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低表达LATS1通过抑制Hippo信号通路促进间充质干细胞的分化增殖和迁移 被引量：11
1
作者 李朗 董亮 +5 位作者 惠姣洁 高飞 王秋卉 杨岚 张江茜 严洁 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期731-737,共7页
目的 探讨低表达大肿瘤抑制因子1（LATS1）基因抑制Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞（mMSCs）分化、增殖和迁移能力的影响.方法 将C57BL/6小鼠mMSCs分为正常对照组（MSC组）、空载体对照组（MSC-GFP组）、过表达LATS1实验组（M... 目的 探讨低表达大肿瘤抑制因子1（LATS1）基因抑制Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞（mMSCs）分化、增殖和迁移能力的影响.方法 将C57BL/6小鼠mMSCs分为正常对照组（MSC组）、空载体对照组（MSC-GFP组）、过表达LATS1实验组（MSC-LATS1组）、空干扰病毒转染组（MSC-shControl组）、转染干扰LATS1病毒组（MSC-shLATS1组）,分别构建过表达或低表达LATS1的慢病毒载体及其空载体对照并转染mMSCs.用荧光显微镜和流式细胞仪评估慢病毒转染效率;用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LATS1 mRNA表达,用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测LATS1、磷酸化YAP（p-YAP）、14-3-3蛋白表达,以明确LATS1对Hippo信号通路的调控作用;用茜素红、油红O染色及qRT-PCR检测成骨转录因子Runx2、OSX及成脂转录因子C/EBPα、PPAR-γ的mRNA表达,以明确Hippo信号通路对mMSCs成骨及成脂分化的影响;用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测mMSCs的数量,以评估Hippo信号通路对mMSCs增殖能力的影响;用划痕实验及Transwell小室迁移实验评估Hippo信号通路对mMSCs水平及垂直迁移能力的影响.结果 慢病毒载体转染mMSCs效率可达94.74%-96.10%.与MSC-GFP组比较,MSC-LATS1可激活Hippo信号通路〔LATS1 mRNA（2-ΔΔCT）：4.37±0.21比1.20±0.04,LATS1蛋白（灰度值）：2.21±0.06比1.09±0.10,p-YAP/YAP蛋白比值（灰度值）：1.51±0.13比0.98±0.05,14-3-3蛋白（灰度值）：1.92±0.18比1.10±0.09,均P〈0.05〕,抑制mMSCs成骨及成脂分化〔钙质沉积（A值）：0.13±0.02比0.40±0.03,Runx2 mRNA（2-ΔΔCT）：0.51±0.02比0.98±0.09,OSX mRNA（2-ΔΔCT）：0.41±0.04比1.04±0.09,脂质沉积（A值）：0.10±0.02比0.25±0.03,C/EBPαmRNA（2-ΔΔCT）：0.33±0.03比1.11±0.09,PPAR-γmRNA（2-ΔΔCT）：0.29±0.02比1.04±0.10,均P〈0.05〕,抑制4-7 d的MSC增殖及mMSCs水平和垂直迁移能力〔划痕弥合程度：（18.65±3.53）%比（40.29±1.87� 展开更多
关键词 LATS1基因 Hippo信号通路 间充质干细胞 分化 增殖 迁移
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中性粒细胞功能在脓毒症肝损伤中的变化及其对预后的影响:一项前瞻性观察性研究 被引量：8
2
作者 高飞 惠姣洁 +3 位作者 杨岚 张江茜 于璇 陆士奇 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1324-1329,共6页
