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RAPD在枇杷品种鉴定中的应用 被引量:45
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作者 潘新法 孟祥勋 +1 位作者 广 徐春明 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期136-138,共3页
运用RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA,即随机扩增多态性DNA)分析技术,对16个枇杷品种的基因组DNA进行RAPD分析,从几个随机引物中筛选出2个随机引物能从各个品种的基因组DNA扩增出DNA片段,在16个枇杷品种中2个引物扩增出19个DNA片段... 运用RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA,即随机扩增多态性DNA)分析技术,对16个枇杷品种的基因组DNA进行RAPD分析,从几个随机引物中筛选出2个随机引物能从各个品种的基因组DNA扩增出DNA片段,在16个枇杷品种中2个引物扩增出19个DNA片段,其中3个为公共,16个为多态性或单态性DNA片段,表明不同枇杷品种基因型间存在着极为丰富的遗传多样性,扩增的DNA指纹图谱可将16个品种一一区分,为枇杷品种鉴定提供了新的方法,同时也为分子标记辅助育种提供了依据。 展开更多
关键词 RAPD 枇杷 品种鉴定 DNA多态性
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南美白对虾养殖环境及其肠道细菌多样性分析 被引量:38
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作者 孙振丽 宣引明 +10 位作者 张皓 蒋明 潘云生 张益明 龚叶平 陆小平 余德山 薛仁宇 胡小龙 广 贡成良 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期594-605,共12页
为了探讨南美白对虾(Penaeus vannamei Boone)肠道及其养殖环境中细菌种群组成和分布,采用Illumina miseq测序平台,基于16S r RNA基因的序列测定结果,对南美白对虾肠道及其养殖池塘底泥、水体中细菌的种群结构进行分析。结果显示,在南... 为了探讨南美白对虾(Penaeus vannamei Boone)肠道及其养殖环境中细菌种群组成和分布,采用Illumina miseq测序平台,基于16S r RNA基因的序列测定结果,对南美白对虾肠道及其养殖池塘底泥、水体中细菌的种群结构进行分析。结果显示,在南美白对虾肠道、养殖池塘底泥、水体分别检测到206、265和270个细菌属,其中,有90个属在3个样品中均可检测到,底泥和水、底泥和虾肠道、水和虾肠道中检测到的共有细菌属分别为146、128和119个,表明养殖池塘底泥、水和肠道中细菌存在密切的相互作用。在底泥、水和虾肠道样品中丰度大于1%的优势菌属分别有20、17和10个;底泥、水体和虾肠道中丰度最高的细菌均为一种分类未明的细菌属,丰度分别为23.08%、37.13%和42.22%。除此之外,底泥中主要优势细菌属分别为假单胞菌属(Pseudomonas)(5.77%)、Ohtaekwangia(4.79%)和狭义的梭菌属(Clostridium)(3.88%);水体中主要优势细菌属分别为土壤杆菌属(Sediminibacterium)(6.64%)、Spartobacteria genera incertae sedis(3.95%)和GPIIa(3.20%),而虾肠道中主要优势细菌属分别为假单胞菌属(Pseudomonas)(14.57%)和不动杆菌属(Acinetobacter)(6.54%)。在底泥、水和肠道中分别检测到3、6和6个潜在致病细菌属,丰度最高的细菌属分别是假单胞菌属(5.77%)、黄杆菌属(Flavobacterium)(0.77%)和假单胞菌属(14.57%)。在底泥、水和肠道中检测到的益生菌可分别分配至8、6和7个细菌属,其中有5个属在3个样品中均可检测到。聚类分析显示,养殖池塘底泥、水体和南美白对虾肠道细菌种群中丰富度位于前20的分类操作单元(OUT)在聚类树的位置存在明显不同。研究结果进一步加深了对健康南美白对虾肠道细菌种群及其与养殖环境中细菌种群互作的理解,为益生菌制剂的研发提供了新的线索。 展开更多
关键词 南美白对虾 养殖水体 底泥 肠道 细菌种群
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细菌性“颤抖病”病原的体外中药药敏试验 被引量:28
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作者 薛仁宇 广 +2 位作者 魏育红 朱越雄 贡成良 《水利渔业》 北大核心 2002年第2期39-41,共3页
