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D-半乳糖致衰老动物模型的建立及其检测方法 被引量:105
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作者 朱亚珍 朱虹 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期617-619,共3页
D-半乳糖衰老动物模型是由我国学者龚国清等在1991年构建的。与其它几种衰老动物模型如SAMP系小鼠衰老模型,臭氧损伤衰老模型,去胸腺衰老模型,自然衰老模型等相比,该模型简便易行,价格低廉,结果稳定,因而得到广泛运用。鉴于该模型近年... D-半乳糖衰老动物模型是由我国学者龚国清等在1991年构建的。与其它几种衰老动物模型如SAMP系小鼠衰老模型,臭氧损伤衰老模型,去胸腺衰老模型,自然衰老模型等相比,该模型简便易行,价格低廉,结果稳定,因而得到广泛运用。鉴于该模型近年来的运用和发展,且众文献中的检测指标各有侧重,本文拟对该模型构建方法和原理以及检测指标从行为学水平,生化水平,形态学水平,分子生物学水平等方面由浅入深进行综述。 展开更多
关键词 D-半乳糖 衰老 动物模型
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NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响 被引量:31
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作者 王震 刘乾 +2 位作者 陈琦 朱荣 朱虹 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期333-338,共6页
目的探讨NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响。方法免疫组织化学SP法、即时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测10例新鲜乳腺浸润性导管癌和27例石蜡包埋乳腺癌组织中NDRG1蛋白和mRNA... 目的探讨NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响。方法免疫组织化学SP法、即时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测10例新鲜乳腺浸润性导管癌和27例石蜡包埋乳腺癌组织中NDRG1蛋白和mRNA的表达。脂质体介导NDRG1基因瞬时转染高侵袭高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231;用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入法、流式细胞术观察NDRG1基因转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;细胞体外侵袭实验和迁移实验观察转染后细胞侵袭和迁移能力的变化。结果NDRG1蛋白和mRNA表达分别为:无转移的乳腺癌组织阳性率为100%(14/14)和0·82±0·14,而有转移的乳腺癌组织中为69·2%(9/13)和0·17±0·11,均明显降低;对两株细胞的检测中,高侵袭高转移的MDA-MB-231细胞株中NDRG1mRNA的表达水平(0·14±0·02)明显低于低侵袭低转移的MCF7细胞株(1·51±0·11)。NDRG1基因瞬时转染MDA-MB-231细胞后,与未转染组和pEGFP-N3组相比,pEGFP-NDRG1-N3转染组中,细胞BrdU掺入率降低,细胞周期G0/G1期比例增高,S期比例明显减低;同时细胞体外侵袭能力下降,而体外迁移能力则差异无统计学意义。结论NDRG1基因的表达与乳腺癌的转移呈负相关关系,提示该基因可望成为早期预测乳腺癌转移的分子生物学标记物之一;NDRG1基因通过脂质体转染高侵袭高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,可抑制肿瘤细胞增殖、降低其侵袭能力,提示其可作为一个候选的肿瘤转移抑制基因,并有望成为乳腺癌基因治疗的新的候选基因。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 肿瘤转移 基因 myc 转染
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HER2/neu过表达通过PI3K/Akt通路对乳腺癌细胞MCF7中p53基因表达及细胞生长和放疗敏感性的影响 被引量:19
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作者 郑莉 任加强 +2 位作者 陈琦 张慧萍 朱虹 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期594-597,共4页
