中国动漫业的现状分析 被引量：5

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作者 王铁柱 徐颖茜 《大众科技》 2005年第12期220-221,共2页

与日益成熟的世界动漫业相比,我国动漫业仍处在起步阶段,应该认清当前的形势,找到自身的问题所在。文章从市场、资金、版权、品牌营销、人才五个方面分析了我国动漫业的现状。

关键词 起步阶段 市场 资金 版权 人才 品牌

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一种新的CD123嵌合抗原受体T细胞的构建及其抗白血病作用探究 被引量：8

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作者 王珍珍 卢杨 +7 位作者 徐颖茜 邢海燕 唐克晶 田征 饶青 王敏 熊冬生 王建祥 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期192-197,共6页

目的构建一种新的靶向CD123的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞),为CD123阳性白血病的免疫治疗提供实验参考。方法通过单克隆筛选技术获得能稳定分泌CD123抗体的杂交瘤细胞株6E11,将杂交瘤细胞扩增后腹腔注射至Balb/c小鼠腹腔内,收集腹水并... 目的构建一种新的靶向CD123的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞),为CD123阳性白血病的免疫治疗提供实验参考。方法通过单克隆筛选技术获得能稳定分泌CD123抗体的杂交瘤细胞株6E11,将杂交瘤细胞扩增后腹腔注射至Balb/c小鼠腹腔内,收集腹水并处理、纯化得到单克隆抗体,测定抗体效价并对其特异性进行验证;RT-PCR法获得轻链和重链可变区序列,并以此为基础利用分子克隆技术构建一种新的靶向CD123嵌合抗原受体,包装病毒后感染T细胞制备CD123 CAR-T细胞,通过功能实验初步探讨6E11 CAR-T细胞体外抗白血病的能力。结果①获得1株稳定分泌抗人CD123抗体的杂交瘤细胞株6E11并获得其可变区序列。②6E11单克隆抗体对CD123蛋白亲和性高,解离常数(Kd值)为2.10 nmol/L,特异性识别CD123阳性细胞且与CD123阴性细胞无交叉反应。③成功构建了CD123 CAR慢病毒载体,感染T细胞后获得了靶向CD123的CAR-T细胞(6E11 CAR-T),感染效率大于60%。④6E11 CAR-T能明显杀伤CD123阳性靶细胞MV4-11,效靶比1∶1时6E11 CAR-T细胞对MV4-11细胞的杀伤比例明显高于Vecor-T细胞[(98.60±1.20)%对(20.28±6.74)%,P<0.001],但对CD123阴性靶细胞K562没有明显杀伤作用。⑤MV4-11细胞可以显著激活6E11 CAR-T,但对Vecor-T细胞无明显激活作用[(26.33±3.30)%对(1.17±0.06)%,P<0.001]。⑥6E11 CAR-T与MV4-11细胞共培养上清中细胞因子水平均显著高于Vecor-T组[IL-2:(92.90±1.51)pg/ml对(6.05±3.41)pg/ml,P<0.001;TNF-α:(1407.20±91.95)pg/ml对(7.86±0.85)pg/ml,P<0.001;IFN-γ:(5614.60±170.17)pg/ml对(8.42±2.70)pg/ml,P<0.001],但与K562细胞共培养后,两组各细胞因子水平差异无统计学意义。⑦6E11 CAR-T在与CD123阳性急性髓系白血病(AML)原代细胞共培养过程中被显著激活,且能有效杀伤原代AML细胞。结论杂交瘤细胞株6E11能稳定分泌高效特异的抗人CD123单克隆抗体,可用于检测表达人CD123的细胞,也能应用在靶向人CD123� 展开更多

关键词 白血病 髓系 急性 CD123 嵌合抗原受体 抗原识别区 免疫治疗

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靶向BCMA的嵌合抗原受体T细胞抗多发性骨髓瘤作用研究 被引量：7

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作者 钟梦君 徐颖茜 +5 位作者 邢海燕 唐克晶 田征 饶青 王敏 王建祥 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期804-811,共8页