嗜水气单胞菌 2菌株ES - 1、ES - 2对地锦草、黄莲、五倍子和增效剂具高度敏感性 ,这 4种药物可作为防治由该菌引起疾病的首选药物 ,同时发现这 2株菌对黄芪、穿心莲、连翘等具有不同程度的耐药性。通过 3种高度抑菌药物间及与增效剂之... 嗜水气单胞菌 2菌株ES - 1、ES - 2对地锦草、黄莲、五倍子和增效剂具高度敏感性 ,这 4种药物可作为防治由该菌引起疾病的首选药物 ,同时发现这 2株菌对黄芪、穿心莲、连翘等具有不同程度的耐药性。通过 3种高度抑菌药物间及与增效剂之间的相互作用 ,得出增效剂对五倍子、黄莲有明显的增效作用 ,地锦草和五倍子具有协同作用 ,尤其增效剂对五倍子的增效作用效果最为明显 ,该复方药物可作为由该菌引起疾病的高效、低成本。 展开更多
关键词 颤抖病 嗜水气单胞菌 中草药 药敏试验 体外试验 细菌性“颤抖病” 病原
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基于piggyBac转座子转hGM-CSF基因家蚕的研究 被引量:17
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作者 广 薛仁宇 +3 位作者 何泽 郑小坚 沈卫德 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期324-327,447,共5页
将由家蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子控制下的hGM-CSF基因克隆到p igA3GFP载体中,构建了家蚕转基因载体p igA3GFP[IE-GMCSF],利用压力渗透法和精子介导法将其与辅助质粒helper p igA3一起导入家蚕蚕卵,获得产生绿色荧光的家蚕,次代产... 将由家蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子控制下的hGM-CSF基因克隆到p igA3GFP载体中,构建了家蚕转基因载体p igA3GFP[IE-GMCSF],利用压力渗透法和精子介导法将其与辅助质粒helper p igA3一起导入家蚕蚕卵,获得产生绿色荧光的家蚕,次代产生荧光蚕的比例分别为0.17%,0.15%。将次代荧光蚕与正常蚕交配后代(G1)的荧光蚕个体再相互杂交,连续进行多代选育,获得了稳定遗传的转hGM-CSF基因家蚕品系。 展开更多
关键词 piggyBac因子 转基因家蚕 人类粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 IE-1启动子 精子介导法
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野生糙皮侧耳子实体多糖的脱色素效果比较 被引量:19
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作者 朱越雄 孙海一 广 《光谱实验室》 CAS CSCD 2005年第5期1070-1073,共4页
用乙醇沉淀法从野生糙皮侧耳子实体中提取水溶性多糖,分别用活性碳,二乙氨乙基(DEAE)纤维素,H2O2,重蒸酚等4种脱色剂进行脱色;并以酵母聚糖为标准品比较脱色效果,用光谱扫描法检测光吸收强度的变化;结果表明,用0.75%浓度的活性碳脱色后... 用乙醇沉淀法从野生糙皮侧耳子实体中提取水溶性多糖,分别用活性碳,二乙氨乙基(DEAE)纤维素,H2O2,重蒸酚等4种脱色剂进行脱色;并以酵母聚糖为标准品比较脱色效果,用光谱扫描法检测光吸收强度的变化;结果表明,用0.75%浓度的活性碳脱色后,有色杂质的去除效果最好,光谱吸收峰最接近标准品。 展开更多
关键词 糙皮侧耳 多糖 脱色 光谱扫描法
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家蚕丝素蛋白轻链基因(fib-L)启动子序列的克隆及其活性分析 被引量:14
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作者 周文林 广 +3 位作者 薛仁宇 虞晓华 沈卫德 贡成良 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期547-554,共8页
家蚕Bombyx mori丝素蛋白轻链(fibroin light-chain,fib-L)基因fib-L具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为了利用其启动子构建能够表达外源基因的丝腺生物工厂,本实验对fib-L启动子活性进行了研究。通过PCR法克隆了fib-L启... 家蚕Bombyx mori丝素蛋白轻链(fibroin light-chain,fib-L)基因fib-L具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为了利用其启动子构建能够表达外源基因的丝腺生物工厂,本实验对fib-L启动子活性进行了研究。通过PCR法克隆了fib-L启动子元件,序列分析显示fib-L启动子由位于-33^-25处的TATA盒元件和位于-128^-121处的特征性序列GTCAATTT共同组成。用fib-L启动子控制报告基因DsRed进行家蚕BmN细胞和蚕体内的瞬时表达研究,结果表明fib-L启动子可以驱动DsRed报告基因在BmN细胞和家蚕后部丝腺组织中瞬时表达。 展开更多
