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鸡tie-2受体胞外片段重组蛋白的制备及其抗血管生成作用的研究 被引量：4
1
作者 罗彦 文艳君 +10 位作者 田聆 吴扬 刘继彦 李秋 李炯 毛咏秋 邓洪新 阚兵 何秋明 杨金亮 魏于全 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期101-105,共5页
目的　设法调控血管的生长发育 ,从而达到治疗疾病的目的。方法　用 PCR方法从既往构建含鸡 tie- 2受体胞外段基因的表达质粒中扩增目的片段 ,构建 p QE质粒原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ;将目的蛋白进一步纯化、复性并免疫小鼠 ,... 目的　设法调控血管的生长发育 ,从而达到治疗疾病的目的。方法　用 PCR方法从既往构建含鸡 tie- 2受体胞外段基因的表达质粒中扩增目的片段 ,构建 p QE质粒原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ;将目的蛋白进一步纯化、复性并免疫小鼠 ,获得抗血清 ,用 EL ISA和 Western印迹检测抗血清中抗体的存在 ;分离纯化抗体 ,用流式细胞仪体外观察其对血管内皮细胞生长情况的影响用体内藻酸盐包裹肿瘤细胞实验和肿瘤内微血管 CD31免疫组化观察其对血管生成情况的影响。结果　经酶切分析及测序鉴定表明获得了鸡 tie- 2受体胞外目的片段的p QE原核表达载体 ,且高效表达目的蛋白 ,其免疫小鼠可产生抗重组蛋白的抗体 ;体外细胞培养结果显示免疫后产生的抗体明显的诱导血管内皮细胞凋亡 ;藻酸盐包裹实验表明此抗体能显著降低肿瘤新生血管的形成 ;CD31微血管计数显示此抗体能明显减少肿瘤内微血管数。结论　用原核表达的方法成功制备了鸡 tie- 2受体胞外片段 (配体结构域 )的蛋白疫苗 ,且此疫苗能明显产生抗血管生成作用。 展开更多
关键词 TIE-2受体 重组蛋白 制备 抗血管生成 原核表达
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免疫球蛋白M在上皮源性恶性肿瘤及细胞系中的表达 被引量：6
2
作者 覃纲 余玲 +6 位作者 杨金亮 李祖茂 杨洪斌 文艳君 魏于全 梁传余 田聆 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期686-689,F0003,共5页
目的探讨IgM在多种上皮来源恶性肿瘤及肿瘤传代细胞系中的表达情况。方法应用组织芯片技术结合免疫组化SABC法检测IgM在10种上皮源性肿瘤及对应阴性组织中的表达情况,并通过流式细胞仪、间接免疫荧光法检测IgM在8种上皮源性肿瘤及Burkit... 目的探讨IgM在多种上皮来源恶性肿瘤及肿瘤传代细胞系中的表达情况。方法应用组织芯片技术结合免疫组化SABC法检测IgM在10种上皮源性肿瘤及对应阴性组织中的表达情况,并通过流式细胞仪、间接免疫荧光法检测IgM在8种上皮源性肿瘤及Burkitt's淋巴瘤(Raji)传代细胞系中的表达。结果IgM在10种上皮来源恶性肿瘤组织及部分对应阴性组织中均有表达,其阳性表达率分别为70.0%和20.0%(P<0.05);IgM在8种上皮来源恶性肿瘤传代细胞系及Raji细胞中存在表达,与阴性对照比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论IgM在上皮来源恶性肿瘤及传代细胞系中存在广泛表达,其意义和机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 免疫球蛋白M 组织芯片 免疫荧光 上皮性恶性肿瘤 癌细胞系
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小鼠B细胞趋化因子原核表达与纯化 被引量：3
3
作者 姜愚 文艳君 +3 位作者 刘继彦 邹春华 田聆 魏于全 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2004年第2期251-254,共4页
