猪生殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：44

1

作者 宋志军 宋长绪 +6 位作者 杨增岐 朱道中 武占银 蒋智勇 林志雄 刘燕玲 张福良 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期98-102,共5页

根据GenBank登录的PRRSV保守基因序列设计合成了引物和探针,并对其进行了筛选;对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。同时用建立的检测方法对组织病料进行了检测,并与常规RT-PCR做了对比。结果显示,... 根据GenBank登录的PRRSV保守基因序列设计合成了引物和探针,并对其进行了筛选;对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。同时用建立的检测方法对组织病料进行了检测,并与常规RT-PCR做了对比。结果显示,所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法灵敏度可达5.0×100拷贝/μL,比常规RT-PCR灵敏度高100倍。用该方法对东莞、增城、湛江等地的猪血清和多种组织样品进行了检测。结果,该方法与常规RT-PCR检测方法的阳性符合率为100%。用该方法对3份不同的组织样品进行了重复检测,结果表明,该方法具有良好的重复性,可满足当前PRRS的诊断需要。 展开更多

关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒 实时定量RT-PCR TaqMan荧光探针

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猪圆环病毒2型套式PCR检测方法的建立及应用 被引量：20

2

作者 王贵平 蒋智勇 +4 位作者 宋长绪 高向阳 赵亚华 林志雄 朱道中 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期26-28,共3页

根据GenBank登录的猪圆环病毒 2型 (PCV2 )的全基因组序列 ,设计了 2对引物 ,建立了检测PCV2的套式PCR方法。对该方法用序列分析、酶切等方法进行了鉴定。同时用该套式PCR方法对华南地区 2 87个猪场的 15 6 0份样品进行了检测 ,结果 ,98... 根据GenBank登录的猪圆环病毒 2型 (PCV2 )的全基因组序列 ,设计了 2对引物 ,建立了检测PCV2的套式PCR方法。对该方法用序列分析、酶切等方法进行了鉴定。同时用该套式PCR方法对华南地区 2 87个猪场的 15 6 0份样品进行了检测 ,结果 ,983份为PCV2阳性 ,阳性率为6 3%。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 套式PCR 检测方法 流行病学

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应用地高辛标记的PCR-ELISA技术快速检测转基因水稻 被引量：14

3

作者 陈茹 林志雄 +2 位作者 刘琳琳 朱道中 鱼海琼 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期78-81,共4页

应用地高辛标记的PCR-ELISA(Dig-PCR-ELISA)技术进行转基因水稻检测研究。针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒(CaMV)35S 启动子(p35S)、胭脂碱合成酶(NOS)终止子(Tnos),筛选标记潮霉素磷酸转移酶基因(hpt,hpt)、β-葡萄糖苷酸酶... 应用地高辛标记的PCR-ELISA(Dig-PCR-ELISA)技术进行转基因水稻检测研究。针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒(CaMV)35S 启动子(p35S)、胭脂碱合成酶(NOS)终止子(Tnos),筛选标记潮霉素磷酸转移酶基因(hpt,hpt)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)、抗草丁膦除草剂基因(bar),建立Dig-PCR-ELISA检测方法;能进行半定量检测,敏感性试验表明,Dig-ELISA检测比常规电泳检测可提高敏感性达1 000倍,可检测含量达0.1％的GMO样品。全过程可在24 h内完成。 展开更多

关键词 转基因水稻 地高辛标记 PCR-EHSA技术 转基因检测 花椰菜花叶病毒 胭脂碱合成酶

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猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：12

4

作者 张福良 宋长绪 +5 位作者 杨鸣琦 朱道中 蒋智勇 林志雄 刘燕玲 宋志军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期248-250,共3页

