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狂犬病病毒(RABV)感染小鼠原代神经元细胞对Bif-1蛋白表达的影响 被引量：1
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作者 李武建 金宏丽 +10 位作者 焦翠翠 时智康 张颖 黄培 伊淑帅 闫飞虎 赵永坤 高玉伟 杨松涛 王化磊 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期711-716,共6页
建立狂犬病病毒(rabies virus,RABV)CVS-11株感染小鼠原代神经元细胞模型,探究RABV感染小鼠原代神经元细胞对Bif-1(Bax-interacting factor-1)蛋白表达的影响。分离并培养小鼠大脑皮质原代神经元细胞,通过间接免疫荧光鉴定RABV感染效率... 建立狂犬病病毒(rabies virus,RABV)CVS-11株感染小鼠原代神经元细胞模型,探究RABV感染小鼠原代神经元细胞对Bif-1(Bax-interacting factor-1)蛋白表达的影响。分离并培养小鼠大脑皮质原代神经元细胞,通过间接免疫荧光鉴定RABV感染效率。将RABV以MOI=0.1剂量接种原代神经元细胞,使用直接免疫荧光、Western blot、RT-PCR等方法检测RABV在原代神经元细胞中的复制情况。利用Western blot检测RABV感染原代神经元细胞后Bif-1蛋白的表达情况。结果成功分离了小鼠大脑皮质原代神经元细胞;直接免疫荧光、Western blot、RT-PCR结果显示,RABV CVS-11株可感染原代神经元细胞;Western blot结果表明RABV感染后,原代神经元细胞中Bif-1蛋白水平早期出现短期上升后降低,且整体低于正常水平。RABV CVS-11感染原代神经元细胞后,Bif-1蛋白水平发生改变,为进一步探索Bif-1蛋白在RABV致病中的作用及其分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒(RABV) 小鼠 原代神经元细胞 Bif-1
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克里米亚刚果出血热病毒抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：2
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作者 时智康 王琪 +8 位作者 焦翠翠 李武建 黄培 闫飞虎 赵永坤 冯娜 马爱民 杨松涛 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第4期389-395,共7页
目的原核表达并纯化克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, CCHFV)M基因编码的包膜糖蛋白片段Gn1和Gc1,以两段目的蛋白为包被抗原分别建立检测CCHFV抗体的间接ELISA方法。方法 PCR扩增CCHFV M基因的抗原保守... 目的原核表达并纯化克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, CCHFV)M基因编码的包膜糖蛋白片段Gn1和Gc1,以两段目的蛋白为包被抗原分别建立检测CCHFV抗体的间接ELISA方法。方法 PCR扩增CCHFV M基因的抗原保守区胞外域Gn1和Gc1基因片段,分别克隆至pET-30a(+)载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),并对不同诱导条件(温度、IPTG浓度、时间)进行优化,使用His-Ni柱纯化目的蛋白,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,分别以纯化的Gn1和Gc1蛋白作为包被抗原建立抗体ELISA检测方法。结果表达并纯化了CCHFV糖蛋白片段Gn1、Gc1,分子质量分别为35 ku和23 ku;Western blot检测两种重组蛋白均能被抗Gn1,Gc1抗体识别。以纯化蛋白为抗原建立的间接ELISA方法检测已知阳性血清CCHFV抗体滴度为1∶10 240,检测RVFV、WNV、JEV感染者血清均阴性,变异系数<8%。结论表达纯化的Gn1和Gc1蛋白纯度均在90%以上,两种蛋白均表现出良好的免疫原性,以两种蛋白为包被抗原建立的抗体间接ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性。重组蛋白的制备为克里米亚刚果出血热疫苗免疫效果评价、疫病监测和新型疫苗研发奠定了基础。 展开更多
关键词 克里米亚-刚果出血热病毒 原核表达 抗体检测 间接ELISA
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