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我国首次非洲猪瘟疫情的发现和流行分析 被引量：105
1
作者 陈腾 张守峰 +7 位作者 周鑫韬 李楠 缪发明 张静远 刘晔 吕宗吉 张国军 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1831-1832,共2页
2018年8月3日,农业农村部根据中国动物卫生与流行病学中心（国家外来动物疫病研究中心）的确认,正式发布了发生在辽宁省沈阳市沈北新区的非洲猪瘟疫情通告。疫情确认之前的2018年7月20日,军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所流行病... 2018年8月3日,农业农村部根据中国动物卫生与流行病学中心（国家外来动物疫病研究中心）的确认,正式发布了发生在辽宁省沈阳市沈北新区的非洲猪瘟疫情通告。疫情确认之前的2018年7月20日,军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所流行病学课题组收到辽宁省沈阳市某技术服务部门送检的病猪脾脏、淋巴结、肾脏等样品和过去一段时间疫情的描述。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 非洲猪瘟病毒 中国
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我国狂犬病现状与防控意见 被引量：59
2
作者 张菲 张守峰 +3 位作者 唐青 唐建蓉 刘晔 扈荣良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期381-388,共8页
关键词 狂犬病病毒 人兽共患传染病 世界性分布 防控 死亡人数 统计数字 夏威夷
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非洲猪瘟及防控技术研究现状 被引量：60
3
作者 扈荣良 于婉琪 陈腾 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期357-369,共13页
非洲猪瘟在我国境外已流行多年,2018年在我国首次出现。现概要介绍了非洲猪瘟流行、病原特性、临床特征、发病机制、诊断技术、疫苗研究和防控的基本情况,并讨论了非洲猪瘟防控面临的主要技术等问题,以便对非洲猪瘟及其防控有进一步认识。
关键词 非洲猪瘟 非洲猪瘟病毒 流行 诊断 防控
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犬细小病毒基因型的调查 被引量：37
4
作者 谢之景 夏咸柱 +3 位作者 扈荣良 赵忠鹏 高玉伟 黄耕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期421-424,共4页
采用 PCR方法扩增了 13株犬细小病毒 ( canine parvovirus,CPV) VP2基因的 2个片段 ,通过序列测定和 DNAS-tar软件分析 ,结果显示 ,我国的 CPV分离株也存在基因变异现象 ,除发现 CPV- 2、CPV - 2 a、CPV- 2 b突变株外 ,还发现在 CPV- 2 ... 采用 PCR方法扩增了 13株犬细小病毒 ( canine parvovirus,CPV) VP2基因的 2个片段 ,通过序列测定和 DNAS-tar软件分析 ,结果显示 ,我国的 CPV分离株也存在基因变异现象 ,除发现 CPV- 2、CPV - 2 a、CPV- 2 b突变株外 ,还发现在 CPV- 2 a基础上进一步进化产生的 2个新的变异株。在我国 ,CPV- 2曾在 2 0世纪 80年代早期流行 ,但 1986年后分离到的 CPV以 CPV- 2 a为主 ,在 2 0 0 2年送检的 8份病料中分离到 4株 CPV- 2 a和 4株 CPV- 2 b。PV/貉 / CC/ 1/ 86在CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 30 0 G→ S替换 ,PV/犬 / JL / 1/ 0 2在 CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 5 6 4 S→ N替换 ,其确切的生物学意义尚不清楚。我国的 CPV分离株与参考毒株的核酸同源性超过 98% ,没有形成明显的中国CPV分支 。 展开更多
关键词 犬细小病毒 基因型 进化 变异
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中国首例非洲猪瘟诊断研究 被引量：42
