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青藤碱对胶原诱导型关节大鼠滑膜细胞增殖及凋亡影响的研究 被引量：55
1
作者 陈光星 刘良 +5 位作者 赵诗哲 刘清平 童娟 简任佑 曾耀英 陈纪藩 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期284-287,共4页
目的研究青藤碱对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症,滑膜增生、凋亡及突变型p53的影响,揭示青藤碱抗类风湿关节炎(RA)可能的作用途径。方法采用牛Ⅱ型胶原混合弗氏不完全佐剂于W istar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组... 目的研究青藤碱对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症,滑膜增生、凋亡及突变型p53的影响,揭示青藤碱抗类风湿关节炎(RA)可能的作用途径。方法采用牛Ⅱ型胶原混合弗氏不完全佐剂于W istar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组、甲氨蝶呤(M TX)治疗组和青藤碱(SIN O)治疗组,采用容积法和计分法分别评价后肢肿胀度和四肢关节炎症程度;左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(H E)染色,评价中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜细胞增生和纤维组织增生的情况;对足肿胀和病理各项指标进行回归性分析。碱性磷酸酶标记法检测大鼠滑膜细胞凋亡;免疫组织化学法检测突变型p53的表达。比较M TX和SINO灌胃治疗后各项指标的差异。结果CIA大鼠造模后,炎症迅速发展,1周内即可达到肿胀高峰,然后逐渐消退,在第21～25天后又出现第2个炎症高峰。药物治疗17d后抑制CIA肢炎症的作用逐渐显现出来。M TX和SIN O都可明显抑制第2个炎症高峰,后肢肿胀度和四肢肿胀积分在35d与造模加生理盐水组差异有统计学意义(P<0.01);病理结果中,CIA大鼠关节表现为单个核炎症细胞浸润(包括中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞的浸润),滑膜细胞增生、纤维组织增生;足肿与淋巴细胞浸润,滑膜增生呈直线回归关系,其中以滑膜增生为主(P<0. 展开更多
关键词 滑膜细胞增殖 青藤碱 影响的研究 突变型p53 滑膜细胞增生 滑膜细胞凋亡 CIA大鼠 胶原诱导型关节炎 纤维组织增生 抗类风湿关节炎 弗氏不完全佐剂 免疫组织化学法 生理盐水组 中性粒细胞 滑膜增生 Wistar 苏木素-伊红 炎症细胞浸润
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活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用 被引量：53
2
作者 肇静娴 曾耀英 +3 位作者 何贤辉 王南 狄静芳 曾山 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期109-111,共3页
目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB +ion omycin或C... 目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB +ion omycin或ConA刺激 4 8h后均出现淋巴细胞分裂 ,表现为CFSE荧光强度的系列减半。环孢菌素A(CsA)可抑制ConA促进淋巴细胞增殖的作用 ,CFSE荧光无减半。ConA刺激4 8h后 ,出现CD4 + T细胞和CD8+ T细胞增殖不同步的现象 ,72h后这一现象更加明显。经ModFitTM 软件拟合后 ,得到的各项增殖指标显示 ,ConA对CD8+ T细胞的促增殖作用强于对CD4 + T细胞的作用。结论 :CFDA SE染色结合荧光抗体标记和流式细胞术 。 展开更多
关键词 活体染料羧基荧光素乙酰乙酸 CFDA-SE 淋巴细胞 细胞增殖 荧光抗体标记 流式细胞术
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黄连素对T淋巴细胞活化和增殖的抑制作用 被引量：36
3
作者 何贤辉 曾耀英 +2 位作者 徐丽慧 邱海霞 蔡小嫦 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1183-1186,共4页
目的 :研究黄连素 (Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法 :正常人外周血全血培养 ,以植物血凝素 (PHA)或佛波醇酯 (PDB)加离子霉素 (Ion)刺激活化淋巴细胞 ,双荧光染色及溶血获取有核细胞后 ,以流式细胞仪分析T细胞表达活... 目的 :研究黄连素 (Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法 :正常人外周血全血培养 ,以植物血凝素 (PHA)或佛波醇酯 (PDB)加离子霉素 (Ion)刺激活化淋巴细胞 ,双荧光染色及溶血获取有核细胞后 ,以流式细胞仪分析T细胞表达活化抗原CD6 9和CD2 5的水平 ,并以碘化丙锭染色分析细胞周期分布 ,7-AAD活染分析细胞死亡率。结果 :浓度为 10 0 μmol/L和 5 0 μmol/L的Ber对PDB +Ion或PHA激活T细胞表达CD6 9有明显抑制 ,而 2 5 μmol/L的Ber抑制效应无显著性 ;随时间延长 ,对CD6 9表达的抑制程度下降 ;对于CD2 5表达 ,上述 3个浓度的Ber抑制作用均有显著性 ,且呈剂量依赖性。同时 ,这 3个浓度的Ber均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2 /M ,对细胞周期的抑制作用没有时相特异性。活染分析显示Ber对淋巴细胞无明显细胞毒性。结论 :Ber通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞活化和增殖 ,发挥其免疫抑制作用。 展开更多
