鸭新城疫病毒山东株的分离鉴定 被引量：18

1

作者 张太翔 王炳军 +6 位作者 王裕 田国华 田国宁 张金玲 韩光来 韩亮 张丽萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期148-151,共4页

笔者从病鸭体内分离到一株病毒,通过试验确定为新城疫病毒。参照世界动物卫生组织(OIE)规定的新城疫毒力判定的标准和方法,测定该分离株的1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉致病指数(IVPI)分别为1.79和2.45。采用已经发表的鸡... 笔者从病鸭体内分离到一株病毒,通过试验确定为新城疫病毒。参照世界动物卫生组织(OIE)规定的新城疫毒力判定的标准和方法,测定该分离株的1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉致病指数(IVPI)分别为1.79和2.45。采用已经发表的鸡新城疫病毒序列设计引物,应用RT-PCR技术扩增鸭源新城疫病毒的F基因,并将其克隆至载体上,然后进行了核苷酸序列、氨基酸序列测定,结果表明该分离株为新城疫强毒株。 展开更多

关键词 鸭源新城疫 分离鉴定 F基因 RT-PCR 序列分析

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猪流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：11

2

作者 张太翔 凌宗帅 +5 位作者 岳志芹 徐彪 梁成珠 刘文鹏 张焕海 张艺兵 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期181-184,共4页

本研究选取猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的NP基因序列设计引物和探针,建立了检测SIV的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有SIV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×108至2.0... 本研究选取猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的NP基因序列设计引物和探针,建立了检测SIV的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有SIV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×108至2.0×102拷贝/μL 7个数量级的范围内定量PCR有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为20个拷贝/μL。根据病毒拷贝数与Ct值的关系绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸都没有扩增反应。本研究建立的实时定量PCR方法,灵敏度高、特异性好,可以进行定量分析,在猪流感的快速检测上具有重要意义。 展开更多

关键词 猪流感病毒 实时荧光定量PCR TAQMAN探针

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犬Ⅰ型腺病毒的分子生物学研究进展 被引量：6

3

作者 凌宗帅 温书坤 +1 位作者 刘友清 张太翔 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第8期34-35,共2页

关键词 犬腺病毒 分子生物学研究 Ⅰ型 败血性传染病 感染病例 传染性 易感性 分泌物 排泄物

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实时荧光定量PCR检测鸡传染性贫血病毒方法的建立 被引量：6

4

作者 张太翔 王炳军 +6 位作者 凌宗帅 李玉峰 高小博 田国宁 张金玲 韩亮 张丽萍 《中国动物检疫》 CAS 2009年第11期58-60,共3页

建立了Taqman实时荧光定量PCR方法检测鸡传染性贫血病毒(CAV)。选取CAV病毒的序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有CAV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×105～2.0×102个拷贝,4个数量级的... 建立了Taqman实时荧光定量PCR方法检测鸡传染性贫血病毒(CAV)。选取CAV病毒的序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有CAV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×105～2.0×102个拷贝,4个数量级的范围内定量PCR有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为200个拷贝。根据病毒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、禽白血病病毒和马立克病毒核酸都没有扩增反应。采用实时荧光定量PCR方法检测试验感染鸡的肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、法氏囊、泄殖腔棉拭子等样品,所有检测样品都有"S"型扩增曲线,且荧光信号值高。实时定量PCR检测CAV的方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,在禽病的快速检测上具有重要意义。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血 实时荧光定量PCR TAQMAN探针

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家禽和野鸟中高致病性禽流感的风险分析 被引量：7

5

作者 张太翔 李峰 +5 位作者 田国华 田国宁 张金玲 王炳军 韩亮 张丽萍 《中国动物检疫》 CAS 2009年第2期66-67,共2页

对高致病性禽流感(HPAI)H5N1亚型在野鸟中发生情况的调查结果进行风险分析,并将这种风险分析应用于家禽的综合监管,主要包括4个方面:早期预警、预防、检测和紧急行动。高致病性禽流感的风险分析重点在风险管理策略,为禽流感的彻底防控... 对高致病性禽流感(HPAI)H5N1亚型在野鸟中发生情况的调查结果进行风险分析,并将这种风险分析应用于家禽的综合监管,主要包括4个方面:早期预警、预防、检测和紧急行动。高致病性禽流感的风险分析重点在风险管理策略,为禽流感的彻底防控提供风险依据。 展开更多

