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基于基因芯片技术检测6种动物源性成分 被引量:19
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作者 王玮 +3 位作者 吕青骎 范巧君 徐幸莲 周光宏 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1003-1008,共6页
[目的]建立一种运用PCR结合基因芯片技术鉴别牛、羊、猪、马、鹿、兔6种动物源性成分的快速、准确、灵敏的方法。[方法]选择线粒体DNA(mitochondrial DNA)基因(mt DNA)和细胞色素b(cytochrome b)基因(cytb)为目标基因,设计6对物种特异... [目的]建立一种运用PCR结合基因芯片技术鉴别牛、羊、猪、马、鹿、兔6种动物源性成分的快速、准确、灵敏的方法。[方法]选择线粒体DNA(mitochondrial DNA)基因(mt DNA)和细胞色素b(cytochrome b)基因(cytb)为目标基因,设计6对物种特异性引物和相应的6条鉴别探针,在此基础上建立了同时检测6种动物源性成分的基因芯片方法,并进行实际应用效果评价。[结果]通过对PCR扩增体系及杂交体系的优化,该检测方法能实现对上述6种动物源性成分同时进行快速、准确检测,具有良好的特异性,检测牛肉和马肉成分时绝对灵敏度为0.5 pg,实际检测灵敏度也可达到0.001%;所制备的基因芯片可以满足市售肉及肉制品样品的检测需求。[结论]本试验所建立的基因芯片方法特异性好、灵敏度高,可用于对生、熟肉制品中多种动物源性成分的检测和鉴别。 展开更多
关键词 肉类品种 基因芯片 PCR 检测
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动物过敏原牛血清白蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量:6
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作者 王玮 +3 位作者 吕青骎 钱行 徐幸莲 周光宏 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期305-311,共7页
[目的]制备鼠抗牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测动物过敏原BSA含量的间接竞争酶联免疫检测方法(IC-ELISA)。[方法]采用BSA纯品为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗BSA... [目的]制备鼠抗牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测动物过敏原BSA含量的间接竞争酶联免疫检测方法(IC-ELISA)。[方法]采用BSA纯品为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗BSA单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立BSA间接竞争ELISA检测方法,并对其分析条件进行优化。[结果]采用自行制备的特异性抗BSA单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,优化得到最佳反应条件:抗原最佳包被浓度为0.25μg·m L^(-1),单抗最佳工作浓度为1∶32 000,酶标二抗最佳工作浓度为1∶10 000,最低检测限为6.71ng·m L^(-1),线性检测范围为3.593 8~460 ng·m L^(-1)。线性回归直线方程为y=-47.448 9x+135.866 3,相关系数R2=0.997 3,P<0.000 1。[结论]该方法特异性强、灵敏度高、可靠性好,适用于食品中过敏原BSA的现场快速检测。 展开更多
关键词 牛血清白蛋白 动物过敏原 单克隆抗体 间接竞争ELISA 检测
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动物过敏原牛血清白蛋白表面等离子共振传感器检测方法的建立 被引量:6
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作者 王玮 滕爽 +2 位作者 徐幸莲 周光宏 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期739-743,共5页
[目的]建立一种表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,用于快速、准确、灵敏、定量检测动物过敏原牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)。[方法]将鼠抗BSA单克隆抗体偶联于SPR生物传感器芯片表面,监测BSA与抗体结合后... [目的]建立一种表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,用于快速、准确、灵敏、定量检测动物过敏原牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)。[方法]将鼠抗BSA单克隆抗体偶联于SPR生物传感器芯片表面,监测BSA与抗体结合后芯片表面的变化,并基于SPR技术建立快速检测微量BSA的新方法,确定其检出限和最佳线性范围,并进行重复性验证和初步应用。[结果]抗体的偶联水平为18 000,对BSA具有良好的亲和能力;BSA质量浓度在6.25~400 ng·m L^(-1)范围内,与SPR响应值的变化量呈良好的线性关系(R2=0.992),方法检测限为33.68 ng·m L^(-1);用建立的SPR方法检测不同浓度BSA的日内RSD为1.12%~3.42%,日间RSD为0.84%~3.98%,均小于5%;SPR方法与ELISA商业化试剂盒检测不同市售食品中BSA含量的结果比较,差异不显著(P>0.05)。[结论]SPR方法可靠性好、稳定性强,适用于食品中过敏原BSA的高通量实时检测。 展开更多
关键词 牛血清白蛋白 动物过敏原 表面等离子共振 检测
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高静压降低食物致敏性的研究进展 被引量:3
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作者 王玮 +3 位作者 范巧君 孙月 徐幸莲 周光宏 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期525-531,共7页
高静压技术作为一种新兴的食品非热处理技术,在保持食物的天然风味、感官品质和营养价值的同时,能够对食物起到杀菌、灭酶、改善食物功能活性以及加工保藏特性的作用,也被认为是降低食物致敏性的重要技术。本文综述近年来高静压技术在... 高静压技术作为一种新兴的食品非热处理技术,在保持食物的天然风味、感官品质和营养价值的同时,能够对食物起到杀菌、灭酶、改善食物功能活性以及加工保藏特性的作用,也被认为是降低食物致敏性的重要技术。本文综述近年来高静压技术在降低或消除动植物过敏原致敏性的研究进展,并初步总结高静压诱导下过敏原致敏性改变的结构变化机制。 展开更多
关键词 高静压 食物过敏原 致敏性
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超高压协同温度处理对过敏原Bos d 6抗原性及二级结构的影响 被引量:3
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作者 王玮 +3 位作者 吕青骎 滕爽 徐幸莲 周光宏 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期668-672,共5页
[目的]本文旨在研究超高压协同温度处理对过敏原Bos d 6抗原性和二级结构的影响。[方法]采用间接竞争ELISA和圆二色光谱方法,研究在25、40和55℃条件下,100、200、300、400、500和600 MPa压力分别处理10 min对过敏原Bos d 6抗原性及二... [目的]本文旨在研究超高压协同温度处理对过敏原Bos d 6抗原性和二级结构的影响。[方法]采用间接竞争ELISA和圆二色光谱方法,研究在25、40和55℃条件下,100、200、300、400、500和600 MPa压力分别处理10 min对过敏原Bos d 6抗原性及二级结构的影响,并分析过敏原抗原性与其二级结构中α-螺旋的相关性。[结果]超高压处理能有效降低过敏原Bos d 6的抗原性及其二级结构中α-螺旋含量;随着处理温度的增加,过敏原抗原性和α-螺旋含量的降低幅度明显;超高压协同温度处理后过敏原Bos d 6抗原性与α-螺旋含量呈明显的正相关性。[结论]超高压协同温度处理技术可以通过改变过敏原Bos d 6蛋白质的空间构象来达到降低其抗原性的目的。 展开更多
关键词 超高压 温度 过敏原Bos d 6 抗原性 二级结构
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