通过条件优化，以定量的10倍系列稀释质粒pMD—ORF2（含PCV2-ORF2全基因）为标准品，进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，建立了猪圆环病毒2型（PCV2）的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达1．0×10^6拷贝／μL，线性范围... 通过条件优化，以定量的10倍系列稀释质粒pMD—ORF2（含PCV2-ORF2全基因）为标准品，进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，建立了猪圆环病毒2型（PCV2）的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达1．0×10^6拷贝／μL，线性范围为10^9～10^0，达10个数量级；对起始浓度为1．0×10^6、1．0×10^5、1．0×10^4拷贝／μL的标准品的最终实际测得值分别为1．000×10^6、0．935×10^5、0．987×10^4拷贝／μL，变异系数分别为2．527％、2．067％、2．092％。该方法的检测灵敏度与套式PCR（nPCR）相当，甚而高于常规PCR。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 荧光定量PCR TAQMAN探针 检测

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副猪嗜血杆菌环介导等温扩增检测方法的建立 被引量：14

5

作者 朱杰仪 谭实勇 +4 位作者 曾小娜 刘健 刘中勇 朱道中 罗满林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期204-207,共4页

本研究旨在建立检测副猪嗜血杆菌(Hps)的新方法。根据GenBank上发表的不同血清型Hps的16S rRNA序列,找出高度保守区域,再针对该区域设计了4条特异性引物,建立了Hps环介导等温扩增法(LAMP)。试验结果表明,LAMP方法在恒温(63℃)条件下特... 本研究旨在建立检测副猪嗜血杆菌(Hps)的新方法。根据GenBank上发表的不同血清型Hps的16S rRNA序列,找出高度保守区域,再针对该区域设计了4条特异性引物,建立了Hps环介导等温扩增法(LAMP)。试验结果表明,LAMP方法在恒温(63℃)条件下特异性强,比PCR方法敏感100倍,鉴于目前副猪嗜血杆菌分离培养和鉴定的复杂性,LAMP操作简单、成本低,整个扩增反应在1 h内即可完成,为检测Hps提供了一个快速简便的分子生物学方法。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 16S RRNA 环介导等温扩增技术

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用地高辛标记的PCR-ELISA技术快速检测转基因鱼 被引量：12

6

作者 陈茹 林志雄 +3 位作者 刘琳琳 朱道中 罗长保 颜思通 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期13-17,共5页

取含有小鼠重金属螯合蛋白 (mMT)基因启动子及人生长激素 (hGH)基因的鱼样品 ,以Qiagene核酸纯化技术对鱼组织DNA进行纯化。常规PCR检测显示 ,mMT启动基因和hGH基因的PCR产物分别为2 4 0bp和 130bp ,与设计相符。PCR产物的核酸测序结果... 取含有小鼠重金属螯合蛋白 (mMT)基因启动子及人生长激素 (hGH)基因的鱼样品 ,以Qiagene核酸纯化技术对鱼组织DNA进行纯化。常规PCR检测显示 ,mMT启动基因和hGH基因的PCR产物分别为2 4 0bp和 130bp ,与设计相符。PCR产物的核酸测序结果证实其扩增产物具特异性。地高辛 PCR(Dig PCR)标记反应显示 ,2个基因均产生 1条Dig标记的特异产物带。Dig PCR ELISA检测敏感性试验显示 ,对mMT启动子和hGH基因的检测敏感性可达 10 - 3,与常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳检测方法相比 ,检测敏感性可提高至 10 0～ 10 0 0倍。试验证明 ,针对mMT和hGH基因所建立的Dig PCR 展开更多

关键词 Dig-PCR-ELISA 小鼠重金属螯合蛋白基因启动子 人生长激素基因 转基因鱼 快速检测

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猪瘟病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量：10

7

作者 刘中勇 曾小娜 +4 位作者 朱道中 房红莹 蒋启荣 吴志强 罗满林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期71-74,共4页

