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一种通用的基于NSP5基因的A组轮状病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：11
1
作者 曾渊君 李廷栋 +7 位作者 鄢小琼 许红梅 杨晗 贾连智 李毅坚 罗国兴 葛胜祥 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期258-264,共7页
建立一种通用的检测不同物种来源A组轮状病毒的逆转录实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR)。根据轮状病毒保守的NSP5基因的保守序列设计引物和探针,建立并优化RT-qPCR检测体系;同时通过9份轮状病毒毒株和96份临床标本的检测对该方法和目前常... 建立一种通用的检测不同物种来源A组轮状病毒的逆转录实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR)。根据轮状病毒保守的NSP5基因的保守序列设计引物和探针,建立并优化RT-qPCR检测体系;同时通过9份轮状病毒毒株和96份临床标本的检测对该方法和目前常用的基于NSP3基因的2种RT-qPCR方法进行灵敏度和检出率的比较。新建立的RT-qPCR方法特异性高,重复性好;与基于NSP3基因的方法相比:(1)在临床标本检测中,检出率无差异;(2)9株培养病毒检测中,NSP5体系可全部检出,两个NSP3对照体系NSP3-1和NSP3-2的检出率分别为78.78%(7/9)和88.89%(8/9);(3)NSP5体系与对照NSP3-1体系灵敏度相当,检测下限比NSP3-2体系低100倍。本研究建立的基于NSP5的荧光定量PCR体系灵敏度高,可检测毒株范围广,为检测不同物种来源的A组轮状病毒提供一种新的选择。 展开更多
关键词 轮状病毒 实时荧光定量PCR TAQMAN NSP5
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漳州市某院2019—2023年腹泻儿童轮状病毒感染流行特征
2
作者 曾渊君 陈伟德 +3 位作者 周巧玲 郭月丽 杨惠聪 张春斌 《海峡预防医学杂志》 CAS 2024年第2期21-23,共3页
目的了解漳州市某院就诊的腹泻患儿轮状病毒感染流行特征,为临床诊断与预防提供依据。方法收集并分析2019年1月至2023年10月漳州市某院就诊的7946例腹泻患儿临床资料和轮状病毒抗原检测结果。结果腹泻患儿粪便标本轮状病毒总阳性率16.7%... 目的了解漳州市某院就诊的腹泻患儿轮状病毒感染流行特征,为临床诊断与预防提供依据。方法收集并分析2019年1月至2023年10月漳州市某院就诊的7946例腹泻患儿临床资料和轮状病毒抗原检测结果。结果腹泻患儿粪便标本轮状病毒总阳性率16.7%(1326/7946);阳性率以2019年最高27.8%,2022年最低8.1%(χ^(2)=159.40,P<0.01);36~47月龄组阳性率最高(33.1%)、24~35月龄组次之(28.4%,χ^(2)=462.72,P<0.01);轮状病毒感染全年均有发生,阳性率以冬季(22.7%)和春季(25.7%)较高(χ^(2)=444.89,P<0.01)。结论漳州市某医院就诊的腹泻儿童轮状病毒阳性率较高,主要在冬春季,应采取相应防控措施以减少轮状病毒感染。 展开更多
关键词 轮状病毒 腹泻患儿 流行特征 疾病控制 漳州市
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SNRPA1在肠癌中的表达及对于辛伐他汀抗肿瘤活性的影响 被引量：1
3
作者 黄荔丰 曾渊君 +2 位作者 刘慧丽 任红岳 张春斌 《齐齐哈尔医学院学报》 2023年第13期1201-1206,共6页
目的研究小核核糖核蛋白多肽A1(Small nuclear ribonucleoprotein A1,SNRPA1)在肠癌组织中的表达及对辛伐他汀抗肿瘤活性的影响。方法通过TCGA数据库、CPTAC及HPA数据库分析SNRPA1在肠癌中的的转录水平和蛋白表达水平,并通过组织芯片验... 目的研究小核核糖核蛋白多肽A1(Small nuclear ribonucleoprotein A1,SNRPA1)在肠癌组织中的表达及对辛伐他汀抗肿瘤活性的影响。方法通过TCGA数据库、CPTAC及HPA数据库分析SNRPA1在肠癌中的的转录水平和蛋白表达水平,并通过组织芯片验证肿瘤组织与正常组织表达差异。利用NCI-60肿瘤细胞药物活性数据分析SNRPA1与辛伐他汀的相关性。通过qPCR筛选及WB验证SNRPA1高表达细胞株RKO及相对低表达细胞株HCT-116并采用CCK8法检测其对辛伐他汀抗肿瘤活性的影响。结果TCGA数据、CPTAC数据表明肠癌组织中SNRPA1的转录和表达水平显著高于癌旁组织(P<0.0001)。组织芯片免疫组化染色结果可见SNRPA1在肿瘤组织中表达升高。NCI-60数据表明SNRPA1的表达水平与辛伐他汀的抗肿瘤活性呈负相关性(R=-0.64,P<0.0001)。CCK8结果表明RKO细胞对辛伐他汀敏感性较低(IC 50=18.3μM),HCT-116对辛伐他汀敏感性相对较高(IC 50=9.91μM)。结论SNRPA1在肠癌组织中异常高表达,辛伐他汀的抗肿瘤活性与SNRPA1的表达呈负相关,降低SNRPA1的表达可增强辛伐他汀的抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 SNRPA1 辛伐他汀 肠癌 抗肿瘤活性
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基于液相色谱质谱联用技术的儿童免疫性血小板减少症血浆代谢组学研究
