,与Ⅱ类NDV代表株核苷酸同源性为93.5%~99.9%。M46与M52为Ⅱ类Ⅱ亚型,其余5株为Ⅱ类Ⅰ亚型。HN基因序列分析显示,M46、M52编码区核苷酸为1 734bp,编码577个氨基酸,其余5株编码区氨基酸为1 851bp,编码616个氨基酸,与Ⅱ类代表毒株核苷酸同源性为92%~99.6%。结论分离的7株新城疫病毒在基因上均符合弱毒特点。其中有5株为Ⅱ类Ⅰ型,2株为Ⅱ类Ⅱ型。 展开更多

关键词 新城疫病毒 ClassⅡ 融合蛋白基因 血凝素-神经氨酸酶基因

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东北三省圈养东北虎重要病毒性传染病血清学调查与分析 被引量：5

5

作者 王海军 王开 +4 位作者 李元果 国娇 胡桂学 高玉伟 夏咸柱 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期608-611,共4页

东北虎(Pantheratigris)是我国国家Ⅰ级保护动物。截至目前,危害东北虎的重要病毒性传染病主要有犬瘟热(CDV)、禽流感(AIV)和细小病毒病(FPV)。为了解我国东北三省圈养东北虎CDV、AIV和FPV的潜伏感染和免疫情况,利用血凝及血凝抑制试验... 东北虎(Pantheratigris)是我国国家Ⅰ级保护动物。截至目前,危害东北虎的重要病毒性传染病主要有犬瘟热(CDV)、禽流感(AIV)和细小病毒病(FPV)。为了解我国东北三省圈养东北虎CDV、AIV和FPV的潜伏感染和免疫情况,利用血凝及血凝抑制试验、中和试验,对75只圈养东北虎进行了CDV、AIV和FPV的血清学调查。结果表明:我国东北地区圈养东北虎H5亚型禽流感、H9亚型禽流感和犬瘟热病毒抗体阳性率分别为9.33%(7/75)、61.33%(46/75)和16.00%(12/75)。说明,我国圈养东北虎AIV和CDV感染率较高,对圈养虎健康构成一定威胁。圈养虎群细小病毒抗体阳性率为100%,这与其接种猫瘟热、传染性鼻气管炎和鼻结膜炎三联疫苗有关。 展开更多

关键词 东北虎 犬瘟热 禽流感 细小病毒 血清学调查

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A型流感病毒通用型人源化抗体的构建及初步鉴定 被引量：5

6

作者 王铁成 任志广 +19 位作者 桑晓宇 于志君 张坤 高晓龙 孙伟洋 李元果 郑学星 高玉竹 耿海东 徐钰 解林红 吴长江 张晓田 孙贺廷 初冬 赵永坤 杨松涛 王化磊 高玉伟 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第6期481-485,560,共6页

目的制备A型流感病毒通用型人源化抗体并进行鉴定。方法通过文献检索、蛋白质序列数据库(Swissprot)、蛋白质结构数据库(PBD)等获得抗流感抗体的序列信息,经计算机分析软件InsightⅡ分析抗体结构,采用分子模拟、分子对接等方法分析抗体... 目的制备A型流感病毒通用型人源化抗体并进行鉴定。方法通过文献检索、蛋白质序列数据库(Swissprot)、蛋白质结构数据库(PBD)等获得抗流感抗体的序列信息,经计算机分析软件InsightⅡ分析抗体结构,采用分子模拟、分子对接等方法分析抗体的轻、重链可变区基因结构,用昆虫细胞偏嗜密码子优化氨基酸序列,合成抗流感病毒抗体轻、重链可变区基因;对合成氨基酸序列中的轻、重链可变区基因作酶切鉴定,将轻链可变区基因与杆状病毒表达载体PAC-κ-CH3连接,构建PAC-κ-L-CH3,酶切合成的重链可变区基因与PAC-κ-L-CH3连接,构建PAC-κ-L-H-CH3重组表达载体,鉴定正确后,同杆状病毒DNA共转染至昆虫细胞(sf9)中,于27℃用无血清培养基培养,收集上清,应用各亚型流感病毒株灭活后进行血凝抑制试验和ELISA试验,检测制备的抗体对流感病毒的通用性;通过荧光抗体试验检测抗体在细胞中的表达。结果重组杆状病毒表达载体转染sf细胞后,传代上清中检测到抗体;血凝抑制试效价为1︰2;ELISA结果显示有3株制备的抗体对3种流感病毒呈阳性反应,1株对实验用的流感病毒株没有反应;转染后传代细胞的荧光抗体鉴定结果显示有阳性抗体表达。结论成功采用计算机筛选合成抗流感病毒抗体基因,初步获得A型流感病毒通用型抗体。 展开更多

