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海州香薷Actin基因片段克隆及表达分析 被引量：5
1
作者 蔡深文 熊治廷 +2 位作者 刘晨 徐仲瑞 邓松强 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期111-115,共5页
通过克隆海州香薷Actin基因片段并分析其组织表达,为研究海州香薷重金属抗性相关基因的表达调控奠定基础。根据Gen Bank中其他植物Actin基因保守序列设计兼并引物,以海州香薷根总RNA为模板,利用RT-PCR技术分离得到Actin基因片段。序列... 通过克隆海州香薷Actin基因片段并分析其组织表达,为研究海州香薷重金属抗性相关基因的表达调控奠定基础。根据Gen Bank中其他植物Actin基因保守序列设计兼并引物,以海州香薷根总RNA为模板,利用RT-PCR技术分离得到Actin基因片段。序列分析结果表明,海州香薷Actin基因片段长576 bp,编码192个氨基酸,与其他植物同源基因的氨基酸序列相似性为84%-97%,所克隆的序列为Actin基因的同源片段,将其命名为Eh ACT,在Gen Bank中提交序列,获得登录号AGT37260。半定量RT-PCR分析结果表明,Eh ACT在海州香薷的根、茎和叶中表达相对稳定,初步表明其可作为研究海州香薷基因表达的内参基因。 展开更多
关键词 海州香薷 ACTIN基因 克隆 表达
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有色金属矿区植物根际耐镉菌的分离鉴定与镉吸附特性 被引量：5
2
作者 汪婵娟 熊治廷 +1 位作者 徐仲瑞 刘荣相 《生态与农村环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期448-455,共8页
从湖南宝山有色金属矿区采集4种优势植物及根部土壤,经鉴定分别为瞿麦(Dianthus superbus)、兰香草(Caryopteris incana var.incana)、野菊(Dendranthema indicum)和败酱(Patrinia villosa)。测定植株和根部土壤的重金属含量,发现野菊... 从湖南宝山有色金属矿区采集4种优势植物及根部土壤,经鉴定分别为瞿麦(Dianthus superbus)、兰香草(Caryopteris incana var.incana)、野菊(Dendranthema indicum)和败酱(Patrinia villosa)。测定植株和根部土壤的重金属含量,发现野菊、瞿麦从土壤吸收转运镉的能力比兰香草、败酱强,可作为人工生态修复系统的优势物种。从植物根际土壤中分离得到3株耐镉菌(BS1、BS2、BS3),结合形态学、RDP-Ⅱ数据库和16S rDNA基因序列分析,3者分别属于Sphingomonas echinoides、Massilia flava和阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai),对Cd^(2+)的最低抑菌质量浓度分别为300、100和80 mg·L^(-1)。吸附性能试验结果表明,在镉初始质量浓度为50 mg·L^(-1)条件下,3种菌株吸附Cd^(2+)的最适温度为30℃,且随着吸附时间的延长,吸附率总体呈上升趋势,在30～36 h时吸附达到饱和。菌株BS2对镉的吸附效果最显著,在pH值为5.5和6.5时,最大吸附率可达57.32%和54.15%;菌株BS1的最大吸附率为18.83%～29.14%。BS3仅在pH值为6.5时有明显吸附,最大吸附率为40.66%。 展开更多
关键词 有色金属矿区 镉 根际细菌 吸附
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铜胁迫对不同抗性种群海州香薷酸性转化酶基因启动子甲基化的影响 被引量：4
3
作者 何宇宁 徐仲瑞 熊治廷 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期574-582,共9页
采用亚硫酸氢盐测序技术,检测了Cu胁迫对海州香薷(Elsholtzia haichowensis Sun)Cu抗性和非抗性种群酸性转化酶基因启动子甲基化的影响。结果表明,海州香薷液泡转化酶基因(v INV)和细胞壁转化酶基因(cw INV)的启动子在CG位点分别表现出... 采用亚硫酸氢盐测序技术,检测了Cu胁迫对海州香薷(Elsholtzia haichowensis Sun)Cu抗性和非抗性种群酸性转化酶基因启动子甲基化的影响。结果表明,海州香薷液泡转化酶基因(v INV)和细胞壁转化酶基因(cw INV)的启动子在CG位点分别表现出超甲基化和低甲基化的现象。酸性转化酶基因启动子CHG和CHH位点的甲基化状态受Cu胁迫影响较大。Cu胁迫下,v INV和cw INV启动子分别有1个CHG和6个CHH位点的甲基化状态在Cu抗性种群和非抗性种群之间表现出较大差异。抗Cu种群中这些甲基化差异位点对Cu胁迫不敏感,但在非抗性种群中这些位点的甲基化水平在Cu胁迫后出现大幅上升或下降。有些甲基化差异位点位于或者临近预测的启动子顺式作用元件区域,可能参与Cu胁迫下酸性转化酶基因的表达调控。 展开更多
关键词 酸性转化酶 启动子 DNA甲基化 CU胁迫 海州香薷
