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三重实时荧光RT-PCR检测三种鱼类弹状病毒的研究 被引量：11
1
作者 许建明 段向英 +2 位作者 张念之 蒋一男 张利峰 《检验检疫科学》 2009年第1期5-10,共6页
鱼传染性造血器官坏死病病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus IHNV)、鱼病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus VHSV)和鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus SVCV)是同属弹状病毒科(Rhabdov... 鱼传染性造血器官坏死病病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus IHNV)、鱼病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus VHSV)和鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus SVCV)是同属弹状病毒科(Rhabdoviridae)的3种鱼类病毒,也是影响水产养殖业的3种重要病毒。通过对这3种病毒基因序列的分析,在病毒基因的高保守区域,设计了3条分别针对这3种病毒的Taqman MGB探针,并选择3种无相互干扰的荧光基团进行标记。以此为基础建立针对该3种病毒的三重实时荧光RT-PCR的检测方法。通过反应条件的优化,该三重实时荧光RT-PCR最低可检测至102拷贝/反应的病毒量。同时,该方法还对病毒混合感染EPC细胞(Epithelioma papulosum cyprini)和攻毒斑马鱼进行了检测。实验结果表明,该方法是一种特异、灵敏、高效的病毒检测方法。 展开更多
关键词 IHNV VHSV SVCV TAQMAN MGB探针 三重实时荧光RT-PCR
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Taqman MGB探针快速定量检测VHSV方法的研究 被引量：6
2
作者 许建明 张念之 +2 位作者 蒋一男 张利峰 夏春 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期208-213,共6页
为建立准确实时地定量检测病毒性出血性败血症病毒(VHSV),在VHSV-N基因保守区设计了Taqman MGB探针与引物对,随后,采用体外转录技术获得了VHSV-N基因RNA,并以此为绝对定量标准品,建立了绝对定量(AQ)检测VHSV的实时荧光RT-PCR法(AQ-RT-PC... 为建立准确实时地定量检测病毒性出血性败血症病毒(VHSV),在VHSV-N基因保守区设计了Taqman MGB探针与引物对,随后,采用体外转录技术获得了VHSV-N基因RNA,并以此为绝对定量标准品,建立了绝对定量(AQ)检测VHSV的实时荧光RT-PCR法(AQ-RT-PCR方法),并与世界动物卫生组织(OIE)推荐的普通RT-PCR法进行了比较。此荧光RT-PCR法特异性好,与其他鱼类弹状病毒无交叉反应。检测线性范围为10^(10)～10~2拷贝/反应,灵法度达10~2拷贝/反应。此检测灵敏度比OIE推举的RT-PCR法高出5个数量级,比嵌套RT-PCR高出1个数量级。此法是出入境检疫VHSV的有效方法。 展开更多
关键词 病毒性出血性败血症病毒(VHSV) TAQMAN MGB探针 荧光RT—PCR法 定量检测
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鸡MHC分子限制性禽流感病毒CD8^(+)T细胞表位研究进展
3
作者 黄诗悦 张念之 孙怡朋 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期132-142,共11页
