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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其分子流行病学分析 被引量：387
1
作者 童光志 周艳君 +4 位作者 郝晓芳 田志军 仇华吉 彭金美 安同庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期323-327,共5页
为了弄清2006年在我国南方一些猪场暴发的一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病的病因,我们从12个省市48个发病猪场采集临床样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的... 为了弄清2006年在我国南方一些猪场暴发的一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病的病因,我们从12个省市48个发病猪场采集临床样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分离鉴定和分子流行病学分析。结果显示从48个猪场样品中均检测出了PRRSV,通过完整的ORF5和部分Nsp2基因序列比较分析发现来自12个省市不同猪场的PRRSV高度同源,而且在Nsp2基因上都有两个相同位点的缺失;从分离的15株PRRSV中选择湖南分离株HuN4人工感染5头60日龄的健康猪,结果5头猪分别在7 d～21 d内全部死亡,感染猪的临床症状和现地所见十分相似。本次试验结果表明新出现的以Nsp2基因部分缺失为特征的PRRSV对猪是高致病性的,可能是2006年大部分猪场暴发"高热综合症"的主要病因。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 高热综合症 分子流行病学
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猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析 被引量：193
2
作者 彭金美 安同庆 +7 位作者 赵鸿远 刘益民 陈家锃 冷超粮 孙艳 常丹 田志军 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-4,共4页
2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分... 2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分析表明,从5个省14个猪场的病料中扩增的gE基因高度同源,与以往发表的相关序列比对显示,这些分离株均属于一个相对独立的分支。病料接种Vero细胞能够产生典型的细胞病变,将命名为PRV HeN1分离株接种小鼠能够引起瘙痒、死亡等伪狂犬病症状,并且对小鼠的LD50(102.37TCID50)显著低于经典强毒PRV双城株(103.83TCID50)。此外,中和试验结果显示,PRV Bartha k61活疫苗免疫猪仅能诱导对HeN1分离株低水平的中和抗体,而HeN1分离株能够诱导较高水平的中和抗体,并具有更强的交叉中和能力。根据本实验结果推测,近期各猪场流行的PRV可能存在一定的抗原变异。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 鉴定 抗原差异
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猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征 被引量：88
3
作者 赵鸿远 彭金美 +9 位作者 安同庆 李琳 冷超粮 陈家锃 王倩 常丹 张秋月 蔡雪辉 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期506-509,共4页
2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d... 2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d内全部死亡,均出现典型的PR症状及组织病理学变化。将PRV-JL1及PRV-HLJ1与近3年来本实验室分离鉴定的及GenBank中登录的来源于国内10多个省份的32个PRV株和17个经典PRV株的gE核苷酸序列进行比对分析,结果表明:近3年分离的PRVs与本实验室之前分离的变异株PRV-HeN1的同源性在97.1%~99.5%,而与经典株PRV双城株(PRV-S)的同源性在96.6%~99.1%。以gE氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3年分离的PRVs形成一个相对独立于经典株的新分支。以上结果表明变异株已成为我国主要流行的病毒株,而且变异株均在gE蛋白的第48位和第492位各存在1个天冬氨酸的插入。该插入突变可以作为鉴定PRV变异株的分子特征,其生物学意义有待于进一步研究。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 变异 鉴定 gE 分子特征
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立 被引量：62
