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QIAcube小型工作站在生物接触类检材提取中的应用研究 被引量：6
1
作者 徐韩飞 范京来 +2 位作者 富渭鑫 陈立彰 尤汉杰 《刑事技术》 2015年第2期118-121,共4页
目的探讨QIAcube工作站在生物接触类检材中的提取效果。方法将90份以脱落细胞粘取膜、实物样本(纱线转移)或棉签擦拭物为载体的生物接触类检材,分别采用QIAcube工作站、EZ1工作站和手工硅珠法进行基因组DNA提取、定量并检测15个常染色... 目的探讨QIAcube工作站在生物接触类检材中的提取效果。方法将90份以脱落细胞粘取膜、实物样本(纱线转移)或棉签擦拭物为载体的生物接触类检材,分别采用QIAcube工作站、EZ1工作站和手工硅珠法进行基因组DNA提取、定量并检测15个常染色体基因座的STR分型。结果利用QIAcube工作站提取的生物接触类检材平均检出率达到44.4%,其中脱落细胞粘取膜组检出率为56.7%,实物纱线转移组检出率为46.7%,棉签擦拭物组检出率为30.0%。脱落细胞粘取膜组和实物样本(纱线转移)组均获得较好的STR分型结果,所得DNA浓度均优于棉签擦拭物组样本。QIAcube工作站组平均检出率为44.4%,手工硅珠法组平均检出率为43.2%,而EZ1工作站组平均检出率为26.9%,前两者平均检出率明显高于EZ1工作站组。QIAcube工作站组与硅珠法组所得DNA浓度无显著差异,但均明显高于EZ1工作站组。QIAcube工作站组与硅珠法组检测得到的STR分型RFU值及峰值均衡性均优于EZ1工作站组,尤其是大片段基因在前两组中均能够被完整检测到。结论采用QIAcube工作站提取生物接触类检材检出率高,STR分型结果良好,可应用于法医物证实际案件检验。 展开更多
关键词 法医遗传学 QIAcube EZ1 硅珠法 生物接触类检材
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问号钩端螺旋体鞭毛蛋白相关蛋白FliH／I／Y／N基因原核表达和膜定位 被引量：1
2
作者 徐韩飞 阮萍 +4 位作者 廖苏梅 杨平 毛亚飞 李立伟 严杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期597-601,共5页
目的克隆问号钩端螺旋体（简称钩体）鞭毛相关蛋白编码基因fliH、fliI、fliY和fliN并构建其原核表达系统，制备表达产物抗血清并了解其蛋白的定位。方法以苯酚-氯仿法提取的问号钩体黄疸出血群赖型赖株基因组DNA为模板，用PCR扩增全长f... 目的克隆问号钩端螺旋体（简称钩体）鞭毛相关蛋白编码基因fliH、fliI、fliY和fliN并构建其原核表达系统，制备表达产物抗血清并了解其蛋白的定位。方法以苯酚-氯仿法提取的问号钩体黄疸出血群赖型赖株基因组DNA为模板，用PCR扩增全长fliH、fliI、fliY和fliN基因片段，T-A克隆后测序，继而构建上述目的基因克隆的原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图像分析系统检查重组蛋白rFliH、rFliI、rFliY和rFliN的表达情况，Ni-NTA亲和层析法提纯目的表达产物。皮下免疫家兔获得4种目的重组蛋白抗血清，用ELISA和Western blot分别检测抗血清效价并了解抗血清与相应抗原结合的能力。采用免疫电镜技术对fliH、fliI、fliY和fliN进行定位。结果PCR扩增获得大小分别为924、1365、1065和318 bp的全长fliH、fliI、fliY和fliN基因片段，与报道的序列比较，其核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。所构建的原核表达系统均能有效地表达目的重组蛋白，其产量均约为20％。rFliH、rFliI、rFliY和rFliN蛋白免疫家兔后能产生抗体，其兔抗血清ELISA效价达到1：100000以上，并分别识别钩体相应重组蛋白和膜蛋白提取物而出现明显的Western杂交条带。fliH、fliI、fliY和fliN蛋白分布于问号钩体内膜、外膜或内外膜之间。结论本研究成功地构建了能高效表达问号钩体鞭毛相关蛋白fliH、fliI、fliY和fliN的原核表达系统，并获得了能有效识别上述蛋白抗原的高效价抗血清。鞭毛相关蛋白fliH、fliI、fliY和fliN是问号钩体内膜或外膜蛋白成分。 展开更多
关键词 问号钩端螺旋体 鞭毛相关蛋白 基因克隆 原核表达 免疫原性/定位
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基于问号钩端螺旋体rLipL32／1-LipL21-OmpL1／2融合抗原的ELISAs建立及应用
3
作者 邱晓枫 徐韩飞 +2 位作者 郭宗琪 王江 严杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第6期592-598,共7页