目的构建以B细胞成熟抗原(BCMA)的特异性配体APRIL为抗原结合区的BCMA-CAR,并验证该BCMA-CAR修饰的T细胞(BCMA-CAR-T)对多发性骨髓瘤的作用.方法以BCMA的特异性配体APRIL为抗原结合区、4-1BB为共刺激分子而构建BCMA-CAR,体外实验验证BCM... 目的构建以B细胞成熟抗原(BCMA)的特异性配体APRIL为抗原结合区的BCMA-CAR,并验证该BCMA-CAR修饰的T细胞(BCMA-CAR-T)对多发性骨髓瘤的作用.方法以BCMA的特异性配体APRIL为抗原结合区、4-1BB为共刺激分子而构建BCMA-CAR,体外实验验证BCMA-CAR-T细胞对BCMA^+骨髓瘤细胞系和原代骨髓瘤细胞的特异性细胞毒作用.此外,构建BCMA^+骨髓瘤小鼠模型并评价BCMA-CAR-T细胞的体内抗肿瘤效应.结果BCMA-CAR-T细胞能特异性杀伤BCMA^+骨髓瘤细胞系(当效靶比为1:4时,BCMA-CAR-T细胞组中BCMA^+细胞几乎检测不到)和骨髓瘤患者的骨髓单个核细胞(BCMA-CAR-T和空载组T细胞的残余细胞比例分别为16.00%和66.85%,P=0.003),并伴随显著的脱颗粒效应(CAR-T和空载组T细胞与MM1.S、H929、U266共培养的脱颗粒水平分别为33.30%对5.62%、16.97%对2.95%、25.87%对2.97%,P值均<0.001)和细胞因子释放(P值均<0.01).在治疗人BCMA^+骨髓瘤小鼠移植模型中,BCMA-CAR-T细胞可显著延长小鼠的生存期(BCMA-CAR-T和空载组T细胞治疗小鼠的中位生存期分别为87.5 d、67.5 d,P<0.001).结论以APRIL为抗原识别区的BCMA-CAR-T细胞有望成为治疗BCMA^+多发性骨髓瘤的理想策略. 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 嵌合抗原受体 B细胞成熟抗原 免疫治疗

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化疗引起的骨髓基质细胞损伤对正常造血细胞的影响 被引量：6

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作者 李艺辉 刘喆 +6 位作者 李欢 徐颖茜 邢海燕 田征 唐克晶 王敏 饶青 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期233-238,共6页

目的:检测化疗药物柔红霉素(DNR)对小鼠骨髓基质细胞细胞系OP9的损伤作用,探索受损伤后的OP9细胞对正常造血细胞功能的影响。方法:β-gal底物探针孵育后流式细胞术检测细胞衰老;实时荧光定量PCR检测OP9细胞的分子表达;流式细胞技术检测... 目的:检测化疗药物柔红霉素(DNR)对小鼠骨髓基质细胞细胞系OP9的损伤作用,探索受损伤后的OP9细胞对正常造血细胞功能的影响。方法:β-gal底物探针孵育后流式细胞术检测细胞衰老;实时荧光定量PCR检测OP9细胞的分子表达;流式细胞技术检测组蛋白γ-H2AX的表达;集落形成实验观察造血细胞集落形成能力的变化。结果:DNR处理后的OP9衰老细胞比例为正常OP9衰老细胞的2.24倍(P<0.05)。同正常OP9细胞相比,OP9细胞经DNR处理后IL-6和TNF-α的表达分别上升了2.73倍(P<0.01)和0.56倍(P<0.01),而神经型钙粘附蛋白(N-cadherin),α平滑肌机动蛋白(α-SMA),重组人血管生成素1(Angpt1),骨桥蛋白(OPN)的表达分别下降了69.54%(P<0.01),63.90%(P<0.01),87.41%(P<0.01)和42.78%(P<0.01)。同正常OP9细胞相比,DNR处理的OP9细胞同正常造血细胞共培养之后,造血细胞的集落形成能力降低了47.10%(P<0.05)。流式细胞术检测显示,正常造血细胞γ-H2AX阳性率增加了2.19倍(P<0.05)。结论:DNR处理后OP9细胞与正常OP9细胞相比,衰老细胞的数量明显增多;TNF-α和IL-6表达升高,N-cadherin,α-SMA, Angpt1和OPN的表达有所下降。与正常OP9细胞相比,DNR处理OP9细胞与正常造血细胞共培养之后,造血细胞的集落形成能力降低,造血细胞基因组不稳定性增加。 展开更多

关键词 柔红霉素 OP9细胞 造血细胞细胞衰老

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全媒体时代公众媒介素养提升之道 被引量：5

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作者 徐颖茜 《传媒论坛》 2020年第12期154-155,共2页

随着互联网时代的到来,舆论生成方式和传播方式都发生了深刻的改变。当下,一方面主流媒体继续担负着重要信息的及时传播与舆论有效引导的重任,另一方面由于媒介信息环境变得纷繁复杂,传播主体参差不齐,信息激流涌动、起伏、对冲、反转,... 随着互联网时代的到来,舆论生成方式和传播方式都发生了深刻的改变。当下,一方面主流媒体继续担负着重要信息的及时传播与舆论有效引导的重任,另一方面由于媒介信息环境变得纷繁复杂,传播主体参差不齐,信息激流涌动、起伏、对冲、反转,前一天认定的“坊间事实”,第二天就可能被证明是无稽之谈,“后真相时代”令人无所适从……正是在这种背景下,“媒介素养”再次引起了笔者的关注。 展开更多

关键词 全媒体 公众媒介 素养 提升

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FHL2沉默对骨肉瘤U2OS细胞增殖与凋亡的影响 被引量：2

