期刊文献+
共找到13篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
鸡胚成纤维细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定 被引量:7
1
作者 祁小乐 陈玉明 +7 位作者 张礼 任宪刚 高立 高宏雷 秦立廷 王永强 高玉龙 王笑梅 《中国家禽》 北大核心 2013年第8期14-16,共3页
试验提取CEF细胞总RNA,运用SMART和LD-PCR技术合成cDNA,通过同源重组克隆入真核表达质粒pGADT7,转化酵母菌Y187,构建cDNA表达文库。文库滴度高达6.94×107cfu/mL,重组率达100%。随机挑选10个克隆进行测序,全部为原鸡序列。本研究为... 试验提取CEF细胞总RNA,运用SMART和LD-PCR技术合成cDNA,通过同源重组克隆入真核表达质粒pGADT7,转化酵母菌Y187,构建cDNA表达文库。文库滴度高达6.94×107cfu/mL,重组率达100%。随机挑选10个克隆进行测序,全部为原鸡序列。本研究为进一步研究重要禽源病毒与宿主细胞的相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 CEF CDNA文库 酵母双杂交
下载PDF
不同毒力传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定 被引量:5
2
作者 陈玉明 张礼 +7 位作者 任宪刚 高立 秦立廷 高玉龙 王永强 高宏雷 王笑梅 祁小乐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期30-34,共5页
传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)毒株Gx(超强毒株)、F9(中等毒力毒株)、Gt(弱毒株)遗传背景高度相似,但生物学性状差异显著。为研究不同毒力毒株与宿主细胞相互作用的分子细节,本研究将IBDV Gx、F9、Gt毒株... 传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)毒株Gx(超强毒株)、F9(中等毒力毒株)、Gt(弱毒株)遗传背景高度相似,但生物学性状差异显著。为研究不同毒力毒株与宿主细胞相互作用的分子细节,本研究将IBDV Gx、F9、Gt毒株的衣壳蛋白VP2基因克隆入pGBKT7载体,分别构建了诱饵载体pGBGxVP2、pGBF9VP2和pGBGtVP2。经Matchmaker Gold Yeast Two-hybrid System验证,结果显示所构建的3个诱饵载体均无自激活作用,对酵母细胞无毒性作用。本研究为利用酵母双杂交系统深入研究IBDV与宿主相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 衣壳蛋白 酵母双杂交 诱饵载体 自激活作用 毒性作用
下载PDF
鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因突变对病毒体外复制的影响 被引量:5
3
作者 祁小乐 高立 +10 位作者 吴关 邓小芸 余飞 张礼 秦立廷 高玉龙 王永强 高宏雷 刘娣 华育平 王笑梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1577-1583,共7页
为了进一步了解影响鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制效率和致病力的分子基础,作者在序列分析的基础上,利用反向遗传操作技术,针对VP2上2个重要的氨基酸位点(222和279),修饰和拯救了相应的2株突变病毒,并研究了突变病毒在体内外的生物学... 为了进一步了解影响鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制效率和致病力的分子基础,作者在序列分析的基础上,利用反向遗传操作技术,针对VP2上2个重要的氨基酸位点(222和279),修饰和拯救了相应的2株突变病毒,并研究了突变病毒在体内外的生物学特性。复制动力学数据显示,VP2的222位由酪氨酸突变为脯氨酸可将IBDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的复制滴度提高6倍以上,而279位氨基酸对病毒复制效率无显著影响。SPF鸡的感染试验显示,222位和279位氨基酸与IBDV的致病力没有关系。本研究首次报道了VP2 222位和279位氨基酸与IBDV复制效率和致病力的关系,有助于更加全面地了解IBDV的基因功能,也将为新型IBDV疫苗的设计提供依据和思路。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 VP2基因 复制 致病力 反向遗传
下载PDF
野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定 被引量:5
4
作者 姜莉莉 祁小乐 +9 位作者 高玉龙 邓小芸 柴洪亮 张礼 贠炳岭 秦立廷 王永强 高宏雷 王笑梅 华育平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1277-1282,共6页
利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV... 利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV,分别来自于针尾鸭和绿头鸭,将分离病毒分别命名为DBYR1101和DBYR1102。克隆2个病毒株的主要保护性抗原基因gp90,并进行序列分析。结果显示,2个分离株gp90基因氨基酸相似性为99.5%;DBYR1101 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.7%、94.2%和98.2%;DBYR1102 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.2%、93.7%和97.7%;与中国早期南方分离株HA9901的氨基酸序列相似性分别为94.7%和94.2%;与中国北方分离株氨基酸序列相似性为99.2%~100%。核苷酸遗传进化分析表明,2个野鸟源REV分离株与现有的东北分离株亲缘关系较近,趋于形成1个北方分离群;与SNV株亲缘关系最远;与170A株亲缘关系较远;与美国和中国台湾地区的某些分离株相似性较高。该研究首次自野鸭体内分离到REV,丰富了REV流行病学资料,同时提醒我们重视野生鸟类迁徙在疾病传播中所扮演的角色,为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。 展开更多