目的研究HER2/neu基因过表达通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)通路对乳腺癌细胞MCF7野生型p53基因表达、细胞增殖及对γ射线照射敏感性的影响。方法以脂质体介导的HER2/neu基因转染MCF7细胞,用G418筛选阳性克隆。通过Westernblot鉴定HER2/neu... 目的研究HER2/neu基因过表达通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)通路对乳腺癌细胞MCF7野生型p53基因表达、细胞增殖及对γ射线照射敏感性的影响。方法以脂质体介导的HER2/neu基因转染MCF7细胞,用G418筛选阳性克隆。通过Westernblot鉴定HER2/neu蛋白的表达,并检测p53、信号转导分子Akt和pAkt蛋白含量的变化及PI3K通路抑制剂LY294002对上述蛋白表达水平的影响。以MTT法检测细胞增殖以及细胞对γ射线照射的敏感性。结果共获得18个稳定转染HER2/neu基因的阳性克隆,其中1个克隆有HER2/neu基因过表达。过表达HER2/neu的MCF7细胞pAkt蛋白含量升高,p53蛋白含量低于对照组细胞,LY294002能够抑制pAkt蛋白和p53蛋白的变化。同时,过表达HER2/neu基因的MCF7细胞生长速度高于对照组细胞,对γ射线照射治疗的敏感性降低,而LY294002能够抑制细胞生长并增强放射治疗的敏感性。结论MCF7细胞中HER2/neu基因的过表达,能够通过激活PI3K通路导致野生型p53蛋白含量减少、细胞增殖加快及放疗的敏感性降低,这可能是某些p53蛋白为野生型的肿瘤患者对治疗产生抗性的原因。 展开更多
关键词 过表达 HER2/NEU PI3K LY294002 治疗 Γ射线照射 乳腺癌细胞 MCF7细胞 阳性克隆 P53基因表达
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两种无机骨水泥对家兔内脏毒性的比较研究 被引量:16
4
作者 吴建国 俞永林 +4 位作者 刘昌胜 郭瀚 周仲文 朱虹 黄煌渊 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期707-710,共4页
目的研究磷酸镁骨水泥(magnesiumphosphate cement,MPC)及磷酸钙骨水泥(Calcium Phosphate Ce-ment,CPC)植入家兔体内后对其内脏的毒性反应。方法把50只家兔分成两组MPC植入组(32只),CPC植入组(18只),每只家兔在植入前抽血查肝功能丙氨... 目的研究磷酸镁骨水泥(magnesiumphosphate cement,MPC)及磷酸钙骨水泥(Calcium Phosphate Ce-ment,CPC)植入家兔体内后对其内脏的毒性反应。方法把50只家兔分成两组MPC植入组(32只),CPC植入组(18只),每只家兔在植入前抽血查肝功能丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和肾功能尿素氮(Bun)、肌酐(Cr)。把MPC和CPC分别植入家兔股骨髁部,在术后24h及1、2、4、8、12周抽血查肝、肾功能。家兔处死后取出肝脏、肾脏、心脏、脑组织等做病理检查。结果①MPC植入家兔前后相比较,其对家兔的肝、肾功能无影响;②CPC植入家兔前后相比较,其对家兔的肝、肾功能无影响;③分别对植入MPC和CPC的家兔的肝、肾功能相比较,差别无统计意义;④全部家兔肝、肾、心脏及脑组织无病理变化。结论MPC与CPC一样,对家兔内脏无毒性作用。 展开更多
关键词 磷酸镁骨水泥 磷酸钙骨水泥 内脏毒性
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血小板源性生长因子对肺纤维母细胞前胶原合成的影响 被引量:15
5
作者 吴浩 张月娥 +4 位作者 许祖德 张锦生 杜卫东 朱虹 陈琦 《上海医科大学学报》 CSCD 1996年第3期199-202,共4页
观察血小板源性生长因子(PDGF)对肺纤维母细胞增殖、胶原合成的影响。以改良Kumar法,分离培养了大鼠肺纤维母细胞,并采用MTT、免疫细胞化学、原位分子杂交等方法。结果:PDGF对肺纤维母细胞具有促增殖作用,其浓度... 观察血小板源性生长因子(PDGF)对肺纤维母细胞增殖、胶原合成的影响。以改良Kumar法,分离培养了大鼠肺纤维母细胞,并采用MTT、免疫细胞化学、原位分子杂交等方法。结果:PDGF对肺纤维母细胞具有促增殖作用,其浓度在1~10μg/L之间呈剂量依赖性。PDGF作用下的纤维母细胞胞浆内线粒体和粗面内浆网明显增多,树状突起和棘状突起也较对照组增多,PDGF作用24h,肺纤继母细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达增强,作用48h胞浆内布满Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型前胶原蛋白,作用72h,大量前胶原则被分泌到细胞外基质中。结论:PDGF不仅可以促进大鼠肺纤维母细胞增殖、合成代谢旺盛和信息传递活跃,而且使其Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型前胶原合成增加。其调控机制之一是在转录水平上增强了前胶原mRNA表达的结果。 展开更多