关键词 高致病性禽流感 风险分析

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实时荧光定量PCR构建奶牛生殖系统PrP基因标准品质粒和标准曲线 被引量：7

6

作者 张太翔 宁章勇 +3 位作者 赵德明 周向梅 杨建民 尹晓敏 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期1-4,共4页

为阐释PrP基因在奶牛生殖系统的正常表达和正常的生理功能,以及为确定生殖系统在疯牛病垂直传播中的地位和其分子机理奠定基础,采用实时荧光定量RT-PCR的方法构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线。对含有目的基因质粒的EcoR... 为阐释PrP基因在奶牛生殖系统的正常表达和正常的生理功能,以及为确定生殖系统在疯牛病垂直传播中的地位和其分子机理奠定基础,采用实时荧光定量RT-PCR的方法构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线。对含有目的基因质粒的EcoRⅠ酶切鉴定表明所插入的片段大小为302 bp,与预期的结果一致。所构建的标准曲线的相关系数r2=0.999,系统生成的回归方程为y=-0.29x+9.48,说明成功构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线,为研究PrP基因在奶牛其他组织的定量奠定基础。 展开更多

关键词 PRP RT—PCR 实时荧光定量PCR 标准曲线 奶牛生殖系统 BSE

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鸭新城疫病毒强毒株的分离和初步鉴定 被引量：6

7

作者 张太翔 田国宁 +5 位作者 张金玲 王炳军 田国华 韩亮 张丽萍 孙军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第9期35-37,共3页

关键词 新城疫病毒 雏鸭 强毒株 鉴定 分离 发病死亡 绿色稀粪 神经症状

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Ⅰ型鸭肝炎病毒PCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：6

8

作者 孙涛 肖西志 +4 位作者 徐彪 梁成珠 凌宗帅 张太翔 岳志芹 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第7期13-18,共6页

用RT-PCR结合变性高效液相色谱技术(DHPLC),建立Ⅰ型鸭肝炎病毒的快速检测方法。根据获得的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV I)RNA聚合酶基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了1对引物,RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。以正常鸭... 用RT-PCR结合变性高效液相色谱技术(DHPLC),建立Ⅰ型鸭肝炎病毒的快速检测方法。根据获得的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV I)RNA聚合酶基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了1对引物,RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。以正常鸭胚尿囊液、正常鸭肝组织、鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅细小病毒、H5N1亚型禽流感病毒、鸭源新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒作对照进行特异性检测;将强毒株核酸稀释成不同梯度,做灵敏度检测;同时将该方法与病毒分离和荧光定量RT-PCR方法做人工感染样品的平行检测。结果表明,该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到4 pg的DHV I核酸模板,与荧光定量PCR检测结果一致。PCR-DHPLC对DHVⅠ强毒株人工感染鸭组织脏器的检测结果与荧光定量PCR检测结果的阳性检出率均为100%,对脑、脾、肺病料的检出率显著(P≤0.01)高于病毒分离,PCR-DHPLC与荧光RT-PCR检测方法相比较,两种方法检测DHVⅠ的符合率为100%。研究表明该方法可用于诊断Ⅰ型鸭肝炎病毒,是一种有效的新方法。 展开更多

关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 RT-PCR 变性高效液相色谱

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动物检疫实验室质量管理体系的建立和运行 被引量：5

9

作者 田国宁 张金玲 +1 位作者 张太翔 孙军 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第9期7-7,18,共2页

近年来。随着禽流感、疯牛病等重大动物疫病的暴发流行及国际贸易中对进出境动物检疫的具体要求增多，建立规范的动物检疫实验室成为有关行政部门及企业的迫切需求。为此，越来越多的动物检疫实验室已经或正在按照ISO／IEC17025标准建... 近年来。随着禽流感、疯牛病等重大动物疫病的暴发流行及国际贸易中对进出境动物检疫的具体要求增多，建立规范的动物检疫实验室成为有关行政部门及企业的迫切需求。为此，越来越多的动物检疫实验室已经或正在按照ISO／IEC17025标准建立质量管理体系，通过管理体系的建立和有效运行，对实验室的具体工作进行全方位控制，确保检测结果准确可靠。而在管理体系的建立和运行过程中，标准要素的要求该如何正确理解，动物检疫实验室有哪些需重点关注的问题，如何确保质量体系始终有效运行，本文结合自身质量管理体系的建立、运行中的做法，简述如下。 展开更多