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作者 卢文婷 刘爽 +4 位作者 李赛赛 刘佳 徐颖茜 王建祥 王敏 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2018年第1期1-6,共6页

目的探讨沉默FHL2表达对骨肉瘤U2OS细胞的增殖和凋亡的影响及其相关机制的研究。方法通过构建FHL2的shRNA干扰载体p LKO.1,制备慢病毒并感染U2OS细胞,分为sh FHL2目的基因干扰组(sh FHL2)和无关序列对照组(SCR);感染96 h后采用实时定量P... 目的探讨沉默FHL2表达对骨肉瘤U2OS细胞的增殖和凋亡的影响及其相关机制的研究。方法通过构建FHL2的shRNA干扰载体p LKO.1,制备慢病毒并感染U2OS细胞,分为sh FHL2目的基因干扰组(sh FHL2)和无关序列对照组(SCR);感染96 h后采用实时定量PCR(QPCR)和Western blotting检测两组FHL2 mRNA和蛋白水平。采用MTT方法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期的变化,Western blotting检测FHL2干扰后U2OS细胞相关信号通路的蛋白表达变化。利用双荧光素酶报告基因系统检测FHL2对p53下游基因转录调控的影响。结果与SCR组比较,sh FHL2组感染96 h后FHL2 mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05)。sh FHL2组感染24、48、72、96 h的细胞增殖比分别为1.73±0.08、2.49±0.38、3.26±0.45和4.28±0.29,其中96 h的细胞增殖比低于SCR组(P<0.05);sh FHL2组感染96 h的细胞凋亡率为(17.55±1.05)%,高于SCR组的(7.73±1.12)%,差异有统计学意义(P<0.05);sh FHL2组感染96 h的G_0/G_1期细胞为(68.18±0.78)%,高于SCR组的(59.73±2.28)%,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰FHL2表达能够显著上调p53、p21和Bax的表达水平并能增强p53对Bax启动子的促转录活性。结论沉默FHL2表达可明显抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞阻滞于G_0/G_1期;FHL2介导了p53对Bax启动子的转录调节作用。FHL2可能会成为新的肿瘤治疗靶点,其机制与p53/Bax和p53/p21通路相关。 展开更多

关键词 骨肉瘤 FHL2 U2OS细胞株 增殖 凋亡

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化疗药物对骨髓基质细胞的氧化性损伤 被引量：3

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作者 刘喆 李艺辉 +6 位作者 薛贞雅 唐克晶 徐颖茜 邢海燕 田征 王敏 饶青 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期970-975,共6页

目的:以小鼠骨髓基质细胞细胞系OP9细胞为研究对象,探索化疗药物柔红霉素(DNR)对其造成的氧化性损伤。方法:采用TMRM探针流式细胞术检测线粒体膜电位;用DCFDA探针流式细胞术检测活性氧(ROS);实时荧光定量PCR检测OP9细胞抗氧化酶系谷胱... 目的:以小鼠骨髓基质细胞细胞系OP9细胞为研究对象,探索化疗药物柔红霉素(DNR)对其造成的氧化性损伤。方法:采用TMRM探针流式细胞术检测线粒体膜电位;用DCFDA探针流式细胞术检测活性氧(ROS);实时荧光定量PCR检测OP9细胞抗氧化酶系谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的分子表达;流式细胞术检测组蛋白γ-H2AX的表达。结果:与正常OP9细胞相比,经DNR处理的OP9细胞的TMRM阳性率降低56.7%(P<0.05);经DNR处理后的OP9细胞DCFDA阳性率增加了3.52倍(P <0.01);DNR处理的OP9细胞的GPX4表达下降44.22%(P <0.001);GPX7表达下降65.7%(P <0.001);GPX8表达下降24.7%(P <0.001);DNR处理后的OP9细胞的γ-H2AX阳性率增加(P <0.05)。结论:DNR处理后的OP9细胞线粒体膜电位降低;活性氧水平增加;抗氧化酶系GPX分子表达均有明显下降;基因组不稳定性明显增加,细胞氧化性损伤增加。 展开更多

关键词 化疗药物 柔红霉素 OP9细胞 氧化性损伤 线粒体膜电位 基因组不稳定性

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嵌合抗原受体T细胞靶向LMP1抗原治疗EB病毒阳性淋巴瘤的功能研究 被引量：2

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作者 何慧珍 邢妍妍 +7 位作者 张瑜 徐颖茜 田征 邢海燕 唐克晶 饶青 王建祥 王敏 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期229-234,共6页