关键词 人源化抗体 流感病毒 可变区 PAC—rcH3

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两株野鸭源新城疫病毒分离株F基因和HN基因的分子特性分析 被引量：3

7

作者 徐钰 解林红 +10 位作者 耿海东 高晓龙 王海军 范胜涛 李元果 王铁成 吴长江 张晓田 孙贺廷 初冬 高玉伟 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期65-69,共5页

为了分析从湖南长沙分离到的野鸭源新城疫病毒（NDV）融合蛋白基因（F基因）和血凝素-神经氨酸酶基因（HN基因）分子特性,采用RT-PCR方法对分离自野鸭粪便的2株NDV的F基因和HN基因进行了扩增和遗传进化分析。F基因序列分析表明,编码区... 为了分析从湖南长沙分离到的野鸭源新城疫病毒（NDV）融合蛋白基因（F基因）和血凝素-神经氨酸酶基因（HN基因）分子特性,采用RT-PCR方法对分离自野鸭粪便的2株NDV的F基因和HN基因进行了扩增和遗传进化分析。F基因序列分析表明,编码区核苷酸为1 662bp,编码553个氨基酸,F基因碱性裂解位点序列为^112E-R-Q-E-R-L^117,符合NDV弱毒特征,与ClassⅠ类NDV代表毒株核苷酸同源性在92.3%-93.8%之间。HN基因序列分析表明,编码区核苷酸为1 851bp,编码616个氨基酸,与ClassⅠ类NDV代表毒株核苷酸同源性在91.6%-93.9%之间。根据F基因和HN基因遗传进化分析表明,此次分离到的2株NDV同属于ClassⅠ类Genotype 3型。 展开更多

关键词 新城疫病毒 F基因 HN基因

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圈养白虎H5N1亚型禽流感病毒的分离鉴定及其HA和NA基因的生物信息分析 被引量：3

8

作者 王海军 王开 +5 位作者 李元果 李胜楠 国娇 胡桂学 高玉伟 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2126-2130,共5页

采集某动物园病死白虎(Panthera tigers)的组织样本,置于灭菌的PBS中充分研磨,离心后取上清液并加入双抗后,接种于9~10日龄鸡胚,分离到1株具有血凝性的病毒。HA和HI试验表明该病毒为H5亚型禽流感病毒;HA和NA基因序列分析表明该病毒为H5N... 采集某动物园病死白虎(Panthera tigers)的组织样本,置于灭菌的PBS中充分研磨,离心后取上清液并加入双抗后,接种于9~10日龄鸡胚,分离到1株具有血凝性的病毒。HA和HI试验表明该病毒为H5亚型禽流感病毒;HA和NA基因序列分析表明该病毒为H5N1亚型禽流感病毒,其HA基因属于Clade 2.3.2.1分支。结果表明:该虎感染了H5N1亚型禽流感病毒,本试验对我国圈养野生虎流感疾病的防控具有重要作用。 展开更多

关键词 虎 H5N1亚型禽流感 分离鉴定 生物信息

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中国首株H13N6亚型禽流感病毒遗传进化分析及致病性和传播性评估 被引量：3

9

作者 高晓龙 范胜涛 +12 位作者 李胜楠 国娇 王爱荣 孙伟洋 李雪 虞一聪 王铁成 李元果 桑晓宇 于志君 张坤 高玉伟 夏咸柱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期172-176,共5页