4
作者 郝晓芳 周艳君 +5 位作者 田志军 韦天超 安同庆 彭金美 华荣虹 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期704-709,共6页
2006年5月以来,我国部分猪场暴发了一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的、对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory ... 2006年5月以来,我国部分猪场暴发了一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的、对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定的PRRSV的nsp2基因序列,在nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物,建立了一种PRRSV的RT-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组时可获得230bp的片段,扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段,根据RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测,并配合PCR产物测序验证,结果表明该方法简便、快速、特异,可以鉴别高致病性PRRSV,为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因缺失 RT-PCR 鉴别诊断
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2014年~2019年PRRSV主要流行毒株在我国的变化 被引量：42
5
作者 张洪亮 张文立 +14 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 相丽润 冷超粮 李真 刘春晓 汤艳东 陈家锃 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期512-516,共5页
为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株n... 为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株nsp2基因和122株全基因组序列。遗传演化分析显示,2014年~2019年共检测到6种基因亚型的PRRSV,分别是I型PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like PRRSV、NADC34-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV和RespPRRS MLV-like PRRSV。经统计分析显示,2016年以前除检测到1株NADC30-like PRRSV外,其余全部是HP-PRRSV;2016年后HP-PRRSV检出比率逐渐降低,NADC30-like PRRSV检出比率逐渐升高,且2016年后已超过HP-PRRSV,成为我国主要的流行株。QYYZ-like PRRSV的检出数量增多,其广泛流行于我国的华南地区。其它类型的PRRSV检出比率较低,呈现散发或局部流行。此外,近年来,PRRSV的细胞嗜性已经发生明显变化,绝大多数的病毒株无法在体外分离培养。因此,我国养殖企业针对PRRSV流行株的变化应及时调整防控策略,同时加大对PRRSV生物学特性变化机制的研究。本研究对了解我国PRRSV的流行状况及防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 PRRSV NADC30-like PRRSV 主要流行毒株 细胞嗜性
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抗禽流感病毒多表位DNA疫苗的构建及其免疫效力研究 被引量：23
6
作者 彭金美 童光志 +1 位作者 王云峰 仇华吉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期623-627,共5页
多表位DNA疫苗是建立在常规DNA疫苗基础上的一种新型疫苗。它是用表位作免疫原 ,这样就比较容易在一个表达载体上克隆病原体的多个抗原基因中具有免疫活性的部分。本试验以H5N1亚型禽流感病毒的HA和NP基因及其表位为基础构建了 4个重组... 多表位DNA疫苗是建立在常规DNA疫苗基础上的一种新型疫苗。它是用表位作免疫原 ,这样就比较容易在一个表达载体上克隆病原体的多个抗原基因中具有免疫活性的部分。本试验以H5N1亚型禽流感病毒的HA和NP基因及其表位为基础构建了 4个重组质粒 :1 pIRES HA(表达全长的HA基因 ) ;2 pIRES tHA(只表达HA基因的主要抗原表位区 ) ;3 pIRES tHA NPep(融合表达HA基因的抗原表位区和NP基因的 3个CTL表位 ) ;4 pIRES tHA NPep IFN γ(用鸡的IFN γ基因取代质粒pIRES tHA NPep中的neo基因 )。分别用这 4个重组质粒和空载体质粒pIRES1neo肌注免疫 30日龄SPF鸡。免疫 3次 ,间隔为 2周 ,每次每只鸡的剂量为 2 0 0 μg。第 3次免疫后两周以高致病性禽流感病毒H5N1强毒攻击 ,免疫及攻毒前后均采血检测HI抗体效价和外周血CD4 + 、CD8+ T细胞的变化。结果发现 ,攻毒前各质粒免疫组均检测不到HI抗体 ,攻毒后 1周存活鸡HI抗体效价迅速升高到 6 4～ 2 5 6。流式细胞仪检测显示外周血CD4 + 、CD8+ T细胞在疫苗免疫后都有不同程度的升高。空载体质粒对照组鸡 (10只 )在攻毒后 3～ 8d内全部死亡 ,其他各重组质粒免疫组鸡都获得了部分保护 ,保护率分别是 :pIRES HA组为 5 4 5 % (6 11) ,pIRES tHA组为 30 % (3 10 ) ,pIRES 展开更多