目的探讨脓毒症肝损伤患者外周血中性粒细胞(PMN)功能变化及其对预后评价的指导作用。方法采用前瞻性观察性研究方法,选择2019年3月至8月南京医科大学附属无锡人民医院重症医学科(ICU)收治的符合脓毒症3.0诊断标准的患者作为研究对象,... 目的探讨脓毒症肝损伤患者外周血中性粒细胞(PMN)功能变化及其对预后评价的指导作用。方法采用前瞻性观察性研究方法,选择2019年3月至8月南京医科大学附属无锡人民医院重症医学科(ICU)收治的符合脓毒症3.0诊断标准的患者作为研究对象,根据肝损伤诊断标准将患者分为脓毒症非肝损伤组和脓毒症肝损伤组;选择同期住院的非脓毒症患者作为非脓毒症组;选择本院体检中心健康体检者作为健康对照组。记录患者入ICU时及健康体检者体检当天的性别、年龄、白细胞计数(WBC)、PMN、降钙素原(PCT),计算患者急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)和序贯器官衰竭评分(SOFA);记录患者28 d病死率;取外周静脉血,使用PicoGreen荧光染料定量检测血浆中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)水平,以游离DNA(cf-DNA/NETs)水平表示;采用细胞免疫荧光染色进行NETs定性检测。提取健康对照组、脓毒症非肝损伤组、脓毒症肝损伤组PMN并进行体外培养,使用PicoGreen荧光染料定量检测细胞上清cf-DNA/NETs水平。根据脓毒症肝损伤患者28 d临床转归分组,绘制受试者工作特征曲线(ROC),并计算ROC曲线下面积(AUC),分析外周血NETs水平对脓毒症肝损伤患者预后的预测价值。结果最终纳入脓毒症非肝损伤患者21例,脓毒症肝损伤患者15例,非脓毒症患者20例,健康体检者20例。4组间性别、年龄差异均无统计学意义,说明各组一般资料均衡,具有可比性。脓毒症非肝损伤与肝损伤组外周血cf-DNA/NETs水平及WBC、PMN均明显高于健康对照组和非脓毒症组,PCT、APACHEⅡ评分、SOFA评分、28 d病死率均明显高于非脓毒症组,且脓毒症肝损伤组外周血cf-DNA/NETs水平及PCT、28 d病死率均明显高于脓毒症非肝损伤组〔cf-DNA/NETs(μg/L):481.60±275.86比169.76±57.05,PCT(μg/L):11.29(1.79,67.10)比1.11(0.19,4.09),28 d病死率:73.3%(11/15)比38.1%(8/21),均P<0.05〕。体外� 展开更多
关键词 中性粒细胞胞外诱捕网 脓毒症 肝损伤 预后
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脓毒症患者免疫功能抑制状态的研究进展 被引量：7
3
作者 张江茜 廖雪莲 康焰 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期769-772,共4页
脓毒症是感染导致的全身炎症反应综合征（SIRS）。据估计，全球每年约有2000万例脓毒症患者，即使在发达的欧美国家，严重脓毒症和脓毒性休克患者的病死率仍高达30％～40％。传统理论认为，机体“细胞因子风暴”所致失控性过度炎症反应... 脓毒症是感染导致的全身炎症反应综合征（SIRS）。据估计，全球每年约有2000万例脓毒症患者，即使在发达的欧美国家，严重脓毒症和脓毒性休克患者的病死率仍高达30％～40％。传统理论认为，机体“细胞因子风暴”所致失控性过度炎症反应导致了器官组织损伤。基于此，很多临床研究观察了如糖皮质激素、抗肿瘤坏死因子（TNF）和抗白细胞介素-1（IL-1）抗体等对脓毒症的治疗作用，然而，各类抗炎试剂并未显示出益处。 展开更多
关键词 脓毒症患者 抑制状态 免疫功能 全身炎症反应综合征 抗肿瘤坏死因子 器官组织损伤 过度炎症反应 细胞因子风暴
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Hippo信号通路调控间充质干细胞抗氧化应激损伤能力的实验研究 被引量：4
4
作者 李朗 董亮 +5 位作者 惠姣洁 高飞 王秋卉 杨岚 张江茜 严洁 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期296-301,共6页
目的探讨Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞（mMSCs）抗氧化应激损伤的调控作用。方法直接贴壁法分离C57BL/6小鼠原代mMSCs，通过流式细胞仪检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化并进行鉴定。通过2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）或Hippo... 目的探讨Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞（mMSCs）抗氧化应激损伤的调控作用。方法直接贴壁法分离C57BL/6小鼠原代mMSCs，通过流式细胞仪检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化并进行鉴定。通过2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）或Hippo信号通路高效特异选择性抑制剂XMU-MP-1调节Hippo信号通路。