用多聚酶链反应 (PCR)扩增小鼠 B细胞趋化因子 (BL C)基因片断并导入 Bam H1和 Pst1两个酶切位点 ,插入到原核表达载体 PQE30中 ,构建重组质粒 p BL C- PQE30 ,并诱导相对分子量为 10 Kda的重组目的蛋白r BL C的表达 ,通过 Ni柱亲和层... 用多聚酶链反应 (PCR)扩增小鼠 B细胞趋化因子 (BL C)基因片断并导入 Bam H1和 Pst1两个酶切位点 ,插入到原核表达载体 PQE30中 ,构建重组质粒 p BL C- PQE30 ,并诱导相对分子量为 10 Kda的重组目的蛋白r BL C的表达 ,通过 Ni柱亲和层析纯化目的蛋白。双酶切和测序分析显示小鼠 B细胞趋化因子片断正确插入原核表达载体 PQE30中 ,重组蛋白 Western blot分析显示出特异性条带。提示已通过基因工程方法获得并纯化了小鼠B细胞趋化因子重组蛋白。 展开更多
关键词 小鼠 B细胞趋化因子 原核表达 多聚酶链反应 PCR BLC 重组蛋白
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增强DNA免疫效应的研究进展 被引量：2
4
作者 文艳君 徐恒 《国外医学（免疫学分册）》 CAS 1999年第6期320-323,共4页
新近迅速发展起来的ＤＮＡ疫苗由于兼有重组亚单位疫苗的安全性和减毒活疫苗的有效性，因而受到人们的高度重视。ＤＮＡ疫苗虽具有多种优点，但在诱导的免疫效应上还未尽如人意。研究者们尝试着采取各种措施以增强ＤＮＡ疫苗的免疫效应... 新近迅速发展起来的ＤＮＡ疫苗由于兼有重组亚单位疫苗的安全性和减毒活疫苗的有效性，因而受到人们的高度重视。ＤＮＡ疫苗虽具有多种优点，但在诱导的免疫效应上还未尽如人意。研究者们尝试着采取各种措施以增强ＤＮＡ疫苗的免疫效应，本文对近年来几种比较有效的增强措施作一综述。 展开更多
关键词 DNA疫苗 免疫刺激 DNA序列 免疫效应
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RNA干涉鼻咽癌细胞Raf-1基因表达的实验研究 被引量：2
5
作者 刘立中 梁传余 +6 位作者 窦艳玲 田聆 魏于全 文艳君 李炯 邓红新 阚兵 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期805-808,共4页
目的研究应用载体介导的RNA干涉技术特异性干扰Raf-1基因在鼻咽癌细胞株HNE1中的表达以及对其生物学行为的影响。方法构建利用U6启动子转录功能的shRNA的载体,在U6启动子下游分别插入含针对Raf-1基因不同位点的特异性RNA干扰序列-67bp... 目的研究应用载体介导的RNA干涉技术特异性干扰Raf-1基因在鼻咽癌细胞株HNE1中的表达以及对其生物学行为的影响。方法构建利用U6启动子转录功能的shRNA的载体,在U6启动子下游分别插入含针对Raf-1基因不同位点的特异性RNA干扰序列-67bp寡核苷酸片段,并编号命名为:pshuttle-Raf-1-a(225),pshattle-Raf-1-b(358)和pshuttle-Raf-1-c(474)。将构建的质粒通过脂质体转染人鼻咽癌细胞株HNE1,用RT-PCR分析Raf-1基因的mRNA的表达,流式细胞仪检测转染后HNE1细胞的凋亡率。结果3种含有针对Raf-1基因不同特异性序列的质粒转染后均能干扰该基因在HNE1细胞中的表达,其中以pSIRENshuttle-Raf-1-b(358)作用最为明显。RT-PCR检测Raf-1基因mRNA表达量下降,流式细胞仪检测细胞凋亡率增加,达到65%。结论应用载体介导的RNAi技术可特异性干扰Raf-1基因在鼻咽癌细胞HNE1中的表达,使该细胞凋亡率增加,Raf-1基因相对应的mRNA表达下降。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 原癌基因蛋白质 c-caf类 基因
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鼻咽癌相关抗原的血清学筛选与鉴定 被引量：2
