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用改进的TRAP法测定树木端粒酶活性 被引量：11
1
作者 王瑾瑜 张徐俞 +2 位作者 王雅群 卢存福 陈玉珍 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期682-686,共5页
TRAP法是一种常用的测定端粒酶活性的方法,但并不太适合测定木本植物的端粒酶活性.因此以油松针叶为实验材料,对TRAP法进行改进.参照前人的研究通过对比实验证明,在端粒酶提取过程中将PEG8000加入上清液,可获得高效的端粒酶.在此基础上,... TRAP法是一种常用的测定端粒酶活性的方法,但并不太适合测定木本植物的端粒酶活性.因此以油松针叶为实验材料,对TRAP法进行改进.参照前人的研究通过对比实验证明,在端粒酶提取过程中将PEG8000加入上清液,可获得高效的端粒酶.在此基础上,对PCR先导引选择TS、模板浓度选择100 ng,最终获得油松针叶高质量的端粒酶PCR产物.应用SYBR Green I替代银染液对电泳凝胶进行染色,获得条带清晰、重复性好的电泳结果.通过对油松针叶、银杏叶片、胡杨愈伤组织、沙冬青悬浮细胞等4种木本植物实验材料进行测定,证明该改进的技术体系可能是适合于木本植物端粒酶活性测定的稳定的、灵敏度高的可行方法. 展开更多
关键词 树木 端粒酶活性 TRAP SYBR Green I染色
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盐胁迫下沙冬青细胞端粒酶活性的变化与DNA稳定性的关系 被引量：9
2
作者 张徐俞 王瑾瑜 +2 位作者 郑广顺 张俊琦 卢存福 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期134-138,共5页
沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)是亚洲中部荒漠地区的常绿阔叶灌木,是古老的第三纪孑遗植物,具有极强的抗逆能力。旨在探究盐胁迫下沙冬青细胞端粒酶活性变化与染色体DNA稳定性的关系。结果表明,在100 mmol/L NaCl的低浓度盐胁迫处... 沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)是亚洲中部荒漠地区的常绿阔叶灌木,是古老的第三纪孑遗植物,具有极强的抗逆能力。旨在探究盐胁迫下沙冬青细胞端粒酶活性变化与染色体DNA稳定性的关系。结果表明,在100 mmol/L NaCl的低浓度盐胁迫处理下,随着处理时间的增加,端粒酶活性没有增加,未出现明显的DNA降解现象;当在500 mmol/L高浓度盐胁迫时,处理的初期端粒酶活性迅速的增加,但随着处理时间的延长,端粒酶活性下降,此时DNA未明显降解;当移除NaCl胁迫,端粒酶活性增加1.4倍,DNA保持稳定。因此推测,在盐胁迫下,沙冬青细胞端粒酶活性的维持对避免细胞遭受不可逆损伤,保持染色体DNA稳定性具有一定的作用。 展开更多
关键词 沙冬青 盐胁迫 端粒酶 DNA损伤
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天台铁线莲愈伤组织诱导研究 被引量：9
3
作者 张徐俞 蒋明 +2 位作者 陈彤 李温平 倪雪莉 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第3期65-66,共2页
以浙江省特有种天台铁线莲为材料,研究了不同培养基、不同外植体和不同激素配比对其愈伤组织诱导的影响。筛选结果表明:MS为诱导愈伤组织的最适培养基;嫩茎的出愈率高、愈伤组织体积大,为愈伤组织诱导的最佳外植体;诱导嫩茎产生愈伤组... 以浙江省特有种天台铁线莲为材料,研究了不同培养基、不同外植体和不同激素配比对其愈伤组织诱导的影响。筛选结果表明:MS为诱导愈伤组织的最适培养基;嫩茎的出愈率高、愈伤组织体积大,为愈伤组织诱导的最佳外植体;诱导嫩茎产生愈伤组织的最佳培养基为MS+BAP(苄氨基嘌呤)1.0 mg/L+NAA(萘乙酸)0.3 mg/L。 展开更多
关键词 天台铁线莲 愈伤组织 诱导 培养基 外植体 激素
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单叶铁线莲Clematis henryi愈伤组织诱导与植株再生 被引量：9
4
作者 黄余磊 吕枷薪 +3 位作者 蒋明 李温平 张徐俞 邹清成 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期731-735,共5页
以单叶铁线莲老枝、嫩茎、叶片和叶柄为外植体,在附加各种激素的MS培养基上进行诱导培养,以探讨愈伤组织诱导和植株再生的条件。结果表明,嫩茎为最佳外植体,适用于愈伤组织的诱导,在MS+1.2 mg.L-16-BA+0.35 mg.L-1NAA培养基中,嫩茎的出... 以单叶铁线莲老枝、嫩茎、叶片和叶柄为外植体,在附加各种激素的MS培养基上进行诱导培养,以探讨愈伤组织诱导和植株再生的条件。结果表明,嫩茎为最佳外植体,适用于愈伤组织的诱导,在MS+1.2 mg.L-16-BA+0.35 mg.L-1NAA培养基中,嫩茎的出愈率为88.6%;MS+4.0 mg.L-1KT+0.4 mg.L-1NAA为最佳不定芽诱导培养基,不定芽发生率为90.0%;MS+0.04 mg.L-1NAA为最佳生根培养基,生根率达95.0%。 展开更多
