从半合成噬菌体抗体库筛选抗狂犬病毒人单链抗体 被引量：4

1

作者 闭兰 张爱华 +3 位作者 彭祥兵 王志友 张智 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期65-67,共3页

目的　应用纯化的狂犬病毒抗原从半合成噬菌体抗体库中筛选针对狂犬病毒的人单链抗体(ScFv)。方法　用固相化的狂犬病毒抗原对半合成抗体库进行 3轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选 ,从第 3轮洗脱下来的克隆中获得一株有可溶性表达且特异性... 目的　应用纯化的狂犬病毒抗原从半合成噬菌体抗体库中筛选针对狂犬病毒的人单链抗体(ScFv)。方法　用固相化的狂犬病毒抗原对半合成抗体库进行 3轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选 ,从第 3轮洗脱下来的克隆中获得一株有可溶性表达且特异性结合狂犬病毒抗原的ScFv ,并进行基因序列测定。结果　所获氨基酸序列经blast数据库搜索 ,与一种抗狂犬病毒免疫球蛋白的氨基酸序列同源性最高 ( 82 % )。经检索kabat数据库 ,发现其轻、重链可变区分别属于VkⅠ型、VHⅢ型。结论　从噬菌体抗体库可以方便快捷地分离到针对狂犬病毒的单链抗体 。 展开更多

关键词 狂犬病毒 人单链抗体 噬菌体抗体库 预防 免疫球蛋白

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百日咳毒素单克隆抗体的制备及其ELISA定量检测方法的建立 被引量：3

2

作者 詹骞 刘志飞 +4 位作者 彭祥兵 宁浩然 陈雯 张爱华 杨晓明 《微生物学免疫学进展》 2013年第2期19-23,共5页

目的制备百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)的单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA用于检测PT的含量。方法采用杂交瘤技术制备PT的单抗,并对其进行鉴定;优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行精密性及准确性... 目的制备百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)的单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA用于检测PT的含量。方法采用杂交瘤技术制备PT的单抗,并对其进行鉴定;优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行精密性及准确性验证;应用建立的方法检测武汉生物制品研究所有限责任公司(简称武汉公司)73批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中的PT含量。结果获得4株稳定的抗PT杂交瘤细胞株,抗体亚型均为IgG2a,抗体腹水ELISA效价达1∶106以上,均能与PT发生特异反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉和破伤风类毒素未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA的线性检测范围在2.50～80.00 ng/mL之间,酶标板内和板间变异系数均小于10%;PT的高、中、低浓度的回收率分别为97.41%、106.60%和89.98%;73批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中的PT质量浓度在50.00～150.00 ng/mL之间波动,说明中间产物的批间一致性及稳定性趋势良好。结论已成功制备了抗PT的单抗,并建立了精密性和准确性均较好的定量检测PT的双抗体夹心ELISA,可用于无细胞百日咳疫苗生产中PT的定量检测。 展开更多

关键词 百日咳毒素 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验

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百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备及ELISA定量检测方法的建立 被引量：3

3

作者 彭祥兵 陈雯 +3 位作者 詹骞 项美娟 张爱华 杨晓明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期590-593,共4页

目的制备百日咳丝状血凝素(Filamentous hemagglutinin,FHA)单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA法用于检测FHA的含量。方法采用杂交瘤技术制备FHA单抗,并对其进行鉴定;优化ELISA系统反应条件,建立FHA双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其... 目的制备百日咳丝状血凝素(Filamentous hemagglutinin,FHA)单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA法用于检测FHA的含量。方法采用杂交瘤技术制备FHA单抗,并对其进行鉴定;优化ELISA系统反应条件,建立FHA双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行精密性及准确性验证;应用建立的方法检测本所12批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中FHA的含量。结果获得4株稳定分泌抗FHA单抗的杂交瘤细胞株,抗体亚型分别为IgG1和IgG2b,抗体腹水ELISA效价达1∶105～1∶106,均能与FHA发生特异性反应,而与百日咳毒素和流感病毒血凝素未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA法的线性检测范围在1.56～100.00 ng/ml之间,板内和板间变异系数均小于10%;FHA高、中、低浓度的回收率分别为94.73%、108.67%和116.37%;12批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中FHA的含量在X±2SD范围内比较稳定。结论已成功制备了抗FHA单抗,并建立了精密性和准确性均较好的定量检测FHA的双抗体夹心ELISA法,可用于无细胞百日咳疫苗生产中间产品中FHA的定量检测。 展开更多