6
作者 谢可 田聆 +4 位作者 魏于全 邓洪新 赵霞 李炯 文艳君 《实用医院临床杂志》 2004年第2期27-29,共3页
目的　有关鼻咽癌肿瘤抗原的研究还仍然集中于研究EB病毒与鼻咽癌的相互关系上 ,而有关鼻咽癌细胞本身的肿瘤抗原的研究到目前为止还几乎是空白。采用SEREX技术筛选与鉴定鼻咽癌相关肿瘤抗原。方法　从鼻咽癌肿瘤组织中提取mRNA ;构建... 目的　有关鼻咽癌肿瘤抗原的研究还仍然集中于研究EB病毒与鼻咽癌的相互关系上 ,而有关鼻咽癌细胞本身的肿瘤抗原的研究到目前为止还几乎是空白。采用SEREX技术筛选与鉴定鼻咽癌相关肿瘤抗原。方法　从鼻咽癌肿瘤组织中提取mRNA ;构建鼻咽癌cDNA表达文库 ;利用SEREX技术筛选鼻咽癌cDNA表达文库 ;对阳性克隆进行测序、生物信息学分析。结果　①构建的鼻咽癌cDNA表达文库大小为 1.9× 10 8个重组子。②筛选出 10个阳性克隆。③测序 :有 8个阳性结果。④生物信息学分析 :除了一些已知的抗原如MAGE外 ,发现一个热休克蛋白基因家族的新成员 ,其在染色体水平上与HSPCB有 84 %的同源性 ,在氨基酸水平上有 97%的同源性。 展开更多
关键词 鼻咽癌 抗原 血清学 筛选 鉴定 CDNA表达文库
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水泡口炎病毒M蛋白对小鼠Lewis肺癌LL/2c细胞增殖与凋亡的影响 被引量：4
7
作者 赵菊梅 刘涛 +3 位作者 徐健蓉 王国庆 杜小波 文艳君 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第3期230-235,共6页
背景与目的:水泡口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)具有明显的抗肿瘤作用,在人的A549肿瘤模型和小鼠的LL/2c模型中已取得了明显的治疗效果。但复制完全型病毒在临床应用中存在着一定的安全隐患,且研究报道VSV抗肿瘤作用与其基... 背景与目的:水泡口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)具有明显的抗肿瘤作用,在人的A549肿瘤模型和小鼠的LL/2c模型中已取得了明显的治疗效果。但复制完全型病毒在临床应用中存在着一定的安全隐患,且研究报道VSV抗肿瘤作用与其基质蛋白(matrix protein,M蛋白)有关。本研究旨在探讨VSV-M蛋白对小鼠的LL/2c肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用分子克隆技术构建VSV-M蛋白重组真核表达质粒pcDNA3.1-M,经酶切、PCR、测序鉴定得到阳性重组子,体外转染LL/2c细胞,RT-PCR、Western blot检测M蛋白的表达。采用噻唑蓝(MTT)法检测了M蛋白质粒对LL/2c肿瘤细胞增殖的影响。DNALadder、Hoechst33528染色检测LL/2c肿瘤细胞凋亡。结果:构建了VSV-M蛋白真核表达质粒pcDNA3.1-M。重组质粒体外转染LL/2c细胞后,检测到M蛋白的表达;倒置显微镜下观察到细胞形态学的改变,且48h后细胞生长抑制明显,抑制率达41.3%(P<0.05),而空载体转染组只有6.5%的抑制率(P>0.05)。琼脂糖凝胶电泳可见DNA ladder形成,Hoechst33528染色检测到LL/2c细胞凋亡,细胞核改变。结论:VSV-M蛋白可抑制小鼠LL/2c细胞增殖,并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 水泡口炎病毒 M蛋白 细胞增殖 凋亡 肺肿瘤
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肾母细胞瘤相关基因新进展 被引量：4
8
作者 吴红波 赵美英 +2 位作者 李建华 魏于全 文艳君 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期42-44,共3页
