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AMOS-PCR对布鲁氏菌种型鉴定的应用 被引量:83
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作者 姜海 崔步云 +2 位作者 赵鸿雁 东日 李兰玉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期107-109,共3页
目的评价AMOS-PCR方法鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性。方法用已建立的AMOS-PCR方法在国内检测标准菌株和对国内分离的布鲁氏菌地方株种型进行检测。结果羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌1,2,4、猪种布鲁氏菌1型和绵羊附睾布鲁氏菌有特异... 目的评价AMOS-PCR方法鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性。方法用已建立的AMOS-PCR方法在国内检测标准菌株和对国内分离的布鲁氏菌地方株种型进行检测。结果羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌1,2,4、猪种布鲁氏菌1型和绵羊附睾布鲁氏菌有特异条带。结论AMOS-PCR是一种快速、简便、特异的鉴定布鲁氏菌的方法之一。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 AMOS-PCR 鉴定
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我国羊种3型布鲁氏菌的多位点序列分型研究 被引量:46
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作者 周晓艳 陈燕芬 +6 位作者 崔步云 陈泽良 姜海 赵鸿雁 东日 李兰玉 王金桃 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期371-375,共5页
目的对2004-2009年从病人标本中分离的羊种3型布鲁氏菌进行遗传多态性分析,了解菌株的遗传特征及遗传进化关系。方法采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)技术,对47株布鲁氏菌菌株的7个管家基因、1个外膜蛋白基因及... 目的对2004-2009年从病人标本中分离的羊种3型布鲁氏菌进行遗传多态性分析,了解菌株的遗传特征及遗传进化关系。方法采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)技术,对47株布鲁氏菌菌株的7个管家基因、1个外膜蛋白基因及1个基因间区的序列进行测定,将各个基因的序列与标准菌株的等位基因型进行比对,确定其等位基因谱型及菌株序列型(STS),分析与其它ST型间的遗传关系。结果 47株布鲁氏菌中,19株omp25基因与目前已有的等位基因型不同,被定义为1个新的等位基因型,即ST28。其余28株与已知的ST8型的各等位基因型一致。结论我国流行的羊种布鲁氏菌主要是羊3型菌株,国内的菌株与国外菌株遗传背景上有差异。MLST分型可以作为研究布鲁氏菌进化关系的重要手段之一。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 羊种3型 MLST
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多重荧光定量PCR方法鉴定布鲁氏菌属及牛羊种布鲁氏菌研究 被引量:28
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作者 刘志国 罗成旺 +5 位作者 张利 姜海 赵鸿雁 东日 田国忠 崔步云 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期869-874,共6页
目的利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法。方法根据布鲁氏菌特异性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法... 目的利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法。方法根据布鲁氏菌特异性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法的灵敏度。利用布鲁氏菌的其他生物型菌株和同源性较近的致病菌(汉赛巴尔通体、霍乱弧菌、土拉弗朗西斯菌、大肠杆菌O157∶H7、大肠杆菌O∶16、小肠结肠炎耶尔森菌O∶9、沙门氏菌N群血清型、嗜麦芽假单胞菌)验证所建立方法的特异性。