本研究设计了4条针对猪瘟病毒6个位点的特异性引物,建立了一种灵敏、特异、快速的猪瘟病毒体外等温扩增(RT-LAMP)检测方法,所建立的方法能够特异地检测出猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的存在,检测PRV、PRRSV、PCV-2等病... 本研究设计了4条针对猪瘟病毒6个位点的特异性引物,建立了一种灵敏、特异、快速的猪瘟病毒体外等温扩增(RT-LAMP)检测方法,所建立的方法能够特异地检测出猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的存在,检测PRV、PRRSV、PCV-2等病毒均为阴性;灵敏度高,所建立的CSFV-RT-LAMP方法灵敏度为10-5,总RNA的检测阈值约为1pg;反应快速,整个扩增反应可在1h内完成;操作简单,不需要PCR仪等复杂的仪器,结果可经肉眼观察及电泳检测。本试验为猪瘟的现场快速检测提供更加简便、快速的方法,可以满足基层检疫的需要。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 环介导等温扩增技术

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猪圆环病毒I型荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：9

8

作者 张福良 朱道中 宋长绪 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第1期8-10,共3页

以定量的10倍系列稀释的质量pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增，建立了PCV1检测的荧光定量PCR方法。结果表明该方法检测灵敏度可达1．0×10^4拷贝／μL，线性范围为10^10～10^1；对起始浓度为1．0×10^2、1．0×10^6、1... 以定量的10倍系列稀释的质量pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增，建立了PCV1检测的荧光定量PCR方法。结果表明该方法检测灵敏度可达1．0×10^4拷贝／μL，线性范围为10^10～10^1；对起始浓度为1．0×10^2、1．0×10^6、1．0×10^6拷贝／μL的标准品的最终实际测得值分别为1．001×10^7、0．869×10^6和0．988×10^5拷贝／μL，变异系数分别为4．758％、1．865％和3．836％，说明此方法具有良好的准确性和重现性。对阳性组织病料的检测表明该方法的检测灵敏度高出常规PCR，与套式PCR（nPCR）具有相近的灵敏度。 展开更多

关键词 猪圆环病毒Ⅰ型 荧光定量PCR TAQMAN探针

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猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测标准阳性模板的构建 被引量：4

9

作者 张福良 靳玉芬 +2 位作者 郝贵增 宋长绪 朱道中 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期49-53,共5页

采用PCR方法克隆了猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因，将构建的重组质粒pMD-ORF2作为PCV2实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测的标准阳性模板，并对该模板进行了酶切及测序鉴定。结果显示，此模板特异性强，稳定性好，一20℃保存20d无显著变化... 采用PCR方法克隆了猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因，将构建的重组质粒pMD-ORF2作为PCV2实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测的标准阳性模板，并对该模板进行了酶切及测序鉴定。结果显示，此模板特异性强，稳定性好，一20℃保存20d无显著变化；对起始浓度为1．0×10^6、1．0×10^5、1．0×10^4拷贝／弘L的pMD-ORF2标准品的最终实际测得值分别为1．000×10^4、0．935×10^5和0．987×10^4，其变异系数分别为2．527％、2．067％和2．092％。表明，以此模板进行FQ—PCR具有良好的准确性和重现性。该模板的检测线性范围宽，当稀释度为1．0×10^9～1．0×10^5拷贝／μL时，相关系数r=0．989。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 实时荧光定量PCR 模板

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逆转录环介导等温扩增技术检测H3亚型猪流感病毒 被引量：8

10

作者 刘中勇 朱道中 +4 位作者 李少璃 冀君 毕英佐 谢青梅 曹永长 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第7期1-5,共5页

基于环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种用于快速检测H3亚型猪流感病毒的方法。根据GenBank中收录的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)HA基因保守区的序列,设计一组对应HA序列6个区域的4条特异性引物,建立RT-LAMP反应体系;经优化,确定了最佳... 基于环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种用于快速检测H3亚型猪流感病毒的方法。根据GenBank中收录的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)HA基因保守区的序列,设计一组对应HA序列6个区域的4条特异性引物,建立RT-LAMP反应体系;经优化,确定了最佳的LAMP反应条件。扩增后产物形成的焦磷酸离子和溶液中的镁离子结合而形成焦磷酸镁沉淀,结果可视。同时用特异性内切酶HhaⅠ对所获得的产物进行酶切鉴定,所得的酶切产物大小与理论值完全符合。用已建立的RT-LAMP技术检测临床样品,检测结果与RT-PCR方法符合率均达到100%。结果表明,本研究建立的RT-LAMP检测猪流感病毒方法,操作简单,灵敏度高,特异性强,是一种适用于现场诊断的检测技术。 展开更多