与肾母细胞瘤相关的基因和染色体位点一直是国内外研究热点,主要包括WT1、WT2、染色体16q FWT1和FWT2、P53、βcatenin和1p和7p等。本文结合国内外最新科研成果,对这些基因的功能研究及其与肾母细胞瘤的关系进行综述。
关键词 儿童 肾母细胞瘤 基因突变 杂合子缺失
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IP-10质粒联合吉西他滨抗肿瘤作用的实验研究 被引量：2
9
作者 梅开 田聆 +4 位作者 魏于全 李炯 文艳君 阚兵 邓洪新 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期397-402,共6页
背景与目的:IP鄄10是α趋化因子家族成员,IP鄄10具有抗肿瘤血管作用,表现为抑制新生血管分化成毛细血管。研究表明,化疗与抗肿瘤血管治疗结合具有协同作用。本研究拟用IP鄄10质粒与化疗药物吉西他滨联合治疗肿瘤,观察其抗肿瘤作用。方法... 背景与目的:IP鄄10是α趋化因子家族成员,IP鄄10具有抗肿瘤血管作用,表现为抑制新生血管分化成毛细血管。研究表明,化疗与抗肿瘤血管治疗结合具有协同作用。本研究拟用IP鄄10质粒与化疗药物吉西他滨联合治疗肿瘤,观察其抗肿瘤作用。方法:质粒pBLAST鄄IP鄄10转化至大肠杆菌中,经扩增后,制备并纯化质粒。采用BALB/c及C57BL/6小鼠,分别建立H22肝癌及Lewis肺癌肿瘤模型。IP鄄10质粒及生理盐水肌肉注射,吉西他滨腹腔注射。收集小鼠血清,ELISA方法检测血清中IP鄄10蛋白表达;观察肿瘤体积变化、小鼠存活期及不良反应;肿瘤组织微血管免疫组化染色,确定微血管密度;TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果:IP鄄10质粒肌注后小鼠血清中IP鄄10蛋白表达于第2周达高峰[(16.8±3.6)ng/ml],至第5周仍持续有较高水平表达[(14.0±2.1)ng/ml]。IP鄄10质粒联合吉西他滨组小鼠肿瘤体积较对照组显著受抑甚至消退,在接种肿瘤细胞后第9周联合给药组小鼠存活率为90%,明显高于其他各组(IP鄄10质粒组55%,吉西他滨组以及生理盐水组为0%)(P<0.005);各组小鼠均未出现明显的不良反应。肿瘤组织内微血管密度在联合给药组为15.8±2.4,显著低于其它各组(IP鄄10组45.6±2.0,吉西他滨组50.2±3.5和生理盐水组51.3±3.0)(P<0.01)。在接种肿瘤细? 展开更多
关键词 IP-10质粒 吉西他滨 微血管密度 抗血管生成 肿瘤
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浅谈戴季陶与南京国民政府文官考试制度建设 被引量：1
10
作者 文艳君 《贵州文史丛刊》 2005年第3期24-26,共3页
政事之原,莫大于官制。戴季陶作为南京国民政府考试院院长对文官考试制度的改革与建设进行了勇敢的探索,取得了不少成绩。虽不可避免有缺陷,但却对国民政府的政治制度建设和经济发展起重大作用。
关键词 南京国民政府 戴季陶 文官考试制度 政治制度建设 经济发展 考试院 政事
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增强人波形蛋白表达可降低肝癌细胞的增殖和侵袭能力 被引量：2
11
作者 李祖茂 文艳君 +4 位作者 杨洪斌 覃纲 田聆 邓洪新 文彬 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期408-412,共5页