关键词 单叶铁线莲 嫩茎 愈伤组织 植株再生
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盐胁迫下胡杨和合作杨悬浮细胞端粒酶与抵御氧化损伤的关系 被引量：6
5
作者 吴晓飞 王瑾瑜 +3 位作者 张徐俞 孙玉萍 陈玉珍 卢存福 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期111-119,共9页
胡杨是我国西北干旱盐碱荒漠和戈壁地带唯一能形成森林的高大乔木树种,具有较高抗盐性。旨在探究盐胁迫下细胞端粒酶活性变化与氧化损伤的关系,以抗盐的胡杨和盐敏感的合作杨悬浮细胞为材料,检测了Na Cl盐胁迫条件下胡杨和合作杨细胞生... 胡杨是我国西北干旱盐碱荒漠和戈壁地带唯一能形成森林的高大乔木树种,具有较高抗盐性。旨在探究盐胁迫下细胞端粒酶活性变化与氧化损伤的关系,以抗盐的胡杨和盐敏感的合作杨悬浮细胞为材料,检测了Na Cl盐胁迫条件下胡杨和合作杨细胞生长、超氧阴离子自由基与丙二醛含量以及端粒酶活性的变化。结果表明,在正常生长条件下,胡杨和合作杨细胞符合S型生长曲线,且合作杨细胞的生长量高于胡杨细胞;在盐胁迫<100 mmol/L时胡杨在培养7 d内细胞活力高于对照(0 mmol/L),即使盐浓度达到300 mmol/L时15 d胡杨细胞依然保持一定的细胞活力,而较低盐处理对合作杨细胞活力影响即较大,当盐浓度达到300 mmol/L时合作杨在第5 d细胞活力已接近零;与合作杨相比,低浓度盐胁迫(100 mmol/L)使胡杨细胞内超氧阴离子自由基含量增加,端粒酶活性较高,而合作杨丙二醛含量显著增加;低浓度(<20 mmol/L)H2O2诱导了胡杨细胞端粒酶活性,合作杨的变化则不显著,但高浓度(>200 mmol/L)Na Cl和高浓度(50 mmol/L)H_2O_2可能造成了胡杨和合作杨氧化损伤,端粒酶活性降低。抗盐性强的胡杨细胞端粒酶对抵御细胞内氧化损伤具有一定作用。 展开更多
关键词 胡杨 合作杨 盐胁迫 端粒酶 氧化损伤
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青花菜查尔酮合成酶基因BoCHS的克隆、表达及序列分析 被引量：4
6
作者 彭礼琼 蒋明 +2 位作者 郭志平 章鲤静 张徐俞 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第8期1796-1800,共5页
根据NCBI数据库中发布的查尔酮合成酶基因序列设计PCR简并引物,以青花菜(Brassica oler-acea var.italica)子叶cDNA为材料,克隆到了青花菜查尔酮合成酶基因,基因命名为BoCHS,序列已提交到NCBI数据库,登录号为GU266209。该基因的编码区... 根据NCBI数据库中发布的查尔酮合成酶基因序列设计PCR简并引物,以青花菜(Brassica oler-acea var.italica)子叶cDNA为材料,克隆到了青花菜查尔酮合成酶基因,基因命名为BoCHS,序列已提交到NCBI数据库,登录号为GU266209。该基因的编码区全长为1182bp,编码393个氨基酸。序列比对结果表明,BoCHS基因编码的氨基酸序列与其他十字花科植物之间的同源性很高,仅存在个别氨基酸残基的差别。RT-PCR检测表明,经霜霉病菌(Hyaloperonospora parasitica)侵染后,子叶中BoCHS的表达量增加,其中以72h和96h的表达量最大。 展开更多
关键词 青花菜 查尔酮合成酶基因 序列分析 基因表达
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四种树木端粒酶活性与树龄及叶位的相关性 被引量：4
7
作者 张徐俞 王瑾瑜 +2 位作者 郑广顺 张俊琦 卢存福 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第B12期197-201,共5页
为探究端粒酶活性与树龄以及叶位是否存在一定的关系,应用TRAP法对不同年龄的油松、银杏、楸树、国槐叶片及油松和银杏同一棵树不同叶位的叶片进行端粒酶活性的测定。结果表明,油松端粒酶活性同树龄无明确的相关性,而楸树、国槐的端粒... 为探究端粒酶活性与树龄以及叶位是否存在一定的关系,应用TRAP法对不同年龄的油松、银杏、楸树、国槐叶片及油松和银杏同一棵树不同叶位的叶片进行端粒酶活性的测定。结果表明,油松端粒酶活性同树龄无明确的相关性,而楸树、国槐的端粒酶活性随着树龄增加而表现为增加的趋势。端粒酶活性与叶位相关,越靠近顶端的叶片端粒酶活性较高,而靠近下端的叶片端粒酶活性较低。 展开更多