关键词 H3亚型猪流感病毒 血凝素 逆转录环介导等温扩增

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牛传染性鼻气管炎病毒LUX^(TM)新型荧光PCR检测方法的建立 被引量：7

11

作者 陈茹 毕英佐 +4 位作者 曹永长 林志雄 赵吟 罗琼 朱道中 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期303-307,共5页

本研究针对牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)高度保守的gC基因设计单标记并具有自身荧光淬灭功能的LUX^(TM)引物,建立LUX^(TM)新型实时荧光PCR方法用于快速检测IBRV。该方法对四株IBRV细胞培养物的... 本研究针对牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)高度保守的gC基因设计单标记并具有自身荧光淬灭功能的LUX^(TM)引物,建立LUX^(TM)新型实时荧光PCR方法用于快速检测IBRV。该方法对四株IBRV细胞培养物的检测均呈典型阳性反应,而对其它动物疱疹病毒以及健康牛组织DNA和细胞对照的检测结果为阴性,检测时间包括核酸提取仅需1h～2h。试验表明,LUX^(TM)荧光PCR法对IBRV细胞增殖病毒液的检测敏感性可达0.04 TCID_(50),比病毒分离敏感性至少提高10倍;对10倍系列稀释的纯化IBRV核酸样品,LUX^(TM)荧光PCR的检测敏感性比常规PCR可提高10~3倍。将病毒液添加到健康牛精液和血液样品中,该荧光PCR可检测到牛冻存精液中40 TCID_(50)、牛抗凝全血、血清和临床精液中0.04 TCID_(50)的病毒,说明对临床样品的检测有效。本研究所建立的LUX^(TM)荧光PCR方法快速敏感,适合应用于活牛及其遗传物质的进出口检疫、养牛业疾病防控等领域对IBRV的快速检测。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 LUX^TM引物 实时荧光PCR 牛疱疹病毒1型

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禽败血支原体病的预防与控制 被引量：7

12

作者 朱道中 吴红专 《中国家禽》 北大核心 2000年第4期45-46,共2页

关键词 禽败血支原体病 呼吸道疾病 症状 诊断 防治

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简介鹅的三种病毒性疾病——鹅的鸭瘟、鹅的副粘病毒病、禽流感 被引量：3

13

作者 吴红专 朱道中 +2 位作者 王星 贺东生 刘福安 《中国禽业导刊》 1999年第4期44-45,共2页

近年来，随着养殖业集约化程度的不断提高，新出现的或重新出现的传染病种类在不断增加，水禽的疾病也呈上升趋势，特别是近年来鹅的病毒性疾病除了小鹅瘟以外，又相继出现了鹅的鸭瘟、鹅的副粘病毒病、鹅的禽流感等新病，这些疾病对广... 近年来，随着养殖业集约化程度的不断提高，新出现的或重新出现的传染病种类在不断增加，水禽的疾病也呈上升趋势，特别是近年来鹅的病毒性疾病除了小鹅瘟以外，又相继出现了鹅的鸭瘟、鹅的副粘病毒病、鹅的禽流感等新病，这些疾病对广大养殖户和禽病工作者来说还比较陌生... 展开更多