目的探讨波形蛋白（VIM）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法构建VIM基因质粒载体pcDNA3．1-VIM，将VIM基因稳定转染人肝细胞癌HepG2细胞株，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot测定VIM的表达，分别用细胞增殖实验和标... 目的探讨波形蛋白（VIM）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法构建VIM基因质粒载体pcDNA3．1-VIM，将VIM基因稳定转染人肝细胞癌HepG2细胞株，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot测定VIM的表达，分别用细胞增殖实验和标准的被覆基质胶侵袭小室，测定癌细胞的增殖活性和侵袭程度。结果DNA序列分析和限制性核酸内切酶消化证实重组载体已正确克隆，建立的细胞株HepG2-pV在RNA和蛋白水平均稳定高表达VIM。HepG2-pV细胞增殖能力降低（P〈0．05），软琼脂集落形成率为35．9％±3．9％，明显低于空质粒对照细胞（HepG2-P）和HepG2细胞（均P〈0．05）。HepG2-pV组侵袭细胞数为17±4，明显低于HepG2-P组和HepG2组（均P〈0．05）。结论在体外增强肝癌细胞VIM表达，可以降低其恶性表型。 展开更多
关键词 波形蛋白 癌 肝细胞 增殖 侵袭
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鸡Tie-2受体胞外片段的原核表达及目的蛋白免疫原性的研究 被引量：1
12
作者 罗彦 田聆 +8 位作者 吴扬 李秋 刘继彦 胡兵 宿静梅 何秋明 刘成文 魏于全 文艳君 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期154-157,共4页
目的　研究鸡 Tie- 2受体胞外片段 (配体结合域 )的原核表达以及目的蛋白对小鼠的抗原性。方法　用 PCR方法从既往构建的包含鸡 Tie- 2受体胞外段基因的表达质粒扩增目的片段 ,进而构建 PQE原核表达载体并诱导其目的蛋白的表达 ,将目的... 目的　研究鸡 Tie- 2受体胞外片段 (配体结合域 )的原核表达以及目的蛋白对小鼠的抗原性。方法　用 PCR方法从既往构建的包含鸡 Tie- 2受体胞外段基因的表达质粒扩增目的片段 ,进而构建 PQE原核表达载体并诱导其目的蛋白的表达 ,将目的蛋白进一步纯化、复性并免疫小鼠 ,获得抗血清 ,用 EL ISA和 Western blotting检测抗血清中抗体的存在。结果　经酶切分析及测序鉴定表明获得了鸡 Tie- 2受体胞外目的片段的 PQE原核表达载体 ,能高效表达目的蛋白 ,将其免疫小鼠可产生抗重组蛋白的抗体。结论　用原核表达的方式可成功的获得鸡Tie- 2受体胞外目的片段的蛋白 。 展开更多
关键词 鸡 TIE-2受体 胞外片段 原核表达 蛋白免疫原性 抗体 血清
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应用蛋白印迹-免疫沉淀-质谱法筛选卵巢癌肿瘤抗原 被引量：1
13
作者 柳斌 杨金亮 +6 位作者 宋鑫 黄欣 阚兵 秦慧 文艳君 赵霞 魏于全 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期890-892,共3页
背景与目的肿瘤抗原的筛选对卵巢癌的早期诊断有重要意义。目前,噬菌体抗体库技术(phageantibodylibrary)、核糖体展示技术(ribosomedisplay)和血清学筛选重组cDNA表达文库(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibraries,SE... 背景与目的肿瘤抗原的筛选对卵巢癌的早期诊断有重要意义。目前,噬菌体抗体库技术(phageantibodylibrary)、核糖体展示技术(ribosomedisplay)和血清学筛选重组cDNA表达文库(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibraries,SEREX)技术等作为常用的肿瘤抗原筛选方法已得到广泛应用。本研究采用蛋白印迹鄄免疫沉淀鄄质谱方法筛选和鉴定卵巢癌肿瘤抗原,以期建立一种新的筛选肿瘤抗原的方法及技术路线。方法应用蛋白印迹(Westernblot)法筛选出差异明显的卵巢癌患者血清,用该血清与SKOV3细胞裂解物反应,免疫沉淀富集抗原,与正常血清的免疫沉淀样品比较,获得差异蛋白条带,然后进行质谱鉴定、生物信息学分析。