关键词 野鸟 禽网状内皮组织增生病病毒 分离 鉴定
下载PDF
Genomic Sequencing and Molecular Characteristics of A Very Virulent Strain of Infectious Bursal Disease Virus Isolated in China 被引量:3
5
作者 祁小乐 高立 +9 位作者 秦立廷 邓小芸 吴关 张礼 余飞 任宪刚 高玉龙 高宏雷 王永强 王笑梅 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第12期1946-1949,共4页
[Objective] The paper was to determine the genomic sequence of a very virulent strain of infectious bursal disease virus(IBDV),and study its molecular characteristics.[Method] A very virulent strain(vvIBDV)(HLJ-0... [Objective] The paper was to determine the genomic sequence of a very virulent strain of infectious bursal disease virus(IBDV),and study its molecular characteristics.[Method] A very virulent strain(vvIBDV)(HLJ-0504) of infectious bursal disease virus(IBDV) with special characters was isolated in China and its genome was sequenced.[Result] Sequence analysis showed that segment A of HLJ-0504 was derived from vvIBDV,while segment B was from a distinct ancestor.The morbidity and mortality of HLJ-0504 was 100% and 86.7%to SPF chickens,respectively.[Conclusion] vvIBDV with distinct segment B were still circulating and the evolution of IBDV was diversified in China.Besides,it is hard to imagine that the virulence of IBDV is determined solely by segment A or B. 展开更多
关键词 Infectious bursal disease virus(IBDV) GENOME EVOLUTION VIRULENCE
下载PDF
传染性法氏囊病病毒超强毒株衣壳蛋白的可溶性表达、纯化与活性分析 被引量:3
6
作者 高祥 李辉 +8 位作者 张礼 卢珍 王永强 高立 吴甜甜 高玉龙 刘长军 王笑梅 祁小乐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2096-2102,共7页
为获得高质量的病毒衣壳蛋白VP2,本研究克隆了传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)超强毒株Gx的VP2基因,并亚克隆至载体pCold-Ⅰ,进而获得重组原核表达质粒pCold-Ⅰ-GxVP2,在Transetta(DE3)工程菌中优化条件进行I... 为获得高质量的病毒衣壳蛋白VP2,本研究克隆了传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)超强毒株Gx的VP2基因,并亚克隆至载体pCold-Ⅰ,进而获得重组原核表达质粒pCold-Ⅰ-GxVP2,在Transetta(DE3)工程菌中优化条件进行IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达,运用Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤两种技术串联的方法进行蛋白纯化,运用单克隆抗体介导的Western blotting技术鉴定纯化蛋白的特异性,免疫SPF鸡鉴定纯化蛋白的免疫活性。结果显示,在冷休克条件下,IBDV衣壳蛋白VP2在Transetta(DE3)工程菌中实现了可溶性表达;通过纯化获得了高纯度的VP2,浓度为542μg/mL;该蛋白不仅能与VP2单克隆抗体特异性反应,还能刺激鸡产生特异性免疫应答,具有良好的免疫活性。本研究在IPTG为1mmol/L,15℃、120r/min,诱导时间为24h的条件下,实现了有免疫活性的IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达和纯化。高纯度、可溶、具有功能活性的衣壳蛋白的制备,为深入开展IBDV致病机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 衣壳蛋白 可溶性表达 纯化
下载PDF
鸡传染性法氏囊病病毒细胞嗜性及受体研究现状 被引量:3
7
作者 张礼 祁小乐 王笑梅 《中国家禽》 北大核心 2014年第20期2-5,共4页
鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)强、弱毒株在侵染宿主细胞上存在着明显的细胞嗜性差异,普遍认为,这种细胞嗜性差异主要由宿主细胞的不同受体所介导。迄今为止,已报道4种IBDV受体相关分子:SIg M免疫球蛋白... 鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)强、弱毒株在侵染宿主细胞上存在着明显的细胞嗜性差异,普遍认为,这种细胞嗜性差异主要由宿主细胞的不同受体所介导。迄今为止,已报道4种IBDV受体相关分子:SIg M免疫球蛋白、热休克蛋白90(c Hsp90)、整合素α4β1、Toll样受体(TLR)。本文对IBDV细胞嗜性及细胞受体相关研究进行了综述。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 细胞嗜性 受体