通过不同浓度双氧水（H2O2）共培养来模拟氧化应激损伤，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法评估mMSCs存活情况；蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测mMSCs中Hippo信号通路关键组分表达；Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果2-DG呈浓度依赖性地激活Hippo信号通路，其浓度为5 mmol/L时效应最明显〔与空白对照组比较，大肿瘤抑制基因1（LATS1）蛋白（灰度值）：2.33±0.25比0.98±0.03，磷酸化Yes相关蛋白（p-YAP）/YAP蛋白比值（灰度值）：2.30±0.35比1.01±0.05，14-3-3蛋白（灰度值）：2.19±0.40比0.99±0.04，均P〈0.05〕；100 nmol/L的XMU-MP-1可抑制Hippo信号通路活化〔与空白对照组比较，LATS1蛋白（灰度值）：0.69±0.10比0.98±0.03，p-YAP/YAP蛋白比值（灰度值）：0.65±0.06比1.01±0.05，14-3-3蛋白（灰度值）：0.75±0.11比0.99±0.04，均P〈0.05〕。H2O2呈浓度依赖性抑制mMSCs存活，0.1 mmol/L是其抑制mMSCs存活的最低浓度〔与空白对照组比较，mMSCs存活率：（81.25±11.85）%比（100.44±12.39）%，P〈0.05〕。H2O2呈浓度依赖性抑制Hippo信号通路，0.1 mmol/L是其抑制Hippo信号通路的最低浓度〔与空白对照组比较，LATS1蛋白（灰度值）：0.75±0.06比1.01±0.09，p-YAP/YAP蛋白比值（灰度值）：0.69±0.05比0.98±0.05，均P〈0.05〕，并可导致Bcl-2/Bax比值下降（灰度值：0.48±0.18比1.06±0.09，P〈0.05）。与0.1 mmol/L H2O2组比较，5 mmol/L的2-DG预处理可以通过活化Hippo信号通路〔LATS1蛋白（灰度值）：0.95±0.05比0.64±0.06，p-YAP/YAP蛋白� 展开更多
关键词 Hippo信号通路 间充质干细胞 抗氧化应激损伤 凋亡相关蛋白 Bcl-2 Bax
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mNUTRIC评分在老年重症肺炎病人营养风险筛查及预后分析中的应用 被引量：3
5
作者 陈意喆 高飞 +5 位作者 杨挺 王秋卉 梁锋鸣 严正 许红阳 张江茜 《肠外与肠内营养》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期263-267,273,共6页
目的:利用改良危重症营养风险(mNUTRIC)评分对老年重症肺炎病人进行营养风险筛查,并分析其与临床预后之间的关联。方法:回顾性分析南京医科大学附属无锡人民医院重症医学科(ICU)收治的68例老年重症肺炎病人的相关临床资料。采用mNUTRIC... 目的:利用改良危重症营养风险(mNUTRIC)评分对老年重症肺炎病人进行营养风险筛查,并分析其与临床预后之间的关联。方法:回顾性分析南京医科大学附属无锡人民医院重症医学科(ICU)收治的68例老年重症肺炎病人的相关临床资料。采用mNUTRIC评分对病人进行营养风险评估,并将病人分为高营养风险组(≥5分)和低营养风险组(<5分),分析比较两组病人相关指标的差异,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价mNUTRIC评分对病人预后的判断价值,Logistic回归分析影响病人不良预后的相关因素。结果:老年重症肺炎病人的mNUTRIC评分为5.0(3.3,6.0),其中44例(64.7%)病人存在高营养风险;高营养风险组和低营养风险组的mNUTRIC评分分别为6.0(5.3,7.0)和3.0(3.0,4.0)。高营养风险组在死亡和机械通气时间上与低营养风险组存在显著差异(P<0.05)。mNUTRIC评分预测病人死亡的ROC曲线下面积为0.803(95%CI:0.698~0.909,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示mNUTRIC评分(OR=2.081,95%CI:1.171~3.698,P=0.013)是老年重症肺炎病人死亡的独立危险因素。结论:老年重症肺炎病人可采用mNUTRIC评分进行营养风险筛查,筛查结果可用于判断病人的临床预后,或能有助于临床营养治疗。 展开更多
关键词 mNUTRIC评分 营养风险筛查 老年 重症肺炎 预后
