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板栗铁型超氧化物歧化酶基因(CmFeSOD)的克隆及原核表达 被引量：5
1
作者 韩珊 刘裕峰 +6 位作者 朱天辉 刘应高 谯天敏 李姝江 汪煜伶 徐缨络 莫义英 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期935-944,共10页
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)是逆境条件下清除细胞内活性氧的关键酶,而铁型超氧化物歧化酶(FeSOD)作为该酶系中的关键酶之一,与植物的抗病性关系密切。根据板栗(Castanea mollissimaBl)转录组数据中分析得到FeSOD基因EST... 超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)是逆境条件下清除细胞内活性氧的关键酶,而铁型超氧化物歧化酶(FeSOD)作为该酶系中的关键酶之一,与植物的抗病性关系密切。根据板栗(Castanea mollissimaBl)转录组数据中分析得到FeSOD基因EST序列设计PCR扩增引物,以板栗幼叶的cDNA为模板,采用RT-PCR技术克隆获得CmFeSOD基因cDNA序列,通过生物信息学方法分析该基因的cDNA序列,并推定其氨基酸序列,同时将该基因片段连接到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行不同条件的诱导表达。结果表明,板栗CmFeSOD基因开放阅读框(ORF)大小为705bp,共编码234个氨基酸,推测其蛋白分子质量为26.0165ku,理论等电点(pI)为6.86,具有FeSOD家族的特征基序和保守结构域,GenBank登录号为KY312852。遗传进化分析表明,板栗CmFeSOD与核桃的亲缘关系最近。SDS-PAGE电泳分析表明,通过原核表达获得CmFeSOD蛋白的分子质量约为29ku,CmFeSOD蛋白在30℃,添加0.4mmol/LIPTG,诱导6h表达量最高,主要以包涵体的形式存在。 展开更多
关键词 板栗 超氧化物歧化酶 基因克隆 原核表达
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