关键词 PDGF 肺纤维母细胞 前胶原 细胞培养 肺纤维化
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滑膜肉瘤石蜡包埋组织SYT-SSX融合基因检测的临床病理意义 被引量:16
6
作者 魏永昆 孙孟红 +3 位作者 朱虹 许祖德 王坚 朱雄增 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期426-430,共5页
目的 探讨在石蜡包埋组织中检测SYT SSX融合基因的可行性及其对滑膜肉瘤的诊断、分型和鉴别诊断的价值。方法 收集滑膜肉瘤标本 38例 ,以恶性周围神经鞘膜瘤、纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、尤文肉瘤、血管外皮肉瘤和转移性腺癌作为对照 ,共... 目的 探讨在石蜡包埋组织中检测SYT SSX融合基因的可行性及其对滑膜肉瘤的诊断、分型和鉴别诊断的价值。方法 收集滑膜肉瘤标本 38例 ,以恶性周围神经鞘膜瘤、纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、尤文肉瘤、血管外皮肉瘤和转移性腺癌作为对照 ,共 40例 ,均为甲醛固定、石蜡包埋组织。用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测SYT SSX融合基因mRNA表达 ,以看家基因PBGD作为内对照检测mRNA质量。结果  78例标本中 6 4例 (占 82 1%)可检出PBGDmRNA表达。 38例滑膜肉瘤中 33例可检出SYT SSX融合基因mRNA表达 ,对照组无一例检出SYT SSX基因。去除PBGD及SYT SSX均阴性病例 1例 ,滑膜肉瘤SYT SSX融合基因检出率为 89 2 %(33/ 37)。 33例SYT SSX阳性滑膜肉瘤中 ,SYT SSX1型 2 2例 ,SYT SSX2型 6例 ,5例无法区分。融合基因类型与滑膜肉瘤组织学类型有关。 10例双相型滑膜肉瘤均为SYT SSX1型 ,而 18例单相型滑膜肉瘤中SYT SSX1型 12例 ,SYT SSX2型 6例 ,二者差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论  (1)从石蜡包埋组织中检测SYT SSX融合基因对滑膜肉瘤有较高的敏感性和特异性 ,可用于滑膜肉瘤的诊断和鉴别诊断 ;(2 )SYT SSX融合基因类型与滑膜肉瘤组织学类型相关 ,SYT SSX2型仅见于单相型。 展开更多
关键词 肉瘤 滑膜 诊断 基因融合 SYT-SSX
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滑膜肉瘤32例临床病理分析 被引量:16
7
作者 魏永昆 朱虹 +3 位作者 周平 许祖德 王坚 朱雄增 《诊断病理学杂志》 CSCD 2002年第2期73-76,共4页
目的 探讨滑膜肉瘤的形态特点和鉴别诊断。方法 收集原诊断为滑膜肉瘤的病例 66例、恶性周围神经鞘膜瘤 1 0例、纤维肉瘤 6例、平滑肌肉瘤 1 3例 ,进行形态学观察 ,并采用 1 0种抗体做免疫组化染色。结果  66例原诊滑膜肉瘤的病例中 ... 目的 探讨滑膜肉瘤的形态特点和鉴别诊断。方法 收集原诊断为滑膜肉瘤的病例 66例、恶性周围神经鞘膜瘤 1 0例、纤维肉瘤 6例、平滑肌肉瘤 1 3例 ,进行形态学观察 ,并采用 1 0种抗体做免疫组化染色。结果  66例原诊滑膜肉瘤的病例中 ,最终确诊为滑膜肉瘤者 2 7例 ,诊断准确率 40 .9%。最易误诊为滑膜肉瘤的肿瘤是恶性周围神经鞘膜瘤 ,占 31 .8%。 5例滑膜肉瘤最初误诊为其他梭形细胞肉瘤。组织学双向分化是其主要特点 ,分单相纤维型 ,双相型和低分化型 ,未见单相上皮型病例。免疫组化瘤细胞表达CK和 /或EMA ,同时vimentin阳性 ,S 1 0 0和PGP9.5也有一定阳性率。bcl 2蛋白阳性率高 ,多为弥漫性。其他几种梭形细胞肉瘤不表达CK和EMA ,bcl 2蛋白阳性率低或局灶阳性。结论 滑膜肉瘤是一种容易误诊的软组织肉瘤 ,免疫组化同时表达上皮性和间叶性标记。最易误诊的肿瘤是恶性周围神经鞘膜瘤。bcl 展开更多
关键词 滑膜肉瘤 鉴别诊断 免疫组织化学 病理
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磷酸镁骨黏合剂生物学固定强度及组织学的实验研究 被引量:12