5
作者 王颖 缪发明 +8 位作者 陈腾 周鑫韬 李楠 吕宗吉 张静远 刘晔 张国军 张守峰 扈荣良 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期817-821,共5页
针对我国首次发生的非洲猪瘟(African swine fever,ASF),根据流行特点、临床表现、剖检变化、病原形态和分子生物学特征进行了较为系统的诊断研究。流行特点上,发病猪主要以育肥泔水猪为主,和国外报道的家猪非洲猪瘟流行特点相似;临床... 针对我国首次发生的非洲猪瘟(African swine fever,ASF),根据流行特点、临床表现、剖检变化、病原形态和分子生物学特征进行了较为系统的诊断研究。流行特点上,发病猪主要以育肥泔水猪为主,和国外报道的家猪非洲猪瘟流行特点相似;临床表现以高热、呕吐、皮肤发绀为典型,可有便秘或腹泻,粪便带有粘液或便血等症状;剖检以脾脏显著肿大、发黑变脆为典型特征,并伴心、肾、膀胱、小肠、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结出血;电镜观察肝脾组织悬液上清可见大小180～200nm具有多层囊膜结构的病毒颗粒;定性诊断目前以PCR和实时PCR较为可靠。综上认为,临床表现对于非洲猪瘟病例排查具有重要意义;剖检变化尽管不十分特异,但可以缩小排查范围,对确立初步诊断具有重要价值;在完成上述初步诊断基础上,应尽快应用分子生物学技术完成确诊。 展开更多
关键词 非洲猪瘟(ASF) 疑似诊断 确定性诊断
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我国狂犬病预防和控制建议 被引量：33
6
作者 扈荣良 张守峰 刘晔 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期487-491,共5页
1狂犬病及流行概况 狂犬病（Rabies）是一种由狂犬病病毒（Rabiesvirus，RABV）感染引起的高度致死性脑脊髓炎^[1]。所有种类的温血动物，不分年龄大小，均对狂犬病易感。犬的狂犬病俗称疯狗病（MadDogDisease），能使患病犬的中枢神... 1狂犬病及流行概况 狂犬病（Rabies）是一种由狂犬病病毒（Rabiesvirus，RABV）感染引起的高度致死性脑脊髓炎^[1]。所有种类的温血动物，不分年龄大小，均对狂犬病易感。犬的狂犬病俗称疯狗病（MadDogDisease），能使患病犬的中枢神经系统兴奋，发作时往往表现攻击行为，咬伤人或其他种类动物个体，造成犬群或犬科野生动物狂犬病的外溢，从而导致人、家畜（如牛、马、羊、猪、驴、鹿、水牛等）和其他温血动物（如猫、狐、黄鼬、鼬獾、猪獾、狼、浣熊、臭鼬、鼠等）的感染^[2-3]。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 中枢神经系统兴奋 野生动物 预防 流行概况 脑脊髓炎 攻击行为 致死性
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通过病毒分离鉴定和基因检测首次发现虎流感 被引量：28
7
作者 夏咸柱 高玉伟 +8 位作者 扈荣良 王立刚 刘丹 邹啸环 黄耕 贺文琦 王玮 苏伟林 刘文良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期107-110,共4页
应用 F8 1 猫肾传代细胞 ,从高热、拒食和间有神经症状的死亡虎病料中分离获得 1株病毒 ,经形态学、理化学、生物学和血清学系统鉴定 ,证明为流感病毒。采用流感病毒核蛋白基因引物 ,对分离病毒及该虎病料进行 RT- PCR扩增和序列分析 ,... 应用 F8 1 猫肾传代细胞 ,从高热、拒食和间有神经症状的死亡虎病料中分离获得 1株病毒 ,经形态学、理化学、生物学和血清学系统鉴定 ,证明为流感病毒。采用流感病毒核蛋白基因引物 ,对分离病毒及该虎病料进行 RT- PCR扩增和序列分析 ,结果从分离病毒和虎病料中均扩增出与理论值大小相符的 4 6 4 bp基因片段 ;其序列与 A、B、C 3型流感病毒相比较 ,同源性分别为 84 .9%、35 .0 %、2 4 .8%。由此说明 ,所分离病毒为 A型流感病毒 ,命名为 A/虎 /哈尔滨 (中国 ) / 0 1/ 2 0 0 2。用此分离病毒静脉接种于 3月龄家猫 3只 ,均出现与病虎相似的临床症状 ,其中 1只耐过 ,2只死亡。死亡猫剖检变化与死虎相似 ,主要呈现肺炎病变 ,并可从病料中回收到所接种病毒。以此分离病毒为 HA抗原 ,进行虎与猫血清的 HI抗体检测 ,结果康复虎血清比其病初血清、康复猫血清比其接种前血清 HI抗体均增高 4倍以上 ,表明该病毒具有致病性 ,是引起该虎与试验猫发病甚至死亡的病原。 展开更多