通过布鲁氏菌标准菌株建立方法,优化体系后扩增97株地方株进行验证。结果应用多重Taq-Man荧光PCR技术检测布鲁氏菌结果显示,布鲁氏菌属、牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌有各自的荧光信号,而与其同源性较高的致病菌均未见荧光信号;由标准曲线可知该方法的单重和多重荧光PCR最低检测下限均约为102copy/μL(13~24fg/μL),是常规PCR灵敏度的100倍。结论建立的方法有灵敏度高、快速易操作等优点,可用于布鲁氏菌快速鉴定,并同时确定是否为牛种或羊种布鲁氏菌。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 荧光定量聚合酶链式反应 鉴定 评价
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五种布鲁菌血清学检测方法对比分析 被引量:18
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作者 王淑云 刘熹 +8 位作者 荣蓉 赵鸿雁 赵赤鸿 东日 赵娜 姜海 田国忠 王桂琴 崔步云 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期175-178,共4页
目的分析5种检测人的布鲁菌病的血清学方法的特异性和敏感性。方法于2013年1—12月,在内蒙古自治区的4个自治旗(察右后旗、科右中旗、林西县和四子王旗)进行调查。调查对象纳入标准:以养殖牛羊和屠宰为职业,伴有发热、乏力、关节... 目的分析5种检测人的布鲁菌病的血清学方法的特异性和敏感性。方法于2013年1—12月,在内蒙古自治区的4个自治旗(察右后旗、科右中旗、林西县和四子王旗)进行调查。调查对象纳入标准:以养殖牛羊和屠宰为职业,伴有发热、乏力、关节痛等布鲁菌病疑似症状,年龄为25—55岁。对疑似患者清晨空腹采集静脉血3-5ml,共采集236份样品。分别采用平板凝集试验(PAT)、虎红平板凝集试验(RBPT)、标准试管凝集试验(SAT)、ELISA和免疫胶体金法(GICA)等5种血清学检测方法进行布鲁菌抗体测定,以SAT为“金标准”,分析RBPT、PAT、ELISA和GICA法的敏感性和特异性。结果SAT法阳性患者136例(57.6%),PAT法阳性患者150例(63.6%),RBPT法阳性患者159例(67.4%),ELISA法阳性患者143例(60.6%),GICA法阳性患者147例(62.3%),不同检测方法检测布鲁菌抗体阳性率差异无统计学意义(x^2=0.52,P=0.264)。以SAT法为“金标准”,PAT、RBPT、ELISA和GICA法的灵敏度分别为97.7%(133/136)、98.5%(134/136)、94.8%(129/136)和94.1%(128/136),特异度分别为70.0%(70/100)、75.0%(75/100)、86.0%(86/100)和81.0%(81/100),符合率分别为86.0%(203/236)、88.5%(209/236)、91.1%(215/236)和88.5%(209/236)。结论ELISA与GICA法在诊断人布鲁菌病中特异性和敏感性都较高,并且两种方法均快速;现场检测可以采用GICA法,大样本检测适宜用ELISA法。 展开更多
关键词 ELISA 布鲁杆菌属 敏感性与特异性
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多位点可变数目串联重复序列分析方法在布鲁杆菌病监测中的应用 被引量:14
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作者 赵鸿雁 杨杰 +5 位作者 张旭 东日 田国忠 李金平 崔步云 姜海 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期441-447,共7页
目的建立多位点可变数目串联重复序列分析方法(MLVA),并评价其在布鲁杆菌菌株鉴定及流行病溯源中的价值。方法使用MLVA方法,对16株羊种菌、22株牛种菌、21株猪种菌和10株犬种菌株进行分析,使用BioNumerics(Version5.0),对16个... 目的建立多位点可变数目串联重复序列分析方法(MLVA),并评价其在布鲁杆菌菌株鉴定及流行病溯源中的价值。方法使用MLVA方法,对16株羊种菌、22株牛种菌、21株猪种菌和10株犬种菌株进行分析,使用BioNumerics(Version5.0),对16个位点进行聚类分析,聚类方式用平均连锁聚类法(UPGMA)。计算每个位点的差异指数,菌株的基因型通过MLVA2010数据库确定。结果使用MLVA方法,通过Brace06、Bruce08、Bruce11、Bruce12、Bruce42、Bruce43、Bruce45、Bruce55共8个位点可以区分布鲁杆菌的种;通过Bruce04、Bruce07、Bruce09、Bruce16、Bruce30共5个位点可以对菌株进行溯源,确定菌株流行病学相关性。结论MLVA技术是一种分辨率高且易于在省级疾病防控系统监测实验室使用的标准化分型技术。可以加强布病监测能力。 展开更多