为了解我国首次分离的H13N6亚型禽流感病毒(AIV)生物学特性,本研究对该分离株进行全基因序列测定和分析,并对其进行BALB/c小鼠和SPF鸡致病性试验以及豚鼠传播试验。序列分析表明HA碱性裂解位点序列为PAISNR↓G,为低致病性AIV。遗传进化... 为了解我国首次分离的H13N6亚型禽流感病毒(AIV)生物学特性,本研究对该分离株进行全基因序列测定和分析,并对其进行BALB/c小鼠和SPF鸡致病性试验以及豚鼠传播试验。序列分析表明HA碱性裂解位点序列为PAISNR↓G,为低致病性AIV。遗传进化分析表明NA基因属于北美谱系,其余7个基因均属于欧亚谱系;其中NA、NP、M、NS基因来源于鸥类,而HA、PB2、PB1、PA基因来源于野鸭类。动物致病性和传播试验结果显示,该病毒株在鸡和小鼠体内不能进行有效复制,在豚鼠和鸡体内也不能进行排毒和有效传播。基因序列分析结合致病性和传播性试验表明H13N6亚型AIV分离株可能是通过候鸟迁徙而传入我国的新型重组AIV,但该病毒株仍只能感染野生水禽尚未获得跨越种间屏障感染陆生家禽和人的能力,尚不具备哺乳动物间和家禽间的传播能力。 展开更多

关键词 H13N6 传播 致病力 鸡 小鼠 豚鼠

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宁夏野生岩羊PPRV全基因组测定与系统进化分析

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作者 阚龙飞 孟宪踊 +10 位作者 闫飞虎 李元果 王铁成 徐钰 初冬 王卫东 李岳城 赵永坤 高玉伟 冯娜 夏咸柱 《野生动物学报》 北大核心 2023年第3期556-564,共9页

为探究宁夏野生岩羊(Pseudois nayaur)小反刍兽疫病毒(Peste des petits rumi-nants virus,PPRV)的分子遗传特征,根据Gen Bank公布的PPRV基因组序列设计并合成13对全基因组扩增引物,通过RT-PCR和DNA测序及拼接获取毒株(wild-bharal/Chin... 为探究宁夏野生岩羊(Pseudois nayaur)小反刍兽疫病毒(Peste des petits rumi-nants virus,PPRV)的分子遗传特征,根据Gen Bank公布的PPRV基因组序列设计并合成13对全基因组扩增引物,通过RT-PCR和DNA测序及拼接获取毒株(wild-bharal/China-NXYH/2021株)全基因组序列,借助DNASTAR和MEGA 7.0软件进行序列分析。结果显示:该毒株属于基因Ⅳ系,基因组全长为15954 nt;在系统进化上,与2013年以来中国流行株和2016—2017年蒙古流行株亲缘关系较近,共同组成一个小的进化分支;在全基因组一致性分析中,与国内新疆流行株goat/China-XJYL/2013一致性最高(99.4%),与国内其他野生动物PPRV株wild-bharal/China-Tibet/2008、Ibex/China-XJBZ/2015和Procapra-przewalskii/China-GS/2018的一致性分别为96.8%、98.8%和99.0%。在H和F蛋白氨基酸多态性分析中,发现该毒株H和F蛋白中均出现了独特的氨基酸突变,分别为H蛋白的R285Q、S421R和F蛋白的R/K/T3W、Q305R。结果表明,小反刍兽疫病毒已传入宁夏野生动物种群,为我国小反刍兽疫根除工作带来新的困难和挑战,需加强对宁夏野生动物PPRV感染情况的追踪和监测,以便及时从传染源和传播途径方面阻断PPRV的传播。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 野生岩羊 宁夏 全基因组测定 系统进化分析

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我国野鸟新城疫病毒流行调查及遗传进化分析

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作者 王文浩 于明远 +13 位作者 李元果 梁宏蕊 胡鑫宇 李敏 李方旭 赵艳斌 宋丹丹 陈艳艳 孔云逸 王铁成 孙伟洋 高玉伟 解林红 王磊 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第3期249-253,259,共6页