目的制备一种靶向LMP1抗原的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞),研究其对EB病毒(EBV)阳性淋巴瘤的免疫治疗作用。方法应用分子克隆技术构建二代LMP1 CAR表达质粒,通过慢病毒包装体系包装病毒后感染人T细胞,获得LMP1 CAR-T细胞,体外实验验证L... 目的制备一种靶向LMP1抗原的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞),研究其对EB病毒(EBV)阳性淋巴瘤的免疫治疗作用。方法应用分子克隆技术构建二代LMP1 CAR表达质粒,通过慢病毒包装体系包装病毒后感染人T细胞,获得LMP1 CAR-T细胞,体外实验验证LMP1 CAR-T细胞对感染EBV后的LMP1阳性淋巴瘤细胞的特异性细胞毒性作用。结果①LMP1蛋白表达于EBV阳性的淋巴瘤细胞表面;②成功构建了二代LMP1 CAR慢病毒载体,感染人T细胞,获取LMP1 CAR-T细胞,感染效率大于80%;③LMP1 CAR-T细胞可特异性杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞,当效靶比按4∶1共培养48 h后,LMP1 CAR-T细胞对Raji细胞的杀伤作用增强,对Ramos细胞无明显杀伤作用;④与LMP1阳性淋巴瘤细胞按1∶1共培养5 h后,LMP1 CAR-T细胞处理组CD107a^(+)T细胞比例显著高于Vector-T细胞组[(13.25±2.94)%对(1.55±0.05)%,t=3.972,P=0.017],脱颗粒效果增强;⑤与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后,LMP1 CAR-T细胞组CD69+、CD25+T细胞比例显高于Vector-T细胞组[(7.40±0.41)%对(3.48±0.47)%,t=6.268,P=0.003;(73.00±4.73)%对(57.67±2.60)%,t=2.842,P=0.047],活化效应增强。⑥与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后,LMP1 CAR-T细胞组细胞因子分泌增强,高于Vector-T细胞组[IFN-γ:(703±73)ng/L对(422±87)ng/L,t=2.478,P=0.068;TNF-α:(215±35)ng/L对(125±2)ng/L,t=2.536,P=0.064]。结论该研究证实EBV阳性淋巴瘤细胞表面可特异表达LMP1蛋白,成功构建了LMP1 CAR慢病毒载体并感染人T细胞,成功获得LMP1 CAR-T细胞。体外实验证实:与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后,LMP1 CAR-T细胞脱颗粒效果增强,活化效应增强,高效分泌细胞因子,可特异杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞,具有潜在的临床应用前景。 展开更多

关键词 EB病毒 LMP1抗原 嵌合抗原受体T细胞

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糖芯片研究进展 被引量：1

9

作者 徐颖茜 庞昕 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期99-103,共5页

糖芯片是生物芯片的一种,是继基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片等之后发展起来的一种很有前景的生物检测技术。随着糖生物学和糖组学的研究进展,糖芯片正逐步发展为该领域的新型研究手段。介绍了糖芯片技术及其制作方法,高通量分析平台... 糖芯片是生物芯片的一种,是继基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片等之后发展起来的一种很有前景的生物检测技术。随着糖生物学和糖组学的研究进展,糖芯片正逐步发展为该领域的新型研究手段。介绍了糖芯片技术及其制作方法,高通量分析平台以及糖芯片在生物学研究和医学领域的具体应用,同时也对糖芯片技术的发展进行了展望。 展开更多

关键词 糖组学 糖芯片 生物芯片

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一种新的靶向CD19抗原的三特异性T细胞衔接器的制备及其抗白血病作用研究 被引量：2

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作者 陈曼玲 彭楠 +8 位作者 刘晓雨 张婷 徐颖茜 田征 邢海燕 唐克晶 饶青 王建祥 王敏 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期217-223,共7页

目的制备一种新的靶向CD19的三特异性T细胞衔接器融合蛋白(19TriTE),研究其对CD19阳性血液肿瘤的免疫治疗作用。方法通过分子克隆技术构建19TriTE表达质粒,并通过真核蛋白表达系统成功表达该融合蛋白。体外实验验证19TriTE对T细胞的活... 目的制备一种新的靶向CD19的三特异性T细胞衔接器融合蛋白(19TriTE),研究其对CD19阳性血液肿瘤的免疫治疗作用。方法通过分子克隆技术构建19TriTE表达质粒,并通过真核蛋白表达系统成功表达该融合蛋白。体外实验验证19TriTE对T细胞的活化与增殖作用及介导T细胞发挥对CD19阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒作用。结果①成功构建19TriTE融合蛋白表达质粒,并通过真核蛋白表达系统成功表达。②19TriTE可以特异性结合T细胞和Nalm6细胞,与T细胞的平衡解离常数为19.21 nmol/L,与Nalm6细胞的平衡解离常数为11.67 nmol/L。③2 nmol/L浓度的19TriTE与T细胞及Nalm6细胞共培养时,T细胞中CD69阳性表达率为35.4%,CD25阳性表达率为49.8%,较对照组显著升高。④19TriTE在浓度为1 nmol/L时即可显著促进T细胞增殖,第12天时,T细胞绝对计数由初始1×10^(6)扩增至7.4×10^(7),增殖74倍。⑤19TriTE融合蛋白能明显介导T细胞杀伤CD19阳性靶细胞且与剂量呈正相关,浓度为10 nmol/L时,靶细胞裂解率达50%。⑥脱颗粒实验验证,CD19阳性靶细胞存在时,19TriTE可以显著激活T细胞且与剂量呈正相关。⑦将19TriTE融合蛋白分别与过表达RFP及Luciferase基因的靶细胞及T细胞共培养,19TriTE能够介导T细胞杀伤CD19阳性的靶细胞。结论本研究成功构建及表达19TriTE融合蛋白,体外实验验证其可以有效活化T细胞,并促进T细胞增殖。同时,能够结合CD19阳性靶细胞和T细胞,促进T细胞发挥体外抗白血病作用,为进一步临床研究奠定基础。 展开更多

