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过表达vWF对人脐静脉内皮细胞生物学影响的实验研究
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作者 张龙飞 陈世远 +3 位作者 冯奔驰 刘德朗 张秀杨 高涌 《蚌埠医学院学报》 CAS 2024年第3期281-285,290,共6页
目的:探讨过表达血管性血友病因子(vWF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、侵袭、凋亡及成管能力的影响。方法:设计构建5种过表达vWF的质粒CRISPRa载体,将HUVECs分为实验组(5组)与对照组。将5种质粒分别转染实验组细胞,Western blo... 目的:探讨过表达血管性血友病因子(vWF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、侵袭、凋亡及成管能力的影响。方法:设计构建5种过表达vWF的质粒CRISPRa载体,将HUVECs分为实验组(5组)与对照组。将5种质粒分别转染实验组细胞,Western blotting检测各组细胞vWF的表达效果,选取优势组。通过细胞增殖实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验、细胞凋亡实验、细胞成管实验等,观察过表达vWF对HUVECs增殖、迁移、侵袭、凋亡及成管能力的影响。Western blotting检测5个常见通路蛋白因子在2组细胞中的表达,探测可能相关的机制。结果:成功转染后各组HUVECs的vWF蛋白表达水平均明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中vWF-OE4组过表达量最高,故选取该引物序列进行后续实验。与对照组相比,vWF-OE组细胞增殖减慢,细胞划痕48 h迁移率降低、Transwell细胞侵袭率降低(P<0.05),细胞凋亡率、血管形成能力、HUVECs生成小管的长度均增高(P<0.05),JUN、P53蛋白含量均增高(P<0.05)。结论:过表达vWF对HUVECs增殖、迁移、侵袭行为具有显著抑制作用,促进凋亡,成管能力增强。 展开更多
关键词 布加综合征 血管血友病因子 人脐静脉内皮细胞
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缺氧诱导因子1α介导单羧酸转运蛋白1表达参与短链脂肪酸对肠道缺氧保护作用的研究 被引量：2
2
作者 张秀杨 张龙飞 +1 位作者 陈世远 高涌 《中华普通外科学文献（电子版）》 CAS 2023年第1期18-23,共6页
目的明确缺氧条件下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对肠上皮细胞单羧酸转运蛋白1(MCT-1)的表达调控,并初步探究短链脂肪酸(SCFAs)在缺氧条件下对肠屏障的保护作用。方法取健康回肠组织及肠缺血坏死患者的回肠组织,进行免疫组织化学染色,检测... 目的明确缺氧条件下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对肠上皮细胞单羧酸转运蛋白1(MCT-1)的表达调控,并初步探究短链脂肪酸(SCFAs)在缺氧条件下对肠屏障的保护作用。方法取健康回肠组织及肠缺血坏死患者的回肠组织,进行免疫组织化学染色,检测肠上皮MCT-1表达情况。正常C57小鼠、肠上皮特异性HIF-1α敲除鼠(HIF-1α^(ΔIEC))以及对照小鼠(HIF-1α^(flox/flox))构建小肠缺血再灌注(I/R)损伤模型,随机分为假手术组(Sham组)、I/R组,I/R+丁酸组,取回肠末段的组织行免疫组织化学染色及肠液行SCFAs检测,透射电镜观察小鼠回肠超微结构变化。培养肠上皮细胞系Caco-2,建立缺氧模型,用Western blotting法分别检测常氧组、缺氧组、缺氧+siHIF-1α组、丁酸+缺氧组、siMCT-1+丁酸+缺氧组MCT-1、HIF-1α和肠上皮紧密连接蛋白Claudin1、Occludin的表达情况;跨上皮电阻(TER)测定评估各组肠上皮屏障功能变化。结果与假手术组相比,I/R组肠道内SCFAs无明显变化。缺血、缺氧均可以诱导肠上皮细胞高表达MCT-1。HIF-1α^(ΔIEC)小鼠较对照小鼠肠道低表达MCT-1,且对I/R损伤更为敏感。丁酸在HIF-1α、MCT-1正常表达时可以介导肠屏障保护和上调Claudin1、Occludin表达。结论缺氧条件下,HIF-1α介导肠上皮细胞表达MCT-1,参与SCFAs对肠屏障的保护。 展开更多
关键词 缺氧诱导因子1Α 缺血再灌注损伤 短链脂肪酸 单羧酸转运蛋白1 肠屏障
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