结果采用蛋白印迹筛选到标记为7号的卵巢癌患者血清,与其他血清比较有明显的差异,经免疫沉淀、聚丙烯酰胺凝胶电泳与正常血清免疫沉淀样品比较,发现在接近66.2ku的位置处有一差异蛋白条带,经质谱鉴定、生物信息学分析为热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70及细胞角蛋白(cytokeratin)9。结论采用蛋白印迹鄄免疫沉淀鄄质谱法进行卵巢癌肿瘤抗原的筛选和鉴定是一种行之有效的方法。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 肿瘤抗原/分离和提纯 免疫沉淀 质谱
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糖化重组生存素腺病毒疫苗抗肿瘤作用的实验研究 被引量：1
14
作者 李秋 文艳君 +2 位作者 吴扬 罗彦 卢铀 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2007年第5期369-373,共5页
背景与目的:生存素在调控细胞凋亡和有丝分裂过程中起着重要作用,在正常分化的组织中不表达或表达极低,而在胚胎组织和大部分肿瘤组织中广泛表达,而这一特点为恶性肿瘤的基因治疗提供了很好的靶标。本研究制备糖化重组生存素腺病毒疫苗... 背景与目的:生存素在调控细胞凋亡和有丝分裂过程中起着重要作用,在正常分化的组织中不表达或表达极低,而在胚胎组织和大部分肿瘤组织中广泛表达,而这一特点为恶性肿瘤的基因治疗提供了很好的靶标。本研究制备糖化重组生存素腺病毒疫苗,观察其抗肿瘤作用并探讨其作用机制。方法:将重组生存素腺病毒和甘露聚糖在氧化条件下偶联,同时建立小鼠结肠癌和Lewis肺癌模型,以糖化重组生存素腺病毒疫苗治疗荷瘤小鼠,观察肿瘤体积和小鼠生存时间。对小鼠肿瘤组织作TUNEL染色观察肿瘤细胞凋亡。为了检测疫苗的保护作用,预先以糖化重组生存素腺病毒疫苗免疫接种小鼠,或合用抗CD4、CD8和NK单克隆抗体阻断相应的淋巴细胞亚群,再接种肿瘤,观察小鼠肿瘤生长情况。结果:糖化重组生存素腺病毒疫苗治疗组小鼠肿瘤生长受到明显抑制,无明显不良反应发生,小鼠的生存时间明显延长,肿瘤细胞凋亡明显增加。同时,糖化重组生存素腺病毒疫苗能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫,这一免疫反应依赖于CD4和CD8淋巴细胞,也部分依赖于NK细胞。结论:糖化重组生存素腺病毒疫苗能诱导机体产生特异性的主动免疫反应,诱导肿瘤细胞凋亡,具有明确的抗肿瘤作用,值得进一步研究。 展开更多
关键词 生存素 疫苗 肿瘤
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人白细胞介素4的原核表达、复性、纯化及生物学活性鉴定 被引量：1
15
作者 李炯 崔凯军 +8 位作者 文静 赵志伟 陈平 田聆 阚兵 文艳君 邓洪新 范琳玉 魏于全 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期866-869,共4页
用PCR方法从pORF-hIL4质粒中扩增重组人白细胞介素4(hIL-4)的基因,构建PQE60原核表达载体并诱导其目的蛋白的表达。对表达的目的蛋白的可溶性进行鉴定,发现hIL-4基因表达产物在大肠杆菌中主要以不溶性包涵体形式存在,经过超声波破细菌... 用PCR方法从pORF-hIL4质粒中扩增重组人白细胞介素4(hIL-4)的基因,构建PQE60原核表达载体并诱导其目的蛋白的表达。对表达的目的蛋白的可溶性进行鉴定,发现hIL-4基因表达产物在大肠杆菌中主要以不溶性包涵体形式存在,经过超声波破细菌、包涵体提取、洗涤处理后,用5mol/L盐酸胍变性溶解包涵体沉淀,上清稀释复性后透析,再经镍亲和层析进行纯化。纯化后的hIL-4进行TF-1细胞体外增生实验检测其生物学活性后,可用于人外周血树突状细胞的体外诱导培养。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素4 包涵体 复性 纯化 生物学活性 树突状细胞