关键词 禽流感病毒 多表位 DNA疫苗 免疫效力
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猪繁殖与呼吸综合征病毒Taq Man-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用 被引量：29
7
作者 韦天超 田志军 +8 位作者 安同庆 周艳君 肖燕 姜一峰 郝晓芳 张善瑞 彭金美 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期944-948,991,共6页
本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL～107拷贝/μL模板范围内具有良好的线... 本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL～107拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,比常规RT-PCR更敏感,可分别检测? 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 荧光定量RT-PCR 病毒含量
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检测猪细小病毒血清抗体乳胶凝集试验方法的建立及初步应用 被引量：22
8
作者 何启盖 陈焕春 +4 位作者 吴斌 邱德新 刘恒贵 彭金美 徐引娣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第6期457-459,共3页
将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖，待出现细胞病变后，反复冻融，收获病毒液，用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定，选择致敏乳胶的最佳条件，制成细小病毒乳胶凝集试验（LAT）抗原。抗原与... 将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖，待出现细胞病变后，反复冻融，收获病毒液，用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定，选择致敏乳胶的最佳条件，制成细小病毒乳胶凝集试验（LAT）抗原。抗原与细小病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒，而与生理盐水、PBS、犊牛血清、猪瘟、衣原体、口蹄疫、伪狂犬病、弓形体及萎缩性鼻炎等阳性血清不出现凝集现象。用所建立的细小病毒乳胶凝集试验（LAT）与血凝抑制试验检测了203份猪血清，其中血凝抑制抗体阳性为161份，阴性为42份，阳性率为79.31％;乳胶凝集抗体阳性为150份，阴性为53份，阳性率为73.89％，两种方法阳性符合率为93.16％，经统计学检验P＞0.05，两者差异不显著。结果表明，乳胶凝集试验可以作为临床上大量血样进行血凝抑制试验前的初筛，具有简便、准确的优点，在检测细小病毒（PPV）抗体上具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 猪 细小病毒 抗体检测 乳胶凝集试验
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2016年我国部分地区类NADC30新亚群猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析 被引量：32
9
作者 张洪亮 张晶 +12 位作者 李真 张文立 刘春晓 陈家锃 相丽润 冷超粮 彭金美 王倩 白云 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期675-680,共6页