目的:建立基于问号钩端螺旋体(简称钩体)rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2融合抗原的ELISAs,并应用于检测钩体病患者血清特异性IgG和IgM。方法:采用显微镜凝集试验(MAT),检测钩体病患者血清及rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清对我国问号钩体... 目的:建立基于问号钩端螺旋体(简称钩体)rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2融合抗原的ELISAs,并应用于检测钩体病患者血清特异性IgG和IgM。方法:采用显微镜凝集试验(MAT),检测钩体病患者血清及rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清对我国问号钩体参考标准株的效价。分别以rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2、rLipL32/1、rLipL21和rOmpL1/2为包被抗原,建立检测血清特异性IgM和IgG的ELISAs,并用于检测107份MAT阳性钩体病患者血清标本。结果:MAT结果证实,66%(71/107)患者感染黄疸出血群问号钩体,rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清对我国15株问号钩体参考标准株的凝集效价为1∶20～1∶160。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2、rLipL32/1、rLipL21、rOmpL1/2抗原用于检测IgM的ELISA阳性率分别为89.7%、75.7%、85.1%和79.4%,用于检测IgG的ELISA阳性率分别为99.1%、99.1%、94.4%和86.0%。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2-IgM-ELISA检测阳性率高于其它3种检测IgM的ELISAs(P<0.05),rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2-IgG-ELISA检测阳性率高于rOmpL1/2-IgG-ELISA(P<0.05),但与rLipL21-IgG-ELISA及rLipL32/1-IgG-ELISA接近(P>0.05)。结论:rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2-ELISAs可作为敏感、特异的通用型钩体病血清学早期诊断方法。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定/方法 钩端螺旋体 问号/诊断 抗原 细菌/分析 属特异性抗原 融合基因/重组表达
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家禽中禽流感的控制
4
作者 徐韩飞（摘译） 严杰（校） 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期F0002-F0002,共1页
由世界动物健康组织（OIE）提名的禽流行性感冒．是一种对动物和人类健康都有重要影响的疾病．该疾病的很多方面都缺乏科学数据．因而近些年的一些疫情的控制与管理也受到了阻碍。随着数以百万动物的死亡．人们对引起人类死亡原因和该... 由世界动物健康组织（OIE）提名的禽流行性感冒．是一种对动物和人类健康都有重要影响的疾病．该疾病的很多方面都缺乏科学数据．因而近些年的一些疫情的控制与管理也受到了阻碍。随着数以百万动物的死亡．人们对引起人类死亡原因和该病广泛流行潜在危机的关注度也在增加．依据新近的科研突破以及OIE新的对动物福利维护与规定细则．我们对禽类中禽流感控制的可行性方法做了归纳与总结，包括对动物的捕杀、急救和预防性疫苗的注射等． 展开更多
关键词 禽流感 动物福利 家禽 禽流行性感冒 人类健康 死亡原因 预防性疫苗 健康组织
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南非蜱咬热焦痂的组织特点和免疫检测
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作者 徐韩飞（摘译） 严杰（校） 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期F0002-F0002,共1页
南非蜱咬热（African tick-bite fever,ATBF）是由非洲立克次体属（R.africae）引起的立克次体病。我们对8个病人通过细胞培养及PCR阳性和血清学阳性的联合检测确定为ATBF，再从这8个患者的表皮嫁接焦痂中提取非洲立克次体，对其组织特... 南非蜱咬热（African tick-bite fever,ATBF）是由非洲立克次体属（R.africae）引起的立克次体病。我们对8个病人通过细胞培养及PCR阳性和血清学阳性的联合检测确定为ATBF，再从这8个患者的表皮嫁接焦痂中提取非洲立克次体，对其组织特点和免疫检测进行探究。通过大量的图象分析，我们对南非蜱咬热病人和地中海斑点热焦痂的炎症模式进行比较。 展开更多
关键词 南非蜱咬热 免疫检测 组织特点 焦痂 立克次体病 FEVER 立克次体属 联合检测
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