关键词 急性淋巴细胞白血病 CD19 三特异性T细胞衔接器 融合蛋白 免疫治疗

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靶向CD52嵌合抗原受体T细胞的制备及其抗白血病作用研究 被引量：1

11

作者 刘琰 刘钰 +8 位作者 唐克晶 陈兆琪 牟峻黎 徐颖茜 邢海燕 田征 饶青 王敏 王建祥 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期279-286,共8页

目的构建一种靶向CD52的嵌合抗原受体T细胞(CD52 CAR-T),探索其对CD52+白血病的治疗效果。方法应用分子克隆技术构建以CD52为抗原结合区的CD52 scFv、4-1BB为共刺激分子的二代CAR-T细胞。慢病毒载体包装后感染T细胞,制备CD52 CAR-T细胞... 目的构建一种靶向CD52的嵌合抗原受体T细胞(CD52 CAR-T),探索其对CD52+白血病的治疗效果。方法应用分子克隆技术构建以CD52为抗原结合区的CD52 scFv、4-1BB为共刺激分子的二代CAR-T细胞。慢病毒载体包装后感染T细胞,制备CD52 CAR-T细胞,通过流式细胞术检测CD52 CAR-T细胞CD4、CD8细胞亚群及其分化状态。通过体外杀伤实验、脱颗粒实验及细胞因子的释放等功能实验,观察CD52 CAR-T细胞对CD52+白血病细胞的特异性细胞毒作用。结果①成功构建了pCDH-CD52 scFv-CD8α-4-1BB-CD3ζ-GFP表达载体,感染人T细胞,获得靶向CD52的CART细胞。②感染CD52 CAR表达载体的第6天,T细胞中表达CD52的细胞可被清除[CD52 CAR-T组CD52+T细胞为(4.48±4.99)%,Vector-T组为(56.58±19.8)%,P=0.011]。③CD52 CAR-T的自我杀伤不会影响T细胞的增殖,培养后期CD52 CAR-T组的增殖速度高于Vector-T组。④T细胞表型检测发现CD52 CAR可以促进CAR-T细胞向中心记忆T细胞及效应记忆T细胞分化,减少CAR-T细胞向终末效应细胞分化。⑤CD52 CAR-T细胞与HuT78-19t及MOLT4-19t靶细胞以效靶比1∶1共培养24 h,HuT78-19t细胞可被清除,而对MOLT4-19t细胞无明显杀伤作用[(2.66±1.60)%对(56.66%±5.74)%,P<0.001]。⑥脱颗粒实验显示,HuT78-19t细胞对CD52 CAR-T细胞的激活作用显著高于MOLT4-19t细胞[(57.34±11.25)%对(13.06±4.23)%,P<0.001]。⑦CD52 CAR-T与HuT78-19t细胞共培养48 h上清中细胞因子分泌水平[IFN-γ(3706±226)pg/ml、TNF-α(1732±560)pg/ml]远高于MOLT4-19t细胞组[IFN-γ(1577±846)pg/ml、TNF-α(74±12)pg/ml](P值均<0.01)。结论该研究成功制备了具有抗白血病作用的CD52 CAR-T细胞,为进一步的靶向CD52的免疫治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 CD52 嵌合抗原受体 免疫治疗

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靶向CD33抗原三特异性T细胞衔接器的制备及对白血病细胞的作用研究

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作者 张婷 陈曼玲 +8 位作者 刘晓雨 何慧珍 徐颖茜 田征 邢海燕 唐克晶 饶青 王敏 王建祥 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期376-382,共7页