关键词 家蚕 丝素轻链基因 启动子 DSRED 瞬时表达
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野生树舌多糖的脱色和脱蛋白 被引量:13
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作者 朱越雄 石亮 广 《氨基酸和生物资源》 CAS 2005年第3期1-3,共3页
从野生树舌中提取水溶性多糖,经乙醇沉淀后得多糖,并分别用活性碳,苯酚,DEAE纤维素,H2O2等4种方法进行脱色,并以酵母聚糖为标准品比较脱色效果,用紫外和可见光谱扫描法检测有色杂质的去除效果;用Zn盐,胰蛋白酶,有机溶剂,胰蛋白酶加有机... 从野生树舌中提取水溶性多糖,经乙醇沉淀后得多糖,并分别用活性碳,苯酚,DEAE纤维素,H2O2等4种方法进行脱色,并以酵母聚糖为标准品比较脱色效果,用紫外和可见光谱扫描法检测有色杂质的去除效果;用Zn盐,胰蛋白酶,有机溶剂,胰蛋白酶加有机溶剂等4种方法脱蛋白,以比较不同方法脱色,脱蛋白的效果。结果表明用质量分数为0.75%的活性碳脱色后,有色杂质的去除效果最好,光谱吸收峰最接近标准品;单独使用有机溶剂的脱蛋白效果最好。 展开更多
关键词 树舌 多糖 脱色 脱蛋白
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枇杷栽培种的随机扩增DNA多态性(RAPD)研究 被引量:12
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作者 孟祥勋 潘新法 +1 位作者 广 李蒙英 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第4期33-37,41,共6页
运用RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA)分析技术 ,对江苏省常绿果树研究中心 16个枇杷(E .japonicThunbLindl)品种的基因组DNA进行了分析 ,从 5 0个随机引物中筛选出 19个引物 ,可从各个品种的基因组DNA扩增出谱带 ,总数为 2 33个 ,... 运用RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA)分析技术 ,对江苏省常绿果树研究中心 16个枇杷(E .japonicThunbLindl)品种的基因组DNA进行了分析 ,从 5 0个随机引物中筛选出 19个引物 ,可从各个品种的基因组DNA扩增出谱带 ,总数为 2 33个 ,其中多态性DNA片段 176个 ,公共性DNA片段 5 7个 ,表明这些枇杷品种间存在着丰富的遗传多样性。根据DNA片段的电泳结果 ,计算出品种间遗传相似系数及遗传距离 ,应用UPG MA方法建立了品种遗传关系的系统树 ,将 16个品种分成 5类。从随机引物中筛选出 2个随机引物能从各个品种的基因组DNA扩增出DNA片段 ,在 16个枇杷品种中 2个引物扩增出 19个DNA片段 ,其中 3个为公共 ,16个为多态性或单态性DNA片段。这些结果可为枇杷品种鉴定、分类、亲缘关系确立及品种选育中杂交组合亲本选配提供一定的依据。 展开更多
关键词 枇杷 栽培种 随机扩增DNA多态性 RAPD
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基于16S rRNA基因序列分析家蚕肠道细菌的多样性 被引量:22
9
作者 许刚 孙振丽 +3 位作者 胡小龙 薛仁宇 广 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期641-649,共9页
家蚕肠道菌群与蚕体对营养物质的消化吸收及健康性密切相关。为了解家蚕肠道细菌的多样性及雌、雄个体间肠道细菌类群的差异,通过应用454焦磷酸测序技术检测细菌16S rRNA基因序列的方法分析家蚕5龄第3天雌、雄幼虫中肠内容物中的细菌类... 家蚕肠道菌群与蚕体对营养物质的消化吸收及健康性密切相关。为了解家蚕肠道细菌的多样性及雌、雄个体间肠道细菌类群的差异,通过应用454焦磷酸测序技术检测细菌16S rRNA基因序列的方法分析家蚕5龄第3天雌、雄幼虫中肠内容物中的细菌类群,共发现5 578个分类操作单元(operational taxonomic units),包括14个门、21个纲、30个目、71个科、120个属的细菌,雌、雄个体在上述分类阶元共有的肠道细菌菌群分别为8、9、20、38和46种。