8
作者 吴建国 俞永林 +6 位作者 刘昌胜 郭瀚 李信安 周仲文 朱虹 黄煌渊 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期230-232,共3页
目的研究磷酸镁骨黏合剂(MPC)植入家兔骨内的生物学固定强度,并作组织学观察。方法①生物力学部分:双侧股骨髁上钻孔后,分别植入MPC和磷酸钙骨水泥(CPC),术后分别饲养1、2、3、4、6和8 周后取出股骨下段作推出试验。②组织学部分:家兔... 目的研究磷酸镁骨黏合剂(MPC)植入家兔骨内的生物学固定强度,并作组织学观察。方法①生物力学部分:双侧股骨髁上钻孔后,分别植入MPC和磷酸钙骨水泥(CPC),术后分别饲养1、2、3、4、6和8 周后取出股骨下段作推出试验。②组织学部分:家兔右股骨髁上钻孔后填入MPC,术后分别饲养24 h、1、2周和 1、2、3个月,分批处死后取出标本,作不脱钙病理切片。结果①生物力学部分:在不同时间,MPC组的生物学固定强度均显著大于CPC组(P<0.05)。②组织学部分:2周时MPC开始吸收,2个月时MPC已完全吸收,骨孔愈合良好。结论 MPC的生物学固定强度比CPC大,且MPC可降解,可用于骨折黏合固定。 展开更多
关键词 磷酸镁骨黏合剂 生物力学 组织学 磷酸钙骨水泥
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大鼠肝纤维化模型中基质金属蛋白酶-2及其抑制物的表达 被引量:12
9
作者 吴运瑾 翟为溶 +2 位作者 庄丽 张月娥 朱虹 《上海医科大学学报》 CSCD 1999年第4期261-264,共4页
目的了解基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织型抑制剂(TIMP-2)在纤维化过程中的变化,分析它们在始动阶段的作用。方法用免疫组化和酶图法,在异种血清诱导的大鼠肝纤维化模型不同阶段,作肝细胞内MMP-2、TIMP... 目的了解基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织型抑制剂(TIMP-2)在纤维化过程中的变化,分析它们在始动阶段的作用。方法用免疫组化和酶图法,在异种血清诱导的大鼠肝纤维化模型不同阶段,作肝细胞内MMP-2、TIMP-2、酶降解底物Ⅳ型胶原(ColⅣ)以及结蛋白(Dm)定位和半定量研究。结果实验鼠于4周末形成细胞间隔,8周末发展为肝纤维化,含细胞-纤维间隔或纤维间隔,12、16周仍为纤维间隔。酶图法表明4周末MMP-2活性升高2.5倍左右,8周末仍高于对照鼠。免疫组化显示4周末MMP-2阳性细胞数最多,连续切片观察MMP-2与Dm阳性细胞(活化的肝星状细胞)几乎重叠。8周末阳性细胞数有所减少,12周末明显减少。半定量变化趋势与酶图法一致。TIMP-2于8周末表达开始升高,12周末达最高。2周末ColⅣ表达开始上升,4周末达高峰,以后缓慢下降。结论肝纤维化早期MMP-2活性增高,继而TIMP-2分泌过多,MMP-2活性受抑,ECM降解受阻,纤维化进一步发展。 展开更多
关键词 肝纤维化 基质金属蛋白酶 TIMP-2 MMP-2
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肝素对大鼠肝星状细胞生长、细胞外基质和基质金属蛋白酶基因表达的影响 被引量:9
10
作者 李文才 张锦生 +3 位作者 朱虹 张秀荣 张月娥 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2000年第4期200-202,共3页
目的探讨肝素对HSC生长、细胞外基质和基质金属蛋白酶基因表达的影响。方法用肝素和不用肝素对活化的HSC进行处理。以直接细胞计数和BrdU标记免疫细胞化学染色检测细胞的生长情况,用免疫细胞化学染色和细胞原位核酸分子杂交... 目的探讨肝素对HSC生长、细胞外基质和基质金属蛋白酶基因表达的影响。方法用肝素和不用肝素对活化的HSC进行处理。以直接细胞计数和BrdU标记免疫细胞化学染色检测细胞的生长情况,用免疫细胞化学染色和细胞原位核酸分子杂交分别检测Ⅰ、Ⅳ型前胶原蛋白、纤连蛋白和Ⅰ、Ⅳ型胶原、纤连蛋白、基质金属蛋白酶-2及膜型基质金属蛋白酶基因的表达,并用酶图法检测基质金属蛋白酶-2的活性。结果肝素使血清所致的HSC生长速度减慢;肝素抑制HSCⅠ型前胶原、纤连蛋白的合成和Ⅰ型前胶原、纤连蛋白、膜型基质金属蛋白酶基因的表达,但对Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶-2 mRNA水平和基质金属蛋白酶-2活性无影响。结论肝素明显抑制血清所致的HSC的生长;下调HSC间质型胶原和FN的合成,并抑制膜型基质金属蛋白酶基因的表达。 展开更多
关键词 肝星状细胞 肝素 细胞外基质 MMP-2 肝纤维化