目的研究靶向CD33抗原双特异性及三特异性T细胞衔接器对T细胞增殖及其抗白血病作用。方法构建抗CD33scFv-抗CD3scFv的双特异性T细胞衔接器(CD33-BiTE)及在BiTE基础上加入CD80胞外段的三特异性T细胞衔接器(CD33-TriTE)表达载体, 使用真... 目的研究靶向CD33抗原双特异性及三特异性T细胞衔接器对T细胞增殖及其抗白血病作用。方法构建抗CD33scFv-抗CD3scFv的双特异性T细胞衔接器(CD33-BiTE)及在BiTE基础上加入CD80胞外段的三特异性T细胞衔接器(CD33-TriTE)表达载体, 使用真核细胞表达系统表达蛋白并进行亲和层析纯化。检测CD33-BiTE及CD33-TriTE对T细胞活化增殖功能及对白血病细胞杀伤功能活性的影响。结果①成功构建了CD33-BiTE及CD33-TriTE表达载体, 在真核细胞中表达, 纯化得到的融合蛋白能与相同靶抗原流式抗体竞争结合于靶细胞表面。②CD33-BiTE及CD33-TriTE分别与人T细胞共培养12 d后, T细胞数扩增至基线值的(33.89±19.46)倍和(81.54±23.62)倍, CD33-TriTE促T细胞增殖能力明显优于CD33-BiTE(P<0.05)。③体外实验证实CD33-BiTE和CD33-TriTE均可增强T细胞对表达CD33白血病细胞的特异性杀伤作用, 且在一定浓度范围内, 浓度越高, 抗体的杀伤作用越强。④与CD33-TriTE相比, CD33-BiTE杀伤白血病细胞的同时增加其PD-L1表达, 而TriTE对过表达PD-L1的Molm13细胞具有更强的杀伤作用。结论该研究构建了CD33-BiTE及CD33-TriTE表达载体, 并在真核细胞表达了融合蛋白, 体外实验证实其促T细胞增殖活化的特性, 并具有促T细胞抗白血病作用。其中CD33-TriTE较CD33-BiTE促增殖效果更强, 且对PD-L1高表达的白血病细胞杀伤效果更强。 展开更多

关键词 白血病 髓样 急性 三特异性T细胞衔接器 免疫治疗

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嵌合抗原受体修饰的T细胞治疗急性白血病的研究进展 被引量：1

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作者 徐颖茜 王敏 王建祥 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2017年第12期1336-1352,共17页

嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)治疗是过继免疫治疗的一种,通常CAR-T细胞是由患者或供者的T细胞经CAR基因转化并扩增而来,最后再回输到患者体内.CAR-T在治疗B细胞恶性肿瘤中展现出了振奋人心的效果,目前也被用于治疗其他血液肿瘤的研究... 嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)治疗是过继免疫治疗的一种,通常CAR-T细胞是由患者或供者的T细胞经CAR基因转化并扩增而来,最后再回输到患者体内.CAR-T在治疗B细胞恶性肿瘤中展现出了振奋人心的效果,目前也被用于治疗其他血液肿瘤的研究中.本文就CAR的基本结构、CAR结构的演变、在急性白血病治疗中的进展以及目前CAR-T设计新方案4个方面进行叙述. 展开更多

关键词 急性白血病 嵌合抗原受体修饰的T细胞 免疫治疗

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凋亡抑制蛋白c-FLIP高表达与白血病细胞耐药的关系 被引量：1

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作者 刘佳 王颖 +7 位作者 李赛赛 徐颖茜 邢海燕 唐克晶 田征 饶青 王敏 王建祥 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1621-1626,共6页

目的:探讨抗凋亡蛋白c-FLIP的表达对于白血病细胞系Kasumi-1细胞耐药的作用及其机制。方法:应用Tet-on系统,通过强力霉素(doxycycline,Dox)调控c-FLIP的条件性表达;将c-FLIP基因与慢病毒目的载体p LVX-Tight-puro连接,感染Kasumi-1细胞... 目的:探讨抗凋亡蛋白c-FLIP的表达对于白血病细胞系Kasumi-1细胞耐药的作用及其机制。方法:应用Tet-on系统,通过强力霉素(doxycycline,Dox)调控c-FLIP的条件性表达;将c-FLIP基因与慢病毒目的载体p LVX-Tight-puro连接,感染Kasumi-1细胞并获得稳定表达c-FLIP蛋白的稳定克隆;应用实时荧光定量PCR和Western blot方法证实c-FLIP在mRNA和蛋白水平的过表达情况;通过流式细胞术分析Fas激动剂CH11和HDAC抑制剂苯丁酸钠处理的Kasumi-1细胞的凋亡变化,以及过表达c-FLIP蛋白后对凋亡发生的影响;应用吉姆萨染色观察细胞凋亡形态变化,Western blot检测caspase-8凋亡信号通路的激活情况。结果:CH11和苯丁酸钠能够诱导Kasumi-1细胞凋亡,在Kasumi-1细胞过表达c-FLIP蛋白后,细胞能够抵抗CH11和苯丁酸钠诱导的凋亡;Western blot显示c-FLIP过表达阻滞了caspase-8凋亡信号通路的激活。结论:c-FLIP基因高表达使白血病细胞系Kasumi-1细胞对CH11和苯丁酸钠产生耐药作用。 展开更多

