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mTOR调节免疫细胞分化与功能的研究进展 被引量:8
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作者 广 周维英 蔡家利 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期173-176,共4页
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)是一种进化保守的非典型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于磷脂酰肌醇激酶相关激酶蛋白质家族成员。m TOR可整合来自营养、能量、生长因子和环境压力对细胞的刺激信号,调控细胞... 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)是一种进化保守的非典型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于磷脂酰肌醇激酶相关激酶蛋白质家族成员。m TOR可整合来自营养、能量、生长因子和环境压力对细胞的刺激信号,调控细胞生长、增殖、分化及细胞周期等过程。在免疫系统研究中,m TOR可传递和集成来自免疫微环境的信号,作为免疫功能的关键调节器。近来研究证实,m TOR信号通路在免疫细胞分化发育及功能活性中发挥重要的调节作用。 展开更多
关键词 m TOR 免疫细胞 分化 功能
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B7-H1启动子荧光素酶报告基因载体的构建及活性检测 被引量:3
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作者 吴胜昔 陈永文 +2 位作者 广 费蕾 吴玉章 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第7期955-960,共6页
目的构建含B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体,转染肝癌Hep G2细胞进行活性检测。方法 PCR扩增B7-H1启动子上游区域基因片段,并插入到含有荧光素酶报告基因的载体PGL3-Basic中构建重组子,经双酶切和测序鉴定后,将重组子转染Hep G2细胞... 目的构建含B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体,转染肝癌Hep G2细胞进行活性检测。方法 PCR扩增B7-H1启动子上游区域基因片段,并插入到含有荧光素酶报告基因的载体PGL3-Basic中构建重组子,经双酶切和测序鉴定后,将重组子转染Hep G2细胞,用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶表达活性。结果成功地构建了6种不同长度的PGL3-B7-H1-Luc荧光素酶表达质粒,分别命名为P88、P175、P203、P398、P723和P960。瞬时转染Hep G2后经报告基因检测,P175、P203、P398、P723和P960所含5段启动子均具有转录活性,IFN-γ作用后启动子活性明显增强,而P88转染组IFN-γ作用后,荧光素酶活性无显著变化。结论成功构建了B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体。 展开更多
关键词 B7-H1 启动子 双荧光素酶报告基因检测 活性测定
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乙型肝炎病毒x基因转染HepG2细胞后差异表达基因的筛选 被引量:2
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作者 吴胜昔 陈永文 +2 位作者 广 费蕾 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期787-791,共5页
目的建立稳定表达HBx蛋白的HepG2细胞系,利用基因芯片技术分析HBx转染肝癌细胞株引起的表达谱变化。方法首先PCR扩增HBx基因片段,与真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组子,脂质体转染HepG2细胞经抗生素G418筛选后获得稳定表达HBx蛋白的HepG... 目的建立稳定表达HBx蛋白的HepG2细胞系,利用基因芯片技术分析HBx转染肝癌细胞株引起的表达谱变化。方法首先PCR扩增HBx基因片段,与真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组子,脂质体转染HepG2细胞经抗生素G418筛选后获得稳定表达HBx蛋白的HepG2细胞系,采用流式细胞术、Western blot鉴定HBx蛋白在细胞中的表达。利用基因芯片技术分析HBx转染肝癌细胞株引起的表达谱变化。结果经HindⅢ和XbaⅠ内切酶酶切和测序鉴定表明成功构建了HBx基因真核表达载体,流式细胞术、Western blot均证实HBx蛋白在HepG2细胞高效表达,基因芯片结果显示在检测的35 000个基因中有98个基因转录显著上调,24个基因转录显著下调。结论成功构建了稳定、高效表达HBx的HepG2细胞,HBx转染HepG2细胞可导致部分基因显著差异表达,差异表达的基因可能参与了肝癌的发生发展。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒X基因 转染 HEPG2细胞 基因芯片
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重组猪α干扰素的体外活性测定和冻干保护剂的筛选 被引量:2
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作者 蔡家利 尹忠宝 +3 位作者 广 任燕斌 吴胜昔 黄国光 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 2014年第4期58-61,107,共5页
为了测定猪α干扰素的活性并选出合适的冻干保护剂,制备了重组猪α干扰素,利用细胞病变抑制法测定了干扰素在Marc-145细胞抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)时的活性,并筛选出效果较好的冻干保护剂。结果表明:制备的重组猪α干扰素活... 为了测定猪α干扰素的活性并选出合适的冻干保护剂,制备了重组猪α干扰素,利用细胞病变抑制法测定了干扰素在Marc-145细胞抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)时的活性,并筛选出效果较好的冻干保护剂。结果表明:制备的重组猪α干扰素活性达到了4.41×105U/mg。选择3%甘露醇作为保护剂,为进一步研究干扰素注射剂奠定了基础。 展开更多
关键词 猪α-干扰素 活性测定 保护剂 rPoIFN-α
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雷公藤红素在乳腺癌中破坏mTOR蛋白稳定性的研究
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作者 李小丽 广 周维英 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1059-1059,共1页
目的探讨雷公藤红素(Cel)通过作用m TOR发挥抗乳腺癌的分子机制。方法采用MTT法检测Cel对乳腺癌细胞活力的影响;采用Western blot检测Cel对m TOR蛋白表达的影响;放线菌酮示踪实验检测Cel对m TOR蛋白稳定性的影响;免疫共沉淀研究m TOR,Hs... 目的探讨雷公藤红素(Cel)通过作用m TOR发挥抗乳腺癌的分子机制。方法采用MTT法检测Cel对乳腺癌细胞活力的影响;采用Western blot检测Cel对m TOR蛋白表达的影响;放线菌酮示踪实验检测Cel对m TOR蛋白稳定性的影响;免疫共沉淀研究m TOR,Hsp90和Cdc37间的相互作用,以及Cel对m TOR、Hsp90和Cdc37复合体形成的影响;Western blotting分别检测MG-132和氯喹对Cel降解m TOR蛋白的影响;Western blotting检测Cel对细胞中p Akt表达的影响。结果 Cel可显著抑制乳腺癌细胞活力,且具有时间和剂量依赖性;Cel下调m TOR的表达;Cel可通过破坏m TOR-Hsp90-Cdc37蛋白复合体的形成,从而加速m TOR经泛素-蛋白酶体途径降解。同时研究发现Cel处理乳腺癌细胞后导致p-Akt表达量一过性增高。结论雷公藤红素可破坏m TOR-Hsp90-Cdc37复合体形成,从而促进m TOR蛋白经泛素-蛋白酶体途径降解而发挥抗乳腺癌的作用。 展开更多
关键词 雷公藤红素 MTOR 乳腺癌
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