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海州香薷(Elsholtzia haichowensis Sun)细胞壁转化酶基因启动子(EhcwINVP)的克隆及活性分析 被引量：3
4
作者 赵静 蔡深文 +1 位作者 徐仲瑞 熊治廷 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期420-429,共10页
以海州香薷基因组DNA为模板,通过hiTAIL-PCR和walking技术扩增得到其细胞壁转化酶基因启动子(Ehcw INVP)片段,长度为1727 bp。生物信息学分析结果表明,该启动子片段中含有多个对脱落酸、赤霉素、细胞分裂素等激素以及对干旱、低温、重... 以海州香薷基因组DNA为模板,通过hiTAIL-PCR和walking技术扩增得到其细胞壁转化酶基因启动子(Ehcw INVP)片段,长度为1727 bp。生物信息学分析结果表明,该启动子片段中含有多个对脱落酸、赤霉素、细胞分裂素等激素以及对干旱、低温、重金属铜等逆境胁迫响应相关的顺式作用元件。将通过克隆得到的Ehcw INVP序列替换p CAMBIA1301载体上驱动GUS报告基因表达的Ca MV35S启动子序列,构建Ehcw INVP融合GUS的植物表达载体Ehcw INVP::GUS。转基因拟南芥植株的组织化学分析结果表明,海州香薷细胞壁转化酶基因启动子序列具有驱动GUS基因表达的功能,且在10μmol/L铜胁迫下,转基因拟南芥植株叶和根中的GUS活性分别约是对照组的1.7倍和1.5倍。 展开更多
关键词 海州香薷 细胞壁转化酶 启动子 顺式作用元件
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海州香薷不同抗性种群液泡转化酶基因EhvINV序列趋异及表达差异分析 被引量：1
5
作者 蔡深文 徐仲瑞 +2 位作者 熊治廷 王加真 陈瑶 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期170-179,共10页
根据GenBank中海州香薷(Elsholtzia haichowensis)液泡转化酶基因EhNvINV(JX500755)和EhCvINV(JX500756)的序列设计特异性引物,克隆cDNA全长序列,并通过生物信息学分析基因及推导的蛋白序列,利用SWISS-MODEL进行同源建模,并与蔗糖分子... 根据GenBank中海州香薷(Elsholtzia haichowensis)液泡转化酶基因EhNvINV(JX500755)和EhCvINV(JX500756)的序列设计特异性引物,克隆cDNA全长序列,并通过生物信息学分析基因及推导的蛋白序列,利用SWISS-MODEL进行同源建模,并与蔗糖分子进行模拟对接,实时荧光定量PCR分析EhNvINV和EhCvINV在铜胁迫下的转录表达。结果表明,海州香薷非抗性和抗性种群液泡转化酶蛋白EhNvINV和EhCvINV在114和346处存在氨基酸趋异位点,模拟3D结构相似,仅在趋异位点Glu114/Gln114和Leu346/Pro346处有差别。EhNvINV、EhCvINV和模拟突变体(EhNvINV-E114Q和EhNvINV-L346P)与蔗糖分子对接形成的活性中心构象基本一致,但在空间位置上存在细微差异。实时荧光定量PCR结果表明铜胁迫7 d后,EhCvINV的表达受铜的诱导,而EhNvINV受铜的抑制。 展开更多
关键词 海州香薷 液泡转化酶 铜胁迫 转录表达
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海州香薷不同种群细胞壁转化酶蛋白结构与分子模拟对接
6
作者 蔡深文 徐仲瑞 熊治廷 《湖北农业科学》 2017年第1期166-170,共5页
为研究铜胁迫下海州香薷(Elsholtzia haichowensis Sun)非矿区种群细胞壁转化酶(Eh Ncw INV)和矿区种群细胞壁转化酶(Eh Ccw INV)活性差异的机理,运用在线分析工具对细胞壁转化酶基因推导的氨基酸序列进行分析,利用SWISS-MODEL进行同源... 为研究铜胁迫下海州香薷(Elsholtzia haichowensis Sun)非矿区种群细胞壁转化酶(Eh Ncw INV)和矿区种群细胞壁转化酶(Eh Ccw INV)活性差异的机理,运用在线分析工具对细胞壁转化酶基因推导的氨基酸序列进行分析,利用SWISS-MODEL进行同源建模,并将细胞壁转化酶与蔗糖分子进行模拟对接。结果表明,海州香薷两个种群细胞壁转化酶蛋白质在443位点和538位点处存在氨基酸趋异位点,模拟的3D结构非常相似,仅在趋异位点Leu433/Pro433和Tyr538/His538处有差别。Eh Ncw INV、Eh Ccw INV和模拟突变体(Eh Ncw INV-L433P和Eh Ncw INV-Y538H)与蔗糖分子对接形成的催化活性中心构象基本一致,但在空间位置上存在细微差异,氨基酸趋异可能是造成两个种群细胞壁转化酶活性差异的原因之一。 展开更多
关键词 海州香薷(Elsholtzia haichowensis Sun) 细胞壁转化酶 同源建模 分子对接
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