关键词 基因检测 A型流感病毒 分离 鉴定 虎 流感
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1株非洲猪瘟病毒自然变异毒株的鉴定 被引量：32
8
作者 张艳艳 张静远 +12 位作者 杨金金 杨金梅 韩桪 米立娟 张菲 齐宇 张守峰 王颖 周鑫韬 岳慧贤 王述超 陈腾 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期199-207,共9页
非洲猪瘟(ASF)于2018年传入我国后已流行了2年有余,我国非洲猪瘟病毒(ASFV)毒株未曾出现较大变异。最近,针对我国ASF疫情放缓以及感染猪出现的低死亡率现象,我们在ASFV生态学研究中,从主动监测的样品中分离到1株源自湖北某地的ASFV自然... 非洲猪瘟(ASF)于2018年传入我国后已流行了2年有余,我国非洲猪瘟病毒(ASFV)毒株未曾出现较大变异。最近,针对我国ASF疫情放缓以及感染猪出现的低死亡率现象,我们在ASFV生态学研究中,从主动监测的样品中分离到1株源自湖北某地的ASFV自然变异株。经基因组测序发现,其EP402R基因(CD2v)和上游相邻的EP153R基因(8CR)出现部分缺失,共计1252 bp,导致病毒血吸附特性丧失;在多处基因编码区和基因间隔区出现独有的碱基突变、缺失或插入,与国内已经发表的10个ASFV毒株完全不同,这些变化导致病毒蛋白氨基酸组成的改变和功能丧失;在基因组3′末端出现503 bp串联重复的核酸片段插入,该片段与国外毒株基因组末端部分序列有高达96%的同源性。该变异株不含任何已知标记基因,说明我国的ASFV已经出现了自然变异株,可能和目前呈现的亚急性型流行的ASF有关。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 自然变异株 亚急性型非洲猪瘟
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非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性 被引量：30
9
作者 张艳艳 陈腾 +35 位作者 张静远 齐宇 缪发明 薄宗义 王立冬 郭晓宇 周鑫韬 杨金梅 王晓虎 高玉龙 汪春雨 鲍晨沂 米立娟 孙雪霏 冯娜 杨金金 王承宇 万忠海 李记平 孟轲音 田多 李楠 王述超 王颖 张菲 张锦霞 蒋依倩 刘晔 张守峰 张中洋 钱莺娟 朱鸿飞 高玉伟 陈鸿军 李金祥 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1421-1427,共7页
以我国首例非洲猪瘟疫情中分离的流行毒株(SY18)为亲本株构建了多基因家族(MGF)基因和CD2v基因缺失的非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗候选株,针对基因缺失株的安全性和免疫保护效果进行了特性研究。结果显示,MGF和CD2v双基因缺失株(ASFV SY18... 以我国首例非洲猪瘟疫情中分离的流行毒株(SY18)为亲本株构建了多基因家族(MGF)基因和CD2v基因缺失的非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗候选株,针对基因缺失株的安全性和免疫保护效果进行了特性研究。结果显示,MGF和CD2v双基因缺失株(ASFV SY18ΔMGF/ΔCD2v)对猪安全,接种猪能够100%抵抗亲本强毒株SY18株的攻击,对照猪全部死亡;说明该毒株可作为非洲猪瘟疫苗候选株。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 基因缺失 MGF基因 CD2v基因 疫苗候选株 安全性 免疫保护
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鸡卵清蛋白基因5′调控序列表达载体的构建及其在鸡原代输卵管上皮细胞及鸡成纤维细胞的表达 被引量：18
10
作者 宇丽 赵君 +6 位作者 张艳玲 刘斌 张守峰 王凤阳 赵宝全 扈荣良 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期21-24,共4页
