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TLR2信号在沙眼衣原体生殖道感染中介导了早期炎症细胞因子的产生 被引量：5
1
作者 王振辉 常晓彤 +3 位作者 郝敏 宋桂芹 侯丽娟 张颖骞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期496-500,共5页
目的探讨TLR2和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染免疫应答中的作用。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株(Mo Pn,1×104IFUs)经生殖道感染野生型小鼠(WT,11只)、TLR2基因缺陷小鼠(TLR2 KO,14只)和TLR4基因缺陷小鼠(TLR4 KO,11只),复制生殖道... 目的探讨TLR2和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染免疫应答中的作用。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株(Mo Pn,1×104IFUs)经生殖道感染野生型小鼠(WT,11只)、TLR2基因缺陷小鼠(TLR2 KO,14只)和TLR4基因缺陷小鼠(TLR4 KO,11只),复制生殖道沙眼衣原体感染模型。于感染后不同时间点取生殖道分泌物,部分用于免疫荧光法检测衣原体包涵体数量,部分用于炎症细胞因子IL-1α、IL-6和MIP-2水平检测。在感染后第70天,处死小鼠,无菌分离腹腔巨噬细胞,于体外衣原体Mo Pn感染,培养24 h后,测定上清液中IL-1α、IL-6和MIP-2含量。细胞因子含量测定均采用ELISA法。结果 TLR2 KO或TLR4 KO小鼠与WT小鼠在每一个检测时间点下生殖道带菌量无差异,且带菌持续时间相同,截止到感染后第38天,3种基因型所有小鼠均清除了下生殖道感染的衣原体。TLR2基因缺失小鼠巨噬细胞产生的炎症细胞因子IL-1α、IL-6和MIP-2水平均明显低于野生型WT小鼠(P<0.01),而TLR4基因缺失小鼠巨噬细胞产生的3种炎症细胞因子水平均与野生型WT小鼠无差异(P>0.05);TLR2基因缺失小鼠棉拭子标本同样具有较低水平的炎症细胞因子(P<0.05)。结论在沙眼衣原体生殖道感染中,TLR2介导了早期炎症细胞因子的产生。沙眼衣原体诱导的早期免疫应答部分依赖于TLR2,而不依赖TLR4。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 TOLL样受体2 TOLL样受体4 生殖道感染 免疫应答
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沙眼衣原体OmcBc基因的克隆、表达与抗原性研究 被引量：4
2
作者 王洁 张颖骞 +1 位作者 钟光明 余平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1558-1561,共4页
目的探讨重组沙眼衣原体OmcB基因C端编码蛋白的抗原性,为衣原体感染性疾病的早期诊断和疫苗研究提供新的靶标。方法采用PCR技术从沙眼衣原体基因组中扩增OmcB的C端(T270-Y553)序列,并构建pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,转染大肠杆菌XL-1b... 目的探讨重组沙眼衣原体OmcB基因C端编码蛋白的抗原性,为衣原体感染性疾病的早期诊断和疫苗研究提供新的靶标。方法采用PCR技术从沙眼衣原体基因组中扩增OmcB的C端(T270-Y553)序列,并构建pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,转染大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达重组GST-OmcBc融合蛋白;收集120例Ct生殖道感染患者血清,以CtD血清型灭活的EB分别于皮下和腹腔免疫7只新西兰大白兔和5只Balb/C小鼠,以CtD血清型活的EB滴鼻感染9只Balb/C小鼠,分别收集这些动物免疫血清;间接免疫荧光法检测各血清中抗衣原体特异性抗体的效价;ELISA法检测重组GST-OmcBc融合蛋白与各免疫血清的反应性。结果成功构建了pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,经测序显示插入基因长度为852bp,编码284个氨基酸。IPTG成功诱导表达了重组GST-OmcBc融合蛋白,其分子质量约为57kDa;所制备和收集的各免疫血清均含高滴度抗衣原体特异性抗体;ELISA结果显示重组GST-OmcBc融合蛋白对各免疫血清均具有强的抗原性。结论 CtOmcBc是衣原体的一个免疫优势蛋白,重组GST-OmcBc融合蛋白的成功表达及其良好的抗原性为进一步开展衣原体感染早期诊断研究和疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 OmcB 抗原性
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中和白细胞介素-17加重小鼠衣原体呼吸道感染 被引量：4
3
作者 张效云 李琦 张颖骞 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期613-618,共6页