禽流感是威胁家禽养殖业和人类公共卫生安全的重要动物呼吸道疾病。疫苗接种是防控禽流感的有效手段,传统灭活疫苗主要通过诱导体液免疫产生针对病毒表面蛋白的中和抗体来抑制病毒复制。然而,由于病毒抗原表位频繁变异,使得疫苗株与流... 禽流感是威胁家禽养殖业和人类公共卫生安全的重要动物呼吸道疾病。疫苗接种是防控禽流感的有效手段,传统灭活疫苗主要通过诱导体液免疫产生针对病毒表面蛋白的中和抗体来抑制病毒复制。然而,由于病毒抗原表位频繁变异,使得疫苗株与流行株不匹配,且部分禽流感病毒单纯依靠体液免疫无法达到清除性免疫。细胞免疫是抵抗病毒感染的重要免疫反应,MHCⅠ分子递呈病毒T细胞表位是激活CD8^(+)T细胞免疫应答的关键环节,了解鸡MHCⅠ分子递呈的具有免疫活性的CTL表位有助于新型疫苗的设计及其细胞免疫效果评价。目前已鉴定的鸡MHCⅠ递呈禽流感病毒CTL表位数据较少,难以确定关键的免疫显性表位。并且,鸡MHCⅠ分子具有高度多态性,不同类型鸡MHCⅠ分子结构存在细微差异,导致其对病毒抗原有不同的结合偏好,进一步加大了鸡CTL表位的鉴定难度。文章综述了鸡MHC分子特征、MHCⅠ分子对禽流感病毒的重要性、现有T细胞表位研究方法及应用,为鸡MHCⅠ分子限制性T细胞表位的鉴定方法及禽流感表位疫苗的研发设计提供理论依据。 展开更多
关键词 禽流感病毒 鸡MHC分子 T细胞表位 疫苗
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北京鸭CD8α分子克隆与表达及其多克隆抗体制备 被引量：1
4
作者 廖定为 唐秀山 +2 位作者 蒋一男 张念之 夏春 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第6期5-7,共3页
为了探讨鸭CTL免疫与病毒关系,本文用PCR技术从鸭cDNA文库中克隆了其CD8α基因(DuCD8α)。将DuCD8α成熟肽cDNA插入表达载体pQE30、构建了E.coliJM109(pQE30/DuCD8α)原核表达系。经诱导表达、蛋白纯化,制备了鼠抗DuCD8α多克隆抗体。... 为了探讨鸭CTL免疫与病毒关系,本文用PCR技术从鸭cDNA文库中克隆了其CD8α基因(DuCD8α)。将DuCD8α成熟肽cDNA插入表达载体pQE30、构建了E.coliJM109(pQE30/DuCD8α)原核表达系。经诱导表达、蛋白纯化,制备了鼠抗DuCD8α多克隆抗体。结果表明DuCD8α成熟肽长645 bp,编码214个氨基酸。与已报道的DuCD8α在氨基酸水平上的同源性高达99.0%。SDS-PAGE证实重组DuCD8α(rDuCD8α)在JM109工程菌中的表达量可达15%。纯化的rDuCD8α分子量为26 kDa。ELISA结果显示鼠抗rDuCD8α多克隆抗体效价为1∶1 280 000。 展开更多
关键词 北京鸭 CD8Α 表达 抗体
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斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)MHC Ⅱα基因的克隆及表达分析 被引量：1
5
作者 蔡佳 李楠 +5 位作者 蒋一男 张念之 鲁义善 吴灶和 夏春 简纪常 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期102-110,共9页
利用RACE PCR克隆了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)主要组织相容性复合体Ⅱα(MHCⅡα)基因,并通过荧光定量PCR分析了该基因在健康鱼体中的组织分布以及在溶藻弧菌(Vibro alginolyticus)感染后在不同组织中的表达变化。斜带石斑鱼MH... 利用RACE PCR克隆了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)主要组织相容性复合体Ⅱα(MHCⅡα)基因,并通过荧光定量PCR分析了该基因在健康鱼体中的组织分布以及在溶藻弧菌(Vibro alginolyticus)感染后在不同组织中的表达变化。斜带石斑鱼MHCⅡαcDNA全长为2127bp,其中5'非翻译区为834bp,开放阅读框为714bp,3'非翻译区为579bp,编码237个氨基酸,其推导的氨基酸序列包含信号肽、α1及α2功能区、跨膜区、连接肽和胞浆区。荧光定量PCR结果表明,斜带石斑鱼MHCⅡα基因在鳃、头肾、肝、体肾、脑、脾和肠中表达量较高,在心脏、皮肤和肌肉中的表达量较低,并且溶藻弧菌(Vibro alginolyticus)感染后在脾、肠、头肾、和体肾中的表达显著上调,分别为对照组的9.5倍、4.3倍、3.4倍及1.9倍。上述结果表明斜带石斑鱼MHCⅡα在抗溶藻弧菌感染的免疫反应中可能发挥重要作用,这对进一步了解石斑鱼抗菌免疫反应具有参考意义。 展开更多
关键词 斜带石斑鱼 溶藻弧菌 MHC Ⅱα 克隆 表达分析
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