将氯霉素乙酰转移酶 ( CAT)基因与鸡卵清蛋白基因上游调控序列融合 ,构建了 p CAT-3-OVP(鸡卵清蛋白基因 5′调控序列 )表达载体。将构建的载体与脂质体混合后制备转染液 ,转染鸡原代输卵管上皮细胞和鸡成纤维细胞进行瞬时表达。结果表... 将氯霉素乙酰转移酶 ( CAT)基因与鸡卵清蛋白基因上游调控序列融合 ,构建了 p CAT-3-OVP(鸡卵清蛋白基因 5′调控序列 )表达载体。将构建的载体与脂质体混合后制备转染液 ,转染鸡原代输卵管上皮细胞和鸡成纤维细胞进行瞬时表达。结果表明 ,在鸡原代输卵管上皮细胞 ,转染后 4 8h表达量最高 ,为 0 .67μg/L;而在鸡成纤维细胞 ,不论有无类固醇激素存在 ,均不表达。结果提示 ,在输卵管细胞中存在细胞特异性转录因子。 展开更多
关键词 鸡 卵清蛋白基因 调控序列 表达 载体构建
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猎豹与虎猫杯状病毒的分离及其超变区基因比较研究 被引量：20
11
作者 高玉伟 夏咸柱 +3 位作者 扈荣良 黄耕 徐春忠 王铁东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期179-182,共4页
用F8 1细胞从上海某动物园患口腔溃疡的猎豹和虎的唾液病料中分离获得两株杯状病毒 ,经形态学、理化学、生物学鉴定和病毒核酸超变区基因RT_PCR扩增与序列测定证明两株病毒均为猫杯状病毒 (FCV) ,分别命名为FCV/cheetah/Shanghai/ 0 2 /... 用F8 1细胞从上海某动物园患口腔溃疡的猎豹和虎的唾液病料中分离获得两株杯状病毒 ,经形态学、理化学、生物学鉴定和病毒核酸超变区基因RT_PCR扩增与序列测定证明两株病毒均为猫杯状病毒 (FCV) ,分别命名为FCV/cheetah/Shanghai/ 0 2 / 2 0 0 2与FCV/tiger/Shanghai/ 0 3/ 2 0 0 2。人工感染猫可引起体温升高 ,口腔溃疡 ,食欲下降等症状。两株病毒的超变区序列 5 2 0bp长片段间的同源性为 99.2 % ,与国内桂林虎分离株 (TFCV9710 )的同源性为 74 .0 % ,与国外分离株的总体同源性为 5 8.1% ,说明不同宿主或同种不同个体间杯状病毒分离株超变区核酸差异十分显著 。 展开更多
关键词 猎豹 虎 猫杯状病毒 病毒分离 序列分析
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肌注狂犬病病毒糖蛋白cDNA表达载体诱导的小鼠体液免疫反应 被引量：15
12
作者 扈荣良 杜坚 +4 位作者 涂长春 李红卫 殷震 崔青山 侯世宽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第4期321-326,共6页
将狂犬病病毒糖蛋白ｃＤＮＡＢｇｌⅡ（１．６７ｋｂ）片段分别正向插入ｐｍＭＴ－１ＢｇｌⅡ位点和ｐＭＴ０１０／Ａ＋ＢａｍＨＩ位点，构建重组质粒ｐｍＭＴ－Ｒｇｐ和ｐＭＴ０１０／Ａ＋－Ｒｇｐ，通过磷酸钙共沉淀法转染ＢＨＫ－２... 将狂犬病病毒糖蛋白ｃＤＮＡＢｇｌⅡ（１．６７ｋｂ）片段分别正向插入ｐｍＭＴ－１ＢｇｌⅡ位点和ｐＭＴ０１０／Ａ＋ＢａｍＨＩ位点，构建重组质粒ｐｍＭＴ－Ｒｇｐ和ｐＭＴ０１０／Ａ＋－Ｒｇｐ，通过磷酸钙共沉淀法转染ＢＨＫ－２１细胞，经ＰＣＲ、打点杂交及ＥＬＩＳＡ检测，证明糖蛋白基因发生了整合并获得表达。以该表达载体给小鼠肌肉内注射２～３次，采其注射前、后双份血清，经ＥＬＩＳＡ检测证明，注射了表达载体的小鼠，血清中病毒特异性抗体明显升高，表明狂犬病病毒糖蛋白ｃＤＮＡ在小鼠体内表达后。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 基因免疫 小鼠 抗体
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狂犬病毒核蛋白单抗和荧光抗体中和试验的建立与应用 被引量：18
13
作者 张守峰 曹亮 +3 位作者 张菲 李海涛 李清竹 扈荣良 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期554-557,共4页