关键词 无细胞百日咳疫苗 丝状血凝素 抗体 单克隆 酶联免疫吸附测定

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一种新型兽用破伤风类毒素抗原的免疫原性 被引量：3

4

作者 汪玉兰 彭祥兵 王爱荣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1995年第1期16-18,共3页

应用戊二醛及精氨酸进行毒素分子聚合解毒制备的破伤风类毒素新型抗原，给9群63匹马超免，一次免后抗体增长率达106．1±31．28％，平均抗体单位由免前1540．9±452．85Lf／ml上升至3146．27±929Lf／ml，免疫成功率为100％。

关键词 破伤风类毒素 抗原 免疫原性

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人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定 被引量：1

5

作者 黄仕和 周志军 +5 位作者 彭祥兵 詹骞 张爱华 闭兰 余模松 梁米芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第12期873-876,共4页

目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板... 目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板孔,用间接ELISA法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS-PAGE、Western blot和竞争性ELISA分析。结果上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97.1%。经SDS-PAGE和Western blot分析可见,IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27000和55000,为人源IgG抗体。CHO表达的HBsAg和血源性HBsAg能竞争性抑制该重组IgG抗体与E.coli表达的HBsAg反应,其抑制率分别为55.9%和81.9%。结论人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒表面抗原 IgG 基因工程抗体 杆状病毒 表达 纯化

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破伤风类毒素的发展历史、现状和新型破伤风疫苗的研究进展 被引量：2

6

作者 彭祥兵 《微生物学免疫学进展》 1997年第2期54-56,共3页

简要回顾了破伤风类毒素主要的发展历程；概述了目前国内外精制破伤风类毒素的两种生产工艺各自的优缺点，并且肯定了吸附精制破伤风类毒素几十年实际应用的效果，同时指出了在大规模人群接种时可能出现为数不多的各种不良反应，以及引... 简要回顾了破伤风类毒素主要的发展历程；概述了目前国内外精制破伤风类毒素的两种生产工艺各自的优缺点，并且肯定了吸附精制破伤风类毒素几十年实际应用的效果，同时指出了在大规模人群接种时可能出现为数不多的各种不良反应，以及引起不良反应的可能的原因。对国内外破伤风疫苗研究进展和主要发展方向，如亚单位疫苗和新型破伤风类毒素的研究概况和前景也作了介绍。 展开更多

关键词 破伤风 破伤风类毒素 破伤风疫苗

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一种新型破伤风类毒素的理化和生物学特性的研究 被引量：2

7

作者 彭祥兵 汪玉兰 王爱荣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1995年第3期119-121,134,共4页

对所研制的新型破类进行SDS－PAGE和HPLC分析，其主要成分为分子量大于584KD的聚合物，HPLC显示第一峰占82．09％～97．68％。此抗原的稳定性能良好，毒性逆转试验阴性，说明此种新破类解毒彻底。动物试验表明，其免疫原性大大优于常规... 对所研制的新型破类进行SDS－PAGE和HPLC分析，其主要成分为分子量大于584KD的聚合物，HPLC显示第一峰占82．09％～97．68％。此抗原的稳定性能良好，毒性逆转试验阴性，说明此种新破类解毒彻底。动物试验表明，其免疫原性大大优于常规破类，而且达到和超过了1990年版《中国生物制品规程》规定的吸附精制破伤风类毒素的要求。 展开更多

关键词 破伤风类毒素 破伤风 理化性状 生物学特性

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WHO关于人用疫苗新佐剂的第二次专题讨论会 被引量：1

8

作者 彭祥兵 《国外医学（预防．诊断．治疗用生物制品分册）》 2003年第2期76-80,共5页

世界卫生组织 (WHO)于 2 0 0 0年 6月在法国昂西 Mérieux基金会举行了第二次佐剂专题讨论会 ,讨论了当前人用疫苗佐剂使用的最新情况。与会科学家报告了正在进行或接近临床试验的佐剂配方。

关键词 新佐剂 临床前试验 临床试验 疫苗

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抗乙型肝炎病毒表面抗原的IgG全抗体表达载体的构建 被引量：1