关键词 黄连素 T淋巴细胞 活化抗原 细胞周期
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红景天苷对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、ROS和NO产生的影响 被引量：50
4
作者 叶莎莎 曾耀英 尹乐乐 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期237-241,共5页
目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L... 目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L、160μmol/L及320μmol/L)的Sal和巨噬细胞共培养4 h,再以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)进行共刺激。利用MTT比色法检测Sal对巨噬细胞体外增殖的影响。用放线菌酮(CHX)诱导巨噬细胞凋亡,用Sytox G reen染色结合荧光酶标仪检测Sal对CHX诱导巨噬细胞凋亡的影响。用流式细胞术(FCM)检测Sal对巨噬细胞吞噬功能的影响。用2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(H2DCFDA)染色法结合荧光酶标仪检测Sal对胞内ROS产生的影响;用G riess反应检测Sal对巨噬细胞分泌NO的影响。结果:MTT比色法检测显示,终浓度为80、160、320μmol/L的Sal均可显著促进LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞增殖(P<0.05)。荧光酶标仪检测Syto xG reen染色法的结果显示,160μmol/L的Sal可抑制CHX诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01)。FCM结果显示,各浓度的Sal均能促进单纯药物组和实验药物组LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。用荧光酶标仪检测DH2DCFDA染色结果表明,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激的巨噬细胞胞内ROS的产生均具有显著的抑制作用(P<0.01)。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞产生NO均具有促进作用(P<0.05)。结论:Sal对LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞增殖具有显著的促进作用,对CHX诱导的巨噬细胞凋亡具有显著的抑制作用,对静息态和活化态的巨噬细胞的吞噬功能均有增强作用,并能减少LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞胞内ROS的产生;但能促进LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞NO的分泌。 展开更多
关键词 红景天苷 腹腔巨噬细胞 增殖 凋亡 吞噬 活性氧 一氧化氮
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喘可治注射液对人外周血单个核细胞Th1/Th2细胞因子谱的影响 被引量：43
5
作者 肇静娴 曾耀英 +2 位作者 王青 俞瑜 王通 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期356-359,共4页
目的:通过研究喘可治注射液对人外周血单个核细胞(PBMCs)Th1/Th2细胞因子谱的影响,探讨喘可治注射液的免疫调节作用机制。方法:以流式微球分析(CBA)法检测不同处理情况下,人外周血单个核细胞分泌Th1(IFN-γ、TNF-α、IL-2)和Th2(IL-4、I... 目的:通过研究喘可治注射液对人外周血单个核细胞(PBMCs)Th1/Th2细胞因子谱的影响,探讨喘可治注射液的免疫调节作用机制。方法:以流式微球分析(CBA)法检测不同处理情况下,人外周血单个核细胞分泌Th1(IFN-γ、TNF-α、IL-2)和Th2(IL-4、IL-6、IL-10)细胞因子水平。结果:健康人PBMCs体外培养12小时后,上清中细胞因子主要为TNFα和IL6,喘可治使Th1和Th2细胞因子全面升高;喘可治对PDB加离子霉素诱导的PBMCs分泌Th1和Th2细胞因子具有抑制作用,并能抑制流感病人异常升高的INF-γ、TNF-α、IL-6和IL-10分泌。结论:喘可治注射液上调健康人PBMCs分泌Th1和Th2细胞因子,对异常活化的PBMCs分泌的Th1和Th2细胞因子则具有下调作用。 展开更多
关键词 喘可治 外周血单个核细胞 TH1/TH2 细胞因子 流式微球分析法
