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用花粉管途径获得小麦转基因植株 被引量:93
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作者 王东江 +4 位作者 吴有强 张健 周文娟 朱小平 徐乃正 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 1993年第3期256-262,共7页
本文将带GUS标记基因的质粒pBI121用花粉管途径转化普通小麦(T. aestivum L)品种小山3号的小花。从结实的106粒种子中,经点杂交初步筛选,再经Southern分子杂交鉴定,选出5株转基因小麦,转化率为4.7%。同时用荧光法和X-Gluc染色法测试,... 本文将带GUS标记基因的质粒pBI121用花粉管途径转化普通小麦(T. aestivum L)品种小山3号的小花。从结实的106粒种子中,经点杂交初步筛选,再经Southern分子杂交鉴定,选出5株转基因小麦,转化率为4.7%。同时用荧光法和X-Gluc染色法测试,检测到这些植株中有GUS基因的表达产物β-葡糖苷酸酶(GUS)存在,证明GUS基因已整合到小麦植株中,并能在植物体中表达。 展开更多
关键词 小麦 花粉管途径 转基因植株
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花粉管通道(或运载)法转化的植株后代遗传表现及转化机理的探讨 被引量:42
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作者 吴有强 +3 位作者 王东江 张健 马铮嵘 周志勇 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1998年第6期561-566,共6页
追溯了花粉管通道法的起因和形成以及现在的应用情况 ,说明利用此法可以将报告基因、目的基因等转入植物 ,经Southenblot,Northernblot等法鉴定和对表达产物的检测 ,证明这是一个行之有效的转化方法 .作者实验室对小麦转基因植株后代连... 追溯了花粉管通道法的起因和形成以及现在的应用情况 ,说明利用此法可以将报告基因、目的基因等转入植物 ,经Southenblot,Northernblot等法鉴定和对表达产物的检测 ,证明这是一个行之有效的转化方法 .作者实验室对小麦转基因植株后代连续 4代遗传表现的观察证明 ,转入的处源基因可以连续遗传 ,遗传规律与其他转化方法如农干菌法、基因枪法等所得结果相似 .在此基础上 ,作者从植物受精生物学的光学和亚显微结构的观察结果出发 ,探讨了此法的转化机理 ,证明受精前后的卵细胞类似未完全酶解的原生质体 ,因此其转化机理应与原生质体的转化相似 .最后总结了此法的优点 。 展开更多
关键词 转基因植株 花粉管通道法 育种 遗传表现 作物
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抗菌核病转基因油菜植株的获得 被引量:13
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作者 张丽华 党本元 +5 位作者 周奕华 毛勇 张铁汉 王兰岚 陈正华 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第12期41-46,共6页
将携带菜豆几丁质酶基因的植物表达载体pBch 通过农杆菌介导法导入甘兰型油菜H165 中。经卡那霉素对T0 、T1 和T2 代植株进行连续的筛选和菌核病(sclerotiniasclerotinorium) 接种试验, 共获得33 株抗菌核病的T2 代植株。对其中的22 株... 将携带菜豆几丁质酶基因的植物表达载体pBch 通过农杆菌介导法导入甘兰型油菜H165 中。经卡那霉素对T0 、T1 和T2 代植株进行连续的筛选和菌核病(sclerotiniasclerotinorium) 接种试验, 共获得33 株抗菌核病的T2 代植株。对其中的22 株进行PCR 检测, 从6 株扩增得到与菜豆几丁质酶基因大小对应的DNA 带型,Southern 杂交证实其中2 株呈现阳性结果, 表明外源基因已整合到油菜基因组中。对转化植株抗菌核病的接种试验及在菌核病高发区的种植试验表明, 含几丁质酶基因的转化体对菌核病具有抗性, 并已得到T3 展开更多
关键词 油菜 几丁质酶基因 抗菌核病植株 育种
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胡萝卜组织培养和高效遗传转化体系的建立 被引量:15
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作者 张娅 +2 位作者 周志勇 陈毓荃 黄华樑 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2005年第B08期37-42,共6页