关键词 布鲁杆菌属 基因 多位点可变数目串联重复序列分析
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一起羊种布鲁氏菌病暴发的流行病学和分子特征研究 被引量:14
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作者 田国忠 崔步云 +2 位作者 赵鸿雁 姜海 东日 《疾病监测》 CAS 2017年第3期211-215,共5页
目的调查研究一起羊养殖场中发生的人畜共患羊种布鲁氏菌病(布病)暴发疫情的流行病学和分子特征。方法血清学实验采用试管凝集试验检测布病抗体,采用纸片法检测菌株的药物敏感性,采用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)和多位点序列... 目的调查研究一起羊养殖场中发生的人畜共患羊种布鲁氏菌病(布病)暴发疫情的流行病学和分子特征。方法血清学实验采用试管凝集试验检测布病抗体,采用纸片法检测菌株的药物敏感性,采用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)和多位点序列分析(MLST)分析菌株的分子特征。结果工作人员布鲁氏菌抗体阳性率为7/18,饲养羊的阳性率为5/8。2名工作人员血液分离培养出羊种布鲁氏菌(菌株编号:CQ-18和CQ-11),3只羊的血液分离培养出羊种布鲁氏菌(菌株编号:CQ-154、CQ-159和CQ-237)。药敏实验结果:5株菌对环丙沙星、左氧氟沙星、强力霉素、头孢曲松、诺氟沙星、米诺霉素、莫西沙星、氧氟沙星、利福平和链霉素敏感,CQ-154和CQ-237菌株对复方新诺明敏感,CQ-159、CQ-18和CQ-11菌株对复方新诺明耐药,5株菌均对阿奇霉素和克拉霉素耐药。MLVA分析发现,CQ-154菌株在BRU16位点少了一个串联重复序列,菌株CQ-18在BRU04位点增加了一个串联重复序列,MLST分析5株菌株ST型为8型。结论布鲁氏菌长期在动物体内存在,是人畜感染布病无法根治的一个关键问题。在我国首次发现对复方新诺明耐药的羊种布鲁氏菌菌株。 展开更多
关键词 羊种布鲁氏菌 流行病学 分子特征 抗生素药物敏感性
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实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌核酸DNA的应用评价 被引量:11
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作者 田国忠 东日 +3 位作者 赵鸿雁 路殿英 姜海 王立军 《疾病监测》 CAS 2019年第5期451-454,共4页
目的探讨实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌核酸DNA浓度的检测范围和检测健康人全血中核酸DNA的Ct本底值。方法采用试剂盒提取纯菌、健康人和临床患者血液中的核酸DNA,应用实时荧光定量PCR进行检测。结果经检测,40份健康人群血液标本Ct值平... 目的探讨实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌核酸DNA浓度的检测范围和检测健康人全血中核酸DNA的Ct本底值。方法采用试剂盒提取纯菌、健康人和临床患者血液中的核酸DNA,应用实时荧光定量PCR进行检测。结果经检测,40份健康人群血液标本Ct值平均值为37.0,标准差为1.9,Ct值95%置信区间为33.0~38.8。将布鲁氏菌核酸DNA标准品倍比稀释(56.2 ng^0.026 5 fg),实时荧光定量PCR检测灵敏度为6.7fg。结论实时荧光定量PCR检测纯菌核酸DNA的灵敏度相当于2个基因组DNA拷贝数,但用于检测血液标本尚待进一步研究。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 布鲁氏菌 灵敏度
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从北京某地分离的2株犬种布氏菌的鉴定报告 被引量:10
8
作者 东日 赵鸿雁 +2 位作者 李兰玉 崔步云 李元凯 《中国地方病防治》 北大核心 2006年第5期263-264,共2页
目的对从北京某地分离的2株布氏菌进行鉴定。方法布氏菌常规鉴定分型方法,布氏菌噬菌体裂解试验,同时辅以脉冲场电泳基因分型方法。结果2株待测菌株均为犬种布氏菌,2株待测菌的脉冲场电泳图谱与国际标准犬种布氏菌RM6/66株的图谱完全一... 目的对从北京某地分离的2株布氏菌进行鉴定。方法布氏菌常规鉴定分型方法,布氏菌噬菌体裂解试验,同时辅以脉冲场电泳基因分型方法。结果2株待测菌株均为犬种布氏菌,2株待测菌的脉冲场电泳图谱与国际标准犬种布氏菌RM6/66株的图谱完全一致。结论采用传统布氏菌分型方法同时辅以脉冲场电泳基因分型方法对布氏菌进行分型鉴定,可以增加鉴定工作的稳定性与正确性。 展开更多