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金银花提取物对小鼠淋巴细胞体外活化与增殖的影响 被引量：38
6
作者 侯会娜 曾耀英 +1 位作者 黄秀艳 尹乐乐 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期178-180,183,共4页
目的研究金银花(Flos lonicerae,FL)提取物对小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响,并初探其免疫抑制作用机制。方法分离小鼠淋巴结细胞,以荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测FL对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)刺激的小鼠淋巴... 目的研究金银花(Flos lonicerae,FL)提取物对小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响,并初探其免疫抑制作用机制。方法分离小鼠淋巴结细胞,以荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测FL对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)刺激的小鼠淋巴细胞活化的影响;利用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色,分析FL对淋巴细胞增殖情况。结果细胞活化分析表明,金银花提取物对ConA诱导的小鼠淋巴细胞CD69、CD25和CD71表达均有明显的抑制作用,且这种抑制程度与其药物浓度呈正相关(P<0.05)。CFDA-SE染色分析显示,不同浓度的金银花提取物均能明显抑制淋巴细胞的增殖(P<0.05)。结论金银花提取物对ConA诱导下的小鼠淋巴细胞体外活化和增殖均有明显抑制作用,是一种有潜在能力的免疫抑制剂。 展开更多
关键词 金银花提取物 淋巴细胞 活化 增殖
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青藤碱对T淋巴细胞活化及TH1类细胞内细胞因子表达的影响 被引量：24
7
作者 李晓娟 王培训 +4 位作者 刘良 陈光星 肇静娴 曾耀英 陈纪藩 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期249-252,258,共5页
目的 :深入研究青藤碱对T淋巴细胞Th1类细胞因子表达的影响。方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,加入不同浓度的青藤碱作用 1小时后 ,加多克隆刺激剂PDB和离子霉素 ,继续培养 4小时后收获细胞 ,进行细胞内细胞因子染色 ,以流式细胞术对T细胞Th... 目的 :深入研究青藤碱对T淋巴细胞Th1类细胞因子表达的影响。方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,加入不同浓度的青藤碱作用 1小时后 ,加多克隆刺激剂PDB和离子霉素 ,继续培养 4小时后收获细胞 ,进行细胞内细胞因子染色 ,以流式细胞术对T细胞Th1类细胞因子TNF γ、炎症性细胞因子TNF α分子表达情况进行分析 ;同时 ,观察药物对T细胞活化早期标志CD6 9表达的影响 ;结果 :10 0 0 μmol L(32 9 2 4 μg ml)青藤碱能够抑制CD6 9表达 ,2 0 0 μmol L青藤碱对CD6 9表达无影响 ;2 0 0、10 0 0、2 0 0 0 μmol L青藤碱能够剂量依赖性地显著降低T细胞内细胞因子TNF γ、TNF α分子表达。 结论 :抑制T细胞活化异常可能是青藤碱治疗类风湿关节炎免疫药理机制之一 ,此抑制效应可能主要不是通过影响PKC而是与影响钙离子依赖的T细胞活化信号传导途径相关。 展开更多
关键词 青藤碱 细胞因子 TH1细胞 类风湿关节炎
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无排卵型功血患者子宫内膜VEGF和雌、孕激素受体的表达 被引量：24
8
作者 罗璐 朱凤川 +1 位作者 曾耀英 马炎辉 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第2期196-200,共5页
研究无排卵型功血患者子宫内膜血管内皮生长因子 (VEGF)、雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)的表达 ,探讨其与子宫内膜血管形成的关系 ,以求从蛋白水平阐明无排卵型功血的出血机制。采用免疫组化方法 ,检测VEGF、ER和PR在 2 0例正常增... 研究无排卵型功血患者子宫内膜血管内皮生长因子 (VEGF)、雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)的表达 ,探讨其与子宫内膜血管形成的关系 ,以求从蛋白水平阐明无排卵型功血的出血机制。采用免疫组化方法 ,检测VEGF、ER和PR在 2 0例正常增殖期和 6 0例无排卵型功血患者子宫内膜的表达。选用微血管密度标记物CD34,测定子宫内膜微血管密度 (MVD)。无排卵型功血患者单纯性增生和复合性增生子宫内膜腺上皮VEGF蛋白和MVD明显低于正常增殖期 (P <0 0 5和P <0 0 1 ) ;而单纯性增生和复合性增生子宫内膜腺上皮PR蛋白明显高于正常增殖期 (P <0 0 5和P <0 0 1 )。相关分析显示 ,子宫内膜腺上皮VEGF与MVD呈显著性正相关 (r =0 6 6 6 ,P <0 0 5 ) ;与腺上皮PR呈显著性负相关 (r=- 0 6 2 9,P <0 0 5 )。正常增殖期内膜与功血增殖期内膜比较 ,腺上皮VEGF和PR蛋白差异无显著性意义。首次指出病理表现为单纯性增生和复合性增生的无排卵型功血患者 ,其子宫异常出血与子宫内膜VEGF和PR的表达失调有关。PR间接作用于无排卵型功血子宫内膜腺上皮VEGF ,使后者分泌减少 ,微血管形成障碍 。 展开更多