关键词 树龄 端粒 端粒酶 叶位
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颐和园古柿树组织培养快繁体系的建立 被引量：2
8
作者 郑广顺 赵晓玉 +4 位作者 张徐俞 戴全胜 车晓航 陈玉珍 卢存福 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期89-94,共6页
以北京颐和园的古柿树当年新生的嫩芽切段为外植体进行组培快繁研究。结果表明,不定芽启动培养基为1/2MS+0.8 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5g/L PVP。将无菌苗转接到最适分化培养基(1/2MS+5.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+0.5g/L PVP)上,组培苗... 以北京颐和园的古柿树当年新生的嫩芽切段为外植体进行组培快繁研究。结果表明,不定芽启动培养基为1/2MS+0.8 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5g/L PVP。将无菌苗转接到最适分化培养基(1/2MS+5.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+0.5g/L PVP)上,组培苗分化效率较高,但小苗矮小。将分化较好的组培苗转接到壮苗培养基(1/2MS+2.0mg/L ZT+0.1mg/L IAA+0.5g/L PVP),待组培苗长至2～3cm转到生根培养基(1/2MS+0.6mg/L NAA+0.3mg/L IBA+0.5g/L PVP),暗培养9～10d后转接到生根培养基(1/2MS+0.5g/L PVP),生根率为30%。而将组培苗茎段预先用250mg/L的IBA或IAA浸泡2min,生根率可提高到40%。生根组培苗经炼苗后移栽成活率可达60%。 展开更多
关键词 颐和园 古柿树 茎段 组培快繁
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重组酶聚合酶扩增结合CRISPR-Cas12a快速检测十足目虹彩病毒1方法的建立 被引量：5
9
作者 张徐俞 黄俊 +6 位作者 杨稳 付媛媛 陈正伟 郑晓叶 朱凝瑜 李业 俞晓平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期4980-4988,共9页
【背景】十足目虹彩病毒1 (Decapod Iridescent Virus 1,DIV1)可感染南美白对虾、中国对虾和日本对虾等,是危害对虾养殖业的主要病毒之一。当前高效、快速、简便地检测对虾是否感染DIV1是减少其发生和危害的重要途径。【目的】将成簇的... 【背景】十足目虹彩病毒1 (Decapod Iridescent Virus 1,DIV1)可感染南美白对虾、中国对虾和日本对虾等,是危害对虾养殖业的主要病毒之一。当前高效、快速、简便地检测对虾是否感染DIV1是减少其发生和危害的重要途径。【目的】将成簇的规律间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)及其相关蛋白12a (CRISPR Associated Protein 12a,Cas12a),即CRISPR-Cas12a系统,与重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)技术相结合,建立快速检测DIV1的方法(RPA-Cas12a),并探讨该方法在实际样本检验中的应用价值。【方法】通过提取DIV1DNA,设计其RPA引物、crRNA及报告探针,优化并建立RPA结合CRISPR-Cas12a的快速检测方法,进一步分析该方法检测DIV1的灵敏度与特异性,并比较建立的方法与qPCR法的一致性。【结果】建立的RPA-Cas12a快速检测方法可在40min内实现对虾样本DNA中DIV1的检测,检测限为10 copies/reaction。用该方法分别对对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus,IHHNV)、虾肝肠胞虫(Enterocytozoon Hepatopenaei,EHP)及DIV1进行检测,结果仅DIV1发生特异性反应,而WSSV、IHHNV和EHP的检测结果均为阴性。采用RPA-Cas12a检测61份实际样本,结果均与qPCR检测法的阳性检出率一致。【结论】建立的RPA-Cas12a方法检测十足目虹彩病毒1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点,为十足目虹彩病毒1的快速检测提供了新的工具。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas12a 重组酶聚合酶扩增 十足目虹彩病毒1 快速检测
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