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端粒酶hTERT mRNA表达在乳腺癌进展中的意义及其与p53的相关性 被引量:13
11
作者 唐峰 顾栋桦 +4 位作者 王虹 朱腾芳 朱虹 许组德 胡锡琪 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期192-195,共4页
目的探讨端粒酶hTERTmRNA表达在人乳腺癌发生、发展中的意义,观察肿瘤抑制基因p53与hTERTmRNA表达的关系。方法收集浸润性导管癌标本25例,导管原位癌标本18例,导管上皮不典型增生标本20例,导管上皮单纯性增生标本7例,癌旁正常乳腺组织标... 目的探讨端粒酶hTERTmRNA表达在人乳腺癌发生、发展中的意义,观察肿瘤抑制基因p53与hTERTmRNA表达的关系。方法收集浸润性导管癌标本25例,导管原位癌标本18例,导管上皮不典型增生标本20例,导管上皮单纯性增生标本7例,癌旁正常乳腺组织标本12例。用原位杂交法检测hTERTmRNA表达,并用免疫组化方法检测乳腺导管癌的p53蛋白表达。结果hTERTmRNA在癌旁正常乳腺组织、乳腺导管单纯性增生中未见表达;在导管不典型增生、导管原位癌、浸润性导管癌中的阳性率分别为25.0%、83.3%和88.0%。导管原位癌、浸润性导管癌组织hTERTmRNA表达明显高于癌旁正常乳腺组织、乳腺导管单纯性增生和导管不典型增生组织(P<0.05)。hTERTmRNA表达与浸润性导管癌肿块大小及淋巴结转移与否无关(P>0.05)。43例乳腺导管癌中,hTERTmRNA表达与p53蛋白表达呈正相关(r=0.5540,P<0.01)。结论端粒酶hTERT mRNA表达可能在乳腺导管癌的组织发生中起关键作用,半定量原位检测hTERTmRNA表达,可为导管上皮不典型增生与导管原位癌的鉴别诊断提供帮助。p53突变可能与乳腺导管癌hTERT基因转录激活有关。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 HTERT MRNA 原位杂交 免疫组化 P53
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MnSOD基因转染对SGC79001胃癌细胞增殖的影响 被引量:7
12
作者 陈坚 林庚金 +4 位作者 唐峰 朱虹 钱立平 程建 刘珊林 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第1期19-23,31,共6页
目的 观察改变胞内MnSOD基因表达水平对SGC7901胃癌细胞增殖的影响。方法 采用电穿孔方法将反义和正义MhSOD cDNA真核表达载体pHβA-SOD(-)/pHβA-SOD(+)转染SGC7901胃癌细胞,400mg/LG418筛选稳定表达克隆并用RT-PCR及Western杂交法鉴... 目的 观察改变胞内MnSOD基因表达水平对SGC7901胃癌细胞增殖的影响。方法 采用电穿孔方法将反义和正义MhSOD cDNA真核表达载体pHβA-SOD(-)/pHβA-SOD(+)转染SGC7901胃癌细胞,400mg/LG418筛选稳定表达克隆并用RT-PCR及Western杂交法鉴定后扩大培养。用pHβA空质粒转染作为对照。放射免疫法检测正义、反义及空载SGC7901胃癌细胞株内的铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD,SOD1)蛋白含量。分别用直接细胞计数法、四唑蓝(MTT)比色法、平皿克隆形成率试验及裸鼠移植瘤模型测定3组细胞在体外、体内的增殖活性。结果 与空载组(Vector—7901)相比,转染正义质粒的MnSOD-7901胃癌细胞呈现抑增殖效应:(1)生长曲线示增殖速度减慢;(2)在平皿上的集落形成能力下降;(3)在裸鼠体内的成瘤性明显受抑制。转染反义质粒的MnSOD-AS7901胃癌细胞则出现促增殖效应:(1)生长曲线示增殖速度加快;(2)在平皿上的集落形成率上升;(3)裸鼠移植瘤生长加速。结论 通过基因转染提高胞内MnSOD的表达可抑制胃癌细胞的增殖,MnSOD可能是胃癌基因治疗的一个新靶点。 展开更多
关键词 MNSOD 基因转染 SGC79001 胃癌 癌细胞增殖 基因表达 超氧化物歧化酶
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原发性肝癌规范化病理诊断方案专家共识 被引量:13
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作者 丛文铭 胡锡琪 +11 位作者 孙耘田 谭云山 纪小龙 云径平 朱虹 郭辉 王瑞安 刘素香 印洪林 王曦 李增山 纪元 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期285-287,共3页
中国是肝癌高发国家之一.随着肝脏外科诊治技术的不断发展,中国肝癌临床病理诊断学得到了快速提高,在肝癌的病理标本的数量和类型上具有明显优势.