目的建立狂犬病毒血清中和抗体效价的快速检测方法,以实现狂犬疫苗免疫效果的定量评价,指导高危人群及动物种群的免疫预防。方法采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗狂犬病毒核蛋白单抗,以亲和层析法进行纯化,异硫氰酸荧光黄标记制备... 目的建立狂犬病毒血清中和抗体效价的快速检测方法,以实现狂犬疫苗免疫效果的定量评价,指导高危人群及动物种群的免疫预防。方法采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗狂犬病毒核蛋白单抗,以亲和层析法进行纯化,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体;以BHK-21细胞系培养狂犬病毒细胞适应株CVS-11,以染毒细胞测定荧光抗体的工作浓度后,通过荧光抗体染色法测定CVS-11细胞半数感染量(TCID50);利用狂犬病毒灭活疫苗免疫犬制备抗狂犬病毒血清,并以国际兽疫局标准品进行标定;参考世界卫生组织及国际兽疫局推荐方法,确定中和试验程序,对51份样品血清进行测定,并与国际狂犬病参考实验室的检测结果进行比较,评价其精确及可靠程度。以Kaber法公式和MicrosoftExcel软件为基础,设计被测样品中和效价计算方法。结果制备的抗狂犬病毒核蛋白单抗的亚型为IgG2a;纯化、标记后的荧光抗体工作浓度为1∶400;CVS-11株的使用量为每孔100TCID50;本研究建立的检测程序对51份人及犬血清测得的中和效价结果与国际参考实验室的测定结果一致;自行设计的计算方法操作简便,计算快捷。结论成功建立了与国际标准相当的狂犬病毒中和抗体效价测定和计算方法。 展开更多
关键词 狂犬病毒 杂交瘤 荧光抗体技术 中和试验
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犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究 被引量：13
14
作者 闫芳 夏咸柱 +4 位作者 扈荣良 谢之景 赵忠鹏 高玉伟 黄耕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期50-55,共6页
以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗，分组进行了免疫小鼠试验，对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示：所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应，pVAXLPH＋pVAXLPF＋pVAXLPN3个基因混合... 以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗，分组进行了免疫小鼠试验，对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示：所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应，pVAXLPH＋pVAXLPF＋pVAXLPN3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答，免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0．332，而免疫前为0．158；抗CDV中和抗体效价为1：（4～16）；CD4^＋T／CD8^＋T比值为2．05±0．38，而对照组为1．99±0．56；免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0．384和0．356。基因疫苗免疫犬试验中，进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示，基因疫苗免疫3次后，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．296，抗CDV中和抗体效价为1：（8～32）。基因疫苗免疫2次，再使用弱毒疫苗加强免疫1次，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．433，抗CDV中和抗体效价为1：（16～64）。 展开更多
关键词 犬瘟热 基因疫苗 犬瘟热病毒H基因 犬瘟热病毒F基因 犬瘟热病毒N基因
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我国部分地区犬狂犬病免疫覆盖率的连续调查 被引量：15
15
作者 张菲 张守峰 +6 位作者 刘晔 查云峰 孙彦伟 文武金 邓文煌 周艳君 扈荣良 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第1期68-71,共4页