为了建立高效的胡萝卜遗传转化体系,本实验选用3个胡萝卜(Daucuscarotavar.sativa)栽培品种:‘金笋五寸’、‘Carol’和‘改良黑田七寸’,以它们的下胚轴和子叶为外植体,首先建立了高频愈伤诱导体系。在此基础上,以Carol的下胚轴和愈伤... 为了建立高效的胡萝卜遗传转化体系,本实验选用3个胡萝卜(Daucuscarotavar.sativa)栽培品种:‘金笋五寸’、‘Carol’和‘改良黑田七寸’,以它们的下胚轴和子叶为外植体,首先建立了高频愈伤诱导体系。在此基础上,以Carol的下胚轴和愈伤组织为受体材料,利用根癌农杆菌LBA4404介导转化质粒pBI121。经X-Gluc染色,证明GUS基因瞬间表达成功,经PCR方法鉴定,证明GUS基因已整合到胡萝卜的染色体中,从而建立了高效的胡萝卜遗传转化体系。 展开更多
关键词 胡萝卜 组织培养 遗传转化 GUS基因 遗传转化体系 愈伤组织 根癌农杆菌 PCR方法 栽培品种 诱导体系
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抗乙型脑炎病毒单克隆抗体重链可变区基因在烟草中的表达 被引量:3
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作者 吴有强 熊曦明 +3 位作者 张健 王东江 黄华梁 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1997年第11期1205-1208,共4页
自Hiatt等1989年首次报道了在植物中进行抗体基因的表达研究以来,至今短短数年,这类研究已日益广泛深入。目前,利用转基因植物和植物细胞表达工程抗体基因进行抗体的生产、作物抗病育种以及植物代谢调控和发育的研究已经成为生物技术中... 自Hiatt等1989年首次报道了在植物中进行抗体基因的表达研究以来,至今短短数年,这类研究已日益广泛深入。目前,利用转基因植物和植物细胞表达工程抗体基因进行抗体的生产、作物抗病育种以及植物代谢调控和发育的研究已经成为生物技术中的一个新途径,新的生长点。这是免疫学和植物科学在分子水平上有机结合的产物。现有的证据表明,不仅高等植物,单细胞绿藻也可以表达抗体基因。高等植物不仅可以表达简单的单域抗体基因,也可以表达更加复杂的IgA-G杂合抗体基因,并在体内装配出双分子dIgA-G和带分泌组分(SC)的SIgA-G,利用转抗体基因植物进行抗病育种,植物代谢和发育的研究也取得令人瞩目的进展。 展开更多
关键词 抗乙型脑炎病毒 单克隆抗体 重链可变区基因
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植物抗体基因工程研究进展 被引量:5
6
作者 付钰 +2 位作者 俞小淙 蒋欣 黄华梁 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1998年第16期1705-1711,共7页
抗体基因工程与植物生物技术相结合 ,产生了植物抗体 .研究表明 ,工程抗体中不论是全抗体或小分子抗体 ,在植物中表达后都具有与抗原结合的活性 ,即具功能性 ,从而使植物抗体的研究备受人们的关注 .目前主要在下述 3个方面开展研究 :( ... 抗体基因工程与植物生物技术相结合 ,产生了植物抗体 .研究表明 ,工程抗体中不论是全抗体或小分子抗体 ,在植物中表达后都具有与抗原结合的活性 ,即具功能性 ,从而使植物抗体的研究备受人们的关注 .目前主要在下述 3个方面开展研究 :( 1 )医用治疗性抗体 .人们期望利用农业大田规模的方式生产抗体 ,以降低成本 .另外 ,利用植物可多次杂交的特点 ,装配双 (或多 )功能的新的大分子抗体 ,创造新的抗体药物 ;( 2 )植物生理 .通过表达植物激素及微量活性物质的工程抗体 ,封闭原有活性成分 ,研究植物的生长和发育 ;( 3)植物抗病 .将由植物病毒制备出的工程抗体基因转入植物 ,以抵御该病毒的入侵 ,达到防病、治病的目的 . 展开更多
关键词 抗体基因 植物抗性 转基因植物 基因工程
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抗除草剂基因和荧光素酶基因在小麦愈伤组织中的稳定表达 被引量:6
7
作者 杨书礼 +3 位作者 吴有强 朱小平 王东江 张健 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1993年第11期825-830,共6页
用PEG介导法将抗除草剂基因和萤火虫荧光素酶基因转入小麦原生质体,在含50mg/L Basta的培养基上筛选出有抗性的愈伤组织。DNA分子杂交结果表明bar基因和luc基因都已整合到小麦细胞基因组中,萤火虫荧光素酶活... 用PEG介导法将抗除草剂基因和萤火虫荧光素酶基因转入小麦原生质体,在含50mg/L Basta的培养基上筛选出有抗性的愈伤组织。DNA分子杂交结果表明bar基因和luc基因都已整合到小麦细胞基因组中,萤火虫荧光素酶活性测定也检测到luc基因的表达。 展开更多
关键词 小麦 荧光素酶 除草剂 基因
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抗甜菜坏死黄脉病毒单链抗体表达载体的构建及其表达 被引量:1
8