关键词 布氏菌 噬菌体 脉冲场电泳
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倍比稀释虎红平板凝集试验对布鲁氏菌病诊断的探讨 被引量:10
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作者 孙岩 肖培 +7 位作者 王娜 赵娜 东日 田国忠 赵鸿雁 姜海 崔步云 杜雅楠 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2014年第4期294-296,共3页
目的探索倍比稀释虎红平板凝集试验(RBPT)作为布鲁氏菌病(布病)诊断实验的可能性。方法选择2013年内蒙古自治区布病患者血清93份,同时进行试管凝集试验(SAT)和倍比稀释RBPT检测,根据二者实验结果的相关性,以SAT结果作为判定标准,分析不... 目的探索倍比稀释虎红平板凝集试验(RBPT)作为布鲁氏菌病(布病)诊断实验的可能性。方法选择2013年内蒙古自治区布病患者血清93份,同时进行试管凝集试验(SAT)和倍比稀释RBPT检测,根据二者实验结果的相关性,以SAT结果作为判定标准,分析不同稀释倍数的RBPT作为诊断截断值的灵敏度和特异度来评价诊断的准确性。结果倍比稀释RBPT受试者工作特征曲线下面积为0.946,以1∶2为截断值时约登指数最高为0.893,灵敏度为89.30%,特异度为100%;以1∶4作为截断值,RBPT的灵敏度为63.10%,约登指数为0.631,特异度为100%;以1∶8作为截断值,RBPT的灵敏度为57.14%,约登指数为0.571,特异度为100%;以1∶16作为截断值,RBPT的灵敏度为19.05%,约登指数为0.191,特异度为100%。结论倍比稀释RBPT以1∶2为截断值时诊断的准确性最高,可以为布病诊断提供参考。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病诊断 虎红平板凝集试验 试管凝集试验 截断值
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用MLVA技术和多重PCR对犬种布氏菌基因分型 被引量:10
10
作者 姜海 崔步云 +2 位作者 李兰玉 赵鸿雁 东日 《生物技术通讯》 CAS 2009年第3期336-338,共3页
目的:对犬种布氏菌的遗传关系进行不同分子分型方法的对比研究,为犬布病分子流行病溯源提供有效方法。方法:采用多重PCR和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)方法对24株犬种布氏菌的遗传关系进行比较研究。结果:多重PCR只鉴定出1株... 目的:对犬种布氏菌的遗传关系进行不同分子分型方法的对比研究,为犬布病分子流行病溯源提供有效方法。方法:采用多重PCR和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)方法对24株犬种布氏菌的遗传关系进行比较研究。结果:多重PCR只鉴定出1株犬种布氏菌,其余23株均鉴定为猪种鲁氏菌,但不能鉴定型别;MLVA方法对已鉴定为猪种的布氏菌仍可再细分为型,87%(20/23)为猪3型,13%(3/20)为猪1型。结论:MLVA可以对布氏菌种(生物型)进行基因分型鉴定,可以作为传统表型鉴定方法的补充。 展开更多
关键词 犬种布氏菌 多重PCR 多位点可变数量串联重复序列分析 分型
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布鲁氏菌微滴式数字PCR方法的建立与应用 被引量:10
11
作者 田国忠 姜海 +4 位作者 薛盼盼 东日 赵鸿雁 杨晓雯 张京云 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期301-305,共5页
目的建立可对布鲁氏菌准确定量的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法。方法使用以布鲁氏菌bscp31基因为靶标的引物和探针,摸索最佳的引物和探针工作浓度,确定反应体系和扩增条件,评价所建立方法的灵敏性、特异性及对疫情相... 目的建立可对布鲁氏菌准确定量的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法。方法使用以布鲁氏菌bscp31基因为靶标的引物和探针,摸索最佳的引物和探针工作浓度,确定反应体系和扩增条件,评价所建立方法的灵敏性、特异性及对疫情相关血液标本的检测效果。结果ddPCR反应体系中最佳引物和探针浓度分别为0.8μmol/L和0.4μmol/L;最佳扩增条件:95℃10 min;95℃30 s,60℃1 min,循环40次;98℃酶失活10 min。布鲁氏菌核酸DNA为0.96 ng/反应~3.68 fg/反应时,ddPCR检出靶标基因拷贝数为2.00×105拷贝/反应~1拷贝/反应,ddPCR测得值的对数值与DNA浓度的对数值有线性关系。在疫情相关血液标本DNA的检测中,ddPCR阳性率远高于培养法和试管凝集法;16份人血液标本中靶标基因浓度为5~65拷贝/mL血液(平均29拷贝/mL血液),5份羊血液标本中靶标基因浓度为25~245拷贝/mL血液(平均98拷贝/mL血液)。结论ddPCR灵敏性高,可检测微量核酸DNA,适合临床血液标本的检测以及布病病原体的分子流行病学调查。 展开更多