为了解类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在我国新的流行特点，本研究根据GenBank中美国2012年提交的PRRSV NADC30株全基因组序列设计合成8对引物，通过RT-PCR的方法对本实验室2016年从4个省搜集的临床样品中检测到的15株类NADC3... 为了解类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在我国新的流行特点，本研究根据GenBank中美国2012年提交的PRRSV NADC30株全基因组序列设计合成8对引物，通过RT-PCR的方法对本实验室2016年从4个省搜集的临床样品中检测到的15株类NADC30 PRRSVs株进行了全基因组测序，并且结合参考株进行了序列分析。NSP2推导氨基酸的序列比对表明，15株PRRSVs均具有aa323～aa433＋aa484＋aa505～aa523 （111＋1＋19） 131个氨基酸缺失的分子特征；经RDP4和Simplot生物学软件分析表明，15株PRRSVs中14株为重组病毒株，参与重组的亲本病毒株为PRRSV NADC30株，提供重组基因片段的病毒株为HP-PRRSV或以VR2332为代表的经典PRRSV株，这些类NADC30重组病毒株的重组位置、重组的基因片段及重组片段长度均具有多样性，而且重组的位置多位于编码非结构蛋白或次要结构蛋白的基因区域；全基因组遗传演化分析表明，这些病毒株远离国内之前流行的HP-PRRSV，同源性仅为83.4 %～87.2 %，而与其它的类NADC30病毒株位于一个相对独立的分支，以上结果均表明这类病毒株已形成了一个新的亚群，命名为5亚群。本研究中不同地区PRRSV的核苷酸同源性差异较大，仅为88.6 %～99.6 %，并且只有2个病毒株可以感染PAM和MARC-145细胞。本研究表明，以基因缺失和基因重组多样性为主要特征的5亚群PRRSV已在我国流行，其生物学特性有待进一步研究。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30 缺失 重组 5亚群
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非洲猪瘟暴发前后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒的流行变化 被引量：17
10
作者 赵静 李超 +15 位作者 许浒 相丽润 汤艳东 孟凡丹 付军 龚帮俊 陈家锃 冷超粮 彭金美 王倩 周国辉 安同庆 童光志 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期349-356,共8页
为了研究非洲猪瘟(ASF)暴发后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行变化,本研究经PCR检测了2017年1月~2020年12月全国18个省、市和自治区1374份疑似PRRSV感染的病料样品,并对其中阳性病料样品的ORF5、nsp2基因测序并统计阳性样品的... 为了研究非洲猪瘟(ASF)暴发后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行变化,本研究经PCR检测了2017年1月~2020年12月全国18个省、市和自治区1374份疑似PRRSV感染的病料样品,并对其中阳性病料样品的ORF5、nsp2基因测序并统计阳性样品的检出率,分析不同地区在ASF暴发前后PRRSV阳性检出率的变化趋势;分别利用GraphPad Prism 8.0及ORF5基因的进化树分析ASF暴发前后我国各亚型PPRSV及各地区PPRSV的流行变化趋势;根据nsp2基因推导氨基酸序列分析其缺失特征。ORF5基因和nsp2基因测序及统计分析结果显示,共检出PRRSV阳性病料样品779份(779/1374),其中ASF暴发前397份,ASF暴发后382份。ASF暴发后(2019年~2020年)我国各地PRRSV阳性检出率均有上升,华北地区PRRSV阳性检出率由60.47%上升至66.33%;东北地区由52.76%上升至53.27%;华东地区由60.93%上升至62.59%;中南地区由53.43%上升至57.50%。ASF暴发前后我国各亚型及各地区PPRSV流行变化趋势统计分析结果显示,ASF暴发后,NADC30-like PRRSV作为主要流行株,其检出率显著增长,从47.36%上升至65.97%;NADC34-like PRRSV的检出率也明显增长,从1.76%上升至5.50%;但HP-PRRSV、VR2332-like PRRSV和QYYZ-like PRRSV的检出率明显降低,分别从34.01%降至20.68%、6.80%降至3.40%、7.30%降至0.52%。可见ASF暴发后,我国大部分地区(华北、东北、华东、中南)NADC30-like PRRSV的流行趋势有所上升,但HP-PRRSV的流行趋势明显下降,并且随着ASF的流行,除中南地区外,我国各地NADC34-like PRRSV检出率明显上升。ORF5基因的遗传演化分析结果显示,ASF暴发前(2017年~2018年)检测到6种基因亚型的PRRSV(NADC30-like PRRSV、HP-PRRSV、NADC34-like PRRSV、VR2332-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV、Type I PRRSV),而ASF暴发后还检测到CH-1a like PRRSV。Nsp2氨基酸缺失特征分析结果显示,ASF暴发前后我国各亚型PRRSV Nsp2氨基酸序列特征均未发生变化。以上结果表明,ASF疫情的暴 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非洲猪瘟 主要流行株
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株主要囊膜糖蛋白GP5的遗传变异分析 被引量：14
11
作者 安同庆 田志军 +6 位作者 肖燕 姜一峰 韦天超 彭金美 周艳君 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期851-856,共6页