作者 周志勇 +5 位作者 吴有强 刘志萍 王文星 黄华梁 蔡祝南 于嘉林 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第11期1006-1011,共6页
用PCR方法以分泌抗甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)单克隆抗体的杂交瘤细胞的基因组为模板,扩增了编码BNYVV单抗的重链可变区(VH)基因。测序表明,该VH序列属于小鼠Ⅱ(A)亚类,全长为360bp,编码120个氨基酸... 用PCR方法以分泌抗甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)单克隆抗体的杂交瘤细胞的基因组为模板,扩增了编码BNYVV单抗的重链可变区(VH)基因。测序表明,该VH序列属于小鼠Ⅱ(A)亚类,全长为360bp,编码120个氨基酸。将其和先前克隆的轻链基因分别插入到一个含有连接VH和VL基因的连接序列的质粒之中,构建成单链抗体(scFv)基因的表达载体pTCscFv。将质粒在大肠杆菌中表达,ELISA法检测出表达产物有与BNYVV抗原结合的活性。 展开更多
关键词 BNYVV 单链抗体 大肠杆菌表达系统 抗病育种
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口蹄疫病毒VP1基因在胡萝卜中的表达 被引量:4
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作者 张娅 +1 位作者 陈耀锋 黄华 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第3期75-80,共6页
为了生产一种可以直接口服的口蹄疫疫苗,以胡萝卜(Daucus carota L.var.sativa)无菌幼苗下胚轴诱导的愈伤组织为受体材料,通过农杆菌LBA4404介导的遗传转化,在CaMV双35S启动子的驱动下,将口蹄疫病毒(foot-and-mouthd iseasevi... 为了生产一种可以直接口服的口蹄疫疫苗,以胡萝卜(Daucus carota L.var.sativa)无菌幼苗下胚轴诱导的愈伤组织为受体材料,通过农杆菌LBA4404介导的遗传转化,在CaMV双35S启动子的驱动下,将口蹄疫病毒(foot-and-mouthd iseasevirus,FMDV)结构蛋白VP1基因的活性肽片段(包括2个141~160位肽和1个200-213位肽的基因片段)导入胡萝卜愈伤组织细胞。经PCR和PCR-Southern杂交等方法鉴定转化苗,确认口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因已整合到胡萝卜染色体中,转化效率达到52%。SDS-PAGE试验结果初步证明,在转化苗总蛋白中有目的基因表达,胡萝卜种子中可溶性蛋白含量最高,达3.57g/L,而根中可溶性蛋白含量最低,仅有0.17g/L;靠近心叶的叶片可溶性蛋白含量可达到1.475g/L,而最外部叶片可溶性蛋白含量仅有0.37g/L,相差近5倍。Dot-ELISA和ELISA检测结果表明,转化苗中表达的口蹄疫病毒结构蛋白VP1可以与FMDV灭活疫苗免疫动物制备的抗体特异结合。以上试验结果证明,口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因在转基因胡萝卜中表达成功。 展开更多
关键词 转基因胡萝卜 口服疫苗 口蹄疫病毒VP1基因
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抗膀胱癌单链抗体基因在烟草中的表达 被引量:2
10
作者 付钰 +5 位作者 黄浩旻 林晴 蒋欣 李志华 周志勇 黄华梁 《自然科学进展(国家重点实验室通讯)》 1999年第6期528-530,共3页
以抗膀胱癌单链抗体(scFv)基因为目的基因,构建植物表达载体,转化烟草,研究医用治疗性工程抗体基因在植物中的表达.结果表明,经Southern杂交鉴定出的转基因植株,叶片提取物的蛋白电泳有特异带出现,其分子量约为27 ku,同预期的单链抗体... 以抗膀胱癌单链抗体(scFv)基因为目的基因,构建植物表达载体,转化烟草,研究医用治疗性工程抗体基因在植物中的表达.结果表明,经Southern杂交鉴定出的转基因植株,叶片提取物的蛋白电泳有特异带出现,其分子量约为27 ku,同预期的单链抗体分子量一致,表达量最高的一株,抗体含量占可溶性蛋白的1.4%.竞争性抑制ELISA测定结果显示,该抗体有抗原结合活性. 展开更多
关键词 抗膀胱癌 单链抗体基因 转基因烟草 基因表达
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Transgenic Wheat Plants Obtained With Pollen-Tube Pathway Method 被引量:1
11
作者 王东江 +4 位作者 吴有强 张健 周文娟 朱小平 徐乃正 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1994年第3期319-325,386,共8页