9

作者 黄仕和 彭祥兵 +5 位作者 张爱华 闭兰 余键 周志军 余模松 梁米芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期170-173,共4页

目的构建抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的IgG全抗体杆状病毒表达载体。方法用PCR方法扩增抗HBsAg抗体Fab片段的轻链(L)及重链Fd段(VH+CH1)基因片段,将杆状病毒载体pAC-k-Fc与L基因连接,重组为过渡表达载体pAC-k-L-Fc,再与Fd基因连接,... 目的构建抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的IgG全抗体杆状病毒表达载体。方法用PCR方法扩增抗HBsAg抗体Fab片段的轻链(L)及重链Fd段(VH+CH1)基因片段,将杆状病毒载体pAC-k-Fc与L基因连接,重组为过渡表达载体pAC-k-L-Fc,再与Fd基因连接,构建重组表达载体pAC-HBs-Fc,并进行酶切鉴定及DNA测序分析。确定正确后,转染昆虫细胞sf9,用免疫荧光检测IgG的表达。结果PCR扩增的片段约650bp,与预期值一致。载体pAC-k-L-Fc和pAC-HBs-Fc的酶切片段和DNA序列与预期结果一致。转染sf9细胞呈阳性荧光反应,未转染细胞呈阴性荧光反应。结论已成功构建表达载体pAC-HBs-Fc,为表达抗人HBsAg的IgG全抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒表面抗原 基因工程抗体 杆状病毒

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噬菌体肽库技术及其在HCV抗原表位研究中的应用

10

作者 彭祥兵 余模松 《微生物学免疫学进展》 2007年第1期64-68,共5页

噬菌体随机肽库技术是研究抗原表位及其配体受体相互作用位点的强有力的工具。本文对噬菌体肽库技术的原理及其在抗原表位研究尤其在HCV抗原表位研究中的应用作一综述。

关键词 噬菌体肽库 抗原表位 HCV

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HIV-2跨膜蛋白gp36的截短及表达 被引量：1

11

作者 张涛 彭祥兵 +1 位作者 端义坤 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期140-142,共3页

目的 将HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中表达。方法 用PCR将gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用 BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T3上,导入宿主细胞BL21(DE3),用... 目的 将HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中表达。方法 用PCR将gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用 BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T3上,导入宿主细胞BL21(DE3),用IPTG诱导表达。结果 成功地对gp36进行了截短,并且构建到表达载体上进行表达。结论 截短的HIV-Ⅱ跨膜蛋白gp36能直接在大肠杆菌内进行表达,为跨膜蛋白的进一步应用打下基础。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒2型 跨膜蛋白 截短 基因表达

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人T淋巴细胞CD3ε链的原核表达及纯化

12

作者 金玉玲 张爱华 +3 位作者 闭兰 赵亚杰 彭祥兵 孙可芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第7期647-650,共4页

目的原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε(hCD3ε)链。方法以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因,并克隆入pCR-II载体,酶切鉴定及测序分析后,再定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-4T... 目的原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε(hCD3ε)链。方法以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因,并克隆入pCR-II载体,酶切鉴定及测序分析后,再定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-hCD3ε,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定。结果酶切分析及DNA测序证实,hCD3ε链基因被正确克隆入pGEX-4T-3载体,并能在原核系统中稳定表达。表达产物的相对分子质量为49 500,0.2 mmol/L IPTG 25℃诱导表达4.5 h,目的蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的29.3%,其中可溶性表达占12.8%。纯化的融合蛋白纯度可达86.1%,可分别被兔抗人CD3ε多抗和羊抗GST多抗识别。结论已成功地原核表达并纯化了GST-hCD3ε融合蛋白。 展开更多

关键词 人T淋巴细胞 CD3ε链 原核表达 纯化

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化学平衡两个问题的探讨

13

作者 彭祥兵 《中学生理科月刊（下半月高中版）》 2004年第7期27-28,共2页

一、反应混合物的物质百分含量比较 对于同一个可逆反应,若起始投料的量不同,或条件发生变化时,达到平衡时,各物质的百分量是否相同,与此可逆反应建立平衡的条件及此可逆反应本身的特点有关.