目的:探讨中和白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)对小鼠沙眼衣原体呼吸道感染的作用。方法:(1)32只小鼠随机分为4组,每组8只,分别为中和抗体组(neutralizing antibody group,NG)、同型抗体对照组(isotype-matched control antibody g... 目的:探讨中和白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)对小鼠沙眼衣原体呼吸道感染的作用。方法:(1)32只小鼠随机分为4组,每组8只,分别为中和抗体组(neutralizing antibody group,NG)、同型抗体对照组(isotype-matched control antibody group,IG)、回补重组鼠IL-17(recombinant mouse,rmIL-17)组(compensating rmIL-17 group,CG)和PBS组(PBS control group,PG),用高剂量沙眼衣原体小鼠肺炎株(mouse pneumonitis,MoPn)通过鼻腔感染小鼠,从感染前1天每隔48 h通过腹腔分别给予各组小鼠抗鼠IL-17单克隆中和抗体、同型对照抗体、抗鼠IL-17单克隆中和抗体同时回补rmIL-17、PBS,记录每天小鼠体重变化和死亡情况,计算生存率。(2)另外32只小鼠随机分为4组,分组情况同方法(1),用中等剂量MoPn通过鼻腔感染小鼠,随后操作同方法(1),于感染后第8天处死各组小鼠,取支气管灌洗液(bronchial alveolar lavage fluids,BALF),计数细胞分类,用免疫荧光法(immunofluoresentassay,IFA)检测衣原体在肺、肾和脾组织的生长。结果:高剂量MoPn感染的小鼠IL-17被中和后,小鼠平均体重变化明显,自12 d起,IG、CG和PG组体重开始上升,NG组则继续下降直至死亡。NG小鼠生存率明显下降,感染后第21天全部死亡,而IG、CG和PG组生存率分别为75%、75%、87.5%,NG组与IG、CG和PG组相比差异有统计学意义(χ2值分别为11.096、10.575、13.781,均P<0.05),IG、CG和PG组间差异无统计学意义。中等剂量MoPn感染第8天肺组织以及扩散至肾和脾的衣原体包涵体形成单位(inclusion-forming unit,IFU)以lg计数,NG组分别为6.85±0.12、1.85±0.35、1.59±0.35,IG组分别为6.03±0.25、0.86±0.80、0.57±0.82,CG组分别为5.42±0.66、0.43±0.23、0.21±0.15,PG组分别为5.65±0.29、0.68±0.39、脾未检出;NG组肺、肾、脾组织IFU与其余3组比较差异均有统计学意义(P<0.05),IG、CG和PG组间差异无统计学意义。BALF的中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞占细胞总数的百分 展开更多
关键词 衣原体 沙眼 呼吸道感染 白细胞介素-17 抗体 中和
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Toll样受体2(TLR2)和TLR4在沙眼衣原体生殖道感染介导的免疫应答 被引量：4
4
作者 王振辉 常晓彤 +3 位作者 郝敏 宋桂芹 朱晓波 张颖骞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1336-1341,共6页
目的 探讨Toll样受体2（TLR2）和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染中的作用。方法用1×104包涵体形成单位的MoPn沙眼衣原体小鼠肺炎株经生殖道感染野生型（WT）小鼠（n=11）、 TLR2基因缺陷 （TLR2-/-）小鼠（n=14）和TLR4-/-小鼠（n... 目的 探讨Toll样受体2（TLR2）和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染中的作用。方法用1×104包涵体形成单位的MoPn沙眼衣原体小鼠肺炎株经生殖道感染野生型（WT）小鼠（n=11）、 TLR2基因缺陷 （TLR2-/-）小鼠（n=14）和TLR4-/-小鼠（n=11）, 复制生殖道沙眼衣原体感染模型。在感染后第3、7、10、17、24、31、38、45天取阴道棉拭子, 免疫荧光法检测衣原体包涵体数量, ELISA检测白细胞介素1α（IL-1α）、IL-6和巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）水平。感染后第70天, 采用免疫荧光法分析血清抗体类型和效价; 用MoPn沙眼衣原体感染无菌分离的腹腔巨噬细胞, 培养24 h, ELISA测定上清液中IL-1α、IL-6和MIP-2含量; 体外用紫外线灭活的衣原体抗原刺激无菌分离的脾细胞, 培养72 h, ELISA测定上清液中γ干扰素（IFN-γ）、IL-17、IL-4和IL-5水平。结果 与WT小鼠相比, TLR2-/-或TLR4-/-小鼠在各时间点的生殖道带菌量无差异、且带菌持续时间相同, 感染后第38天, 所有小鼠均清除了下生殖道感染的衣原体。TLR2-/-小鼠巨噬细胞产生的IL-1α、IL-6和MIP-2水平均明显低于WT小鼠,而TLR4-/-小鼠巨噬细胞产生的3种炎症细胞因子水平均与WT小鼠无显著性差异; TLR2-/-小鼠棉拭子标本具有较低水平的炎症细胞因子。所有小鼠脾细胞均产生高水平的IFN-γ和IL-17、 较低水平的IL-4和IL-5、血清IgG2a/ IgG1比值均大于1, 但各组间无显著性差异。结论 TLR2而不是TLR4介导了沙眼衣原体生殖道感染的早期免疫应答, 但沙眼衣原体诱导的适应性免疫应答可能既不依赖于TLR4, 也不依赖于TLR2。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 TOLL样受体2 TOLL样受体4 生殖道感染 免疫应答
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IL-17在沙眼衣原体呼吸道感染早期表达及与衣原体复制的关系 被引量：2
5
作者 张效云 程建贞 +2 位作者 高丽芬 张颖骞 钟光明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第16期1563-1565,共3页