关键词 无排卵型功血 子宫内膜 VEGF 雌激素受体 表达 孕激素受体 功能性子宫出血
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人β_2-微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 被引量：24
9
作者 何贤辉 徐丽慧 +1 位作者 刘毅 曾耀英 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期99-103,共5页
β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大... β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大肠杆菌中得到高效表达。表达的β2 m大部分在包涵体中 ,经洗涤、变性和复性 ,并以强阴离子交换柱层析纯化 ,获得SDS PAGE纯的人重组 β2 m ,Western印迹法分析表明该蛋白具有与抗人天然 β2 m抗体反应的特性。此工作为制备MHCⅠ类分子四聚体奠定基础。 展开更多
关键词 β2-微球蛋白基因 克隆 大肠杆菌 表达 基因克隆 重组蛋白 包涵体
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天花粉蛋白诱导人类白血病细胞株HL-60细胞凋亡的研究 被引量：16
10
作者 何贤辉 曾耀英 +3 位作者 孙荭 曾洁铭 徐丽慧 狄静芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期200-203,T001,共5页
目的 :研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白 (TCS)诱导人类白血病细胞株HL - 6 0细胞发生凋亡的作用及放线菌酮 (CHX)对此作用的影响。方法 :采用流式细胞术分析及荧光显微镜观察研究TCS诱导HL - 6 0细胞发生凋亡的情况。结果 :流式细胞... 目的 :研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白 (TCS)诱导人类白血病细胞株HL - 6 0细胞发生凋亡的作用及放线菌酮 (CHX)对此作用的影响。方法 :采用流式细胞术分析及荧光显微镜观察研究TCS诱导HL - 6 0细胞发生凋亡的情况。结果 :流式细胞术分析表明TCS能够诱导HL - 6 0细胞发生明显的凋亡现象 ,TCS (2 0mg/L)处理48h细胞凋亡百分率为 48 7%± 2 3% ( x±s) ,明显高于对照组的凋亡率 (6 3%± 1 0 % ) (P <0 0 5 ) ,而CHX (5mg/L)相同条件下诱导的凋亡率为 6 5 3%± 3 9%。TCS诱导的凋亡现象进一步为荧光显微镜的观察及DNA凝胶电泳所证实 ,TCS处理的细胞中有许多细胞呈现典型的凋亡细胞核形态改变 ,如染色体凝缩、核碎裂等 ;DNA凝胶电泳显示TCS处理的细胞呈典型的梯级格局。进一步研究表明预先以低浓度CHX (0 2mg/L)处理可显著加强TCS的作用 ,而在这个浓度下单独CHX并不诱导明显的细胞凋亡。TCS诱导HL - 6 0细胞的凋亡呈时间和剂量依赖关系。结论 :TCS能够诱导HL - 6 0细胞发生明显的凋亡 ,CHX可加强这种作用。 展开更多
关键词 天花粉素 放线菌酮 细胞凋亡 流式细胞术 白血病 HL-60细胞
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雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用 被引量：21
11
作者 俞瑜 曾耀英 +2 位作者 刘良 季煜华 肇静娴 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期499-502,共4页
目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(C... 目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RTPCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL2、IFNγmRNA的表达的影响。结果TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL2及IFNγmRNA的表达。结论TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 小鼠 体外活化 IFN-γmRNA表达 RT-PCR技术 免疫抑制作用 流式细胞仪检测 CD69 IL-2 CD25 细胞因子表达 活化标志 T淋巴细胞 分子药理学 淋巴结细胞 T细胞活化 TRD 无菌分离 不同浓度 刀豆蛋白 单克隆体 荧光标记
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双氢青蒿素对小鼠T细胞的免疫抑制作用 被引量：20
12
作者 叶燕霞 曾耀英 +3 位作者 黄秀艳 陆晓宇 曾祥凤 王希朝 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期417-423,共7页