关键词 微滴式数字PCR 荧光定量PCR 布鲁氏菌
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应用多重PCR鉴别布鲁氏菌种及猪种5个生物型研究 被引量:9
12
作者 陈军 崔步云 +4 位作者 赵鸿雁 东日 姜海 邰新平 田国忠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第2期126-130,共5页
目的应用布鲁氏菌种多重PCR和猪种多重PCR对布鲁氏菌进行鉴定。方法对两套多重PCR方法进行条件优化,应用布鲁氏菌参考菌株、疫苗株和临床分离菌株进行评价,并与生物学分型方法进行比较。结果布鲁氏菌种多重PCR扩增(包括牛种布鲁氏菌8个... 目的应用布鲁氏菌种多重PCR和猪种多重PCR对布鲁氏菌进行鉴定。方法对两套多重PCR方法进行条件优化,应用布鲁氏菌参考菌株、疫苗株和临床分离菌株进行评价,并与生物学分型方法进行比较。结果布鲁氏菌种多重PCR扩增(包括牛种布鲁氏菌8个生物型,猪种5个生物型,羊种3个生物型,以及绵羊附睾、犬和沙漠森林野鼠种各1个生物型)可获得152~1 682bp的8个DNA片段,但种间DNA片段数不一。猪种多重PCR扩增猪种5个生物型菌株得到197~774bp的7个DNA片段,不同生物型的DNA扩增图谱不同;猪种疫苗株S2扩增图谱与猪种生物1型相同,多重PCR分型方法与生物学分型方法分析结果一致。结论布鲁氏菌种多重PCR能鉴别布鲁氏菌6个种,猪种多重PCR可以鉴别猪种5个生物型。两种多重PCR均具有较好的特异性和重复性,该方法快速、简便,可推广应用。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 菌种 生物型 多重PCR 鉴别
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全自动微生物分析系统对布鲁杆菌属和种鉴定效果的研究 被引量:8
13
作者 肖春霞 赵鸿雁 +9 位作者 侯临平 荣蓉 刘熹 赵赤鸿 东日 赵娜 姜海 田国忠 王桂琴 崔步云 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期416-420,共5页
目的 鉴定与分析布鲁杆菌的生化特征,评价对全自动微生物分析系统的鉴定效果和临床意义.方法 17株标准菌株和121株实验菌株来自于中国疾病预防控制中心传染病预防控制所布鲁杆菌病(简称布病)研究室菌种库,实验菌株为全国26个省(市、... 目的 鉴定与分析布鲁杆菌的生化特征,评价对全自动微生物分析系统的鉴定效果和临床意义.方法 17株标准菌株和121株实验菌株来自于中国疾病预防控制中心传染病预防控制所布鲁杆菌病(简称布病)研究室菌种库,实验菌株为全国26个省(市、自治区)1957-2014年历次流行自布病患者和羊、黄羊、岩羊、牛、猪分离的布鲁杆菌菌株.用GN鉴定卡在VITEK2 COMPACT全自动微生物分析系统上对标准菌株和实验菌株进行生化检测,根据布鲁杆菌属和种的生化阳性鉴定标准,通过对比分析,获得布鲁杆菌属和种的生化阳性鉴定结果.对系统鉴定异常的菌种,采用传统鉴定方法进行氧化酶、脲酶、动力、硫化氢测定和碱性复红敏感性试验、噬菌体裂解试验及A/M单相特异性血清凝集试验进行菌种的重新判定.结果 对138株布鲁杆菌菌株的全自动微生物分析系统生化鉴定结果显示,布鲁杆菌属的主要阳性鉴定指标为L-脯氨酸芳胺酶(ProA)、酪氨酸芳胺酶(TyrA)、尿素酶(URE)、氨基乙酸芳胺酶(GlyA)、乳酸盐产碱(1LATK)、ELLMAN (ELLM);与系统值比较,全部菌株生化功能相似率为97.99%(135.23/138),其中标准菌株为96.71%(16.44/ 17),实验菌株为98.17%(118.79/121);菌株鉴定需要的时间为6.1 ~ 7.7 h,其中标准菌株为7.3 h,实验菌株为6.9 h.区分是否为布鲁杆菌属的阳性鉴定指标为ProA、TyrA、URE、GlyA;区分羊种布鲁杆菌的阳性指标为ELLM;区分牛种布鲁杆菌的阳性指标为1LATK;区分猪种布鲁杆菌的阳性指标为丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸芳胺酶(APPA);犬种无明显的阳性指标.从实验菌株中鉴定出4株人苍白杆菌,传统方法显示,氧化酶阳性、脲酶阳性、硫化氢阳性、动力阴性;碱性复红敏感性试验有抗性2株(牛种),敏感2株(猪种);硫堇实验敏感2株(牛种),有抗性2株(猪种);噬菌体裂解试� 展开更多