目的掌握我国野鸟中新城疫病毒(NDV)的流行及遗传进化特征。方法结合候鸟的分布、迁徙规律以及栖息环境等信息,在途经中国的东亚-澳大利亚和西太平洋候鸟迁徙路线及其他重要野鸟栖息、停歇地作为监测哨点,采集环境样品、组织及咽肛拭子... 目的掌握我国野鸟中新城疫病毒(NDV)的流行及遗传进化特征。方法结合候鸟的分布、迁徙规律以及栖息环境等信息,在途经中国的东亚-澳大利亚和西太平洋候鸟迁徙路线及其他重要野鸟栖息、停歇地作为监测哨点,采集环境样品、组织及咽肛拭子等样品进行NDV鉴定,阳性样品按照地域、物种和采集时间划分挑取代表株并进行F基因序列测定,构建NJ进化树并分析F蛋白裂解位点。结果2013-2021年共采集环境样品、拭子及组织样品113017份,分离获得67株候鸟NDV,均来自常规监测中采集的拭子和环境样品,死亡野鸟中未检出NDV。历年野鸟中NDV的分离率分别为:2013年0.21%,2014年0.23%,2015年0.04%,2016年0.05%,2017年0.03%,2018年0.03%,2020年0.06%,2021年0.01%。F基因遗传进化分析表明,26株代表株中有20株NDV为ClassⅠ(14株genotypeⅠ.1.1.2,6株genotypeⅠ.1.2),宿主分布为苍鹭、赤麻鸭、斑嘴鸭、红腹滨鹬、海鸬鹚及鸥类;6株NDV为ClassⅡ(1株为genotypeⅠ.1.1,1株为genotypeⅠ.1.2.1,4株为genotypeⅠ.2),宿主分布为豆雁、翘嘴鹬、绿头鸭、红头潜鸭。经F蛋白裂解位点分析,26株新城疫病毒代表株均符合弱毒株分子特征。结论新城疫病毒野鸟宿主种类呈多样性,且同时存在ClassⅠ和ClassⅡ两类新城疫弱毒株。可为我国野鸟中新城疫病毒的流行、进化和宿主多样性提供数据资料。 展开更多

关键词 新城疫病毒 野鸟 多样性 遗传进化分析

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肉用商品鸡大肠杆菌致病菌株耐药性的检测 被引量：2

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作者 李元果 刘福臣 刘清河 《吉林畜牧兽医》 2009年第5期51-52,共2页

鸡大肠杆菌病是长期困扰养鸡业的难题，主要是因为乱用抗生素类药物引起抗药菌株及抗药谱的快速增长，大部分菌株对多种药物都产生耐药性，在临床治疗时难以选择高效药物，给鸡病防治带来了较大的困难，造成巨大的经济损失。本实验利用... 鸡大肠杆菌病是长期困扰养鸡业的难题，主要是因为乱用抗生素类药物引起抗药菌株及抗药谱的快速增长，大部分菌株对多种药物都产生耐药性，在临床治疗时难以选择高效药物，给鸡病防治带来了较大的困难，造成巨大的经济损失。本实验利用自制药敏片对分离自吉林省某些地区的18株致病性大肠杆菌进行了耐药性检测，根据检测结果可见硫酸丁胺卡那、硫酸粘杆菌素、硫酸庆大霉素、氟本尼考、痢菌净等药物对大肠杆菌有较好的抑制作用，为临床用药提供了依据。 展开更多

关键词 鸡大肠杆菌病 检测结果 致病菌株 耐药性 抗生素类药物 硫酸粘杆菌素 致病性大肠杆菌 商品

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动物发热时机体功能变化及应对措施 被引量：2

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作者 狄淑英 刘清河 +1 位作者 叶远森 李元果 《吉林畜牧兽医》 2009年第8期45-46,共2页