关键词 原发性肝癌 病理学 诊断
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乳腺癌细胞过表达HER2/neu时经PI3K和Ras/Raf/MEK/ERK信号通路下调野生型p53蛋白含量 被引量:8
14
作者 郑莉 任加强 +2 位作者 张琳 陈琦 朱虹 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期358-362,共5页
目的 研究HER2/neu基因过表达对乳腺癌细胞野生型p53蛋白含量的影响并探讨其分子机制。方法 脂质体介导的HER2/neu基因转染MCF7细胞,G418筛选阳性克隆。Western印迹法鉴定HER2/neu蛋白表达,并同时检测p53及信号转导分子Akt,p-Akt,p-Raf,... 目的 研究HER2/neu基因过表达对乳腺癌细胞野生型p53蛋白含量的影响并探讨其分子机制。方法 脂质体介导的HER2/neu基因转染MCF7细胞,G418筛选阳性克隆。Western印迹法鉴定HER2/neu蛋白表达,并同时检测p53及信号转导分子Akt,p-Akt,p-Raf,p-MEK,p-ERK蛋白含量,以及P13K信号通路抑制剂LY294002和MEK抑制剂U0126处理对p53蛋白含量的影响。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测p53 mRNA水平。结果 成功建立稳定过表达HER2/neu的MCF7细胞(MCF7-neu3),其HER2/neu蛋白表达量是对照组MCF7细胞的13倍。MCF7-neu3中p-Akt,p-Raf,p-MEK,P-ERK蛋白含量分别较MCF7细胞升高了2.5倍、2倍、1.6倍和1.6倍(P<0.01),p53蛋白含量仅为对照组细胞的40%(P<0.01),但p53mRNA表达无明显差异。在经PI3K信号通路抑制剂LY294002及MEK抑制剂U0126处理24 h后,MCF7-neu3细胞p53蛋白含量分别上升了1.7和1.5倍(P<0.01),在LY294002和U0126处理48 h后,p53蛋白含量分别升高了4.7倍和5.3倍(P<0.01)。LY294002和U0126处理对MDA-MB-453细胞突变型p53蛋白含量不产生影响。结论 乳腺癌细胞中HER2/neu基因的过表达能够通过激活P13K和Ras/Raf/MEK/ERK通路导致野生型p53蛋白含量减少,可能是HER2/neu过表达乳腺癌患者预后不良及对治疗产生抗性的分子机制。 展开更多
关键词 乳腺癌 HER2/NEU 信号通路下调 p53 基因过表达 分子机制 信号转导分子 C-ERBB-2 Ras/Raf/MEK/ERK
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caveolin-1对喉鳞状细胞癌生物学特性的影响 被引量:7
15
作者 顾栋桦 唐峰 +3 位作者 王震 李华 陈琦 朱虹 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期329-333,共5页
目的探讨细胞质膜微囊蛋白-1(caveolin-1)对喉鳞状细胞癌生物学特征的影响。方法构建caveolin-1真核表达质粒,用脂质体法转染喉鳞癌细胞株HEp2细胞,筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆,并用实时荧光定量PCR和免疫印迹法鉴定。MMT法用... 目的探讨细胞质膜微囊蛋白-1(caveolin-1)对喉鳞状细胞癌生物学特征的影响。方法构建caveolin-1真核表达质粒,用脂质体法转染喉鳞癌细胞株HEp2细胞,筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆,并用实时荧光定量PCR和免疫印迹法鉴定。MMT法用于检测细胞的生长能力,软琼脂克隆形成实验用于检测细胞锚定非依赖性生长能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,免疫印迹法检测表皮生长因子受体(EGFR)和细胞外信号调节激酶(Erk1/2)的磷酸化水平,用激光共聚焦显微镜观察caveolin-1和EGFR的共定位。结果成功构建了caveolin-1真核表达质粒,转染HEp2细胞后筛选得到3株稳定高表达caveolin-1的克隆。与对照组相比,转染后的细胞生长速度明显减慢,软琼脂中克隆形成能力明显下降。流式细胞仪结果显示,高表达caveolin-1可使细胞阻滞在G0/G1期,并且促进细胞的凋亡。激光共聚焦显微镜观察显示,caveolin-1与EGFR共定位于细胞膜。免疫印迹检测显示,caveolin-1能降低EGFR和Erk1/2的磷酸化水平。结论caveolin-1能够抑制喉鳞癌细胞株HEp2的生长,并促进其凋亡;对EGFR-MAPK信号通路的负性调节可能在其抑癌机制中发挥重要作用。 展开更多
关键词 喉肿瘤 细胞质膜微囊蛋白 表皮生长因子受体 细胞外信号调节激酶