下载PDF
Genetic Analysis of the VP2 Hypervariable Region of Thirty-six Infectious Bursal Disease Virus Isolates in China during 2009-2012 被引量:2
8
作者 祁小乐 秦立廷 +10 位作者 高玉龙 高宏雷 李颖颖 高立 卢珍 王念 陈玉明 张礼 李凯 王永强 王笑梅 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2015年第8期1565-1569,1602,共6页
[Objective] Infectious bursal disease (IBD) is a highly contagious immuno- suppressive disease caused by infectious bursal disease virus (IBDV). IBDV is ge- netically prone to mutation, which results in challenges... [Objective] Infectious bursal disease (IBD) is a highly contagious immuno- suppressive disease caused by infectious bursal disease virus (IBDV). IBDV is ge- netically prone to mutation, which results in challenges to the disease prevention and control. Thus, it is necessary to continuously monitor the prevalence of IBDV. [Method] 36 IBDVs were identified from ten provinces in China from 2009 to 2012. Partial fragments of VP2, including the hypervariable region (HVR), from new iso- lates were sequenced and analyzed through comparisons with published sequences of IBDV, including 18 strains isolated previously by our lab and 24 reference strains from China and around the world. [Result] Phylogenetic analysis showed a co-exis- tence of IBDV strains belonging to classic, variant, attenuated, and very virulent IB- DV (wlBDV) in China. wlBDVs remain the predominant strains in China and the new subgroup was emerging. Alignment analysis revealed several distinct amino acid mutations that might be involved in virulence or antigenicity variation. [Conclu- sion] The results offered evolutionary clues showing the emerging trend of obvious variations and diversity of IBDV in major poultry-producing regions of China particu- larly in recent years. These findings will contribute to a better understanding of the genetic evolution of IBDV. 展开更多
关键词 Genetic analysis VP2 Infectious bursal disease virus
下载PDF
传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白与宿主CEF细胞相互作用蛋白的筛选 被引量:1
9
作者 陈玉明 高立 +11 位作者 王念 张礼 卢珍 高玉龙 王永强 高宏雷 李凯 刘长军 崔红玉 张艳萍 王笑梅 祁小乐 《中国家禽》 北大核心 2015年第7期16-19,共4页
为筛选与传染性法氏囊病病毒(IBDV)衣壳蛋白VP2相互作用的宿主细胞蛋白,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)为宿主细胞模型,VP2蛋白为诱饵,采用MatchmakerTMGold系统,进行酵母双杂交试验。结果显示杂交效率为15%,所筛选的酵母总数为7.5×... 为筛选与传染性法氏囊病病毒(IBDV)衣壳蛋白VP2相互作用的宿主细胞蛋白,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)为宿主细胞模型,VP2蛋白为诱饵,采用MatchmakerTMGold系统,进行酵母双杂交试验。结果显示杂交效率为15%,所筛选的酵母总数为7.5×106个。回转验证等试验表明,有4种宿主细胞蛋白可以与VP2蛋白发生相互作用,本研究为深入研究IBDV的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 衣壳蛋白 宿主细胞蛋白 酵母双杂交 相互作用
下载PDF
传染性法氏囊病病毒VP4酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选
10