关键词 布鲁杆菌 鉴定 生化功能 全自动微生物分析仪
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内蒙古四子王旗家畜流产与人布鲁杆菌病感染的调查分析 被引量:8
14
作者 东日 殷文武 +6 位作者 范蒙光 王建忠 李金平 赵鸿雁 孙辉 鲁艳英 崔步云 《中国地方病防治》 2012年第1期43-45,共3页
目的调查内蒙古自治区四子王旗家畜流产情况,分析影响家畜流产的可能因素及其对当地牧民布病感染的影响。方法分阶段整群抽样入户问卷调查,对数据进行χ2检验、协方差的秩检验及Wilcoxon秩和检验进行分析。结果羊流产组和无流产组的人... 目的调查内蒙古自治区四子王旗家畜流产情况,分析影响家畜流产的可能因素及其对当地牧民布病感染的影响。方法分阶段整群抽样入户问卷调查,对数据进行χ2检验、协方差的秩检验及Wilcoxon秩和检验进行分析。结果羊流产组和无流产组的人布鲁杆菌病感染率差别显著(χ2=5.51,P<0.05)。羊免疫组与未免疫组的羊流产无统计学差异(χ2CMH=0.71,P>0.05)。羊免疫前与免疫后的流产数目无统计学差异(M=17.0,P>0.05)。结论四子王旗羊患布鲁杆菌病引起的流产是该地区人群布病感染的一个重要因素。该地区羊群免疫接种对降低羊群流产效果不显著。 展开更多
关键词 布鲁杆菌病 危险因素 内蒙古自治区
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利用多重聚合酶链反应和多色毛细管电泳分析布氏菌多位点可变数目串联重复序列 被引量:7
15
作者 姜海 荣蓉 +5 位作者 田国忠 赵娜 赵鸿雁 东日 赵赤鸿 崔步云 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期303-310,共8页
目的传统的布鲁氏菌多点可变数目串联重复序列分析方法涉及16个位点(MLVA-16),包括单重聚合酶链反应和琼脂糖凝胶电泳,一直以来都作为标准的基因分型方法,用于布病的病原监测和流行病学调查。然而,目前这种传统方法工作量较大,实验室间... 目的传统的布鲁氏菌多点可变数目串联重复序列分析方法涉及16个位点(MLVA-16),包括单重聚合酶链反应和琼脂糖凝胶电泳,一直以来都作为标准的基因分型方法,用于布病的病原监测和流行病学调查。然而,目前这种传统方法工作量较大,实验室间结果不宜比较;尤其是对大规模菌株进行基因分型或面临突发疫情时,急需一种高通量且快速的方法。方法用多重PCR和多色毛细管电泳方法建立一种可靠的,高通量的且自动化程度较高的MLVA-16改良分型系统,用82株菌进行测试。结果这种改良的MLVA-16分型系统具有很高的准确性,且具有快速和高通量的特点。结论改良的MLVA-16分型系统可用于基层布病实验室,为布病的病原监测提供高效的工具。 展开更多
关键词 多重PCR 多色毛细管电泳 布鲁氏菌 基因分型
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内蒙古布鲁氏菌临床分离株多位点序列分型研究 被引量:7
16
作者 刘志国 王妙 +4 位作者 刘日宏 赵鸿雁 东日 崔步云 夏咸柱 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期991-996,共6页
目的探讨临床分离布鲁氏菌的种群结构和遗传进化特征。方法布鲁氏菌标准参考菌株羊种16M,牛种544A和猪种1 330S作为对照菌株,采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)方法对内蒙古地区分离的116株羊种布鲁氏菌进行分析... 目的探讨临床分离布鲁氏菌的种群结构和遗传进化特征。方法布鲁氏菌标准参考菌株羊种16M,牛种544A和猪种1 330S作为对照菌株,采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)方法对内蒙古地区分离的116株羊种布鲁氏菌进行分析,确定待测菌株的序列型(STs),用软件BioNumerics(Version 5.0)构建菌株的最小生成树。结果116株羊种布鲁氏菌全部为ST8型,9个MLST位点的变异完全相同,分离株种群结构单一;羊种菌的生物型与ST型无明显关联,ST8型菌系该地区的主要流行菌种,并与内蒙古地区先前分离羊种布鲁氏菌进化程度相同,且有密切的亲缘关系。结论羊种布鲁氏菌的序列分型(ST)与常规生物分型存在差异,ST8型菌可能具有较强的环境适应性和致病性。MLST是一种较好的羊布鲁氏菌种群和进化关系研究方法,但更适合于具有较大时间跨度和地理分布菌株间的流行病学调查。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 临床分离株 MLST