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肝片吸虫DNA疫苗的构建及其免疫效应的初步研究
16
作者 文艳君 徐恒 高继魁 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期110-114,共5页
用ＥｃｏＲＩ酶切含肝片吸虫保护性抗原基因 ＦＨ３的重组质粒ｐＵＣ１８／ ＦＨ３，回收ＦＨ３（～１．０Ｋｂ）片段克隆到真核表达载体ｐＢｌｕｅＣＭＶ上，酶切筛选顺向插入重组子ｐＢｌｕｅＣＭＶ－ＦＨ３，即得到一种肝片吸虫ＤＮ... 用ＥｃｏＲＩ酶切含肝片吸虫保护性抗原基因 ＦＨ３的重组质粒ｐＵＣ１８／ ＦＨ３，回收ＦＨ３（～１．０Ｋｂ）片段克隆到真核表达载体ｐＢｌｕｅＣＭＶ上，酶切筛选顺向插入重组子ｐＢｌｕｅＣＭＶ－ＦＨ３，即得到一种肝片吸虫ＤＮＡ疫苗．制备纯化该疫苗并免疫小鼠，小鼠肌肉细胞中有一定的ＦＨ３抗原表达；用ＥＬＩＳＡ检测抗血清表明，注射疫苗的小鼠均伴随产生一定量的特异性抗体．用肝片吸虫囊蚴攻击（２０囊／鼠）小鼠，初步显示有一定的减虫率． 展开更多
关键词 肝片吸虫 DNA疫苗 免疫效应 寄生虫病
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1919年香港米荒风潮研究 被引量：1
17
作者 张晓辉 文艳君 《广西师范大学学报（哲学社会科学版）》 2006年第1期137-139,共3页
1919年香港之所以发生米荒,既是东南亚频繁灾荒及国际粮食市场等外在因素影响的结果,同时也与港岛自身的社会问题密切相关。米荒不仅扰乱了粮食市场,影响了人民的生活,而且严重破坏了社会的稳定。探究此次米荒风潮形成的原因,对我们当... 1919年香港之所以发生米荒,既是东南亚频繁灾荒及国际粮食市场等外在因素影响的结果,同时也与港岛自身的社会问题密切相关。米荒不仅扰乱了粮食市场,影响了人民的生活,而且严重破坏了社会的稳定。探究此次米荒风潮形成的原因,对我们当前制定和完善粮食政策有借鉴意义。 展开更多
关键词 香港 米荒风潮 港英政府 米价
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重组腺病毒HBx体内抑制恶性肿瘤细胞的实验研究
18
作者 律慧敏 程平 +5 位作者 唐清清 陈平 彭星辰 李玉华 文艳君 魏于全 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期803-806,共4页
目的探讨人乙肝病毒x蛋白(HBx)在体内对肿瘤细胞增殖能力的影响。方法利用连接有增强型绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-eGFP),在体外感染H22肿瘤细胞,观察腺病毒对H22细胞的感染效率;在小鼠腹腔内接种小鼠肝癌H22细胞,建立恶性腹水模型,腹腔... 目的探讨人乙肝病毒x蛋白(HBx)在体内对肿瘤细胞增殖能力的影响。方法利用连接有增强型绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-eGFP),在体外感染H22肿瘤细胞,观察腺病毒对H22细胞的感染效率;在小鼠腹腔内接种小鼠肝癌H22细胞,建立恶性腹水模型,腹腔注射重组腺病毒HBx(Ad-HBx)、空载腺病毒(Ad-null)或生理盐水(对照组),检测腹水肿瘤细胞内的HBx蛋白表达并观察其对肿瘤细胞增殖能力、腹水形成及腹膜渗透性、红细胞等腹水性状的影响。结果腺病毒体外对H22细胞有高的感染效率。HBx蛋白能在腹水肿瘤细胞中表达,在体内环境中Ad-HBx能改善腹膜的渗透性(P<0.05),抑制小鼠腹水生成(P<0.05),使腹水中的红细胞、癌细胞水平明显减少(P<0.05),流式细胞术分析提示Ad-HBx使腹水中的肿瘤细胞周期有明显G2/M阻滞。结论体内环境中Ad-HBx能在肿瘤细胞内表达HBx蛋白,通过细胞周期阻滞明显抑制肿瘤细胞的增殖能力,有望成为治疗癌性腹水的一种新方法。 展开更多
关键词 乙肝病毒X蛋白 基因治疗 癌性腹水