关键词 化学平衡问题 反应混合物 物质百分含量 等效平衡 解题思路 高中 化学

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牛血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

14

作者 余健 周志军 +3 位作者 彭祥兵 朱华松 施金荣 余模松 《微生物学免疫学进展》 2007年第1期30-34,共5页

用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体... 用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A5、3A3、3G6、4A8。鉴定结果显示,2A5细胞分泌IgG2a/κ,其余3株细胞分泌IgG1/κ;纯化后4株腹水单抗的纯度达90%以上,对BSA的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;4株单抗均不与人以及马、猪、羊、兔、豚鼠等血清发生交叉反应;W estern B lotting试验证明4株单抗均识别分子量为68000的BSA;用间接ELISA法测定4株单抗相对亲和力及相对敏感度大小依次为3A3>2A5>3G6>4A8;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存半年后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。 展开更多

关键词 牛血清白蛋白 筛选 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验

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丙型肝炎病毒C区和NS3区嵌合基因的克隆及表达

15

作者 彭祥兵 余健 +7 位作者 黄仕和 周志军 李健 朱华松 张爱华 闭兰 赵亚杰 余模松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期457-460,共4页

目的获得丙型肝炎病毒(HCV)C-NS3嵌合抗原,以提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量。方法应用SOE-PCR(拼接重叠延伸PCR)的方法,构建了HCV的C区和NS3区的嵌合基因,克隆于表达载体pGEX-4T3,并转化于大肠杆菌BL21,经筛选,IPTG诱导HCV的C-... 目的获得丙型肝炎病毒(HCV)C-NS3嵌合抗原,以提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量。方法应用SOE-PCR(拼接重叠延伸PCR)的方法,构建了HCV的C区和NS3区的嵌合基因,克隆于表达载体pGEX-4T3,并转化于大肠杆菌BL21,经筛选,IPTG诱导HCV的C-NS3嵌合抗原的表达。经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测抗原特异性。结果SOE-PCR构建的HCV C区和NS3区嵌合基因在BL21中获得表达。经鉴定,其相对分子质量约为75000,并具有高度特异性。结论已获得HCV C-NS3嵌合抗原,为提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量奠定了基础。 展开更多

关键词 拼接重叠延伸PCR 嵌合基因 丙型肝炎病毒

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HCV的Core-NS3嵌合抗原在大肠杆菌中的表达、纯化及初步应用

16

作者 彭祥兵 周志军 +3 位作者 桑爱军 余健 黄仕和 余模松 《微生物学免疫学进展》 2006年第4期14-18,共5页

用已经构建的含有HCV的Core-NS3(C33 c)嵌合基因的表达质粒pGEX TL1-2在大肠杆菌中进行了高效表达,表达产物纯化后通过SDS-PAGE、W estern-b lot、ELISA等一系列鉴定试验进行了分析,结果表明,该嵌合抗原具有高度特异性和良好的抗原活性... 用已经构建的含有HCV的Core-NS3(C33 c)嵌合基因的表达质粒pGEX TL1-2在大肠杆菌中进行了高效表达,表达产物纯化后通过SDS-PAGE、W estern-b lot、ELISA等一系列鉴定试验进行了分析,结果表明,该嵌合抗原具有高度特异性和良好的抗原活性,为研制诊断用HCV抗原奠定基础。 展开更多

关键词 HCV Core-NS3 嵌合抗原

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临床使用的单克隆抗体

17

作者 彭祥兵 《生物制品快讯》 2002年第12期21-23,共3页

关键词 单克隆抗体 生物制剂 临床医学

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HCV NS5A的结构和功能研究进展

18

作者 彭祥兵（综述） 余模松（审校） 《国际生物制品学杂志》 CAS 2007年第1期3-5,共3页

HCV感染严重危害人类健康，是输血后肝炎的主要病因之一。近年来，有关HCV非结构蛋白NS5A的研究倍受关注，本文对NS5A的结构和功能的研究情况作一介绍。

关键词 丙型肝炎病毒 NS5A 结构 功能

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HCV NS5A的结构和功能研究进展（续）

19

作者 彭祥兵（综述） 余模松（审校） 《国际生物制品学杂志》 CAS 2007年第2期63-66,共4页

HCV感染严重危害人类健康，是输血后肝炎的主要病因之一。近年来，有关HCV非结构蛋白NSSA的研究倍受关注，本文对NSSA的结构和功能的研究情况作一介绍。

关键词 丙型肝炎病毒 NS5A 结构 功能

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