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PPM1A蛋白的表达纯化及鼠多克隆抗体制备研究 被引量：2
1
作者 吴淑坤 杨燕 +4 位作者 王宝菊 田拥军 张娥娟 张振华 杨东亮 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期503-506,共4页
目的表达、纯化PPM1A-His融合蛋白及制备鼠多克隆抗体。方法将pBEX1-PPM1A-His原核表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内进行诱导表达,用纯化的PPM1A-His融合蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,并用ELISA、免疫组化和免疫荧光检测抗体的... 目的表达、纯化PPM1A-His融合蛋白及制备鼠多克隆抗体。方法将pBEX1-PPM1A-His原核表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内进行诱导表达,用纯化的PPM1A-His融合蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,并用ELISA、免疫组化和免疫荧光检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功表达并纯化了PPM1A-His融合蛋白,纯化后纯度可达90%;ELISA法测定抗体效价为1∶100000;免疫组化和免疫荧光结果显示所制备的抗体可特异性检测肝和肝癌细胞的PPM1A。结论获得的PPM1A鼠多克隆抗体有较高的效价和特异性,为PPM1A在肝癌的相关研究打下了基础。 展开更多
关键词 PPM1A蛋白 多克隆抗体 肝癌
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PD-1／PD-L1抑制性通路在病毒性感染中的研究进展 被引量：2
2
作者 张娥娟 田拥军 +2 位作者 徐飓 陆蒙吉(审校) 杨东亮(审校) 《国际免疫学杂志》 CAS 2008年第4期279-283,共5页
杀伤性T细胞（CTL）是病毒感染过程中主要的效应细胞。在急性病毒性感染中，CTL细胞通过杀伤病毒感染的细胞，分泌抗病毒细胞因子从而有效清除病毒。而在慢性病毒感染过程中，病毒特异性CTL发生克隆耗竭，细胞数量少，细胞功能受损，分... 杀伤性T细胞（CTL）是病毒感染过程中主要的效应细胞。在急性病毒性感染中，CTL细胞通过杀伤病毒感染的细胞，分泌抗病毒细胞因子从而有效清除病毒。而在慢性病毒感染过程中，病毒特异性CTL发生克隆耗竭，细胞数量少，细胞功能受损，分泌细胞因子能力下降。目前证明，CD28家族成员Programmed Death-1（PD-1）是一种重要的细胞表面分子，能够抑制CTL细胞功能，参与外周免疫耐受，维持T细胞克隆耗竭，保护机体不受免疫病理损伤。在慢性病毒性感染中，T细胞表面的PD-1与其受体PD．L1／2结合后，传递抑制性信号，下调外周T细胞功能。阻断PD-1通路，能够重建CD8^＋T细胞功能，抑制病毒复制，促进病毒清除。因此，通过干扰PD-1／PD-L1抑制途径进行免疫调节，可能是处理慢性病毒感染性疾病的一个新方法。 展开更多
关键词 感染免疫 慢性病毒感染 PD-1
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截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白原核表达、多克隆抗体的制备和鉴定 被引量：2
3
作者 王超 田拥军 +5 位作者 张娥娟 吴洪坤 刘嘉 王宝菊 赵西平 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期467-470,共4页
目的：构建截短型鸭乙型肝炎病毒（DHBV）核心蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，制备多克隆抗体。方法：应用基因工程技术将编码截短型DHBV核心蛋白（DH-BcAg 1～214aa）的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内，在宿主菌Rosetta（... 目的：构建截短型鸭乙型肝炎病毒（DHBV）核心蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，制备多克隆抗体。方法：应用基因工程技术将编码截短型DHBV核心蛋白（DH-BcAg 1～214aa）的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内，在宿主菌Rosetta（DE3）pLacI内进行诱导表达，运用Ni-NTA方法纯化目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BALB／c小鼠制备多克隆抗体，并采用酶联免疫吸附实验（ELISA），Western blot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性。结果：成功地构建了含截短型DHBV核心区基因的质粒，并纯化得到了相对分子质量（Mr）约为28000的目的蛋白，用之免疫BALB／c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论：获得的重组截短型DHBV核心抗原纯度高，免疫反应性强；获得的多克隆抗体有较高的效价和较好的特异性，为DHBV的检测和研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 鸭乙型肝炎病毒 核心蛋白 原核表达载体 多克隆抗体
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截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备及初步应用
4
作者 王超 田拥军 +5 位作者 龚劲松 张娥娟 刘嘉 王宝菊 赵西平 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期740-742,共3页
目的:制备能与鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHB-cAg)特异性结合的单克隆抗体(mAb),使之能特异性地对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)进行检测。方法:以原核表达的截短型鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg1-214)免疫BALB/c小鼠后常规杂交瘤技术进行细胞融... 目的:制备能与鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHB-cAg)特异性结合的单克隆抗体(mAb),使之能特异性地对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)进行检测。方法:以原核表达的截短型鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg1-214)免疫BALB/c小鼠后常规杂交瘤技术进行细胞融合,有限稀释法克隆化,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组织化学(IHC)筛选、鉴定。结果:筛选出3株(3H4、4A11、5A12)能有效分泌抗鸭乙肝病毒核心抗原的杂交瘤细胞株。该mAb可用于ELISA、IHC和Westernblot研究。结论:获得了3株有效分泌抗核心抗原的mAb,可用于鸭乙肝病毒相关肝病组织与血清的检测。 展开更多
关键词 鸭乙型肝炎病毒 核心蛋白 单克隆抗体
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犬乳腺癌基因表达特征及肿瘤预后标志物分析
5
作者 谭杰仁 王晓明 +4 位作者 程旭 折志刚 张晓晶 李红良 张娥娟 《实验动物科学》 2023年第3期42-52,共11页
目的探索犬自发性乳腺癌的基因表达特征和预后标志物。方法从公共数据库获取多个犬乳腺癌转录组数据集,校正合并获得大样本量的整合数据集。通过生物信息学分析与疾病预后相关的基因聚类,筛选与预后不良相关的特征性基因并在细胞水平进... 目的探索犬自发性乳腺癌的基因表达特征和预后标志物。方法从公共数据库获取多个犬乳腺癌转录组数据集,校正合并获得大样本量的整合数据集。通过生物信息学分析与疾病预后相关的基因聚类,筛选与预后不良相关的特征性基因并在细胞水平进行验证。结果共识聚类分析获得的聚类3与犬乳腺癌的低生存率相关,其特征性基因主要富集于细胞增殖相关信号通路。经过单因素分析并与人类数据集提取交集基因,获得11个与乳腺癌预后不良相关的跨物种保守性关键基因。利用犬乳腺癌细胞系证实其中的ZBTB16和ABI3BP基因参与调节乳腺癌细胞增殖。结论成功获得一组保守性风险基因,可作为生物标志物用于犬自发性乳腺癌及犬乳腺癌动物模型的疾病分型和预后评估。 展开更多
关键词 乳腺癌 犬 动物模型 生物标志物 风险基因 预后
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