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内蒙古羊种布鲁氏菌传播模式调查研究 被引量:7
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作者 刘志国 王妙 +3 位作者 赵鸿雁 东日 崔步云 李振军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期465-471,共7页
目的调查内蒙古羊种布鲁氏菌的传播模式和流行规律。方法采用AMOS-PCR对60株布鲁氏菌的种型进行鉴定,用Hunter-Gaston Diversity Index(HGDI)评价菌株的遗传多态性特征,采用MLVA-16分型方法对菌株进行基因分型,确定菌株的亲缘关系。结果... 目的调查内蒙古羊种布鲁氏菌的传播模式和流行规律。方法采用AMOS-PCR对60株布鲁氏菌的种型进行鉴定,用Hunter-Gaston Diversity Index(HGDI)评价菌株的遗传多态性特征,采用MLVA-16分型方法对菌株进行基因分型,确定菌株的亲缘关系。结果 60株试验菌全部为羊种布鲁氏菌。MLVA-16对菌株具有极高的分辨力,多态性指数为0.981;Panel 1,Panel 2A和Panel 2B的多态性指数分别为0.264,0.345和0.980;Panel 2B中Bru16位点的多态性指数最高,多态性指数为0.835。60株羊种布鲁氏菌聚为5大类37个基因型,其中15个共享基因型包括38株羊种布鲁氏菌,聚类率为63.3%(38/60),提示病例多为有流行病学关联的暴发流行;另外22株菌表现为独特基因型表明菌株无明显的流行病学相关性。共享基因型GT5包括2株分别分离自羊和骆驼的菌株且有相同的MLVA-16基因型,提示布鲁氏菌在羊和骆驼中循环传播;3个共享基因型(GT11、GT17和GT23)分别包含来自人和羊的菌株并呈现完全相同的MLVA-16基因型,表明羊是人间布病的传染源。GT35由3株分离自羊脾的菌株构成且共享相同的基因型,提示布病在羊中呈暴发流行。类群E由12个来自不同宿主(羊,牛,野生骆驼和人)的菌株构成,共享相同或相似的MLVA-16基因型,揭示了内蒙古羊种布鲁氏菌潜在的传播模式。结论疫羊是主要传染源,野生动物(骆驼)是贮藏宿主。羊种布鲁氏菌在羊牛(骆驼)和骆驼(羊牛)中相互循环传播,最后传染给人是内蒙古羊种布鲁氏菌的潜在传播模式。 展开更多
关键词 羊种布鲁氏菌 传播模式 内蒙古
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基于微滴式数字聚合酶链式反应技术检测布鲁氏菌病患者血液中布鲁氏菌核酸的研究
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作者 刘海雯 徐玲 +9 位作者 范玉 包桂英 陈俊杰 张天承 徐晴晴 赵鸿雁 东日 田国忠 任锋 姜海 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期751-755,共5页
目的本研究旨在建立一种基于微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)的检测方法,能够实现对布鲁氏菌病(布病)患者血液中布鲁氏菌核酸的定量与精准检测。方法以布鲁氏菌Bcsp31基因为靶基因,设计引物与探针并构建pUC57-Bcsp31重组阳性质粒,评价d... 目的本研究旨在建立一种基于微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)的检测方法,能够实现对布鲁氏菌病(布病)患者血液中布鲁氏菌核酸的定量与精准检测。方法以布鲁氏菌Bcsp31基因为靶基因,设计引物与探针并构建pUC57-Bcsp31重组阳性质粒,评价ddPCR方法检测布鲁氏菌的灵敏度、重复性与特异度。此外,收集疑似布病患者血液120份,采用ddPCR方法对样本中布鲁氏菌DNA载量进行定量检测。结果本研究建立的ddPCR检测布鲁氏菌的方法具有很高的灵敏性,最低检出限为100拷贝/μL,并且对布鲁氏菌的检测呈现出良好的特异性与准确性。120份血液样本中,ddPCR方法检出阳性103份,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法检出阳性52份。105份抗体阳性样本中,ddPCR方法与qPCR方法分别检出阳性93份和51份,阳性率分别为88.57%和49.52%。15份抗体阴性样本中,两种方法分别检测出阳性12份和1份。结论本研究建立了一种基于ddPCR方法的高灵敏度、高特异度的检测布鲁氏菌的方法,能够实现布病患者血液样品中布鲁氏菌核酸的定量与精准检测。尤其对于抗体阴性的疑似患者早期布病筛查具有重要意义。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 微滴式数字聚合酶链式反应 定量检测