为了探究高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)的遗传变异特征,本研究对GenBank中235株HP-PRRSV GP5序列的遗传进化、主要氨基酸基序、抗原性以及N-糖基化位点数量和位置的变异进行了分析。结果表明HP-PRRSV之间的同源性较高,与其他参考毒株... 为了探究高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)的遗传变异特征,本研究对GenBank中235株HP-PRRSV GP5序列的遗传进化、主要氨基酸基序、抗原性以及N-糖基化位点数量和位置的变异进行了分析。结果表明HP-PRRSV之间的同源性较高,与其他参考毒株相比,这些病毒处于一个相对独立的分支中,而且与经典疫苗株的亲缘关系较远。这有助于解释经典疫苗株对于HP-PRRSV为何起不到理想的免疫保护效果。在病毒的中和表位序列中存在着规律的点突变,同时抗原性比较显示HP-PRRSV与经典毒株之间存在着一定的差异。绝大多数的HP-PRRSV的N-糖基化位点在数量上多一个,而且位置要向羧基端平移2个氨基酸,从而使得中和表位两侧直接与糖链相连,可能会造成中和表位被糖侧链所遮掩,本研究由此推测减弱中和抗体对HP-PRRSV的有效识别,促进病毒逃避机体体液免疫。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征 GP5 序列分析 遗传变异 糖基化
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猪IFN-γ mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：12
12
作者 韦天超 田志军 +5 位作者 周艳君 安同庆 肖燕 彭金美 姜一峰 童光志 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期168-172,共5页
为建立一种检测猪γ-干扰素（IFN-γ）的荧光定量RT—PCR方法，针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A（CyPA）的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针，以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18T-CyPA为标准品，进行实时荧光定... 为建立一种检测猪γ-干扰素（IFN-γ）的荧光定量RT—PCR方法，针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A（CyPA）的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针，以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18T-CyPA为标准品，进行实时荧光定量RT-PCR检测，并构建猪IFN-γ mRNA和CyPA的荧光定量RT—PCR标准曲线。结果表明，建立的方法在1×10^1～1×10^7copies／μL模板范围内具有良好的线性关系，相关系数产均高达0．999，扩增效率均高于99．0％；可检测至少为100 copies的阳性标准品。该方法具有快速、敏感性高、特异性强和重复性好等特点，可应用于临床样品的检测。 展开更多
关键词 猪 IFN-Γ 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针
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带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究 被引量：15
13
作者 彭金美 王瑜 +4 位作者 田志军 周艳君 陈瑾 安同庆 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期10-15,共6页
本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载... 本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BACII。将PRV基因组和转移载体共转染Vero细胞,利用同源重组在Bartha K61株的TK基因中插入了BAC质粒和绿色荧光蛋白筛选标记,经过11轮噬斑纯化和鉴定证实获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC。通过噬斑试验和一步生长曲线测定等方法对重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC的生长特性进行研究,结果发现带有BAC质粒及筛选标记的重组病毒rv-PRVBAC在体外细胞培养中的增殖速度与亲本毒Bartha K61株相比没有明显差别,说明大的基因片段的插入没有影响重组病毒在体外的繁殖速度。重组病毒rv-PRVBAC在Vero细胞上盲传18代,其绿色荧光蛋白仍能够稳定表达,通过PCR鉴定可以检测到插入的外源片段和插入位点两侧的病毒基因序列,表明所获得的重组病毒rv-PRVBAC得到了稳定遗传。本研究成功获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC,为进一步开展PRV的细菌人工染色体的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 Bartha K61株 BAC 重组病毒
