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可诱导表达结核分枝杆菌ESAT-6的THP-1细胞系的建立 被引量：1
1
作者 唐亦然 戴鑫钧 +4 位作者 胡燕萍 毕斯琪 孟祥苗 杨杨 宋厚辉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2148-2154,共7页
利用Tet-On-3G系统构建可诱导表达ESAT-6的THP-1细胞系,研究结核分枝杆菌毒力蛋白ESAT-6在宿主细胞内的生物学功能。首先,利用聚合酶链反应(PCR)扩增ESAT-6片段和红色荧光蛋白mCherry片段,并与pLVX-TRE3G载体连接,构建pTRE3G-mCherry-ES... 利用Tet-On-3G系统构建可诱导表达ESAT-6的THP-1细胞系,研究结核分枝杆菌毒力蛋白ESAT-6在宿主细胞内的生物学功能。首先,利用聚合酶链反应(PCR)扩增ESAT-6片段和红色荧光蛋白mCherry片段,并与pLVX-TRE3G载体连接,构建pTRE3G-mCherry-ESAT-6。将其与调控质粒pLVX-Tet3G共同转染HEK293T细胞,Dox诱导后检测ESAT-6表达情况。然后,将质粒pTRE3G-mCherry-ESAT-6和pLVX-Tet3G分别与包装质粒psPAX2和pMD2.0G共转染HEK293T细胞,以获得慢病毒颗粒LV-TRE3G-ESAT-6和LVX-Tet3G。接着,将2种病毒感染THP-1细胞,通过Puromycin和G418进行筛选诱导表达ESAT-6的阳性细胞克隆,命名为THP-1/ESAT-6。利用Western blot检测THP-1细胞中ESAT-6的表达情况。结果表明,筛选获得了携带ESAT-6的THP-1诱导表达细胞系,并且ESAT-6表达量与Dox剂量和诱导时间呈正相关。最后,对细胞系中表达的ESAT-6进行生物活性检测,结果表明ESAT-6能够促进细胞的死亡和IL-1β的分泌。该细胞系的建立为深入研究ESAT-6调控细胞信号通路的功能提供了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ESAT-6 慢病毒包装 TET-ON 诱导表达
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