β-glucuronidase (GUS) gene (carried by pBI121 plasmid) has been introduced into hexaploid wheat c. v. Xiaoshan No. 3 with the pollen-tube pathway method. Five transgenic plants are selected from 106 T0 plants. All of... β-glucuronidase (GUS) gene (carried by pBI121 plasmid) has been introduced into hexaploid wheat c. v. Xiaoshan No. 3 with the pollen-tube pathway method. Five transgenic plants are selected from 106 T0 plants. All of these plants are identified by the Southern hybridization, and the GUS activity can be detected by using fluorogenic assay and histochemical stain. 展开更多
关键词 WHEAT POLLEN-TUBE pathway METHOD GUS gene TRANSGENIC WHEAT plants.
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抗菌核病转基因油菜的获得
12
作者 张丽华 党本元 +5 位作者 周奕华 毛勇 张铁汉 王兰岚 陈正华 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第S3期177-178,共2页
关键词 转基因油菜 抗菌核病 中国科学院 卡那霉素 遗传研究 植物表达载体 转基因植株 农杆菌 植物几丁质酶 筛选培养基
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转基因植物产生之早期历程
13
作者 张娅 《生物学通报》 北大核心 2003年第4期9-10,共2页
关键词 转基因植物 分子生物学 遗传工程 质粒 基因抢法 农杆菌
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植物性口服疫苗研究进展 被引量:1
14
作者 张娅 +2 位作者 周志勇 陈毓荃 黄华樑 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第9期12-15,共4页
利用转基因植物作为生物反应器生产疫苗是近几年发展起来的一个崭新的领域 ,并取得了许多成就。就植物性口服疫苗的最新研究进展进行了综述 。
关键词 转基因植物 口服疫苗 生物反应器 马铃薯 胡萝卜
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抗甜菜坏死黄脉病毒单链抗体基因的构建和在细菌中的表达
15
作者 周志勇 +5 位作者 吴有强 刘志萍 熊英 黄华梁 蔡祝南 于嘉林 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第S3期96-97,共2页
关键词 甜菜坏死黄脉病毒 抗体基因 中国科学院 可变区基因 中国农业大学 细菌 表达产物 遗传 酶切位点 基因工程抗体
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小麦花药培养中小孢子DNA合成的放射自显影研究
16
作者 《Acta Botanica Sinica》 1988年第2期140-145,共6页
用放射自显影术研究小麦花药培养中小孢子的雄核发育,发现培养24小时后3H-胸腺嘧啶核苷掺入单核晚期小孢子,2.5天后营养细胞核中有3H-胸腺嘧啶核苷掺入,由A和B途径形成多细胞花粉的过程中,超始几次孢子体分裂,细胞的DNA合成是... 用放射自显影术研究小麦花药培养中小孢子的雄核发育,发现培养24小时后3H-胸腺嘧啶核苷掺入单核晚期小孢子,2.5天后营养细胞核中有3H-胸腺嘧啶核苷掺入,由A和B途径形成多细胞花粉的过程中,超始几次孢子体分裂,细胞的DNA合成是同步进行的。在多细胞花粉形成时逐渐变为不同步,生殖核的DNA合成不活跃,偶而能被标记上,个别合成DNA的生殖细胞形成类胚柄结构,当培养基中蔗糖浓度低(3%)时,培养早期小孢子内核的DNA合成正常进行,3H-胸腺嘧啶核苷比高糖浓度(9%)更易惨入小孢子,但经1-2次分裂后,核不再分裂,细胞壁不形成,所以3%的糖浓度中,多细胞花粉不能形成,主要不是DNA不能复制,而是细胞分裂和细胞壁的形成受阻所致。 展开更多
关键词 放射自显影 3H-胸腺嘧啶核苷 小孢子 DNA合成 小麦 花药培养 雄核发育 蔗糖浓度 愈伤组织
全文增补中
DNA SYNTHESIS OF MINI-MICROSPORE FROM POLLEN-DERIVED HAPLOID OF TRITICUM AESTIVUM L.