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布鲁氏菌104M疫苗株A抗原组分解析与候选蛋白筛选
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作者 韩阔 赵鸿雁 +6 位作者 东日 肖迪 王磊 范玉 徐晴晴 田国忠 姜海 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期756-760,共5页
目的探究布鲁氏菌104M疫苗株A抗原的主要成分,从A抗原中筛选潜在候选蛋白,为布鲁氏菌新型疫苗的研制提供基础。方法本研究利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝染色、鲎试剂检测脂多糖、脂多糖银染对布鲁氏菌104M疫苗株A抗... 目的探究布鲁氏菌104M疫苗株A抗原的主要成分,从A抗原中筛选潜在候选蛋白,为布鲁氏菌新型疫苗的研制提供基础。方法本研究利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝染色、鲎试剂检测脂多糖、脂多糖银染对布鲁氏菌104M疫苗株A抗原的主要成分进行解析,通过与免疫绵羊血清的蛋白免疫印记实验,选取有印迹的部分切胶酶解,利用液相色谱–串联质谱对这部分蛋白进一步解析,通过抗原分析工具VaxiJen和毒力蛋白分析工具VirulentPred,筛选布鲁氏菌A抗原评分0.6以上的毒力相关蛋白作为潜在的候选疫苗。结果布鲁氏菌A抗原是一种淡黄色棉花糖状、质量较轻的物质,主要由蛋白和脂多糖构成,对A抗原的蛋白质组鉴定显示,104M A抗原共有1142种蛋白,能够与绵羊血清反应的蛋白有172种,VaxiJen抗原性评分在0.6以上的有87种蛋白,其中毒力相关蛋白有38种。结论布鲁氏菌104M疫苗株A抗原的主要成分是蛋白质和脂多糖,对筛选到的A抗原中的候选蛋白需要进一步的实验来测试这些蛋白质的免疫原性和保护水平以设计出针对布鲁氏菌病更为有效和安全的疫苗。 展开更多
关键词 布鲁氏菌A抗原 脂多糖 抗原筛选 候选蛋白 疫苗
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布鲁氏菌病患者血液中布鲁氏菌与临床症状 和抗体水平关联性研究 被引量:2
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作者 包桂英 陈俊杰 +5 位作者 张天承 东日 赵鸿雁 姜海 范玉 田国忠 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期432-435,共4页
目的 应用巢式聚合酶链式反应(PCR)方法检测布鲁氏菌病(布病)患者血液中布鲁氏菌DNA,分析其与临床症状和抗体水平之间的关系。方法对门诊就诊患者进行个案调查,包括临床症状、既往史、接触史、用药史等。布病可疑患者,采集血液,分离血清... 目的 应用巢式聚合酶链式反应(PCR)方法检测布鲁氏菌病(布病)患者血液中布鲁氏菌DNA,分析其与临床症状和抗体水平之间的关系。方法对门诊就诊患者进行个案调查,包括临床症状、既往史、接触史、用药史等。布病可疑患者,采集血液,分离血清,进行血清试管凝集试验(SAT),检测布鲁氏菌抗体,按照《布鲁氏菌病诊断》(WS269-2019)进行布病临床诊断。同时对患者抗凝全血进行细菌DNA提取,应用巢式PCR方法检测血液中布鲁氏菌DNA。对不同症状、抗体水平血液中布鲁氏菌细菌数之间的关系进行统计学分析。结果118例布病患者中,男性78例,女性40例。患者的临床症状主要有发热、乏力、头痛、胸背酸痛、腰痛、四肢酸痛、关节肌肉疼痛、出汗、失眠和睾丸痛等。118例布病患者血液标本中,布鲁氏菌DNA阳性率为63.56%(75/118),布鲁氏菌细菌数中位数(MED)为7拷贝/mL血液,四分位数(IQR)为2~17拷贝/mL血液。118例布病患者中,SAT检测阳性率为38.14%(45/118)。118例布病患者中,新发病例和复诊病例分别占55.08%(65/118)和44.92%(53/118),新发病例和复诊病例血液中布鲁氏菌DNA阳性率分别为72.31%(47/65)和52.83%(28/53)。47例新发病例血液标本中布鲁氏菌细菌数MED为3拷贝/mL血液,IQR为2~26拷贝/mL血液;28例复诊病例血液标本中布鲁氏菌细菌数MED为4拷贝/mL血液,IQR为2~12拷贝/mL血液。结论巢式PCR方法检测布病疑似患者血液中布鲁氏菌DNA,有助于布鲁氏菌感染或血清抗体阴性患者的诊断,血液中布鲁氏菌DNA的检测和血清学检查相结合可以有效地诊断布病。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 症状 布鲁氏菌 布鲁氏菌抗体 巢式聚合酶链式反应
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