4
作者 徐文鑫 肖慧婷 +3 位作者 曾渊君 翁开枝 王尔莉 张春斌 《黑龙江医药科学》 2023年第2期40-45,共6页
目的:基于LC-MS寻找儿童ITP潜在生物标记物。方法:采集患儿及健康儿童外周血进行LC-MS检测,通过统计学方法分析,经数据库鉴定代谢物结构。结果:LC-MS/MS检测获得原始数据,经主成分分析、层次聚类分析、秩和检验及HMDB数据库中匹配鉴定,... 目的:基于LC-MS寻找儿童ITP潜在生物标记物。方法:采集患儿及健康儿童外周血进行LC-MS检测,通过统计学方法分析,经数据库鉴定代谢物结构。结果:LC-MS/MS检测获得原始数据,经主成分分析、层次聚类分析、秩和检验及HMDB数据库中匹配鉴定,再通过ROC曲线分析,最终筛选鉴定出5种潜在生物标志物:间甲酚、腐胺、5-羟色胺、2-氧代精氨酸、精氨基琥珀酸。结论:检测鉴定出的5种关键差异性代谢物可能可以作为鉴别ITP患儿和健康儿童的临床实验室生物标记物。 展开更多
关键词 儿童免疫性血小板减少症 代谢组学 液相色谱-质谱联用技术
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轮状病毒感染与宿主固有免疫研究进展 被引量：3
5
作者 宋飞波 曾渊君 +1 位作者 李廷栋 葛胜祥 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期811-816,共6页
轮状病毒(rotavirus,RV)是世界范围内引起婴幼儿和动物幼崽急性肠胃炎的主要病因之一。轮状病毒感染具有明显的种属特异性,病毒感染后主要引起婴幼儿或动物幼崽产生腹泻症状。固有免疫应答通过多个信号通路的激活抑制轮状病毒的感染和复... 轮状病毒(rotavirus,RV)是世界范围内引起婴幼儿和动物幼崽急性肠胃炎的主要病因之一。轮状病毒感染具有明显的种属特异性,病毒感染后主要引起婴幼儿或动物幼崽产生腹泻症状。固有免疫应答通过多个信号通路的激活抑制轮状病毒的感染和复制,同时轮状病毒自身也通过多种途径来拮抗固有免疫应答。本文就近年来轮状病毒感染后宿主的固有免疫应答机制以及轮状病毒对宿主固有免疫的拮抗机制进行综述,以期为轮状病毒治疗性药物的研发和预防轮状病毒感染提供参考。 展开更多
关键词 轮状病毒 固有免疫 干扰素 免疫逃逸
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轮状病毒反向遗传学研究进展 被引量：1
6
作者 赵毕妍 曾渊君 +1 位作者 李廷栋 葛胜祥 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期544-550,共7页
反向遗传学技术可直接在基因水平上对病毒的基因组进行操作,从而快速直接的对病毒复制、致病等机制进行详细的研究。目前,呼肠孤病毒科的多种病毒,例如,哺乳动物正呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus,... 反向遗传学技术可直接在基因水平上对病毒的基因组进行操作,从而快速直接的对病毒复制、致病等机制进行详细的研究。目前,呼肠孤病毒科的多种病毒,例如,哺乳动物正呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)等均已利用反向遗传学技术这一有力工具,在病毒各项基础研究中取得了较大进展。但是,对于呼肠孤病毒科轮状病毒属成员,反向遗传学操作系统的构建进展缓慢。自2006年成功建立依赖于辅助病毒的反向遗传学系统开始,直到2017年才成功建立完全只依赖于质粒的反向遗传学系统。本文将对轮状病毒反向遗传学发展过程作一简要综述,并对未来轮状病毒反向遗传学研究方向作一展望,以期为加快轮状病毒的感染机制等基础研究提供技术支撑。 展开更多
关键词 轮状病毒 反向遗传学 呼肠孤病毒科 感染性克隆 辅助病毒
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轮状病毒VP4~*高聚体的制备及其免疫保护性评价
7
作者 李毅坚 罗国兴 +5 位作者 杨晗 贾连智 曾渊君 赵毕妍 李廷栋 葛胜祥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期281-289,共9页
在前期工作中发现,截短的轮状病毒VP4~*蛋白(aa26–476)在大肠杆菌中能够以可溶形式表达,且在小鼠模型中具有较高的免疫原性和免疫保护性。本研究通过颗粒化进一步提高VP4~*蛋白的免疫保护性。通过37℃水浴加热处理24h使VP4~*蛋白多聚化... 在前期工作中发现,截短的轮状病毒VP4~*蛋白(aa26–476)在大肠杆菌中能够以可溶形式表达,且在小鼠模型中具有较高的免疫原性和免疫保护性。本研究通过颗粒化进一步提高VP4~*蛋白的免疫保护性。通过37℃水浴加热处理24h使VP4~*蛋白多聚化,通过高效液相色谱、透射电镜、分析超离等分析VP4~*蛋白颗粒化程度,通过酶联免疫吸附试验分析颗粒化对VP4~*蛋白与中和抗体反应性的影响;通过差示量热法分析VP4~*高聚体的热稳定性;最后,通过小鼠母传抗体模型研究颗粒化对VP4~*免疫原性和免疫保护性的影响。结果表明,VP4~*蛋白高聚体结构均一,并且相比三聚体,具有更高热稳定性和中和抗体结合活性;在内毒素<20 EU/mg的条件下,与铝佐剂混合,刺激小鼠产生更高滴度的中和抗体;对轮状病毒导致的腹泻具有更高的免疫保护性。综上所述,VP4~*高聚体的研究为轮状病毒基因工程亚单位疫苗的研制提供了更广阔的思路。 展开更多
关键词 轮状病毒 基因工程疫苗 VP4^*高聚体 中和抗体 免疫保护性
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