本研究对我国部分城市或地区犬狂犬病的免疫覆盖率进行了连续3年以上的调查,结果显示,所调查的发达城市犬狂犬病免疫覆盖率总体水平有所提高,如深圳和北京已达到或接近70%的有效覆盖率;南方较发达城市的免疫覆盖率为20%~30%,但距离狂犬... 本研究对我国部分城市或地区犬狂犬病的免疫覆盖率进行了连续3年以上的调查,结果显示,所调查的发达城市犬狂犬病免疫覆盖率总体水平有所提高,如深圳和北京已达到或接近70%的有效覆盖率;南方较发达城市的免疫覆盖率为20%~30%,但距离狂犬病免疫覆盖标准（≥70%）相差甚远;农村地区和狂犬病流行的北方城市,狂犬病免疫覆盖率仍很低,甚至不足5%。以上结果反映出,在未实行强制免疫的情况下,我国狂犬病的免疫覆盖率和经济发展水平呈正相关,欠发达城市和农村地区的犬仍未接受有效免疫,无法阻断狂犬病在动物之间传播,不利于我国狂犬病的控制。 展开更多
关键词 狂犬病 犬 免疫覆盖率 监测
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感染性犬2型腺病毒全基因组克隆及鉴定 被引量：12
16
作者 张守峰 扈荣良 +1 位作者 牛建强 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期533-535,共3页
以犬 2型腺病毒 (canine adenovirus type- 2 ,CAV- 2 )自然弱毒株 YCA18基因组 DNA为模板 ,经 PCR扩增分别获得其双链两末端 10 13bp(U)和 972 bp(D)的 DNA序列 ,以首尾相接方式克隆入载体 p Poly2 ,获得重组质粒p Poly2 - UD。以 Hin... 以犬 2型腺病毒 (canine adenovirus type- 2 ,CAV- 2 )自然弱毒株 YCA18基因组 DNA为模板 ,经 PCR扩增分别获得其双链两末端 10 13bp(U)和 972 bp(D)的 DNA序列 ,以首尾相接方式克隆入载体 p Poly2 ,获得重组质粒p Poly2 - UD。以 Hind 和 Bst B 双酶切 p Poly2 - UD,回收含载体和部分 U、D的大片段并与 CAV- 2 DNA共转化感受态 E.coli Sure TM,经菌体内同源重组 ,获得含有 CAV- 2全基因组序列的重组质粒 p Poly2 - CAV- 2。后者以 Cla 和 Asc 双酶切 ,释放 CAV- 2全基因组 ,通过脂质体介导转染 MDCK细胞 ,盲传 3代后重复转染 1次 ,4d后 ,出现腺病毒典型病变。细胞上清血凝效价为 1∶ 6 40 ,并可被 CAV- 2抗血清有效抑制。以上结果表明 ,本研究获得了具有感染性的CAV- 2全基因组重组质粒 ,为以 CAV- 2作为重组疫苗载体的系列研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 鉴定 犬2型腺病毒 同源重组 感染性全基因组 基因克隆 重组疫苗载体
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猪瘟病毒石门株特异cDNA片段的扩增与序列分析 被引量：9
17
作者 涂长春 李红卫 +5 位作者 金扩世 章金钢 白安斌 刘士英 扈荣良 殷震 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第1期33-38,共6页
以猪瘟病毒感染细胞中提取的细胞总ＲＮＡ为模板，应用反转录─聚合酶链反应，在化学合成的两对特异引物引导下，成功地扩增出了两个石门株的ｃＤＮＡ片段。电泳证明它们的大小与预计的３４６ｂｐ和１２０ｂｐ完全一致。酶切分析证实了... 以猪瘟病毒感染细胞中提取的细胞总ＲＮＡ为模板，应用反转录─聚合酶链反应，在化学合成的两对特异引物引导下，成功地扩增出了两个石门株的ｃＤＮＡ片段。电泳证明它们的大小与预计的３４６ｂｐ和１２０ｂｐ完全一致。酶切分析证实了它们应有的酶切位点。随后对这两个片段进行了克隆和序列测定，并与国外株的序列进行了比较。结果证明本实验扩增的两个ｃＤＮＡ序列与Ａｌｆｏｒｔ株和Ｂｒｅｓｉａ株的同源性分别是９５．２％和９８．５％。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 CDNA 扩增 序列分析
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tPA体外纤溶活性及半定量检测方法的确立 被引量：12
18
作者 张守峰 扈荣良 +1 位作者 赵君 李敏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期436-437,共2页