关键词 质量管理体系 动物检疫 运行过程 实验室 ISO/IEC17025 重大动物疫病 标准建立 全方位控制

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欧洲型和美洲型PRRSV双重PCR检测方法的建立 被引量：5

10

作者 张松林 刘磊 +4 位作者 张太翔 马永彪 王文秀 肖娜 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第12期26-30,共5页

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。按照血清型和遗传性差异,PRRSV可划分为欧洲型和美洲型。欧洲型主要流行于欧洲地区,美洲型主要流行于美洲及亚太地区。我国每年从英国和法国... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。按照血清型和遗传性差异,PRRSV可划分为欧洲型和美洲型。欧洲型主要流行于欧洲地区,美洲型主要流行于美洲及亚太地区。我国每年从英国和法国等欧洲国家进口生猪占进口生猪总数的40%左右,但是在我国关于欧洲型PRRSV的报导却很少。为此,论文设计了2对能特异性扩增欧洲型和美洲型PRRSV的引物,建立并优化了可同时检测欧洲型和美洲型PRRSV的双重PCR方法。应用该方法能在3h内对样品进行检测并获得结果,本方法的建立对这两种病毒亚型的快速检测有十分重要的意义。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 欧洲型 美洲型 双重PCR

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禽肉产品中禽流感与新城疫多重PCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：5

11

作者 孙涛 徐彪 +4 位作者 朱来华 张太翔 梁成珠 凌宗帅 岳志芹 《中国动物检疫》 CAS 2011年第3期41-45,51,共6页

应用多重RT-PCR反应(mRT-PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立禽产品中禽流感病毒和新城疫病毒的快速检测方法。以禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单相RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立多重RT-PCR(mRT-PCR)同... 应用多重RT-PCR反应(mRT-PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立禽产品中禽流感病毒和新城疫病毒的快速检测方法。以禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单相RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立多重RT-PCR(mRT-PCR)同时检测禽流感和新城疫,其PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测分析后,检测极限分别达10-0.5ELD50/0.1mL和10-1.5ELD50/0.1mL。与普通凝胶电泳比较,敏感性高2个数量级。特异性试验表明,mRT-PCR-DHPLC仅检测到禽流感病毒与新城疫病毒,而对其他5种禽类病原体和SPF鸡胚尿囊液均未检测到阳性吸收峰。所建立的方法检测不同亚型禽流感病毒29株、不同来源及不同毒力的新城疫病毒16株,结果与实时荧光定量PCR检测结果完全一致;与病原分离法同时检测人工感染鸡的组织脏器,两种方法检测禽流感的符合率为94.4%(34/36),检测新城疫的符合率为95.4%(21/22)。病原分离法的检出率虽高于DHPLC方法,但经统计学分析两者差异不显著,两种方法同时对27份进口鸡胗样品与90份棉拭子样品进行检测,阴性符合率为100%,可适用于进出口禽肉产品的检测。 展开更多

关键词 禽流感病毒 新城疫病毒 多重RT-PCR 变性高效液相色谱

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次氯酸钠·酒精及穿串用竹签对鸡肉产品中呋喃西林代谢物检测结果的影响 被引量：5

12

作者 袁涛 田国华 +5 位作者 吴伟 宋殿亮 张太翔 王超 宫小明 管恩平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第30期18733-18735,共3页

对从屠宰到加工过程中与鸡皮串类产品密切接触的次氯酸钠、酒精及穿串用竹签进行相关试验,结果表明,次氯酸钠消毒剂的使用,会使次氯酸钠消毒剂残存在肉鸡皮肤中,从而对呋喃西林代谢物的检测造成干扰;经过后池的冲洗之后,对呋喃西林代谢... 对从屠宰到加工过程中与鸡皮串类产品密切接触的次氯酸钠、酒精及穿串用竹签进行相关试验,结果表明,次氯酸钠消毒剂的使用,会使次氯酸钠消毒剂残存在肉鸡皮肤中,从而对呋喃西林代谢物的检测造成干扰;经过后池的冲洗之后,对呋喃西林代谢物检测的干扰大大降低。在加工过程中使用的酒精和竹签,不是鸡肉产品中检出呋喃西林代谢物的干扰因素。 展开更多