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白B表位诱导中和抗体能力的研究 被引量：13
14
作者 冷超粮 安同庆 +9 位作者 陈家锃 宫大庆 李登云 杨永倩 彭金美 张祎 郭娟娟 吴江 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期297-300,共4页
为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-1a株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清。此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的... 为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-1a株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清。此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的健康仔猪以HP-PRRSV HuN4疫苗毒株(HuN4-F112)进行基础免疫,然后用强毒株(HuN4-F5)进行多次接种,制备猪高免血清。间接免疫荧光检测(IFA)结果显示,两份多肽抗血清均能与PRRSV经典株和变异株发生特异性反应,IFA抗体效价无差异,表明两份血清没有显著差异。病毒中和试验结果表明,两份多肽抗血清均不具有中和PRRSV活性。间接ELISA和病毒中和试验结果表明,猪高免血清中针对B表位肽的ELISA抗体水平与血清抗PRRSV中和抗体之间没有正相关关系,而且B表位肽不能抑制中和抗体。以上结果表明HP-PRRSV B表位不能诱导产生中和抗体。 展开更多
关键词 HP-PRRSV GP5 B表位 中和抗体
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我国高致病性猪蓝耳病病毒的演化分析 被引量：12
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作者 安同庆 田志军 +5 位作者 李冉 彭金美 周艳君 华育平 刘娣 童光志 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第4期3-6,共4页
自2006年以来,我国大面积暴发高致病性猪蓝耳病,但目前对其病原HP-PRRSV的起源还不得而知。本试验通过对多株HP-PRRSV进行全长基因组分析,发现HP-PRRSV中存在4处缺失,而且这4处缺失是逐步形成的,在中间过渡类型的毒株中存在着缺失1处、... 自2006年以来,我国大面积暴发高致病性猪蓝耳病,但目前对其病原HP-PRRSV的起源还不得而知。本试验通过对多株HP-PRRSV进行全长基因组分析,发现HP-PRRSV中存在4处缺失,而且这4处缺失是逐步形成的,在中间过渡类型的毒株中存在着缺失1处、2处、3处的毒株。此外,中间过渡类型毒株中的一些氨基酸基序也是逐步变化的。本试验初步阐明了我国HP-PRRSV的起源是CH-1a-like PRRSV,在中间过渡的毒株中能够发现逐步演变的轨迹。 展开更多
关键词 高致病性猪蓝耳病病毒 基因组序列分析 进化
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2016年我国3株欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其全基因组特征分析 被引量：12
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作者 张洪亮 张晶 +13 位作者 张文立 相丽润 宋帅杰 刘春晓 李真 彭金美 陈家锃 冷超粮 王倩 白云 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期513-517,共5页
2016年,本实验室共检测到3株基因1型(欧洲型)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为ZD1株、WK14株和WG9株,本研究对3株PRRSV进行了全基因组序列分析。遗传演化分析显示,3株PRRSV均属于基因1型I亚型,与基因1型代表株LV的核苷酸同源性... 2016年,本实验室共检测到3株基因1型(欧洲型)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为ZD1株、WK14株和WG9株,本研究对3株PRRSV进行了全基因组序列分析。遗传演化分析显示,3株PRRSV均属于基因1型I亚型,与基因1型代表株LV的核苷酸同源性为88.7%~88.9%,与基因2型代表株VR2332的核苷酸同源性为60.7%~60.8%。ORF3与ORF4推导氨基酸序列比对结果显示,ZD1株的ORF3提前26个氨基酸(aa)终止,这是首次报道基因1型PRRSV编码的结构蛋白存在提前终止现象,WK14株与WG9株在ORF3的245位存在1个氨基酸的缺失;3株PRRSV在ORF4的66位皆存在1个氨基酸的缺失。Simplot生物学重组软件分析表明,WK14株为重组病毒,供体病毒株为BJEU06-1,提供重组片段的病毒株为NVDC-FJ,重组位置位于第931~3 379位碱基处。ZD1株和WG9株未发现重组现象。本研究发现我国欧洲型PRRSV基因组在缺失、重组等方面正发生一些新的变化,有必要对该类病毒进行持续监测和深入研究。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因1型 缺失 重组