目的:研究双氢青蒿素(DHA)在体外对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,探讨其可能的免疫作用机制。方法:加入不同浓度DHA,以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)诱导T细胞活化增殖,用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色法分析T细胞增殖... 目的:研究双氢青蒿素(DHA)在体外对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,探讨其可能的免疫作用机制。方法:加入不同浓度DHA,以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)诱导T细胞活化增殖,用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色法分析T细胞增殖情况;利用流式细胞术(FCM)结合双色免疫荧光染色技术检测CD3+T细胞早、中、晚期活化标志CD69、CD25、CD71表达情况;用Fluo-4/AM荧光钙离子探针技术检测细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度的变化;以碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布;运用流式细胞术(FCM)结合三色荧光染色技术检测CD4+CD25highTreg早期活化抗原CD69表达情况。结果:CFDA-SE染色结果显示,DHA能有效抑制ConA诱导的T细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性;DHA对ConA刺激的CD3+T细胞CD69、CD25的表达有促进作用,而对CD71的表达有抑制作用,均呈剂量依赖性;DHA单独作用不能引起T细胞[Ca2+]i的升高,在ConA的刺激下能引起[Ca2+]i浓度升高;PI染色流式分析结果显示,DHA阻滞细胞于G0/G1期,阻止细胞进入S期和G2/M期;DHA能够下调CD4+CD25highTreg细胞CD69的表达。结论:DHA对小鼠淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。 展开更多
关键词 双氢青蒿素 免疫抑制 T淋巴细胞 CD4+CD25highTreg 流式细胞术
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黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响 被引量：20
13
作者 李林 曾耀英 +4 位作者 黄秀艳 宋兵 杨志 滕菲 姚满林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期75-78,共4页
目的:分析黄芩苷(BA)对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色,不同终浓度的BA预孵育4h,加入刀豆蛋白(ConA)或佛波... 目的:分析黄芩苷(BA)对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色,不同终浓度的BA预孵育4h,加入刀豆蛋白(ConA)或佛波醇酯类多克隆刺激剂PDB和离子霉素Ion进行刺激,以流式细胞术(FCM)结合荧光抗体染色技术检测黄芩苷对CD3+T细胞增殖率的影响;以碘化丙锭(PI)染色结合FCM分析其细胞周期分布。结果:BA(10、15、20、25mg/L)对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+T细胞增殖均有明显的抑制作用(P<0.05),且呈浓度依赖性。对细胞周期分析表明,BA能使ConA或PDB和Ion刺激的小鼠淋巴细胞停滞于G0/G1期、S期,阻止其进入G2/M期,阻止作用随浓度的增加而增强。结论:BA对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+T细胞增殖有明显抑制作用,能够将淋巴细胞阻滞在G0/G1期和S期,表现出明显的周期特异性。本研究提示黄芩苷有发展成免疫抑制剂的潜力。 展开更多
关键词 黄芩苷 T细胞 细胞增殖 细胞周期
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棉酚对多克隆激活剂活化人T淋巴细胞的抑制作用 被引量：16
14
作者 何贤辉 曾耀英 +3 位作者 李振 徐丽慧 孙荭 曾洁铭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期510-514,共5页
目的 :以体外培养的人外周血单个核细胞为材料 ,研究多酚类抗生育药物棉酚对正常人外周血T淋巴细胞体外活化作用的影响。方法 :利用双荧光染色流式细胞术分析棉酚对人T淋巴细胞在丝裂原或佛波醇酯刺激下早期活化抗原CD6 9表达的影响。结... 目的 :以体外培养的人外周血单个核细胞为材料 ,研究多酚类抗生育药物棉酚对正常人外周血T淋巴细胞体外活化作用的影响。方法 :利用双荧光染色流式细胞术分析棉酚对人T淋巴细胞在丝裂原或佛波醇酯刺激下早期活化抗原CD6 9表达的影响。结果 :10 0 μmol/L的棉酚预先与T细胞温育 ,能完全抑制 10mg/L植物血凝素(PHA)刺激的CD3+T细胞活化抗原CD6 9的表达 ,又可阻断 10 -7mol/L佛波醇酯 (PDB)对T细胞的活化作用。这种抑制作用呈剂量依赖性 ,棉酚对PDB及PHA抑制作用的IC50 分别为 (35 7± 2 9) μmol/L和 (32 8± 1 5 ) μmol/L。此外 ,棉酚对CD3-的淋巴细胞CD6 9表达也有类似的抑制作用。然而 ,它对多克隆激活剂引起的T细胞表面分子CD3的下调无明显影响。结论 :在体外活化模型中 ,棉酚能够同时抑制多克隆激活剂PHA和PDB对T细胞的活化作用 ,提示其作用部位可能位于PKC或下游 。 展开更多