关键词 C-FLIP 白血病 KASUMI-1细胞 白血病细胞耐药

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张恩利创作中的“记忆”

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作者 徐颖茜 《艺海》 2021年第2期32-33,共2页

画家张恩利不止一次地认为在他的作品中记忆是非常重要的,通过记忆,他将那些在岁月里消逝的“物体”转化为感受,在岁月中不断加强,在创作中不断表现。本文通过对张恩利不同时期代表作的分析,挖掘张恩利创作背后的记忆与意义。

关键词 张恩利 创作 记忆

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利用定量蛋白组学的方法研究甲异靛诱导K562细胞凋亡的机制

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作者 毛新荷 徐颖茜 +6 位作者 邢海燕 田征 唐克晶 刘璐 饶青 王敏 王建祥 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1589-1597,共9页

目的:利用串联质谱标签系统(tandem mass tag,TMT)标记定量蛋白组学的方法,检测白血病细胞系K562细胞经甲异靛(meisoindigo)处理后蛋白表达的改变,探讨甲异靛诱导白血病细胞凋亡的作用机制。方法:用CCK8法检测甲异靛对K562细胞的半抑制... 目的:利用串联质谱标签系统(tandem mass tag,TMT)标记定量蛋白组学的方法,检测白血病细胞系K562细胞经甲异靛(meisoindigo)处理后蛋白表达的改变,探讨甲异靛诱导白血病细胞凋亡的作用机制。方法:用CCK8法检测甲异靛对K562细胞的半抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC50),流式细胞术检测不同浓度甲异靛诱导K562细胞的凋亡水平。K562细胞经终浓度为0. 2%DMSO(对照组)和20μmol/L甲异靛(实验组)处理2 h后,提取总蛋白,TMT标记,高效液相色谱分级和质谱定量蛋白组学技术鉴定肽段和丰度信息,并进行3次技术重复。用Mascot软件鉴定蛋白,用GO(gene ontology)注释、富集和聚类分析方法分析差异表达蛋白。结果:在K562细胞系中,甲异靛以剂量依赖的方式诱导K562细胞凋亡(r=0. 98);蛋白质组学分析结果显示,共鉴定出蛋白质5 544个,其中有定量数据的蛋白质4 792个。与对照组相比,在实验组中表达差异1. 5倍以上的蛋白有8个,其中4个蛋白表达上调,4个蛋白表达下调,差异变化的蛋白主要与活性氧代谢相关。结论:应用定量蛋白质组学分析表明,包括DDIT4等蛋白的表达在甲异靛处理K562细胞系早期发生明显改变,提示活性氧代谢过程的改变可能在甲异靛促进凋亡的机制中发挥了重要作用。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 K562 甲异靛 定量蛋白质组学

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吕克·图伊曼斯与张恩利的绘画对比研究

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作者 徐颖茜 《艺术研究（哈尔滨师范大学艺术学报）》 2020年第3期67-69,共3页

20世纪以来当代艺术开始进入大众的视线,艺术的表现形式日渐丰富多样,艺术家们不断寻求属于自身的独特艺术媒介.而来自比利时的吕克·图伊曼斯与来自中国的张恩利却不约而同地坚守着绘画艺术的阵地.出生于同一时代背景下的二人,在... 20世纪以来当代艺术开始进入大众的视线,艺术的表现形式日渐丰富多样,艺术家们不断寻求属于自身的独特艺术媒介.而来自比利时的吕克·图伊曼斯与来自中国的张恩利却不约而同地坚守着绘画艺术的阵地.出生于同一时代背景下的二人,在油画的面貌上有着惊人的相似性.但由于中西方民族文化的差异性,使得他们对于创作的观念颇有不同.本文试通过结合二者的时代与文化背景进行分析,找到两位艺术家创作过程中的共性与个性,相似与差异,充分感悟他们在艺术创作上的审美倾向与艺术诉求,从而探究东西方人文背景下的差异性,并思考当代艺术中绘画发展的新的可能. 展开更多

关键词 吕克·图伊曼斯 张恩利 对比研究

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双靶点嵌合抗原受体T细胞治疗CD19抗原表位缺失急性B淋巴细胞白血病一例报告并文献复习

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作者 傅雪航 王迎 +8 位作者 王慧君 魏述宁 徐颖茜 邢海燕 唐克晶 田征 饶青 王建祥 王敏 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期282-286,共5页