发热是动物机体在致热源作用下使体温调节中枢的调定点（SP）上移而引起的调节性体温升高。动物在1日问体温波动超过1℃就称为发热。逐日将体温记录连接起来可以做成一条体温曲线，称为热型。不同疾病在发病过程中体温变化呈现一定的规... 发热是动物机体在致热源作用下使体温调节中枢的调定点（SP）上移而引起的调节性体温升高。动物在1日问体温波动超过1℃就称为发热。逐日将体温记录连接起来可以做成一条体温曲线，称为热型。不同疾病在发病过程中体温变化呈现一定的规律性，如稽留热、弛张热、间歇热。可以做为诊断疾病的依据。 展开更多

关键词 动物机体 功能变化 发热 体温调节中枢 热源作用 体温变化 发病过程 温升高

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禽曲霉菌性肺炎 被引量：2

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作者 安明范 李元果 +1 位作者 宋启明 刘清河 《吉林畜牧兽医》 2010年第3期43-43,46,共2页

禽曲霉菌性肺炎是由真菌中的烟曲霉或其他霉菌引起的鸡、鸭、鹅和鸽的急性或慢性呼吸道传染病。特别是幼禽常引起爆发，发病率和死亡率均较高。该病是条件性传染病，如禽舍条件较差、通风不良，有大量霉菌孢子漂浮在空中，或较长时间饲... 禽曲霉菌性肺炎是由真菌中的烟曲霉或其他霉菌引起的鸡、鸭、鹅和鸽的急性或慢性呼吸道传染病。特别是幼禽常引起爆发，发病率和死亡率均较高。该病是条件性传染病，如禽舍条件较差、通风不良，有大量霉菌孢子漂浮在空中，或较长时间饲喂发霉的饲料，霉菌孢子通过鼻腔进入气管，再进入微支气管，并萌发生长为菌丝，堵塞微支气管而造成呼吸困难。 展开更多

关键词 曲霉菌性肺炎 幼禽 慢性呼吸道传染病 霉菌孢子 支气管 通风不良 萌发生长 呼吸困难

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H9N2亚型AIV HA蛋白第226位点氨基酸多样性分析及3株病毒受体结合能力检测 被引量：2

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作者 王爱荣 桑晓宇 +8 位作者 高晓龙 李元果 张坤 于志君 王铁成 杨松涛 夏咸柱 高玉伟 柴同杰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第11期965-968,991,共5页

目的了解目前我国家禽业中流行的H9N2亚型AIV的HA蛋白第226位氨基酸残基的多样性,并用固相糖链ELISA方法检测实验室保存的3株H9N2亚型AIV病毒的受体结合能力。方法从NCBI数据库中下载我国分离的H9N2流感病毒的HA氨基酸序列,对其第226位... 目的了解目前我国家禽业中流行的H9N2亚型AIV的HA蛋白第226位氨基酸残基的多样性,并用固相糖链ELISA方法检测实验室保存的3株H9N2亚型AIV病毒的受体结合能力。方法从NCBI数据库中下载我国分离的H9N2流感病毒的HA氨基酸序列,对其第226位(参照H3亚型HA位点)氨基酸残基的种类进行统计分析,并利用固相糖链ELISA方法对3株H9N2亚型AIV的受体结合能力进行检测。结果与H9N2流感病毒受体结合能力相关的HA226位点已呈现出多样性,分别为HAL226、HAQ226、HAM226和HAF226,其占有比率分别为81.85%、17.57%、4.81%和0.11%;进一步统计分析表明,我国近几年分离的H9N2流感病毒以HAL226为主。受体结合能力检测显示,CK/JN/3(HAL226)只具有结合人样受体的能力,CK/JL/06(HAQ226)只具有结合禽样受体的能力,而CK/JN/2(HAF226)则具有双受体结合特性,其中与人样受体结合能力稍高。结论当前我国家禽中流行的H9N2亚型AIV中以具有HAL226位点特征的毒株占优势,而这一位点特征与病毒结合人样受体有关。因此,H9N2亚型AIV具有突破种间屏障并引发新的流感大流行的潜在威胁。 展开更多

关键词 H9N2亚型AIV HA226 多样性 受体结合能力

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几种抗病毒药物对甲型H1N1季节性流感病毒的体内外抑制效果评价 被引量：2