在属水平上对细菌菌群构成的分析显示,雄蚕肠道中的主要优势细菌为代尔夫特菌属Delftia、橙单胞菌属Aurantimonas、肠球菌属Enterococcus、嗜糖假单胞菌属Pelomonas、青枯菌属Ralstonia、台湾温单胞菌属Tepidimonas、假单胞菌属Pseudomonas、阿斯普罗单胞菌属Aspromonas、甲基杆菌属Methylobacterium和葡萄球菌属Staphylococcus;雌蚕肠道中的主要优势细菌为代尔夫特菌属Delftia、橙单胞菌属Aurantimonas、假单胞菌属Pseudomonas、嗜糖假单胞菌属Pelomonas、佩特罗菌属Petrobacter、肠球菌属Enterococcus、台湾温单胞菌属Tepidimonas、狭义的梭菌属Clostridium sensu stricto、阿斯普罗单胞菌属Aspromonas。其中,雄蚕肠道中有23个属的细菌丰度是雌蚕的1.5倍以上,在雌蚕肠道中有7个属的细菌丰度是雄蚕的1.5倍以上,表明雌性与雄性家蚕肠道细菌类群的组成和比率存在明显差异。基于16S rRNA基因序列的聚类分析显示,家蚕肠道中的优势细菌属可分为2个大类。家蚕肠道细菌的多样性研究结果可作为探讨雌蚕和雄蚕经济性状差异的新线索。 展开更多
关键词 家蚕肠道 细菌类群 多样性 性别差异 16S RRNA基因序列 454焦磷酸测序
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中华绒螯蟹血清中外源凝集素的凝集作用及影响因素 被引量:13
10
作者 广 朱越雄 +1 位作者 薛仁宇 贡成良 《水产养殖》 CAS 1999年第5期16-18,共3页
中华绒螯蟹血清中的凝集素可凝集人、兔、豚鼠、小白鼠、鹌鹑、鸡、蟾蜍、鳝鱼等动物血细胞,但不凝集鲫鱼血细胞;此外,该凝集素亦可凝集双球菌、蕈状芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、枯草杆菌等细菌。该凝集素凝集活性可被L-山梨糖、D-果糖... 中华绒螯蟹血清中的凝集素可凝集人、兔、豚鼠、小白鼠、鹌鹑、鸡、蟾蜍、鳝鱼等动物血细胞,但不凝集鲫鱼血细胞;此外,该凝集素亦可凝集双球菌、蕈状芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、枯草杆菌等细菌。该凝集素凝集活性可被L-山梨糖、D-果糖、D-半乳糖轻微抑制,并表现出对pH和温度的广泛适应性,在pH为2-12,温度为8℃-64℃范围内均具凝集活性。中华绒螯蟹血清中的凝集素对上述几种动物血细胞的凝集效价高于罗氏沼虾和克螯虾。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 血清 凝集素 凝集效价
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中华绒螯蟹呼肠孤病毒样病毒病研究 被引量:15
11
作者 贡成良 薛仁宇 +4 位作者 广 魏育红 朱越雄 陈辉 吴祥甫 《中国病毒学》 CSCD 2000年第4期395-399,共5页
为了探讨中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)颤抖病的发生原因 ,从表现出颤抖症状的中华绒螯蟹中初步分离纯化出一种病毒 ,人工感染健康触 ,出现明显的阳性反应 ,并从人工感染的蟹的血液、肠道、性腺等组织中检测到病毒 ,表明分离到的病毒... 为了探讨中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)颤抖病的发生原因 ,从表现出颤抖症状的中华绒螯蟹中初步分离纯化出一种病毒 ,人工感染健康触 ,出现明显的阳性反应 ,并从人工感染的蟹的血液、肠道、性腺等组织中检测到病毒 ,表明分离到的病毒为中华绒螯蟹的病原 ,且对野生锯齿华溪蟹 (Sesarna <Holometapus >dehanni)也具感染性。电镜观察结果显示该病毒粒子呈球状 ,无囊膜 ,大小为 55nm左右。病毒核酸在 1%琼脂糖凝胶电泳中 ,电泳图谱呈现 3/ 3/ 4 / 2型 ,总分子量约 2 0kb。该核酸对DNaseⅠ不敏感 ,对RNase敏感 ,推测病毒核酸为dsRNA ,从病毒形态大小、病毒核酸等特性初步确定该病毒为呼肠孤病毒样病毒 (Reovirus likeVirus)。该研究为探讨中华绒螯蟹颤抖病的发生原因及防治方法有很大的指导意义。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 颤抖病 呼肠孤病毒样病毒 病毒核酸
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鳗鲡血液细胞的研究 被引量:16
12
作者 朱越雄 广 《水产养殖》 CAS 1997年第4期18-20,共3页
本文通过对鳗鲡血液有形成份常规Wright染色并进行显微分析,辩识其红血细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、小淋巴细胞、单核细胞和血栓细胞并加以分析。
