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链霉菌Streptomyces olivaceoviridis A1木聚糖酶基因xynA在大肠杆菌及毕赤酵母中的高效表达 被引量：24
1
作者 张红莲 姚斌 +4 位作者 王亚茹 袁铁峥 张王照 伍宁丰 范云六 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期41-45,共5页
从橄榄绿链霉菌StreptomycesolivaceoviridisA1中克隆出木聚糖酶基因xynA ,将带与不带原基因信号肽编码序列的xynA分别以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌表达载体pET 2 2b(+)上的pellB信号肽编码序列之后 ,得到 2种构建的重组载体 ,在重... 从橄榄绿链霉菌StreptomycesolivaceoviridisA1中克隆出木聚糖酶基因xynA ,将带与不带原基因信号肽编码序列的xynA分别以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌表达载体pET 2 2b(+)上的pellB信号肽编码序列之后 ,得到 2种构建的重组载体 ,在重组大肠杆菌中木聚糖酶得到了表达 ,表达产物具有生物活性。进一步将不带原基因信号肽编码序列的xynA插入到毕赤酵母转移载体pPIC9中 ,转化毕赤酵母得到重组子 ,在重组子中木聚糖酶基因得到了高效分泌表达 ,在摇床培养水平上的表达量达到 2 0 0mg L ,且表达产物具有生物学活性。 展开更多
关键词 链霉素 木聚糖酶基因 xynA 大肠杆菌 毕赤酵母 高效表达
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弗氏链霉菌丝氨酸蛋白酶基因的克隆及表达 被引量：13
2
作者 李江 石鹏君 +5 位作者 张王照 韩晓宇 徐玲玲 张会图 姚斌 范云六 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期782-788,共7页
从一株具有极强的降解羽毛能力的弗氏链霉菌菌株(Streptomycesfradiaevar.k11)中纯化得到了一种丝氨酸蛋白酶SFP2。经蛋白测序,得到部分氨基酸序列,设计简并引物,PCR扩增得到部分基因序列,通过构建基因文库,获得了包括信号肽序列在内的... 从一株具有极强的降解羽毛能力的弗氏链霉菌菌株(Streptomycesfradiaevar.k11)中纯化得到了一种丝氨酸蛋白酶SFP2。经蛋白测序,得到部分氨基酸序列,设计简并引物,PCR扩增得到部分基因序列,通过构建基因文库,获得了包括信号肽序列在内的完整的基因sfp2(EMBL收录号AJ784940),开放阅读框全长924bp,包括114bp的信号肽编码序列和810bp的酶原编码序列,其中成熟蛋白编码基因长576bp,编码191个氨基酸,理论分子量为19.112kD。酶原编码基因和成熟蛋白编码基因均在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中得到了表达,酶原编码基因表达产物具有正常的生物学活性,证明了克隆基因的生物学功能。 展开更多
关键词 弗氏链霉菌 丝氨酸蛋白酶 基因克隆 表达
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木聚糖酶XYNB分子中折叠股B1和B2间的疏水作用对酶热稳定性的影响 被引量：10
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作者 杨浩萌 姚斌 +6 位作者 罗会颖 张王照 王亚茹 袁铁铮 柏映国 伍宁丰 范云六 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期414-419,共6页
对来源于Streptomycesolivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB进行同源建模,并结合嗜热木聚糖酶氮末端芳香族氨基酸疏水作用的结构分析,设计了XYNB的T11Y定点突变,观察XYNB分子中折叠股B1和B2的疏水作用对酶的热稳定性的影响。将突变酶XYN... 对来源于Streptomycesolivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB进行同源建模,并结合嗜热木聚糖酶氮末端芳香族氨基酸疏水作用的结构分析,设计了XYNB的T11Y定点突变,观察XYNB分子中折叠股B1和B2的疏水作用对酶的热稳定性的影响。将突变酶XYNB′在毕赤酵母中表达,表达的XYNB′经纯化后与原酶XYNB(同样经毕赤酵母表达后纯化)进行酶学性质比较,结果表明,XYNB′的耐热性比XYNB有明显的提高,但最适温度与原酶一样为6 0℃。另外,XYNB′的最适pH、Km值及比活性均有一定的改变。实验证实了木聚糖酶XYNB的氮端芳香族氨基酸之间的疏水相互作用与其热稳定性相关,为进一步的结构与功能研究提供了优良的基因材料。 展开更多
关键词 木聚糖酶XYNB 定点突变 热稳定性
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具有高比活性的新木聚糖酶XYNB的酶学性质研究及其编码基因的克隆和表达 被引量：4
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作者 张红莲 姚斌 +2 位作者 王亚茹 张王照 袁铁铮 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期364-368,共5页
纯化了橄榄绿链霉菌Al产生的胞外木聚糖酶XYNB,并对其酶学性质进行了测定,XYNB具有优良的酶学性质,最适pH为5.2,最适温度为60℃,比活性高达2869.78 U/mg,对金属离子及EDTA和SDS等具有较好的抗性,根据木聚糖酶成熟蛋白N端氨基酸序列测序... 纯化了橄榄绿链霉菌Al产生的胞外木聚糖酶XYNB,并对其酶学性质进行了测定,XYNB具有优良的酶学性质,最适pH为5.2,最适温度为60℃,比活性高达2869.78 U/mg,对金属离子及EDTA和SDS等具有较好的抗性,根据木聚糖酶成熟蛋白N端氨基酸序列测序结果设计引物,克隆了此酶的成熟蛋白编码基因xynB,基因全长576 bp,(G+C)含量为64.3％,编码191个氦基酸,理论分子量为20.839kD,是一种新的木聚糖酶基因.构建了xynB表达载体并在大肠杆菌中得到了表达,表达产物具有正常的生物学活性. 展开更多
关键词 比活性 木聚糖酶 XYNB 酶学性质 编码基因 橄榄绿链霉菌A1 基因克隆 基因表达
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饲用木聚糖酶的研究进展 被引量：6
5
作者 张王照 王亚茹 杨浩萌 《饲料广角》 2005年第15期27-28,30,共3页
关键词 木聚糖酶 饲料添加剂 分子生物学 耐热性 最适PH值 基因工程
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