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应用细菌双杂交系统技术寻找与人PCIA1基因相互作用的基因 被引量：1
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作者 李祖茂 文艳君 +9 位作者 来松涛 倪睿 邓洪新 阚兵 李炯 刘钧 敬小梅 程平 石薇 贾永喜 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期279-283,共5页
目的探寻与新近发现的人类交叉免疫反应抗原（homo sapiens cross-immune reaction antigen）基因PCIA1相互作用的基因,为其功能研究提供线索。方法应用Stratagene公司的细菌双杂交系统和人胚肾cDNA文库,构建诱饵质粒pBT-PCIA1,与靶质粒... 目的探寻与新近发现的人类交叉免疫反应抗原（homo sapiens cross-immune reaction antigen）基因PCIA1相互作用的基因,为其功能研究提供线索。方法应用Stratagene公司的细菌双杂交系统和人胚肾cDNA文库,构建诱饵质粒pBT-PCIA1,与靶质粒pTRG-cDNA文库大规模地共转化报告菌株,筛选并分离具有相互作用的pTRG-cDNA阳性克隆,经DNA序列分析和生物信息学确定靶基因。结果发现7种靶蛋白基因,其中3种基因功能尚不清楚,其余4种具有重要生理功能,突变或表达异常都会导致严重疾病;α-辅肌动蛋白-4（actinin,alpha4,ACTN4）、鞘脂激活蛋白原（prosaposin,PSAP）或真核翻译起始因子（eukary-otic translation initiation factor 3,subunit 10 theta,EIF3S10）过表达都会促进肿瘤发生和演进。结论细菌双杂交系统技术探测蛋白质之间的相互作用,是一种提供新基因功能研究信息的有效方法;PCIA1基因表达与肿瘤形成、侵袭和转移密切相关。 展开更多
关键词 双杂交系统技术 α-辅肌动蛋白-4基因 EIF3S10基因 鞘脂激活蛋白原基因 PCIA1基因
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EBV-LMP1与HSP90真核双表达质粒的构建及体外表达 被引量：1
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作者 赵菊梅 刘涛 +2 位作者 田聆 魏于全 文艳君 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期339-343,共5页
目的从鼻咽癌组织中克隆EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)与热休克蛋白90β(HSP90β)基因,构建其真核双表达质粒pIRES-LMP1-HSP90β,并检测其在体外的表达。方法提取鼻咽癌组织总RNA,逆转录PCR获得LMP1基因片段和HSP90β基因片段,将二者连接于... 目的从鼻咽癌组织中克隆EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)与热休克蛋白90β(HSP90β)基因,构建其真核双表达质粒pIRES-LMP1-HSP90β,并检测其在体外的表达。方法提取鼻咽癌组织总RNA,逆转录PCR获得LMP1基因片段和HSP90β基因片段,将二者连接于真核双表达质粒pIRES中,测定序列后,用脂质体包裹转染COS细胞,采用RT-PCR和Westernblot检测LMP1和HSP90β的表达。结果核酸序列测定证实本实验所构建的质粒正确,该双表达质粒在体外转染COS细胞后可表达LMP1和HSP90β分子。结论实验所构建的pIRES-LMP1-HSP90β双表达质粒能在体外同时表达LMP1和HSP90β分子。 展开更多
关键词 潜伏膜蛋白1 热休克蛋白90β 真核双表达质粒 质粒pIRES 鼻咽癌
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