关键词 棉酚 T淋巴细胞 流式细胞术 抗生素药物
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山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响 被引量：21
15
作者 慕静静 曾耀英 +2 位作者 黄秀艳 赵晓慧 宋兵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1106-1108,1111,共4页
目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养。流式细胞术结合双色荧光抗体染... 目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养。流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期。结果:终浓度为10、20和40μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期。结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期。 展开更多
关键词 山奈酚 T淋巴细胞活化 增殖 细胞周期 流式细胞术
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连翘提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响 被引量：18
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作者 尹乐乐 曾耀英 +1 位作者 黄秀艳 侯会娜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期10-12,共3页
目的:分析连翘(FS)提取物对小鼠淋巴结T细胞的体外活化与增殖的影响,初步探讨其免疫抑制作用机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)染色结合流式细胞术(FCM),检测... 目的:分析连翘(FS)提取物对小鼠淋巴结T细胞的体外活化与增殖的影响,初步探讨其免疫抑制作用机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)染色结合流式细胞术(FCM),检测小鼠T淋巴细胞的表达的活化抗原CD69、CD25、CD71的表达情况;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色,以FCM分析FS对淋巴细胞体外增殖的影响。结果:终浓度为40、80、160 mg/L的FS均对ConA刺激诱导的T细胞CD69、CD25和CD71的表达有降低作用(P<0.05)。CFDA-SE染色分析显示,上述浓度的FS对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖具有抑制作用(P<0.05)。结论:FS对ConA诱导的T细胞早、中、后期活化和体外增殖有抑制作用。 展开更多
关键词 连翘提取物 T淋巴细胞 活化 增殖
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心理应激对正常人外周血T淋巴细胞体外活化表面分子表达的作用 被引量：16
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作者 黄柏炎 孙荭 +3 位作者 曾洁铭 程云华 王曦 曾耀英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期229-232,共4页
目的 :探讨心理应激增加对感染的易感性的细胞和分子免疫学机理。方法 :采用双荧光染色流式细胞分析法对 2 0名健康大学生志愿者 (男女各半 )在应激前后进行外周血淋巴细胞免疫表型及T细胞体外丝裂原刺激早期活化抗原表达分析。连续一... 目的 :探讨心理应激增加对感染的易感性的细胞和分子免疫学机理。方法 :采用双荧光染色流式细胞分析法对 2 0名健康大学生志愿者 (男女各半 )在应激前后进行外周血淋巴细胞免疫表型及T细胞体外丝裂原刺激早期活化抗原表达分析。连续一周期末考试被设定为心理应激。结果 :免疫表型分析显示 ,应激前后CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD2 0、CD16、CD5 6等淋巴细胞的表面分子阳性的细胞的百分比的差异无统计学显著性 ;与应激前的结果相比 ,应激后的T细胞在体外培养条件下多克隆刺激剂活化后CD6 9的表达明显降低 ,植物血凝素 (phytohemagglutinin ,PHA)组CD6 9+ CD3+ /CD3+ 的百分率由应激前的 2 8.1± 4.1降低到应激后的 17.6± 3.8,佛波醇酯 (phorbol 12 ,13-dibutyrate ,PDB)组CD6 9+ CD3+ /CD3+ 的百分率由应激前的 80 .7± 6 .8降至应激后的 6 5 8± 7.9,而在没有刺激剂作用的条件下 ,T细胞CD6 9表达率应激前后的差别无显著。结论 :应激对免疫系统的影响并不在于改变外周血淋巴细胞各亚群的比例的层面上 ;心理应激能降低健康人T细胞体外活化的反应性 ,这可能与心理应激个体对感染的易感性增加有关。 展开更多