关键词 副粘病毒病 病毒性疾病 低致病性禽流感 禽流感病毒 鸭瘟病毒 小鹅瘟 致病力 油乳剂疫苗 分离鉴定 巴氏杆菌病

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微量补体结合试验检测牛、羊副结核病的研究 被引量：6

14

作者 颜思通 林志雄 +2 位作者 朱道中 鱼海琼 曹志玲 《中国动物检疫》 CAS 2004年第11期23-26,共4页

采用《中华人民共和国出入境检验检疫行业标准》"副结核病补体结合试验操作规程"方法(简称常量法)和微量补体结合试验(简称微量法)检测3677头进口牛羊的副结核病抗体并进行比较。结果表明,常量法和微量法的溶血素效价测定值相... 采用《中华人民共和国出入境检验检疫行业标准》"副结核病补体结合试验操作规程"方法(简称常量法)和微量补体结合试验(简称微量法)检测3677头进口牛羊的副结核病抗体并进行比较。结果表明,常量法和微量法的溶血素效价测定值相同,补体效价测定值近似,阴性血清对照、抗原对照、补体对照、红细胞对照、血清抗补体结合对照结果均相同,阳性对照血清效价微量法比常量法提高1个滴度,被检血清的阳性检出率微量法高于常量法。比较37℃水浴及37℃恒温培养箱环境下的微量法补体结合试验结果,溶血素效价、补体效价、各项对照试验结果完全相同,被检血清在37℃水浴反应更加充分。比较用变态试验和补体结合试验检验3677头牛羊副结核病的结果、以及用补体结合试验、变态反应和酶联免疫吸附试验方法同时检测2024头牛的结果,发现它们的相关性很小。 展开更多

关键词 牛 羊 副结核病 微量补体结合试验 抗体检测

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GICA检测高致病性禽流感抗体方法的建立 被引量：3

15

作者 林志雄 田纯见 +3 位作者 朱道中 金业 王海涛 金大力 《检验检疫科学》 2005年第2期12-14,共3页

〔目的〕　建立可快速、简便地检测微量禽流感的抗体的方法。〔方法〕　利用灭活的高致病性禽流感病毒H5N1建立禽流感病毒浓缩纯化样品体系,获得大量纯度较高的禽流感病毒(1:5 12 )。将2 .80mg/mL纯化病毒与一定大小的胶体金颗粒偶联,... 〔目的〕　建立可快速、简便地检测微量禽流感的抗体的方法。〔方法〕　利用灭活的高致病性禽流感病毒H5N1建立禽流感病毒浓缩纯化样品体系,获得大量纯度较高的禽流感病毒(1:5 12 )。将2 .80mg/mL纯化病毒与一定大小的胶体金颗粒偶联,吸附在玻璃纤维上,制作的高致病性禽流感病毒抗体胶体金检测试纸条,用于高致病性禽流感定量(合格)检测。〔结果〕　显色反应良好,条带稳定,检测获得成功。〔结论〕　其反应特异性、敏感性、重复性良好,具备微量、快速、简便的特点,适合于进出境现场检疫和疫情普查。 展开更多

关键词 检测 抗体方法 高致病性禽流感病毒 H5N1 玻璃纤维 病毒抗体 显色反应 疫情普查 现场检疫 胶体金 试纸条 特异性 敏感性 重复性 进出境 微量 简便 纯化

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基于TaqMan探针的猪圆环病毒1型实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：4

16

作者 张福良 宋长绪 +1 位作者 朱道中 徐维加 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期477-481,共5页

采用PCR方法克隆了猪圆环病毒1型(PCV1)ORF2基因,构建了重组质粒pMD-ORF2并将其作为标准阳性模板。通过对反应条件进行优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了检测PCV1的荧光定量PCR方法。结果显示... 采用PCR方法克隆了猪圆环病毒1型(PCV1)ORF2基因,构建了重组质粒pMD-ORF2并将其作为标准阳性模板。通过对反应条件进行优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了检测PCV1的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的检测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL;对起始浓度为1.0×107、1.0×106、1.0×105拷贝/μL标准品的最终实际测得值分别为1.001×107、0.869×106和0.988×105拷贝/μL,变异系数分别为4.758%、1.865%和3.836%。表明,此方法具有良好的准确性和重现性。 展开更多

关键词 猪圆环病毒1型 实时荧光定量PCR TAQMAN探针

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病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备 被引量：5

