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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白的表达及其免疫保护效力分析 被引量：6
1
作者 李大鹏 徐胜奎 +2 位作者 刘双红 李刚 王春来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期245-249,共5页
为评价副猪嗜血杆菌(H.parasuis)细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护效力,本研究以H.parasuis血清5型参考菌株Nagasaki基因组为模板,通过PCR扩增cdtB基因,将cdtB基因去除信号肽编码序列后克隆于pET-22b(+)载体中,构建重组... 为评价副猪嗜血杆菌(H.parasuis)细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护效力,本研究以H.parasuis血清5型参考菌株Nagasaki基因组为模板,通过PCR扩增cdtB基因,将cdtB基因去除信号肽编码序列后克隆于pET-22b(+)载体中,构建重组质粒pET-cdtB,并在E.coli BL21(DE3)感受态中诱导表达。结果显示,重组CdtB蛋白(rCdtB)以可溶形式表达。以纯化后的100μg蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,2周后进行一次加强免疫并进行血清抗体检测,其抗体效价高于1:25 600,表明该蛋白具有良好的免疫原性。淋巴细胞增殖试验结果表明rCdtB能够显著刺激小鼠T淋巴细胞增殖。此外,分别以5 LD_(50)的H.parasuis血清5型HN10菌株和血清13型ZD12菌株攻毒,结果表明rCdtB可以对血清5型HN10菌株提供60%以上的免疫保护力,而对血清13型ZD12菌株可以提供50%以上的免疫保护力,这表明rCdtB可以作为重组亚单位疫苗的候选抗原蛋白。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 CdtB 原核表达 免疫保护
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乙型脑炎病毒非结构蛋白的表达及与hnRNP K的相互作用
2
作者 郝悦 徐胜奎 阮文科 《北京农学院学报》 2024年第1期37-42,共6页
【目的】为探明JEV病毒复制与宿主蛋白的关系。【方法】首先构建非结构蛋白质粒,然后将构建成功的非结构蛋白的质粒转染至Vero细胞中,24 h在荧光显微镜下观察蛋白表达情况,再分别与pCMV-MYC-hnRNP K质粒同时转染至Vero细胞中,培养24 h,... 【目的】为探明JEV病毒复制与宿主蛋白的关系。【方法】首先构建非结构蛋白质粒,然后将构建成功的非结构蛋白的质粒转染至Vero细胞中,24 h在荧光显微镜下观察蛋白表达情况,再分别与pCMV-MYC-hnRNP K质粒同时转染至Vero细胞中,培养24 h,收取细胞蛋白样,进行Co-IP试验相关步骤,用Western-blot实验进行结果呈现,得出试验结果。【结果】构建的非结构蛋白质粒在Vero细胞中可以表达,通过与表达hnRNP K蛋白的质粒共转染,通过Co-IP试验经Western-blot结果分析能够得出JEV的NS1与hnRNP K之间存在相互作用,JEV的NS2a、NS3、NS5与宿主hnRNP K之间不存在相互作用。【结论】JEV的NS1蛋白与宿主蛋白hnRNP K存在相互作用,为JEV非结构蛋白的研究进一步拓宽了思路,同时为JEV病毒在宿主细胞中的生命活动周期的研究提供了基础,为深入研究JEV病毒复制提供了新方向。 展开更多
关键词 乙型脑炎 非结构蛋白 hnRNP K 免疫共沉淀 蛋白互作
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乙型脑炎病毒激活天然免疫应答的特点
3
作者 董昊 徐胜奎 +1 位作者 郝悦 阮文科 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第9期84-91,共8页