关键词 抗原 CD69 心理应激 T细胞
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不同病程尖锐湿疣患者外周血Th细胞亚群的研究 被引量：18
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作者 李振 曾耀英 +4 位作者 蔡小嫦 何贤辉 徐丽慧 曾山 狄静芳 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期253-255,共3页
目的从辅助性T细胞(Th)极化情况,探讨不同病程尖锐湿疣患者的细胞免疫状态。方法取肝素抗凝血,用密度梯度离心法分离出血浆和外周血单一核细胞(PBMC)进行细胞培养和免疫荧光染色:PHA和自身血浆刺激PBMC诱导T细胞极化,72h后收获细胞,分... 目的从辅助性T细胞(Th)极化情况,探讨不同病程尖锐湿疣患者的细胞免疫状态。方法取肝素抗凝血,用密度梯度离心法分离出血浆和外周血单一核细胞(PBMC)进行细胞培养和免疫荧光染色:PHA和自身血浆刺激PBMC诱导T细胞极化,72h后收获细胞,分别标记抗CD4鄄PE与抗CCR5鄄FITC和抗CD4鄄FITC与抗CCR3鄄PE,最后利用流式细胞仪对标记细胞进行分析。结果尖锐湿疣患者中,短病程组与长病程组Th1/Th2极化细胞百分率分别为(25.82±2.22)%/(14.80±1.14)%与(12.20±1.37)%/(13.74±0.99)%,两组极化细胞百分率分别与正常对照组比较差异均有显著性(P <0.05),短病程组Th1/Th2的比值为1.75±0.17,而长病程组为0.89±0.11。结论短病程尖锐湿疣患者机体呈现Th1型反应,而长病程者则以Th2型反应为主,存在Th1型反应向Th2型反应切换的现象。 展开更多
关键词 尖锐湿疣 外周血 TH细胞亚群 细胞免疫 细胞培养 免疫荧光染色
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根皮素的抗炎和免疫抑制作用(英文) 被引量：19
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作者 陆晓宇 曾耀英 +3 位作者 叶燕霞 周玉英 慕静静 赵晓慧 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期480-485,共6页
探讨根皮素(phloretin)在体外对小鼠T淋巴细胞增殖、活化、周期和巨噬细胞NO释放、吞噬功能的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术检测根皮素对T淋巴细胞增殖的影响。荧光抗体染色结合流式细胞术分析根皮素对T淋巴细胞在ConA的刺激下C... 探讨根皮素(phloretin)在体外对小鼠T淋巴细胞增殖、活化、周期和巨噬细胞NO释放、吞噬功能的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术检测根皮素对T淋巴细胞增殖的影响。荧光抗体染色结合流式细胞术分析根皮素对T淋巴细胞在ConA的刺激下CD69和CD25的表达水平的影响。碘化丙啶(PI)染色检测细胞周期的分布情况。Griess试剂盒和荧光微球分别用以检测巨噬细胞NO释放和吞噬功能。结果显示,根皮素(40、60和80μmol.L-1)明显抑制T淋巴细胞增殖,增殖指数(PI)从1.41±0.13分别下降到1.34±0.16、1.19±0.12和1.07±0.06。根皮素可明显抑制CD69和CD25的表达(P<0.01)。细胞周期分析显示,根皮素可将细胞抑制在G0/G1期。巨噬细胞在LPS和IFN-γ的刺激下的NO释放量为(26.72±3.57)μmol.L-1,而在根皮素作用下NO释放量明显下降(P<0.01)。巨噬细胞吞噬率在根皮素作用下也明显下降(P<0.01)。以上结果表明,根皮素有望发展成为一种新的免疫抑制药物。 展开更多
关键词 根皮素 T淋巴细胞 巨噬细胞 流式细胞术
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杨梅素对淋巴细胞活化及增殖的影响 被引量：16
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作者 俞瑜 曾耀英 +3 位作者 刘良 季煜华 邢飞跃 肇静娴 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期63-66,共4页
目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光... 目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术,流式细胞仪检测杨梅素对小鼠CD3+T细胞CD69表达的影响;采用3H-TdR参入法检测杨梅素对淋巴细胞增殖的影响,采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测杨梅素对IL-2mRNA表达的影响。采用ELISPOT检测杨梅素对IFN-γ分泌的影响。结果杨梅素能抑制T细胞早期活化标志CD69的表达,并能抑制淋巴细胞增殖反应,同时对淋巴细胞活化后IL-2 mRNA的表达及IFN-γ的分泌也有抑制作用。结论杨梅素对淋巴细胞的活化增殖反应具有抑制作用。 展开更多
关键词 杨梅素 淋巴细胞活化 增殖 细胞因子
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