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锰型超氧化物岐化酶基因转染抑制SGC7901胃癌细胞增殖的机制 被引量:7
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作者 陈坚 林庚金 +3 位作者 程建 唐峰 朱虹 刘珊林 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第12期1386-1389,共4页
目的:我们已经报道锰型超氧化物岐化酶(MnSOD)高表达可明显抑制SGC7901胃癌细胞的增殖,本研究拟进一步探索其中所涉及的分子机制.方法:利用DCFH-DA荧光染色方法检测正义、反义及空载SGC7901胃癌细胞株内的活性氧水平透射电镜下观察肿瘤... 目的:我们已经报道锰型超氧化物岐化酶(MnSOD)高表达可明显抑制SGC7901胃癌细胞的增殖,本研究拟进一步探索其中所涉及的分子机制.方法:利用DCFH-DA荧光染色方法检测正义、反义及空载SGC7901胃癌细胞株内的活性氧水平透射电镜下观察肿瘤细胞形态及细胞器结构改变.RT—PCR方法检测三者缺氧诱导因子HIF-1α的表达.结果:正义MnSOD-7901胃癌细胞胞内ROS下降,HIF-1α表达下调.反义组电镜下细胞形态明显小于正义组,正义组线粒体明显较反义组丰富,但两组线粒体均呈空泡状,缺少线粒体嵴.反义组核糖体明显较正义组丰富,内质网也略多.结论:MnSOD依赖的抑制胃癌细胞增殖途径与下调肿瘤的胞内ROS水平,下调HIF-1α的表达及改变细胞器的超微结构有关. 展开更多
关键词 锰型超氧化物岐化酶 基因转染抑制 SGC7901 胃癌 细胞增殖
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鼻腔鼻窦原发性非霍奇金淋巴瘤CD56表达与EBV感染的相关性研究 被引量:7
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作者 陈东 王纾宜 +1 位作者 李诗敏 朱虹 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2006年第3期152-154,i0003,共4页
目的探讨鼻腔鼻窦原发性非霍奇金淋巴瘤(Non-Hoagkin’s Lymphomas,NHL)CD56表达与 EB 病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测55例鼻腔鼻窦 NHL CD56、CD45RO、CD3_、CD20、CD79、TIA-1和潜伏膜蛋白1... 目的探讨鼻腔鼻窦原发性非霍奇金淋巴瘤(Non-Hoagkin’s Lymphomas,NHL)CD56表达与 EB 病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测55例鼻腔鼻窦 NHL CD56、CD45RO、CD3_、CD20、CD79、TIA-1和潜伏膜蛋白1(latent membrane protein-1,LMP1);联合采用聚合酶链式反应(polymerse chain reaction,PCR)检测 LMP1基因。结果 LMP1蛋白阳性率为29/55(53%),PCR IAIP1基因阳性率为33/55(60%),CD56阳性率为28/55(51%),EBV 在 CD56阳性与 CD56阴性鼻腔鼻窦淋巴瘤中的感染率分别是25/28(89.3%)和13/27(48.1%),两者差异显著,P<0.01。结论提示 EBV 和 CD56分子的相互作用在CD56+鼻腔鼻窦原发性 NHL 发病中可能起重要作用。(中国眼耳鼻喉科杂志,2006,6:152~154) 展开更多
关键词 淋巴瘤 非霍奇金 EB病毒 潜伏膜蛋白1 CD56
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野生型p53基因转染对人HCC-9204细胞端粒酶活性影响 被引量:4
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作者 戴大英 翟为溶 +2 位作者 万大方 朱腾方 朱虹 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2003年第6期515-517,522,共4页