流行性乙型脑炎(JE)是由乙型脑炎病毒(JEV)感染引起的人兽共患病,威胁人类健康和畜牧业健康发展。天然免疫作为机体防御的第一道防线,在抵抗病原感染过程中发挥重要作用。病原微生物感染机体后,宿主模式识别受体(PRRs)通过识别病原相关... 流行性乙型脑炎(JE)是由乙型脑炎病毒(JEV)感染引起的人兽共患病,威胁人类健康和畜牧业健康发展。天然免疫作为机体防御的第一道防线,在抵抗病原感染过程中发挥重要作用。病原微生物感染机体后,宿主模式识别受体(PRRs)通过识别病原相关分子模式(PAMPs)诱导天然免疫发挥抗病毒功能,其中干扰素和炎性因子至关重要。为了逃逸宿主的免疫清除,JEV进化出多种策略抑制天然免疫,促进自身复制。本文通过论述JEV基因组结构和致病机理,总结机体天然免疫分子识别JEV PAMPs激活天然免疫应答的方式,并进一步阐释JEV调控天然免疫应答的策略,有利于深入理解该病毒的致病机理,为JE的防控提供思路。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒(JEV) 天然免疫 免疫调控
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副猪嗜血杆菌间接ELISA检测方法的建立 被引量：4
4
作者 刘双红 李大鹏 +5 位作者 徐胜奎 谢芳 李刚 李婷 孙斌 王春来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期576-579,共4页
为建立一种快速检测副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学方法,本实验采用重组表达的HPS细胞致死膨胀毒素B亚基蛋白(r Cdt B)作为包被抗原,并对各反应条件进行优化,建立了检测HPS血清抗体的间接ELISA方法。以该方法检测HPS阳性血清和其他猪病病原... 为建立一种快速检测副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学方法,本实验采用重组表达的HPS细胞致死膨胀毒素B亚基蛋白(r Cdt B)作为包被抗原,并对各反应条件进行优化,建立了检测HPS血清抗体的间接ELISA方法。以该方法检测HPS阳性血清和其他猪病病原阳性血清,除了HPS阳性血清呈阳性外,其余均为阴性,表明该方法特异性良好。批内重复和批间重复的最大变异系数分别小于7%和8%。此外,将Cdt B-ELISA方法与商品化试剂盒Bio Chek HPS-Opp A间接ELISA抗体检测方法对背景明确的116份HPS阳性血清和112份HPS阴性血清进行检测,商品化试剂盒阳性符合率为25%,阴性血清符合率为100%,总符合率为62%,其中Cdt B-ELISA方法对阳性血清的检出率高于商品化试剂盒。应用Cdt B-ELISA方法检测330份临床猪血清样品,结果显示,HPS抗体阳性检出率为11.8%。该方法可以用于HPS的临床检测,为HPS流行病学调查和防控提供了一种快速有效的检测方法。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 rCdtB 间接ELISA
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胸膜肺炎放线杆菌relA基因缺失株的构建及其生物学特性的研究 被引量：3
5
作者 李婷婷 李刚 +4 位作者 刘双红 徐胜奎 李大鹏 王春来 刘伟石 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期969-974,共6页
为探究信号分子4或5磷酸鸟苷[(p)ppGpp]对胸膜肺炎放线杆菌(APP)适应性及致病性影响,本研究以APP血清7型S8为亲本株,通过同源重组、卡那抗性及蔗糖负向筛选的方法,将(p)ppGpp的合成调控基因relA敲除,构建缺失突变株S8△relA。生物学特... 为探究信号分子4或5磷酸鸟苷[(p)ppGpp]对胸膜肺炎放线杆菌(APP)适应性及致病性影响,本研究以APP血清7型S8为亲本株,通过同源重组、卡那抗性及蔗糖负向筛选的方法,将(p)ppGpp的合成调控基因relA敲除,构建缺失突变株S8△relA。生物学特性鉴定结果表明,S8△relA具有良好的遗传稳定性,与亲本株增殖速度变化差异不显著,但平台期营养限制环境下,S8△relA存活能力降低,而且在Gly、Ile、Val营养缺失时,S8△rel生长能力显著抑制;S8△relA的持留菌形成能力、生物膜形成能力以及体外抗肺泡巨噬细胞(PAM)吞噬能力均有不同程度降低;对小鼠致病性试验结果显示,S8△relA相比亲本株S8毒力降低2.7倍。研究结果表明(p)ppGpp在环境胁迫下参与APP适应性调控,并对其毒力有一定的影响。本研究首次证明了(p)ppGpp作为一种信号分子,同样可以调控APP的生长,并且在宿主肺部弱营养环境条件下,APP与致病力相关的表型均受到影响,这为进一步阐明APP的致病机制提供实验依据。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 relA基因 基因缺失株
