应用表达纯化的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白制备的多克隆抗体,建立了检测PPRV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染PPRV进行了调查。方阵法确定了抗PPRV兔源IgG作为捕获抗体的包...应用表达纯化的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白制备的多克隆抗体,建立了检测PPRV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染PPRV进行了调查。方阵法确定了抗PPRV兔源IgG作为捕获抗体的包被量为0.2μg,酶标抗体的最佳稀释度为1∶1 000。对大量小反刍兽疫阴性粪便样品进行检测及统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测PPRV的判定标准,即被检粪便样品D490≥0.221,判定为阳性。特异性、敏感性等试验结果表明,建立的检测PPRV抗原方法具有特异、敏感和快速等优点。与RT-PCR方法相比,该方法省时省力、简单快速。应用建立的检测PPRV抗原的双抗体夹心ELISA对吉林省和内蒙古不同地区的羊粪样进行检测,发现羊群均存在程度不同的PPRV隐性感染。本研究在国内首次揭示出临床健康羊群携带PPRV,为今后小反刍兽疫的诊断与防控提供了新的流行病学理论依据。展开更多
应用PCR技术从长春地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪检测到PCV2病毒基因组序列,并以PK15细胞分离获得1株病毒,命名为PCV2-CC12毒株。序列测定结果揭示:CC12毒株的完整基因组序列为1 767bp,含有2个较大的读码框架,编码病毒复制所需...应用PCR技术从长春地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪检测到PCV2病毒基因组序列,并以PK15细胞分离获得1株病毒,命名为PCV2-CC12毒株。序列测定结果揭示:CC12毒株的完整基因组序列为1 767bp,含有2个较大的读码框架,编码病毒复制所需的Rep蛋白和病毒的结构蛋白Cap。核苷酸序列的比对分析发现,CC12株基因组的607位核苷酸存在一个独特的碱基突变(607A>G),导致其编码的Rep蛋白的186位氨基酸由天冬酰胺突变成丝氨酸(N186S)。应用PCR扩增病毒的全基因组序列并将其插入pBluescript II SK载体获得CC12株单拷贝基因组重组质粒,并以此构建了正向双拷贝重组质粒。重组质粒通过脂质体转染PK15细胞后,以RT-PCR、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)等方法检测拯救病毒,结果从盲传第8代后的细胞培养物中检测到病毒粒子的存在,表明CC12毒株拯救成功,为进一步研究PCV2病毒的复制机理及致病机理打下基础。展开更多
文摘应用PCR技术从长春地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪检测到PCV2病毒基因组序列,并以PK15细胞分离获得1株病毒,命名为PCV2-CC12毒株。序列测定结果揭示:CC12毒株的完整基因组序列为1 767bp,含有2个较大的读码框架,编码病毒复制所需的Rep蛋白和病毒的结构蛋白Cap。核苷酸序列的比对分析发现,CC12株基因组的607位核苷酸存在一个独特的碱基突变(607A>G),导致其编码的Rep蛋白的186位氨基酸由天冬酰胺突变成丝氨酸(N186S)。应用PCR扩增病毒的全基因组序列并将其插入pBluescript II SK载体获得CC12株单拷贝基因组重组质粒,并以此构建了正向双拷贝重组质粒。重组质粒通过脂质体转染PK15细胞后,以RT-PCR、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)等方法检测拯救病毒,结果从盲传第8代后的细胞培养物中检测到病毒粒子的存在,表明CC12毒株拯救成功,为进一步研究PCV2病毒的复制机理及致病机理打下基础。