在原有的纤维蛋白平板溶圈法 (fibrin agarose plate assay,FAPA)检测系统中引入纤溶酶原 (plasminogen) ,使该法检测组织型纤溶酶原激活剂 (tissue plasminogen activator,t- PA)的灵敏度提高 30倍以上 ,达到 0 .0 1ng(约0 .0 0 1IU )... 在原有的纤维蛋白平板溶圈法 (fibrin agarose plate assay,FAPA)检测系统中引入纤溶酶原 (plasminogen) ,使该法检测组织型纤溶酶原激活剂 (tissue plasminogen activator,t- PA)的灵敏度提高 30倍以上 ,达到 0 .0 1ng(约0 .0 0 1IU )水平 ;并对不同反应时间、纤维蛋白含量、琼脂糖凝胶厚度下的溶圈结果进行对比研究。结果表明 ,37℃温育18～ 2 4h可以得到较满意结果 ;其他因素虽不同程度地影响溶圈出现时间及大小 ,但对其溶圈梯度及标准曲线无明显影响。从而确立了以 FAPA为基础的快速、灵敏、可靠的重组 t- PA体外纤溶活性半定量检测方法。 展开更多
关键词 tPA体外纤溶活性 半定量检测 组织型纤溶酶原激活剂 纤维蛋白平板溶圈法
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乳铁蛋白肽基因的合成及其在动物乳腺中的表达 被引量：12
19
作者 张锦霞 王铁东 +2 位作者 张守峰 郭学军 扈荣良 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2006年第2期229-233,共5页
根据已发表的编码牛乳铁蛋白肽（LfcinB）25个氨基酸的mRNA序列，设计了4条用于合成牛乳铁蛋白肽全基因的引物，用重叠延伸PCR法合成149bp的牛乳铁蛋白肽基因（包括牛乳铁蛋白信号肽序列、上下游酶切位点和终止密码子），并将此基因克... 根据已发表的编码牛乳铁蛋白肽（LfcinB）25个氨基酸的mRNA序列，设计了4条用于合成牛乳铁蛋白肽全基因的引物，用重叠延伸PCR法合成149bp的牛乳铁蛋白肽基因（包括牛乳铁蛋白信号肽序列、上下游酶切位点和终止密码子），并将此基因克隆到载体pI-B，获得了乳腺特异性表达质粒pI-BL，该质粒经生理盐水稀释后直接注入稳定泌乳期奶山羊和奶牛乳腺组织（注射量为400μg），以琼脂板溶圈法检测奶样抑菌活性。结果显示，注射后3～48h，奶样有明显抑菌活性，其中3～9h抑菌活性最高。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 乳铁蛋白肽 基因合成 乳腺特异性表达
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犬细小病毒分离鉴定及其基因型调查的基础研究 被引量：12
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作者 谢之景 夏咸柱 +4 位作者 扈荣良 范泉水 叶俊华 徐在品 黄耕 《中国动物保健》 2003年第12期21-23,共3页
用F81细胞从不同地区送检的25份肠炎犬病料中分离出10株细小病毒,经形态学、理化学、生物学和分子病毒学等鉴定。结果这10株病毒均能在F81细胞上生长,产生细胞肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变;病毒粒子呈立体对称,直径为20～24nm,无囊... 用F81细胞从不同地区送检的25份肠炎犬病料中分离出10株细小病毒,经形态学、理化学、生物学和分子病毒学等鉴定。结果这10株病毒均能在F81细胞上生长,产生细胞肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变;病毒粒子呈立体对称,直径为20～24nm,无囊膜,抗氯仿,耐酸,耐热,能被5-IUDR抑制,可凝集猪、马、猫的红细胞,不能凝集人、鸡、豚鼠、兔的红细胞,HA试验能被抗CPV的特异性抗体所抑制。用犬细小病毒(CPV)特异性引物对10株病毒进行PCR扩增,结果扩增片段与阳性对照大小一致(771bp)。用PV/犬/JL/1/02、PV/犬/BJ/1/99和PV/犬/GZ/1/02三个毒株进行人工感染犬试验,结果人工感染犬在接种后白细胞总数出现短期不同程度的下降,在攻毒后4～14d粪便PCR检测阳性,其中接种PV/犬/BJ/1/99的一只犬出现严重的肠炎症状并死亡,其余接种犬没有出现明显的临床症状,但血清抗体均升高(大于5倍),而对照组的白细胞总数和血清抗体没有明显的变化,粪便PCR检测阴性。表明所分离毒株能够感染犬。鉴定结果证明,CPV在我国犬群中仍广泛存在。 展开更多
关键词 犬 细小病毒 分离鉴定 基因型 形态学 理化学 生物学 分子病毒学 人工感染
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