目的探讨炎症性细胞因子IL-17在沙眼衣原体呼吸道感染中的早期表达及与衣原体复制的关系。方法128只小鼠按随机数字表法分为实验组和对照组,实验组用4000包涵体形成单位(IFU)沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)通过鼻腔感染小鼠,对照组则给予... 目的探讨炎症性细胞因子IL-17在沙眼衣原体呼吸道感染中的早期表达及与衣原体复制的关系。方法128只小鼠按随机数字表法分为实验组和对照组,实验组用4000包涵体形成单位(IFU)沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)通过鼻腔感染小鼠,对照组则给予等量蔗糖磷酸盐缓冲液(SPG),分别在感染后0、1、1.5、2、3、4、8、12d处死小鼠,用免疫荧光检测(IFA)衣原体在肺组织中的生长情况,通过ELISA检测小鼠肺组织IL-17表达。24只小鼠分为3组,分别用160、800、4000IFUMoPn通过鼻腔感染小鼠,于感染后第2天测定肺组织中衣原体生长及IL-17表达。16只小鼠随机分为2组,用4000IFUMoPn通过鼻腔感染小鼠,实验组肌肉注射利福平和氯霉素,对照组则给予等量PBS,于感染后第2天测定肺组织中衣原体生长及IL-17表达。结果MoPn感染后第1天,肺组织有衣原体生长,于感染后第8天达高峰。感染后第2天,IL-17在小鼠肺组织中的表达达峰值,并很快下降。仅剂量为4000IFUMoPn感染小鼠2d后,肺组织中同时有衣原体生长和IL-17的表达。经抗生素处理后衣原体生长被抑制,同时也检测不到IL-17的表达。结论IL-17在衣原体呼吸道感染早期出现,其表达情况与衣原体感染剂量和早期复制有关。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 IL-17 呼吸道感染 抗生素 固有免疫
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TLR2和TLR4在小鼠生殖道沙眼衣原体感染免疫应答中的应用研究 被引量：2
6
作者 马科 王振辉 +3 位作者 宋桂芹 郝敏 张颖骞 常晓彤 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第5期397-400,405,共5页
目的探讨TLR2和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染免疫应答中的作用。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)1×104 IFUs经生殖道感染野生型小鼠(WT,11只)、TLR2基因缺陷小鼠(TLR2KO,14只)和TLR4基因缺陷小鼠(TLR4KO,11只),复制生殖道沙... 目的探讨TLR2和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染免疫应答中的作用。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)1×104 IFUs经生殖道感染野生型小鼠(WT,11只)、TLR2基因缺陷小鼠(TLR2KO,14只)和TLR4基因缺陷小鼠(TLR4KO,11只),复制生殖道沙眼衣原体感染模型。于感染后不同时间点取生殖道分泌物,采用免疫荧光法检测衣原体包涵体数量。在感染后第70d处死小鼠,留取血清,采用免疫荧光法检测抗体类型和效价;无菌分离的脾细胞,用经紫外线灭活的衣原体EB刺激培养72h,采用ELISA法测定上清液中细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-4和IL-5水平。结果 TLR2KO或TLR4KO小鼠与WT小鼠在每一个检测时间点生殖道带菌量差异无统计学意义(P>0.05),3组小鼠带菌持续时间相同,截止到感染后第38d,所有小鼠下生殖道感染的衣原体均被清除.。3种基因型小鼠脾细胞均产生高水平的IFN-γ和IL-17,且3组间差异无统计学意义(P>0.05);但IL-4及IL-5水平均降低,且3组间差异无统计学意义(P>0.05)。3种基因型小鼠血清IgG2a/IgG1比值均>1,且组间差异无统计学意义(P>0.05)。3种基因型小鼠均发展为Th1偏倚的免疫应答。结论在沙眼衣原体生殖道感染中,TLR2或TLR4介导的信号通路对控制小鼠下生殖道衣原体感染不是必需的,沙眼衣原体诱导的适应性免疫应答既不依赖于TLR2,也不依赖于TLR4。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 TOLL样受体2 TOLL样受体4 生殖道感染 免疫应答
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鼠抗沙眼衣原体Tarp蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
7
作者 王洁 张颖骞 +1 位作者 钟光明 余平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期2219-2223,共5页
目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免... 目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免疫荧光法筛选阳性克隆和有限稀释克隆化,获得鼠抗沙眼衣原体血清型DTarp蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA法鉴定单克隆抗体的抗Tarp特异性,并应用间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类和衣原体种属特异性。结果成功克隆表达了重组GST-Tarp融合蛋白,其相对分子质量约为136kDa;成功地建立了7株稳定分泌抗Tarp蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株;7株单克隆抗体均特异性的识别Tarp蛋白而不识别其他衣原体性蛋白;2株单克隆抗体(R5B6.2和R8G7.2)的免疫球蛋白亚类为IgG2a,其余5株单克隆抗体(R4D5,R2H1.2,R12B12,R2H7和R5G8.1)的免疫球蛋白亚类均为IgG1;7株单克隆抗体全部特异性识别衣原体血清型A、D、L2,而不识别MoPn、6BC和AR39。结论获得了特异性识别沙眼衣原体血清型DTarp蛋白的单克隆抗体,为Tarp蛋白的结构及生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 TARP 单克隆抗体
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