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以胸膜肺炎放线杆菌菌影作为佐剂的猪圆环病毒亚单位疫苗的研究 被引量：3
6
作者 徐胜奎 李婷婷 +6 位作者 赵谦 李大鹏 李刚 刘思国 刘长明 冯力 王春来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期55-59,共5页
为评价胸膜肺炎放线杆菌菌影(APP-BGs)作为猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗佐剂的效果,本实验原核表达及纯化了重组Cap蛋白(r Cap),并分别以法国ISA61(r Cap+ISA61)和APP-ghost(r Cap+APP-ghost)作为佐剂两次免疫仔猪,并设P... 为评价胸膜肺炎放线杆菌菌影(APP-BGs)作为猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗佐剂的效果,本实验原核表达及纯化了重组Cap蛋白(r Cap),并分别以法国ISA61(r Cap+ISA61)和APP-ghost(r Cap+APP-ghost)作为佐剂两次免疫仔猪,并设PCV2灭活苗组和对照组,在加强免疫14 d后攻毒。结果显示,r Cap+APP-ghost组仔猪的抗体水平显著高于r Cap+ISA61组(p<0.05);攻毒后,r Cap+APP-ghost组仔猪未检测到病毒血症,而对照组仔猪在攻毒后14 d^28 d检测到病毒血症;攻毒后28 d,r Cap+APP-ghost组仔猪腹股沟淋巴结中的病毒载量显著低于r Cap+ISA61组和对照组仔猪的病毒载量(p<0.05);同时,r Cap+APP-ghost组仔猪相对体质量增长率显著高于对照组仔猪的相对体质量增长率(p<0.05)。以上结果表明,APP ghost可以作为有效的佐剂增强机体免疫反应,提高机体的抗病原感染能力。 展开更多
关键词 APP菌影 CAP蛋白 佐剂 猪圆环病毒亚单位疫苗
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病毒调控应激颗粒形成的策略及应激颗粒对病毒复制的影响 被引量：1
7
作者 郭鑫 徐胜奎 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期1-7,共7页
病毒严格在细胞内寄生,其依赖于宿主细胞的翻译系统进行复制增殖。近年多项研究发现,细胞内核糖核蛋白(RNP)聚集形成的应激颗粒(SG)具有调控病毒复制的功能。病毒感染细胞后,一方面,诱导真核起始因子2α(eIF2α)磷酸化并形成SG,SG通过... 病毒严格在细胞内寄生,其依赖于宿主细胞的翻译系统进行复制增殖。近年多项研究发现,细胞内核糖核蛋白(RNP)聚集形成的应激颗粒(SG)具有调控病毒复制的功能。病毒感染细胞后,一方面,诱导真核起始因子2α(eIF2α)磷酸化并形成SG,SG通过内部翻译停滞的mRNA抑制病毒蛋白的翻译,或通过内部模式识别受体(PRR)激活宿主天然免疫应答从而影响病毒复制。另一方面,病毒也相应地进化出抑制eIF2α激酶活化、促进eIF2α去磷酸化以及直接破坏SG组成等多种策略抑制SG的形成,以此逃避宿主的免疫清除。此外,病毒还可利用SG来满足自身复制的需要。阐明病毒与SG之间的相互作用关系有利于深入了解病毒的致病机制,为病毒病的防控提供新思路。 展开更多
关键词 应激颗粒 病毒感染 调控机制
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乳猪皮生物敷料对创面愈合的影响 被引量：1
8
作者 钟卫民 张燕 +5 位作者 张阳 陈柯 王旭良 徐胜奎 邹清雁 杨松林 《中国美容医学》 CAS 2003年第4期351-352,I002,共3页
目的:探讨乳猪皮生物敷料促进创面愈合的机理。方法:用凡士林纱布做对照,将乳猪皮生物敷料覆盖猪皮肤缺损创面,观察创面面积、愈合时间、炎性反应及肉芽生长等组织学改变。结果:乳猪皮生物敷料较对照组凡士林纱布能加速创面愈合(P<0.... 目的:探讨乳猪皮生物敷料促进创面愈合的机理。方法:用凡士林纱布做对照,将乳猪皮生物敷料覆盖猪皮肤缺损创面,观察创面面积、愈合时间、炎性反应及肉芽生长等组织学改变。结果:乳猪皮生物敷料较对照组凡士林纱布能加速创面愈合(P<0.01),减少炎性细胞浸润和肉芽生长。结论:乳猪皮生物敷料促进创面愈合并提高愈合的质量,并可在常温下较长时间保存,是创面修复的一种较理想的生物敷料。 展开更多
关键词 乳猪皮 生物敷料 创面愈合 凡士林纱布 皮肤缺损 皮肤移植
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