关键词 次氯酸钠 酒精 竹签 呋喃西林

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流感病毒血凝素受体分子的研究进展 被引量：4

13

作者 张太翔 王炳军 +5 位作者 田国华 田国宁 张金玲 侯志高 韩亮 张丽萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期188-191,共4页

血凝素是流感病毒的重要糖蛋白,它的受体研究是目前国际上的热点。作者针对流感病毒的HA受体分子从分子学基础、种属特异性和致病性方面作一综述。

关键词 流感病毒 HA受体 种属特异性

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基于TaqMan探针的牛布氏杆菌实时荧光定量PCR的特异性鉴定 被引量：4

14

作者 张太翔 凌宗帅 +6 位作者 赵立娜 孙涛 徐彪 梁成珠 刘文鹏 孙军 张艺兵 《中国动物检疫》 CAS 2011年第11期29-31,共3页

根据牛布氏杆菌BM28保守序列设计引物和探针,建立了一种快速鉴定牛布氏杆菌的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示：5.0×105~5.0×101拷贝范围内定量PCR... 根据牛布氏杆菌BM28保守序列设计引物和探针,建立了一种快速鉴定牛布氏杆菌的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示：5.0×105~5.0×101拷贝范围内定量PCR均有＂S＂型扩增曲线,检测灵敏度为50拷贝每微升。本研究建立的实时荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性和重复性好、方便经济的特性,在牛布氏杆菌的检测与鉴定中具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 布氏杆菌 实时荧光定量PCR TAQMAN探针

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朊蛋白构象改变和种属突破机制的研究进展 被引量：4

15

作者 张太翔 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 2006年第11期68-71,共4页

异常朊蛋白(P rP sc)是一种可引起人和动物传染性脑退化病的不含核酸的蛋白因子。P rP c是一个正常的蛋白,有正常的生理功能,主要分布于神经元表面,属于肌醇磷脂锚蛋白类。由P rP c向P rP sc转变即产生疾病。作者简单介绍了正常和异常... 异常朊蛋白(P rP sc)是一种可引起人和动物传染性脑退化病的不含核酸的蛋白因子。P rP c是一个正常的蛋白,有正常的生理功能,主要分布于神经元表面,属于肌醇磷脂锚蛋白类。由P rP c向P rP sc转变即产生疾病。作者简单介绍了正常和异常朊蛋白结构、功能、构象改变及朊病毒种属屏障的研究进展,并提出了目前尚待研究的问题。 展开更多

关键词 朊蛋白 种属屏障 结构 构象改变

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我国肉鸡养殖企业动物福利现状调查及对策分析 被引量：4

16

作者 张太翔 王炳军 +3 位作者 刘文鹏 侯志高 李建军 刘云国 《中国动物检疫》 CAS 2010年第8期10-12,共3页

本文通过对山东省肉鸡养殖企业动物福利的现状进行调查,与动物福利的标准做比较,找出其中的差异,并针对差异提出符合我国国情的合理建议,为打破国外有关动物福利方面的技术壁垒奠定基础。

关键词 动物福利 肉鸡 调查

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焦磷酸测序技术在确证猪甲型H1N1流感病毒中的应用 被引量：4