作者 王念 陈玉明 +9 位作者 张礼 高立 卢珍 高玉龙 王永强 高宏雷 刘长军 崔红玉 王笑梅 祁小乐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期317-323,共7页
VP4蛋白(viral protein 4)是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种重要非结构蛋白,具有蛋白水解酶活性,剪切多聚蛋白pVP2-VP4-VP3释放出pVP2、VP4、VP3,对病毒蛋白成熟具有重要的作用。为了研究VP4蛋白... VP4蛋白(viral protein 4)是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种重要非结构蛋白,具有蛋白水解酶活性,剪切多聚蛋白pVP2-VP4-VP3释放出pVP2、VP4、VP3,对病毒蛋白成熟具有重要的作用。为了研究VP4蛋白与宿主细胞的相互作用,本研究将IBDVVP4基因克隆入pGBKT7,构建诱饵载体pGBGtVP4,自激活试验证明其无自激活活性,对酵母细胞没有毒性。运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)文库中筛选VP4的互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得22个候选互作宿主细胞蛋白,为深入研究IBDV VP4与宿主互作的效应和机制奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 VP4 酵母双杂交 诱饵载体 互作蛋白
下载PDF
鸡法氏囊B淋巴细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定
11
作者 陈玉明 高玉龙 +9 位作者 张礼 王念 高立 任宪刚 姜莉莉 高宏雷 秦立廷 王永强 祁小乐 王笑梅 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期15-17,21,共4页
为了研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)与宿主B淋巴细胞作用机制,构建鸡法氏囊B淋巴细胞酵母表达文库,试验从3周龄SPF鸡中摘取法氏囊,分离制备B淋巴细胞,从中提取细胞总RNA,使用SMART和LD-PCR技术合成双链cDNA,并进一步与线性化载体pGADT7-... 为了研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)与宿主B淋巴细胞作用机制,构建鸡法氏囊B淋巴细胞酵母表达文库,试验从3周龄SPF鸡中摘取法氏囊,分离制备B淋巴细胞,从中提取细胞总RNA,使用SMART和LD-PCR技术合成双链cDNA,并进一步与线性化载体pGADT7-Rec共同转化Y187酵母感受态细胞,通过同源重组构建酵母表达文库。结果表明:所构建cDNA文库的效价为9.5×107cfu/mL,重组率为100%,可以用于酵母双杂交试验。 展开更多
关键词 法氏囊 B淋巴细胞 酵母双杂交 CDNA文库
原文传递
鸡法氏囊B淋巴细胞全长cDNA表达文库的构建
12
作者 张礼 祁小乐 +1 位作者 高玉龙 王笑梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1012-1016,共5页
分离纯化了3~4周龄SPF雏鸡法氏囊B淋巴细胞的mRNA,通过琼脂糖凝胶电泳确定其质量,运用SMART技术合成第一链cDNA,LD-PCR合成第二链cDNA,经SfiⅠ酶切后定向导入真核表达质粒pEXP-Lib中,构建了全长cDNA表达文库。初级文库的库容量达1.98&#... 分离纯化了3~4周龄SPF雏鸡法氏囊B淋巴细胞的mRNA,通过琼脂糖凝胶电泳确定其质量,运用SMART技术合成第一链cDNA,LD-PCR合成第二链cDNA,经SfiⅠ酶切后定向导入真核表达质粒pEXP-Lib中,构建了全长cDNA表达文库。初级文库的库容量达1.98×105 CFU,扩增后的库容量为2.35×109CFU。PCR鉴定结果显示,文库的重组率约为100%,且插入片段分布于500~2 000bp之间。对随机挑选的22个克隆进行测序,其中20个与原鸡序列的同源性在97%以上,另外2个为未知序列。结果表明,构建的cDNA文库具备较高的库容量和重组率,为进一步筛选鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)受体及感染相关基因奠定了良好基础。 展开更多
关键词 IBDV 法氏囊 B淋巴细胞 SMART CDNA表达文库
原文传递
传染性法氏囊病病毒VPP5酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选
13
作者 王念 张礼 +10 位作者 陈玉明 卢珍 高立 高玉龙 王永强 高宏雷 刘长军 崔红玉 李凯 王笑梅 祁小乐 《中国家禽》 北大核心 2015年第3期22-26,共5页
VP5蛋白是传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种非结构蛋白,在病毒感染、释放、致病性方面起着重要作用。为了研究VP5蛋白与宿主细胞的相互作用,本试验首先将IBDV VP5基因克隆入p GBKT7,构建诱饵载体p G... VP5蛋白是传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种非结构蛋白,在病毒感染、释放、致病性方面起着重要作用。为了研究VP5蛋白与宿主细胞的相互作用,本试验首先将IBDV VP5基因克隆入p GBKT7,构建诱饵载体p GBGt VP5,通过自激活试验证明其没有自激活活性,对酵母细胞没有毒性。然后,运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)c DNA文库中筛选与VP5互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得5个互作宿主细胞蛋白,为进一步深入研究IBDV VP5与宿主互作的效应和机制奠定基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 VP5蛋白 酵母双杂交 诱饵载体 互作蛋白
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部