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作者 方树珊 李元果 +11 位作者 夏青 张亚敏 张醒海 赵梦琳 何健 孙伟洋 王铁成 冯娜 夏咸柱 郭振东 岳冬辉 高玉伟 《中医药临床杂志》 2019年第4期599-605,共7页

目的:评价流感病毒神经氨酸酶抑制剂奥司他韦及几种中药单体化合物对2018年河北流行株H1N1体内外抑制效果的评价。方法:通过鸡胚及MDCK细胞系扩增培养河北株甲型H1N1季节性流感病毒(简称BH076)。对所获毒株进行基因突变分析未发现毒株... 目的:评价流感病毒神经氨酸酶抑制剂奥司他韦及几种中药单体化合物对2018年河北流行株H1N1体内外抑制效果的评价。方法:通过鸡胚及MDCK细胞系扩增培养河北株甲型H1N1季节性流感病毒(简称BH076)。对所获毒株进行基因突变分析未发现毒株具有耐奥司他韦H275Y位点及其他相关位点突变。通过细胞水平和小鼠体内分组治疗评价奥司他韦对BH076株的抑制作用。结果:奥司他韦无论在细胞水平还是小鼠体内均无抑制作用。通过直接作用和间接作用两种方法评价茶黄素、芦丁、金丝桃苷、羟基红花黄色素A在细胞水平上对BH076株的抑制作用,发现茶黄素在药物浓度达0.125mg/ml以上时对H1N1流感病毒有抑制作用,芦丁可在浓度为2 mg/m:以上时具有抑制病毒的作用。结论:该毒株对奥司他韦抑制的敏感性降低且中药单体化合物茶黄素对该毒株有较好的抑制作用。 展开更多

关键词 流感病毒 奥司他韦 耐药性 中药单体化合物

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水貂犬瘟热动物模型的建立 被引量：3

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作者 王胜乐 王铁成 +13 位作者 冯娜 李元果 于志君 丁洁 许薇薇 忻悦 岳秀芳 王铮 郑学星 杨松涛 黄耕 赵永坤 高玉伟 夏咸柱 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第11期54-58,I0003,共6页

目的建立水貂犬瘟热动物模型,并利用水貂犬瘟热模型评价不同犬瘟热强毒株的毒力,为水貂犬瘟热病毒疫苗的研究奠定基础。方法从猴、藏獒、犬的病料中分离犬瘟热病毒,测定犬瘟热病毒的毒力,并进行传代培养。利用犬的犬瘟热动物模型筛选稳... 目的建立水貂犬瘟热动物模型,并利用水貂犬瘟热模型评价不同犬瘟热强毒株的毒力,为水貂犬瘟热病毒疫苗的研究奠定基础。方法从猴、藏獒、犬的病料中分离犬瘟热病毒,测定犬瘟热病毒的毒力,并进行传代培养。利用犬的犬瘟热动物模型筛选稳定的犬瘟热强毒株,进行水貂犬瘟热动物模型的建立及其毒力评估。结果筛选出了稳定的犬瘟热强毒株并进行了家犬动物实验,同时表现出了强烈的临床症状,并利用不同的代次毒进行了犬瘟热动物模型的建立。结论成功建立了犬瘟热动物模型并对不同来源的犬瘟热病毒毒力进行了评估。 展开更多

关键词 水貂 模型 动物 毒力评估 大瘟热病毒

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不同宿主来源犬瘟热病毒的分离及致病相关基因序列分析 被引量：1

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作者 李天松 王磊 +7 位作者 王胜乐 姜雪 许微微 李元果 高玉伟 王铁成 黄耕 夏咸柱 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第7期3-7,共5页