17

作者 孙涛 张太翔 +4 位作者 徐彪 梁成珠 凌宗帅 朱来华 岳志芹 《中国动物检疫》 CAS 2011年第4期48-52,58,共6页

目的本研究旨在通过对猪甲型H1N1流感病毒进行序列信息分析的基础上,利用焦磷酸测序技术建立一种快速、简单地确证猪甲型H1N1流感病毒的方法。方法通过序列信息比对,设计H1HA和N1NA基因保守区段的扩增引物及测序引物。从感染猪甲型H1N1... 目的本研究旨在通过对猪甲型H1N1流感病毒进行序列信息分析的基础上,利用焦磷酸测序技术建立一种快速、简单地确证猪甲型H1N1流感病毒的方法。方法通过序列信息比对,设计H1HA和N1NA基因保守区段的扩增引物及测序引物。从感染猪甲型H1N1病毒的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,RT-PCR扩增目的基因片段,采用焦磷酸测序技术(PSQ)针对HA基因和NA基因进行保守核苷酸区段的测序分析。利用扩增引物与其他猪源病毒进行特异性试验,利用测序引物进行重复性试验。将该方法与病毒分离和荧光定量RT-PCR方法做临床样品的平行检测,并比较结果。结果通过序列信息比对寻找到表征H1N1亚型的核苷酸保守区段,经焦磷酸测序后能进一步确证毒株的序列信息为猪甲型H1N1流感病毒。特异性试验表明,不与其他猪源病毒发生交叉反应;重复性试验表明,重现性为100%。对221份临床样品检测表明,病毒分离鉴定与焦磷酸测序方法结果符合率为96.8%,与TaqMan荧光定量方法检测结果符合率90.3%。经统计学分析,焦磷酸测序确证与病毒分离鉴定在检测临床样品上,两者差异不显著。结论基于序列分析的焦磷酸测序技术可以作为进一步确证方法使用。 展开更多

关键词 猪甲型H1N1流感病毒 序列比对 焦磷酸测序

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次氯酸钠、酒精及穿串用竹签对鸡肉产品中呋喃西林代谢物检测结果的影响研究 被引量：4

18

作者 袁涛 田国华 +5 位作者 吴伟 宋殿亮 张太翔 王超 宫小明 管恩平 《中国家禽》 北大核心 2011年第20期18-20,23,共4页

本研究对从屠宰到加工过程中与鸡肉产品密切接触的次氯酸钠、酒精及穿串用竹签进行相关试验。结果表明,次氯酸钠消毒剂的使用会使次氯酸钠消毒剂残留在肉鸡皮肤中,从而对呋喃西林代谢物的检测造成干扰;经过后池的冲洗之后,对呋喃西林代... 本研究对从屠宰到加工过程中与鸡肉产品密切接触的次氯酸钠、酒精及穿串用竹签进行相关试验。结果表明,次氯酸钠消毒剂的使用会使次氯酸钠消毒剂残留在肉鸡皮肤中,从而对呋喃西林代谢物的检测造成干扰;经过后池的冲洗之后,对呋喃西林代谢物检测的干扰大大降低。加工过程中使用的酒精和竹签,不是检出呋喃西林代谢物的干扰因素。 展开更多

关键词 次氯酸钠 酒精 竹签 呋喃西林

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绿脓杆菌焦磷酸测序检测方法的建立 被引量：4

19

作者 张太翔 孙军 +5 位作者 赵晗 李秀勇 孙涛 刘文鹏 田国宁 韩亮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期53-56,共4页

本试验旨在利用绿脓杆菌的序列信息分析和焦磷酸测序技术,建立一种快速、简单检测绿脓杆菌的方法。从培养的绿脓杆菌中提取DNA,PCR扩增目的基因片段,采用焦磷酸测序技术(pyrosequencing technology,PSQ)针对保守核苷酸区段的测序分析。... 本试验旨在利用绿脓杆菌的序列信息分析和焦磷酸测序技术,建立一种快速、简单检测绿脓杆菌的方法。从培养的绿脓杆菌中提取DNA,PCR扩增目的基因片段,采用焦磷酸测序技术(pyrosequencing technology,PSQ)针对保守核苷酸区段的测序分析。通过焦磷酸测序后获得的序列信息与已知的目的基因的序列比对,能进一步确证毒株的序列信息为绿脓杆菌。利用焦磷酸测序能快速获取核酸的序列信息,可为毒株及早确证奠定基础。 展开更多

关键词 绿脓杆菌 PCR 焦磷酸测序 鉴定

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兽医服务在食品安全中的作用 被引量：3

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作者 张太翔 王炳军 +2 位作者 李峰 田国宁 张金玲 《中国动物检疫》 CAS 2009年第9期14-15,共2页

本文针对兽医服务的职能,结合兽医服务在食品安全中的作用,对兽医从传统到现在的职能转变作一综述。

关键词 兽医 兽医服务 兽医权威部门

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