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中国与美国RFLP 1-4-4 lineage1C变异株同一分支PRRSV的全基因组序列分析 被引量：11
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作者 许浒 李超 +13 位作者 相丽润 汤艳东 赵静 龚帮俊 李宛生 付军 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期202-207,共6页
2020年美国报道了高致病性的RFLP 1-4-4 lineage 1C PRRSV变异株,其对猪的致死率达到17.5%。为了分析美国1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国当前流行的PRRSV的关系,本研究对中国不同基因亚型的PRRSV与美国新发1-4-4 lineage1C PRRSV变... 2020年美国报道了高致病性的RFLP 1-4-4 lineage 1C PRRSV变异株,其对猪的致死率达到17.5%。为了分析美国1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国当前流行的PRRSV的关系,本研究对中国不同基因亚型的PRRSV与美国新发1-4-4 lineage1C PRRSV变异株进行遗传演化分析,结果显示,中国类NADC34 PRRSV与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株关系密切;其Nsp2推导氨基酸序列比对结果显示,中国类NADC34 PRRSV与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株在Nsp2区域存在相同的分子特征,即100个氨基酸(aa328~aa427)的连续缺失。PRRSV基因重组分析结果显示,美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株是以类NADC34 IA14737-2016株为母本毒株,并由IA/2014/NADC34和NADC30病毒株提供重组基因片段的重组病毒,而中国早期的类NADC34 PRRSV是以IA/2014/NADC34株为母本毒株的重组病毒。美国早期的类NADC34 PRRSV对仔猪的致病力差异较大,而中国早期的类NADC34 PRRSV对仔猪多为中、低致病力。此外,中国HLJZD22-1812株与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株具有类似的重组模式、相同的Nsp2缺失特征、相同的1-4-4 ORF5限制性片段长度多态性(RFLP)模式,且均属于lineage1C分支。本研究结果首次表明美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国类NADC34(PRRSV)属于同一亚型分支,且具有一致的分子特征,提示类NADC34 PRRSV在我国的流行及演化情况需高度关注。 展开更多
关键词 1-4-4 PRRSV变异株 类NADC34 PRRSV 100个氨基酸缺失 重组病毒
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猪伪狂犬病病毒HeN1株全基因组测序及感染和毒力相关基因的变异特征分析 被引量：12
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作者 叶超 赵款 +8 位作者 郭金潮 姜成刚 常晓博 王淑杰 王同云 彭金美 蔡雪辉 田志军 安同庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期581-584,共4页
2011年以来我国多个省份免疫过Bartha-K61弱毒疫苗的猪场相继发生猪伪狂犬病（PRl疫情。为分析PR病毒（PRV）流行株的变异情况，本研究对其中一株PRVHeNl分离株进行了全基因组测序，并对PRV感染相关基因（gB、gC、gD和gH）和毒力相关基... 2011年以来我国多个省份免疫过Bartha-K61弱毒疫苗的猪场相继发生猪伪狂犬病（PRl疫情。为分析PR病毒（PRV）流行株的变异情况，本研究对其中一株PRVHeNl分离株进行了全基因组测序，并对PRV感染相关基因（gB、gC、gD和gH）和毒力相关基因（TK、PK、RR1、RR2、gE和gI）进行比较分析。结果显示，国内分离株之间的序列同源性很高（96．2％～100％），而与国外分离株的同源性较低（92．9％～99．7％）；国内分离株与国外分离株在感染和毒力相关基因编码上存在氨基酸突变和插入／缺失特征；并且序列分析表明部分插入／缺失与微卫星序列重复单元数量的变化相关。遗传进化分析表明，国内外分离株间具有显著的遗传差异，处于两个独立的遗传分支。此外，国内分离株相对于国外分离株在gC蛋白中存在7个连续氨基酸的插入（63AAASTPA69），该插入突变可以作为PRV国内外病毒株的分子特征。本研究为有效防制PR提供实验依据。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 全基因组测序 感染和毒力基因 变异
