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重组氨基脲敏感型胺氧化酶在293T细胞中的定位及酶活性测定
1
作者 钱九战 李蕊 +3 位作者 罗红军 林哲绚 施金婉 罗文鸿 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2017年第4期277-283,共7页
目的:构建氨基脲敏感型胺氧化酶(SSAO)基因真核表达载体,并在293T细胞中进行瞬时表达,确定SSAO体外表达效率、亚细胞定位及酶活性。方法:以pcDNA3-SSAO质粒为模板,PCR扩增获取SSAO编码区全序列,分别构建SSAO与绿色荧光蛋白(GFP)的融合... 目的:构建氨基脲敏感型胺氧化酶(SSAO)基因真核表达载体,并在293T细胞中进行瞬时表达,确定SSAO体外表达效率、亚细胞定位及酶活性。方法:以pcDNA3-SSAO质粒为模板,PCR扩增获取SSAO编码区全序列,分别构建SSAO与绿色荧光蛋白(GFP)的融合表达质粒pEGFP-N3-SSAO和共表达质粒pIRES2-EGFP-SSAO,并通过酶切和测序验证。再分别将pcDNA3-SSAO、pEGFP-N3-SSAO、pIRES2-EGFP-SSAO和pcFLAG-SSAO重组质粒瞬时转染293T细胞,在荧光显微镜下观察目的蛋白的分布及表达情况。采用高效液相色谱法(HPLC)测定转染上述4种重组质粒及相应空质粒细胞的SSAO活性。结果:测序结果表明重组真核表达质粒构建正确。在瞬时转染pEGFP-N3-SSAO和pIRES2-EGFP-SSAO重组质粒的293T细胞中,转染后3~36 h各组均可观察到绿色荧光,且转染36 h为最佳观察时间点。转染pIRES2-EGFP-SSAO质粒的绿色荧光分布于细胞质中;转染pEGFP-N3-SSAO和pcFLAG-SSAO质粒的绿色荧光及红色荧光均分布于细胞膜上。酶活性检测结果显示转染pcFLAG-SSAO、pIRES2-EGFP-SSAO和pcDNA3-SSAO载体质粒的293T细胞中的SSAO活性分别为111.50±7.07、117.22±9.54、215.74±21.44 nmoL/(mg·h),较各自的空白质粒对照组均显著升高(P均<0.01),但转染pEGFP-N3-SSAO质粒的细胞SSAO活性极低,仅为2.09±0.29 nmoL/(mg·h)。结论:293T细胞中,体外重组表达的SSAO蛋白主要分布于细胞膜上,以pcDNA3为载体外源表达的天然状态SSAO活性最高。 展开更多
关键词 氨基脲敏感型胺氧化酶 重组表达 亚细胞定位 酶活性测定
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仿制药与原研药吸入用布地奈德混悬液治疗AECOPD的药物经济学研究
2
作者 刘裕婷 林晓峰 +3 位作者 林丽敏 施金婉 蓝雁霞 温娟莹 《中国处方药》 2022年第4期63-65,共3页
目的观察仿制药与原研药布地奈德混悬液在临床上用于治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者的临床效果与药物经济学上的差异,以便为广大患者在疗效与费用之间作出权衡。方法将慢性阻塞性肺疾病急性加重的患者52例随机分为两组,分别给予仿... 目的观察仿制药与原研药布地奈德混悬液在临床上用于治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者的临床效果与药物经济学上的差异,以便为广大患者在疗效与费用之间作出权衡。方法将慢性阻塞性肺疾病急性加重的患者52例随机分为两组,分别给予仿制药吸入用布地奈德混悬液(天晴速畅)及原研药吸入用布地奈德混悬液(普米克令舒),1 mg,一天2次,每次15 min,治疗4~7 d后观察临床疗效,运用药物经济学的最小成本分析、成本-效果分析方法进行评价。结果两组总有效率差异无统计学意义(P>0.05);两组肺功能指标及血气分析治疗前后均具有显著性差异(P<0.05),但治疗后两组间血气分析和肺功能差异无统计学意义(P>0.05);成本与效果方面,仿制药吸入用布地奈德混悬液的成本与效果比(C/E)显著小于原研药,且进行敏感性分析后证实结论可信。结论仿制药与原研药吸入用布地奈德混悬液在治疗慢阻塞肺急性加重的临床疗效、不良反应发生率差异均无统计学意义,仿制药吸入用布地奈德混悬液具有较高的经济优势。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病急性加重 吸入用布地奈德混悬液 原研药 仿制药 药物经济学
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