关键词 鳗鲡 血液细胞
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家蚕蛹虫草的延缓衰老作用研究 被引量:17
13
作者 贡成良 潘中华 +2 位作者 郑小坚 薛仁宇 广 《苏州大学学报(工科版)》 CAS 2005年第2期24-27,共4页
经口给予老龄小鼠不同剂量的家蚕蛹虫草50天,与空白对照组相比,小鼠心肌脂褐素含量明显下降,肝脏SOD比活力显著提高,但谷胱甘肽过氧化物酶活力单位数无显著变化。不同剂量的家蚕蛹虫草喂饲果蝇表明:雄、雌性果蝇平均寿命、最高寿命、半... 经口给予老龄小鼠不同剂量的家蚕蛹虫草50天,与空白对照组相比,小鼠心肌脂褐素含量明显下降,肝脏SOD比活力显著提高,但谷胱甘肽过氧化物酶活力单位数无显著变化。不同剂量的家蚕蛹虫草喂饲果蝇表明:雄、雌性果蝇平均寿命、最高寿命、半数死亡时间都有明显延长。推测家蚕蛹虫草有较好的延缓衰老作用。 展开更多
关键词 蚕蛹虫草 延缓衰老 小鼠 果蝇
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家蚕丝蛋白Fhx/P25基因启动子区域的克隆及序列分析 被引量:12
14
作者 刘炜彬 贡成良 +3 位作者 薛仁宇 周文林 诸戌娴 广 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期17-23,共7页
为研究家蚕Fhx/P25基因在时空上的调控机制,通过PCR扩增获得家蚕丝素蛋白Fhx/P25基因的启动子序列并进行克隆和序列分析。进一步构建了由Fhx/P25启动子驱动报告基因DsRed的表达载体pSK-P25-DsRed-PolyA,并通过家蚕BmN细胞进行瞬时表达... 为研究家蚕Fhx/P25基因在时空上的调控机制,通过PCR扩增获得家蚕丝素蛋白Fhx/P25基因的启动子序列并进行克隆和序列分析。进一步构建了由Fhx/P25启动子驱动报告基因DsRed的表达载体pSK-P25-DsRed-PolyA,并通过家蚕BmN细胞进行瞬时表达。结果显示:Fhx/P25基因的启动子序列符合真核生物启动子特点,具有丝腺特异性表达启动子的特征,TATA框的保守序列为TATAA,位于-28—-32处,CAAT基序有3个,其中-110—-117和-90—-87处的2个CAAT基序可能具有活性;二级结构分析显示:Fhx/P25启动子区域具有复杂的茎环结构,这可能与蛋白表达的组织特异性、时间性以及活性有关。基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕BmN培养细胞中的瞬时表达。 展开更多
关键词 家蚕 Fhx/P25基因 启动子 序列分析
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中华绒螯蟹颤抖病的一种病原特性初步研究 被引量:12
15
作者 薛仁宇 贡成良 +6 位作者 广 魏育红 朱越雄 陈飞英 张唯 陈辉 吴祥甫 《水利渔业》 2000年第6期46-48,共3页
病毒球状、无囊膜 ,大小为 5 5nm左右 ,病毒核酸有 12个基因组片段 ,为 3/3/6型 ,总分子量 2 0kb左右。推测病毒核酸为RNA ,初步确定为呼肠孤病毒样病毒 (Reovirus -likeVirus)。
关键词 中华绒螯蟹 颤抖病 呼肠孤病毒样病毒 病原特性
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家蚕丝素蛋白H链基因启动子区域的克隆及活性分析 被引量:11
16
作者 周文林 锦如 +3 位作者 叶爱红 广 薛仁宇 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期72-77,共6页
家蚕(Bombyxmori)丝素蛋白H链基因(fib-H)具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为利用其时空调控机制,通过PCR扩增方法克隆fib-H启动子片段,并进行序列分析,进而构建由fib-H启动子控制报告基因DsRed的重组载体pSK-FH-DsRed-Pol... 家蚕(Bombyxmori)丝素蛋白H链基因(fib-H)具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为利用其时空调控机制,通过PCR扩增方法克隆fib-H启动子片段,并进行序列分析,进而构建由fib-H启动子控制报告基因DsRed的重组载体pSK-FH-DsRed-PolyA,通过家蚕BmN细胞和丝腺进行瞬时表达。结果表明:克隆的fib-H启动子序列具有典型的丝腺特异性表达启动子的特征,并可以驱动DsRed报告基因在BmN细胞和家蚕后部丝腺组织中瞬时表达。 展开更多
关键词 家蚕 丝素H链基因 启动子 DsRed基因 瞬时表达
