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铜绿假单胞菌群体感应相关sRNA的筛选及突变株的构建 被引量：2
1
作者 李虹霖 鲁洋 +5 位作者 刘宇阳 张社彬 蔡依玫 曾建明 黄彬 陈茶 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第4期348-355,共8页
目的群体感应与调控小RNA(small regulatory RNA,sRNA)在铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)许多信号传导级联反应中起关键调节作用。文中旨在探讨sRNA是否参与P.aeruginosa的群体感应表达调控系统,筛选群体感应系统相关sRNA,构建sRNA过表达与... 目的群体感应与调控小RNA(small regulatory RNA,sRNA)在铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)许多信号传导级联反应中起关键调节作用。文中旨在探讨sRNA是否参与P.aeruginosa的群体感应表达调控系统,筛选群体感应系统相关sRNA,构建sRNA过表达与敲除株。方法利用基因转录组测序及qPCR筛选群体感应系统相关sRNA;利用PCR扩增目的基因,使用无缝连接试剂盒将线性化载体与目的片段连接,分别将pROp200-sRNA和pGSM-ΔsRNA的连接反应液转化入E.coliDH5α和SM10λπ感受态细胞中,通过PCR鉴定重组载体;将过表达质粒pROp200-sRNA转化入铜绿假单胞菌野生株PAO1,获得PAO1-sRNA过表达株;通过接合反应将pGSM-ΔsRNA转移至PAO1,获得PAO1ΔsRNA敲除株。对处于对数生长期的PAO1野生株、PAO1-sRNA过表达株、PAO1ΔsRNA敲除株及PAO1ΔsRNA/sRNA过表达株提取RNA,逆转录,验证sRNA基因过表达株及敲除株。绘制各菌株生长曲线,检测绿脓素的浓度。结果成功利用转录组测序及qPCR筛选出群体感应相关sRNA P26、P5316.1、P30、P34、AmiL。pROp200经过EcoRI酶切后,质粒由超螺旋结构变为线性结构;pGSM-MR经SacI、XbaI双酶切后,产生长度分别为1898bp和7509bp的片段。PAO1-sRNA过表达株的sRNA基因表达量均较PAO1野生株显著上调(P<0.05);PAO1ΔsRNA敲除株的sRNA基因表达量较PAO1野生株均明显降低(P<0.05);PAO1ΔsRNA/sRNA过表达株的sRNA基因表达量较PAO1ΔsRNA敲除株均明显升高(P<0.05)。绿脓素检测显示,PAO1-sRNA过表达株AmiL绿脓素浓度低于PAO1野生株[(1.73±0.03)μg/mL vs(2.83±0.09)μg/mL,P<0.05],PAO1ΔsRNA/sRNA过表达株AmiL绿脓素浓度较PAO1ΔsRNA敲除株降低(P<0.05),P30绿脓素浓度较PAO1ΔsRNA敲除株升高(P<0.05)。结论PAO1-sRNA过表达株与PAO1ΔsRNA敲除株构建成功,可用于研究sRNA与群体感应系统间的调控关系,并进一步功能研究。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 群体感应系统 SRNA 筛选 过表达 敲除
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碳青霉烯酶抑制剂检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的效能
2
作者 蔡依玫 张社彬 +4 位作者 张轩 代奥 刘健平 龙一飞 刘玥 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第14期2081-2085,共5页
目的评估迪尔碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)产不同基因型碳青霉烯酶的效能。方法收集2018-2020年广东省中医院临床分离的73株非重复CRE。采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合乙二胺四乙酸(EDTA)碳青霉烯灭活试验... 目的评估迪尔碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)产不同基因型碳青霉烯酶的效能。方法收集2018-2020年广东省中医院临床分离的73株非重复CRE。采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合乙二胺四乙酸(EDTA)碳青霉烯灭活试验(eCIM)以及碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯酶,采用聚合酶链式反应(PCR)检测10种常见β-内酰胺酶基因。以PCR为金标法,评估两种表型试验的临床效能。结果mCIM试验阳性54株,产丝氨酸碳青霉烯酶20株,产金属β-内酰胺酶34株,符合率为98.63%(72/73)。碳青霉烯酶抑制剂检出56株产碳青霉烯酶,产A类酶22株,产B类酶34株。1株产OXA-181的摩根摩根菌为假阴性,2株不产碳青霉烯酶、高产头孢菌素酶DHA的CRE为假阳性。碳青霉烯酶抑制剂灵敏度和特异度分别为98.18%(54/55)和88.89%(16/18),符合率为95.89%(70/73)。结论mCIM联合eCIM无法区分A类和D类丝氨酸碳青霉烯酶。碳青霉烯酶抑制剂符合率较mCIM联合eCIM试验稍低,能有效鉴别A类和B类酶,但在D类酶和高产AmpC酶的CRE检测上仍存在不足。碳青霉烯酶抑制剂与mCIM/eCIM联合能更全面地实现碳青霉烯酶分型,精准指导临床合理用药。 展开更多
关键词 碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌 mCIM联合eCIM试验 碳青霉烯酶抑制剂 碳青霉烯酶抑制剂增强试验 丝氨酸碳青霉烯酶 金属Β-内酰胺酶
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铜绿假单胞菌群体感应系统及相关sRNA的研究进展 被引量：1
3
作者 张社彬 陈茶 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第3期64-69,共6页
群体感应(quorum sensing,QS)系统是一种微生物利用信号分子实现细胞间交流并调控群体基因表达变化的调节系统,其中铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)QS系统能参与调控各种毒力因子、生物膜和耐药功能,对其感染入侵宿主起重要调... 群体感应(quorum sensing,QS)系统是一种微生物利用信号分子实现细胞间交流并调控群体基因表达变化的调节系统,其中铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)QS系统能参与调控各种毒力因子、生物膜和耐药功能,对其感染入侵宿主起重要调控作用。非编码小RNA(small non-coding RNA,sRNA)是细菌仅参与调控而不编码蛋白质的RNA,目前已发现多条sRNA参与QS系统的调节通路,表现为受QS系统调控或调控QS系统相关功能,对PA的生命活动起重要作用,因此对QS系统相关sRNA的研究十分有意义。现就PA QS系统的组成、生物学功能,及其相关sRNA的研究进展等方面作一阐述,为进一步研究QS系统相关sRNA提供有益的帮助。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 群体感应系统 非编码小RNA
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