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2016~2021年我国猪伪狂犬病病毒的分子流行病学调查与分析 被引量：8
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作者 郭镇洋 赵静 +17 位作者 付军 许浒 李超 李宛生 孙琪 裴艳艳 龚帮俊 王倩 周国辉 汤艳东 冷超粮 王永杰 陈长青 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 彭金美 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期122-128,155,共8页
为探究近几年猪伪狂犬病病毒(PRV)在我国的流行情况及遗传演化特征,本研究对2016年~2021年采自全国17个省、市和自治区的2299份临床样品经PCR检测,并利用PCR扩增阳性样品中的PRV gB、gE和gC基因并测序,采用MegAlign分析三者与GenBank登... 为探究近几年猪伪狂犬病病毒(PRV)在我国的流行情况及遗传演化特征,本研究对2016年~2021年采自全国17个省、市和自治区的2299份临床样品经PCR检测,并利用PCR扩增阳性样品中的PRV gB、gE和gC基因并测序,采用MegAlign分析三者与GenBank登录的PRV参考株相应基因序列的同源性;利用MEGA 7.0分别构建上述3个基因的遗传进化树,并采用MegAlign分析gB、gE和gC蛋白氨基酸序列的差异,分析其遗传演化及分子特征的变化。结果显示,共扩增出24份PRV阳性样品,阳性率约1.04%,且不同年份及不同地区均有PRV的检出。PRV gB、gE和gC基因序列的同源性及遗传进化分析结果显示,3个基因及其编码氨基酸序列均与2011年以来的PRV变异株同源性最高,且均属于基因Ⅱ型PRV变异株;氨基酸序列比对结果显示,与基因Ⅰ型PRV相比,所测PRV gB、gE和gC中均存在特征性氨基酸突变位点:gB氨基酸序列aa75~aa77连续缺失3个氨基酸(SPG),aa93~aa94连续插入2个氨基酸(DG);gE氨基酸序列在aa48和aa496各插入1个氨基酸(D);gC氨基酸序列在aa63~aa69连续插入7个氨基酸AAASTPA。此外,本研究通过比对国内外经典株以及2011年以来国内PRV gE蛋白的氨基酸序列,确定了不同亚型PRV(即指基因Ⅱ型PRV变异株和经典株)的分子特征即基因Ⅱ型PRV变异株:gE aa496为“D+”或aa496为“D-”+aa448“I”;基因Ⅱ型PRV经典株:gE为aa496“D-”+aa448“V/A”。上述结果表明,我国现阶段仍以基因Ⅱ型PRV变异株的流行为主,进一步明确了不同基因型和亚型PRV的分子特征,对了解我国PRV的流行现状及当前流行株的分子特征具有重要意义,为PRV诊断试剂的研发及PR的防控提供了参考。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 变异株 遗传演化 分子特征
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2015年我国部分地区2.1d新基因亚型猪瘟病毒的分子流行病学分析 被引量：10
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作者 冯丽苹 张洪亮 +11 位作者 刘春晓 冷超粮 陈家锃 李真 彭金美 王倩 白云 张武超 安同庆 蔡雪辉 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期651-655,共5页
为了解猪瘟病毒（CSFV）在我国的流行情况，本研究对2015上半年来自4个省疑似猪瘟（csF）病料样品采用RT．PCR方法进行检测，28份样品中14份为CSFV阳性，并对这些阳性样品进行CSFVE2基因遗传进化分析。结果表明，14个病毒株中11个属于2... 为了解猪瘟病毒（CSFV）在我国的流行情况，本研究对2015上半年来自4个省疑似猪瘟（csF）病料样品采用RT．PCR方法进行检测，28份样品中14份为CSFV阳性，并对这些阳性样品进行CSFVE2基因遗传进化分析。结果表明，14个病毒株中11个属于2．1d新基因亚型，它们与CSFV代表株Shimen、HCLV和2．1b基因亚型病毒株的核苷酸同源性分别为82．8％～84．1％、81．1％～82．4％和92．6％～97．1％，氨基酸同源性分别为89．8％～91．2％、88．2％～89．8％和94．1％～98．9％，其余3个病毒株属于2．1b亚型。这些2．1d亚型新分离株在E2基因的4个氨基酸（R31、S34、K303和A331）上具有相同的分子特征。本研究结果与我们2014年CSFV流行病学研究结果一致，表明2．1d亚型病毒株已成为我国现阶段CSFV的主要流行株。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 新基因亚型 流行病学
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