17

作者 段燕喻 陈茹 +4 位作者 吴晓薇 朱道中 林志雄 田纯见 刘志玲 《中国动物检疫》 CAS 2018年第2期102-107,共6页

利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至... 利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至约10~8 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异<5%;稳定性检验表明,室温(20~25℃)保存7 d、冷藏(2~8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算。核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×10~8 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品。 展开更多

关键词 病毒性神经坏死病 实时定量RT-PCR 标准物质

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结核分枝杆菌和牛分枝杆菌TaqMan~荧光PCR检测的建立 被引量：4

18

作者 陈茹 刘中勇 +5 位作者 杨国海 曾碧健 朱道中 林志雄 高小博 刘宁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期154-158,共5页

目的对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别建立荧光PCR快速检测方法。结核分枝杆菌荧光PCR对H37Rv标准菌株、结核分枝杆菌临床分离株的检测结果呈典型阳性反应，牛分枝杆菌荧光PCR对牛分枝杆菌标准菌株、BCG菌株的检测结果呈典型阳性反应，... 目的对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别建立荧光PCR快速检测方法。结核分枝杆菌荧光PCR对H37Rv标准菌株、结核分枝杆菌临床分离株的检测结果呈典型阳性反应，牛分枝杆菌荧光PCR对牛分枝杆菌标准菌株、BCG菌株的检测结果呈典型阳性反应，对其它分枝杆菌菌株以及常见微生物样品为阴性反应。两种荧光PCR对对应阳性重组质粒模板的检测灵敏度可达单个基因拷贝，对结核分枝杆菌或BCG标准菌株的检测灵敏度可达单个菌细胞。对临床样品的检测结果显示，荧光PCR对模拟感染奶样、血样的检测灵敏度可达单个菌细胞。所建立的方法，全过程包括血样、奶样、痰液等临床样品的前处理、核酸提取和荧光PCR检测，可在5～6h内完成。采用上述荧光PCR方法从临床采集的疑似病人痰液中检出多份结核分枝杆菌阳性样品。 展开更多

关键词 结核病 荧光PCR 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌

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影响血凝抑制试验的因素 被引量：3

19

作者 朱道中 林志雄 颜思通 《养禽与禽病防治》 2002年第7期31-32,共2页

关键词 制约因素 抗原 血清 红细胞 稀释液 反应板 兽医临床医学 血凝抑制试验

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牛地方流行性白血病液相蛋白芯片检测方法的建立 被引量：4

20

作者 刘志玲 陈茹 +4 位作者 舒鼎铭 马静云 朱道中 吴晓薇 林志雄 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期26-30,共5页

应用xMAP液相芯片技术原理,以原核表达的重组牛白血病病毒gp51蛋白为抗原,建立了检测牛白血病病毒抗体的LiquiChip液相蛋白芯片检测方法,并进行了特异性、敏感性、重复性与稳定性试验。结果表明,该方法对牛白血病病毒阳性血清检测阳性,... 应用xMAP液相芯片技术原理,以原核表达的重组牛白血病病毒gp51蛋白为抗原,建立了检测牛白血病病毒抗体的LiquiChip液相蛋白芯片检测方法,并进行了特异性、敏感性、重复性与稳定性试验。结果表明,该方法对牛白血病病毒阳性血清检测阳性,对其他常见牛病毒阳性血清检测阴性,表明特异性好;液相蛋白芯片方法对牛白血病病毒抗体的检测敏感性可达119.7ng/μL,对多份牛白血病病毒阳性血清的检测结果显示该方法的检测敏感性与商品化ELISA试剂盒无显著差异;对3份牛白血病病毒阳性血清进行4次重复检测,批内、批间的变异系数均低于10%。所制备的偶联微球芯片保存3个月,其检测结果无显著差异。采用该方法对169份临床牛血清样品进行检测,检出阳性率达57.4%,该检测结果与瑞典进口ELISA试剂盒检测结果的符合率为94.67%。本方法为牛地方流行性白血病的进出境检疫、疫病监测和流行学调查研究提供了一种特异、敏感的新型快速检测技术。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 gp51基因 xMAP液相蛋白芯片

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