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基于DNA载体的RNAi抑制家蚕核型多角体病毒复制 被引量:12
17
作者 薛仁宇 广 +3 位作者 王崇龙 沈卫德 魏育红 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期362-367,共6页
基于DNA载体的RNA i技术可以较长时间高效地抑制基因的活性。利用家蚕核型多角体病毒ie-1基因启动子,构建了在细胞内能转录形成与ie-1基因+19^+446区域互补同源的发夹状dsRNA的RNA i DNA载体。研究结果表明,该载体DNA在体外、体内均能... 基于DNA载体的RNA i技术可以较长时间高效地抑制基因的活性。利用家蚕核型多角体病毒ie-1基因启动子,构建了在细胞内能转录形成与ie-1基因+19^+446区域互补同源的发夹状dsRNA的RNA i DNA载体。研究结果表明,该载体DNA在体外、体内均能较好地抑制家蚕核型多角体病毒在细胞中的复制。 展开更多
关键词 DNA载体 RNA干涉 家蚕核型多角体病毒 极早期基因
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家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析 被引量:9
18
作者 诸戌娴 广 +3 位作者 薛仁宇 周文林 刘炜彬 贡成良 《科技通报》 2007年第6期828-834,共7页
家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA... 家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24~-30处,CAAT框位于-112~-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。 展开更多
关键词 家蚕 丝胶蛋白基因 启动子 克隆 表达载体
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piggyBac转座子介导的家蚕细胞转基因研究初探 被引量:10
19
作者 周文林 王崇龙 +4 位作者 刘波 广 薛仁宇 沈卫德 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期30-35,共6页
为探讨稳定转化家蚕细胞表达外源基因的新方法,以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)极早期蛋白基因(ie-1)启动子元件驱动新霉素抗性基因(neor),并克隆至具有绿色荧光蛋白基因(gfp)标记的昆虫转座子载体piggyBac中,构建转基因载体pigA3-IE-Neo... 为探讨稳定转化家蚕细胞表达外源基因的新方法,以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)极早期蛋白基因(ie-1)启动子元件驱动新霉素抗性基因(neor),并克隆至具有绿色荧光蛋白基因(gfp)标记的昆虫转座子载体piggyBac中,构建转基因载体pigA3-IE-Neo。以该载体转染家蚕BmN细胞,用终浓度800μg/mL的遗传霉素(geneticin,G418)筛选3个月,获得了稳定转化的细胞,呈现绿色荧光的细胞数达80%以上。通过PCR鉴定证实了细胞基因组DNA中neor基因和gfp基因的存在。 展开更多
关键词 转基因 家蚕 PIGGYBAC转座子 家蚕细胞
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美国白蛾核型多角体病毒超氧化物歧化酶基因的序列分析和表达 被引量:8
20
作者 广 薛仁宇 +2 位作者 朱越雄 魏育红 贡成良 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期173-180,共8页
根据测序结果 ,HcNPVsod的核苷酸序列与BmNPVsod的完全一致 ,与AcNPVsod的核苷酸序列相比 ,同源性达到 97 2 % ;推测HcNPVsod编码 1 51个氨基酸 ,与BmNPVsod的完全一致 ,与AcNPVsod编码的氨基酸相比 ,有三个氨基酸的差别。按基酸序列分... 根据测序结果 ,HcNPVsod的核苷酸序列与BmNPVsod的完全一致 ,与AcNPVsod的核苷酸序列相比 ,同源性达到 97 2 % ;推测HcNPVsod编码 1 51个氨基酸 ,与BmNPVsod的完全一致 ,与AcNPVsod编码的氨基酸相比 ,有三个氨基酸的差别。按基酸序列分析表明 ,HcNPVSOD蛋白中含有对SOD结构和活性必需的氨基酸残基 ,在HcNPVsod中均是保守的。SOD活性测定表明酶活为 1 47 0 展开更多
关键词 美国白蛾核型多角体病毒 超氧化物歧化酶 表达 进化分析
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