目的 :探讨肿瘤抑制基因 p5 3对人肝癌细胞端粒酶活性及其催化亚单位hTERT (humantelomerasereversetranscriptase)的影响 ,并探讨可能的机制。方法 :用脂质体介导基因转染法将野生型p5 3(wt p5 3)导入端粒酶 /hTERTmRNA阳性、内源性 p... 目的 :探讨肿瘤抑制基因 p5 3对人肝癌细胞端粒酶活性及其催化亚单位hTERT (humantelomerasereversetranscriptase)的影响 ,并探讨可能的机制。方法 :用脂质体介导基因转染法将野生型p5 3(wt p5 3)导入端粒酶 /hTERTmRNA阳性、内源性 p5 3突变的HCC 92 0 4人肝癌细胞中 ;用Westernblot鉴定转染效率 ;PCR ELISA、TRAP 银染、原位杂交和RT PCR法检测细胞端粒酶活性和hTERTmRNA表达 ;用流式细胞仪观察细胞凋亡改变。结果 :外源wt p5 3基因转染后HCC 92 0 4细胞端粒酶活性明显受抑 ,hTERTmRNA表达水平下调 ,bcl 2表达减少 ,细胞呈现凋亡改变。结论 :外源wt p5 3基因表达可抑制人肝癌细胞端粒酶活性 ;端粒酶活化、hTERTmRNA表达存在 p5 3依赖性调节途径。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 肿瘤抑制基因P53 基因转染 端粒酶
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肝细胞肝癌中端粒酶活性及hTERT mRNA表达 被引量:4
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作者 戴大英 翟为溶 +3 位作者 朱腾方 万大方 凌玉琴 朱虹 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期484-487,共4页
目的 探讨肝细胞肝癌 (hepatocellularcarcinoma,HCC)中端粒酶、端粒酶催化亚单位hTERT(humantelomerasere versetranscriptase)表达及意义。方法 应用PCR ELISA和TRAP 银染法检测人HCC癌内、癌旁和正常肝组织中端粒酶活性 ,用RNA RN... 目的 探讨肝细胞肝癌 (hepatocellularcarcinoma,HCC)中端粒酶、端粒酶催化亚单位hTERT(humantelomerasere versetranscriptase)表达及意义。方法 应用PCR ELISA和TRAP 银染法检测人HCC癌内、癌旁和正常肝组织中端粒酶活性 ,用RNA RNA原位杂交法检测石蜡包埋组织hTERTmRNA表达 ,观察二者与肿瘤病理特征间的关系。结果 癌组织中端粒酶活性、hTERTmRNA检出率分别为 81 3% (2 6 /32 )、87 5 % (2 8/32 ) ,远高于这些病例的癌旁肝组织 (1 2 5 % ,1 2 5 % ) ;癌内及癌旁端粒酶活性与hTERTmRNA表达相关。小肝癌和肿瘤分化差者端粒酶、hTERT均呈高表达 ;肿瘤近包膜处、与周边正常组织交错或移行处癌细胞hTERT表达强 ;癌内及癌旁浸润的单核性细胞、癌旁不典型增生区肝细胞及癌栓内的肿瘤细胞hTERTmRNA常为阳性。正常肝组织 4例均为阴性。结论 HCC中端粒酶活性、hTERTmRNA高表达 ,二者密切相关 ;端粒酶、hTERTmRNA活化表达与HCC的发生、演进及肿瘤的侵袭状态相关。癌旁端粒酶活性来自浸润的单核性细胞。 展开更多
关键词 肝细胞 肝癌 粒酶活性 HTERT MRNA表达 末端转移酶
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肝细胞癌中端粒酶逆转录酶表达及其与肿瘤抑制基因p53相关性研究 被引量:4
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作者 戴大英 翟为溶 +3 位作者 朱腾方 万大方 朱虹 凌玉琴 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2001年第S1期79-81,共3页
目的探讨肝细胞肝癌(HCC)中端粒酶逆转录酶(HTERT)mRNA表达意义及其与肿瘤抑制基因p53的相关性。方法收集34例HCC标本,应用RNA-RNA原位杂交技术检测HTERT mRNA表达,观察其与病理特征间的关... 目的探讨肝细胞肝癌(HCC)中端粒酶逆转录酶(HTERT)mRNA表达意义及其与肿瘤抑制基因p53的相关性。方法收集34例HCC标本,应用RNA-RNA原位杂交技术检测HTERT mRNA表达,观察其与病理特征间的关系;用免疫组织化学技术检测p53蛋白,比较HTERT与p53表达间的关系。结果30/34例(88.2%) HCC中癌细胞HTERT mRNA呈阳性表达,其中小肝癌6例均为阳性;分化差、肝内外转移、包膜不完整、癌旁有活动性病变及HBsAg阳性者HTERT mRNA表达较高;侵袭灶前沿癌细胞及少数非典型性增生的肝细胞中常见阳性。 HTERT mRNA和p53表达一致(均阳或均阴)者占79.4%,两者表达具有相关性, p53阳性者 HTERT mRNA表达较强(P<0.05)。正常肝组织 HTERT mRNA呈阴性。结论 HCC中 HTERT mRNA高表达; HTERT mRNA表达与HCC发生、演进有关; p53可能参与HTERT mRNA的表达调控。 展开更多
关键词 肝细胞 端粒 基因 P53 逆转录酶
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