目的:了解CD19异构体对双特异性T细胞衔接器(BiTE)治疗的反应,进一步探讨BiTE治疗无效的相关机制及相应的解决方案。方法:通过半定量RT-PCR的方法检测1例CD19+急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者BiTE治疗前后CD19异构体mRNA表达量的情况,Sa... 目的:了解CD19异构体对双特异性T细胞衔接器(BiTE)治疗的反应,进一步探讨BiTE治疗无效的相关机制及相应的解决方案。方法:通过半定量RT-PCR的方法检测1例CD19+急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者BiTE治疗前后CD19异构体mRNA表达量的情况,Sanger测序对相应的异构体序列进行分析,流式细胞术及转录组测序分析治疗前后谱系特异性分子的表达情况。结果:患者初诊时即存在2号外显子缺失型CD19异构体的表达,BiTE治疗后患者未缓解,流式细胞术检测发现CD19抗原表达转阴,但2号外显子缺失型CD19异构体的表达量并无增加,且细胞表型及转录组测序均未见谱系转化的发生。外显子可变剪接引起的缺失型CD19异构体的表达及谱系转化并非该患者CD19抗原表位缺失的机制。该例患者在疾病进展退出BiTE治疗组之后,采用中国医学科学院血液病医院自主研发的CD22及CD19 CAR-T序贯治疗后完全缓解。结论:该例患者CD19抗原-缺失导致BiTE治疗无效,其缺失并非由可变剪接或谱系转换所致,更换为CD22、CD19双靶点CAR-T细胞治疗有效。 展开更多

关键词 白血病 淋巴细胞 急性 双特异性T细胞衔接器 表位缺失 异构体 CD19

原文传递

Numb在白血病细胞系K562中的表达及不对称分裂研究

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作者 李正 李欢 +6 位作者 李艺辉 徐颖茜 邢海燕 唐克晶 田征 王敏 饶青 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期668-672,共5页

目的:以白血病细胞系K562为研究对象,通过观察分化与未分化的K562细胞中Numb的表达改变以及不对称分裂规律的变化,探讨不对称分裂改变在白血病细胞中的作用。方法:氯化高铁血红素(Hemin)诱导K562细胞分化,实时荧光定量RT-qPCR和流式细... 目的:以白血病细胞系K562为研究对象,通过观察分化与未分化的K562细胞中Numb的表达改变以及不对称分裂规律的变化,探讨不对称分裂改变在白血病细胞中的作用。方法:氯化高铁血红素(Hemin)诱导K562细胞分化,实时荧光定量RT-qPCR和流式细胞术分别检测K562细胞分化后Numb表达的改变。诺考达唑使细胞处于同步化水平,免疫组织化学技术标记Numb蛋白,应用共聚焦显微镜观察处于分裂末期的细胞,再使用Image J软件计算细胞的荧光强度,根据分裂后2个子细胞的荧光强度统计各分裂方式的比例。结果:在诱导K562细胞分化过程中,Numb mRNA水平较对照组上调了2.3倍(P<0.001);流式细胞术分析显示,分化的K562细胞中Numb阳性率为(67.37±5.01)%,而未分化的K562细胞中Numb阳性率为(43.97±5.72)%(P<0.01),并且分化的K562细胞比未分化的K562细胞不对称分裂比例增加了18.3%,对称性自我更新比例减少了49.7%(P<0.001),对称性向下分化比例增加了32%(P<0.001)。结论:分化的K562细胞中Numb的表达上调,不对称分裂的比例比未分化的增多;当诱导其分化时,不对称分裂增加,对称性自我更新减少。白血病细胞主要是通过对称性自我更新方式进行分裂以维持白血病细胞的稳定。 展开更多

关键词 白血病 NUMB K562细胞 对称分裂 不对称分裂

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血细胞系列单抗关键技术及产品产业化

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作者 无 王建祥 +10 位作者 熊冬生 廖晓龙 王敏 安娜 陶中飞 饶青 徐颖茜 王迎 竺晓凡 邹德慧 张宇光 《中国科技成果》 2021年第20期52-52,共1页

面对白血病分型准确率较低的状况,应对国家重大需求,中国医学科学院血液学研究所(简称血研所)作为国内率先获得鼠源性单抗技术突破及拥有核心技术的单位之一,研发制备了200余种具有自主知识产权的HI系列单抗,廖晓龙团队基于HI单抗研发... 面对白血病分型准确率较低的状况,应对国家重大需求,中国医学科学院血液学研究所(简称血研所)作为国内率先获得鼠源性单抗技术突破及拥有核心技术的单位之一,研发制备了200余种具有自主知识产权的HI系列单抗,廖晓龙团队基于HI单抗研发出单色及多色荧光标记的流式抗体检测试剂(图1),研发出的62种流式抗体试剂中有14个产品获得III类诊断试剂注册证.开发出用于淋巴细胞亚群检测的产品,实现了国产4色以上诊断试剂领域的突破.HI单抗为国内提供了主要流式抗体试剂,摆脱对进口试剂的依赖,促进高端流式诊断试剂国产化,显著提升了我国血液肿瘤精准分型水平,指导临床治疗抉择和效果监测,突破诊断抗体依赖进口、"卡脖子"的困境. 展开更多

关键词 进口试剂 注册证 诊断试剂 淋巴细胞亚群 血液肿瘤 效果监测 国家重大需求 产品产业化

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