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作者 胡含 +3 位作者 张汉 张传善 徐宗尧 郝水 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1982年第6期665-669,共5页
Ⅰ. INTRODUCTIONIn pollen mother cell (PMC) of wheat pollen-derived haploid, there are only 21 chromosomes (n=21), each of which lacks its homologous partner, thus the meiosis is abnormal and results in the production... Ⅰ. INTRODUCTIONIn pollen mother cell (PMC) of wheat pollen-derived haploid, there are only 21 chromosomes (n=21), each of which lacks its homologous partner, thus the meiosis is abnormal and results in the production of the microspores varying in size. Among them, some very small microspores which contain only a few chromosomes packed in a micro- 展开更多
关键词 chromosomes POLLEN HAPLOID wheat HOMOLOGOUS abnormal ANTHER partner mother packed
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构建及表达小麦高分子量容蛋白基因5′端调控序列缺失突变体嵌合质粒 被引量:2
18
作者 鲍时来 徐乃正 +1 位作者 鲁润龙 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期333-336,共4页
通过定点突变,在小麦高分子量(HMW)谷蛋白基因5′上游调控序列的TATAbox与基因翻译起始密码子ATG之间,改变三个碱基,产生新的BamHⅠ内切酶位点.在调控序列中,选择四个合适的内切酶,对上游序列进行缺失,分离... 通过定点突变,在小麦高分子量(HMW)谷蛋白基因5′上游调控序列的TATAbox与基因翻译起始密码子ATG之间,改变三个碱基,产生新的BamHⅠ内切酶位点.在调控序列中,选择四个合适的内切酶,对上游序列进行缺失,分离到四个大小分别为2400、610、440和110bp的含有不同调控元件的HMW谷蛋白基因启动子,与质粒pBI101.1的报告基因GUS重组,构建了四个嵌合质粒pWG2400、pWG600、pWG440和pWG100.经基因枪、微束激光和PEG等方法将pWG2400转化玉米胚乳悬浮细胞,GUS基因获得表达.这为进一步研究HMW谷蛋白基因的调控机理奠定了基础. 展开更多
关键词 小麦 调控序列 HMW 麦谷蛋白基因 缺失突变体
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番杏的组织培养与植株再生 被引量:3
19
作者 王文星 付钰 +2 位作者 周志勇 刘远声 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2002年第5期456-456,共1页
关键词 番杏 组织培养 植株再生
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抗除草剂转基因小麦愈伤组织的获得
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作者 杨书礼 +5 位作者 吴有强 田文忠 张健 王东江 朱小平 周文娟 《植物学报》 CAS CSCD 1992年第S1期99-99,共1页
小麦是重要的粮食作物,但在植物基因工程的研究中其进展是较缓慢的。除 Lorz.H 在1985年报导获得转基因愈伤组织外,迄今未见有更多的报导.我们在1989—1991年先后将抗除草剂 Basta 的 Bar 基因和萤火虫荧光素酶(Luc)基因转入小麦悬浮... 小麦是重要的粮食作物,但在植物基因工程的研究中其进展是较缓慢的。除 Lorz.H 在1985年报导获得转基因愈伤组织外,迄今未见有更多的报导.我们在1989—1991年先后将抗除草剂 Basta 的 Bar 基因和萤火虫荧光素酶(Luc)基因转入小麦悬浮细胞系徐州211和(中3×科冬58)F<sub>1</sub>的原生质体中,获得转基因的多细胞团和愈伤组织,并从(中3×科冬58)F<sub>1</sub>的转基因抗性愈伤组织中得到根的分化。 展开更多
关键词 愈伤组织 转基因小麦 萤火虫荧光素酶 悬浮细胞 植物基因工程 Basta 基因转入 细胞团 染色体组 王海波
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