利用Vero-DST细胞从死亡犬、狐狸肺、脾内分离到4株犬瘟热病毒-CDV-TM-CC、CDV-Dog-SCh、CDV-Fox-SY、CDV-Fox-WF,在Vero-DST细胞上传5代没有细胞病变,5代细胞培养物经电镜、间接免疫荧光及PCR鉴定为阳性。与本实验室保存的CDV-Monkey-B... 利用Vero-DST细胞从死亡犬、狐狸肺、脾内分离到4株犬瘟热病毒-CDV-TM-CC、CDV-Dog-SCh、CDV-Fox-SY、CDV-Fox-WF,在Vero-DST细胞上传5代没有细胞病变,5代细胞培养物经电镜、间接免疫荧光及PCR鉴定为阳性。与本实验室保存的CDV-Monkey-BJ进行基因测序,并对与致病相关的F蛋白、V蛋白进行分析,F蛋白分析5株毒具有6个潜在N-末端糖基化位点,与强毒株同源性在92%～99.7%,与疫苗株不高于93.3%,在F1亚基内有7个特有氨基酸位点,这可能与其对灵长类致病有关。V蛋白分析表明,其与强毒株同源性在94%～99.7%之间,而与疫苗株不高于93.3%,CDV-Monkey-BJ C272R突变使其Zn结合能力丧失。试验结果显示,所有分离株均为强毒株,不同宿主毒株序列存在差异,值得进一步研究。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 V蛋白 F蛋白

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通用H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备 被引量：1

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作者 刘静 任志广 +6 位作者 王铁成 李元果 孙伟洋 冯娜 秦川 高玉伟 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第7期755-760,共6页

目的高致病性H5N1亚型流感病毒可感染人,并不断衍生出多个新的基因谱系,存在着大规模流行的可能性。我国现有的商品化疫苗无法对不同谱系的H5N1流感病毒感染提供有效的保护。病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗具有良好的免疫... 目的高致病性H5N1亚型流感病毒可感染人,并不断衍生出多个新的基因谱系,存在着大规模流行的可能性。我国现有的商品化疫苗无法对不同谱系的H5N1流感病毒感染提供有效的保护。病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗具有良好的免疫原性和安全性,成为近年研究的热点。本研究旨在建立H5亚型禽流感病毒通用型病毒样颗粒疫苗的制备方法。 方法将优化的H5N1A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)亚型流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e(5个M2e)/HL5M2e(5M2e替代HA的头部嵌入HLHA)、NP基因和M1基因分别插入pFast-BacDual载体,得到相应的重组供体。然后将重组供体转化至含Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,获得含有目的基因的重组杆粒。 结果酶切和PCR鉴定表明成功构建了含目的基因的重组杆粒Bacmid-(HLHA/5M2e/HL5M2e、NP、M1)。将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,IFA试验和Western blot试验皆证实,优化的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP基因和M1基因编码的蛋白均获得表达。透射电子显微镜观察VLPs转染Sf9细胞上清的浓缩液中,有球形结构和100nm左右典型VLPs存在。 结论在Sf9昆虫杆状病毒表达系统中成功表达H5N1A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)亚型禽流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP和M1蛋白,并组装成3种VLPs,为进一步研究流感病毒的VLPs疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 流感病毒 基因优化 HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e NP M1 病毒样颗粒

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吉林省部分地区野禽携带新城疫病毒情况调查

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作者 耿海东 解林红 +10 位作者 徐钰 高晓龙 李元果 王海军 范胜涛 孙贺廷 王铁成 吴长江 张晓田 初冬 高玉伟 《现代畜牧兽医》 2014年第7期45-49,共5页

为调查吉林省候鸟迁徙路线中野禽类携带新城疫病毒情况,对吉林省七个地区野禽新鲜环境样品或泄殖腔拭子进行样品采集。对采集的821样品进行新城疫病毒携带的检测,其中有32份阳性样品,阳性分离率为3.9%。经GenBank序列比对32株均为弱毒Cl... 为调查吉林省候鸟迁徙路线中野禽类携带新城疫病毒情况,对吉林省七个地区野禽新鲜环境样品或泄殖腔拭子进行样品采集。对采集的821样品进行新城疫病毒携带的检测,其中有32份阳性样品,阳性分离率为3.9%。经GenBank序列比对32株均为弱毒ClassⅠ群基因3型。本次对吉林省新城野禽携带新城疫病毒调查结果中未见新城疫强毒株。 展开更多

关键词 野禽 新城疫病毒 调查

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