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联合床边早期革兰染色涂片、前降钙素对ICU呼吸机相关性肺炎患者预后的影响
6
作者 高飞 惠姣洁 +2 位作者 杨岚 张江茜 郭赟 《广东医学》 CAS 2019年第22期3113-3116,共4页
目的探讨联合床边快速革兰染色涂片、前降钙素(PCT)对ICU呼吸机相关性肺炎(VAP)患者预后的影响。方法前瞻性选取80例符合VAP诊断标准的患者,根据有无进行床边早期革兰染色将患者分为两组。观察组(40例)通过支气管镜取患者病变侧肺的下... 目的探讨联合床边快速革兰染色涂片、前降钙素(PCT)对ICU呼吸机相关性肺炎(VAP)患者预后的影响。方法前瞻性选取80例符合VAP诊断标准的患者,根据有无进行床边早期革兰染色将患者分为两组。观察组(40例)通过支气管镜取患者病变侧肺的下呼吸道分泌物,采用早期(2 h时内)快速革兰染色涂片,根据染色结果选择针对性的抗生素;对照组(40例)经验性使用抗生素。所有患者都在使用抗生素前均院内送检标本,包括痰培养及药敏、PCT等炎症指标。统计所有患者的28 d病死率、体温下降时间、机械通气时间、ICU住院时间、PCT变化(观察第1、3、5天)等。结果(1)观察组与对照组相比,患者体温下降时间、住院时间、机械通气时间、PCT均下降明显,两者之间差异有统计学意义(P<0.05);(2)早期革兰染色涂片与送检痰培养结果符合率较高;(3)观察组与对照组相比,患者28 d病死率更低,28 d累积生存率更高,两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论联合早期革兰染色涂片、PCT指导初始抗生素使用能够较经验用药改善VAP患者的预后。 展开更多
关键词 革兰染色 前降钙素 呼吸机相关性肺炎 预后
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调控Hippo信号通路对间充质干细胞氧化应激耐受能力的影响
7
作者 董亮 李朗 +5 位作者 惠姣洁 高飞 王秋卉 杨岚 张江茜 严洁 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期414-420,I0001,共8页
目的 探讨调控Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞（mMSCs）氧化应激耐受能力的影响.方法 直接贴壁法分离C57BL/6小鼠原代mMSCs,通过流式细胞学检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化进行鉴定,采用非接触共培养诱导其向ATⅡ细胞分化... 目的 探讨调控Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞（mMSCs）氧化应激耐受能力的影响.方法 直接贴壁法分离C57BL/6小鼠原代mMSCs,通过流式细胞学检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化进行鉴定,采用非接触共培养诱导其向ATⅡ细胞分化;通过2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）及XMU-MP-1调节Hippo信号通路,根据不同浓度的双氧水（H2O2）共培养来模拟氧化应激损伤.应用MTT法评估H2O2诱导氧化应激损伤对mMSCs存活的影响;Western blot法检测mMSCs中Hippo信号通路关键组分,评估H2O2诱导氧化应激损伤对Hippo信号通路的影响;同时应用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达,评估Hippo信号通路调控mMSCs氧化应激耐受能力的机制.结果 2-DG呈浓度依赖性的激活Hippo信号通路,而通过XMU-MP-1可抑制Hippo信号通路活化.H2O2能导致mMSCs损伤和抑制其Hippo信号通路的活性,凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达比例下调是导致mMSCs损伤的可能机制;而活化Hippo信号通路能通过上调Bcl-2/Bax表达比例,增强mMSCs氧化应激耐受能力;通过抑制Hippo信号通路下调Bcl-2/Bax表达比例,减弱mMSCs氧化应激耐受和存活能力.结论 Hippo信号通路可通过调控凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达比例,影响mMSCs的存活和氧化应激耐受能力. 展开更多
关键词 Hippo信号通路 间充质干细胞(mMSCs) 氧化应激耐受 凋亡相关蛋白 BCL-2/BAX
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