大肠杆菌青霉素G酰化酶基因及其邻近区域的核苷酸全序列 被引量：8

1

作者 郭礼和 叶增产 +3 位作者 杨钧 王敏 韩恒湘 张其玖 《实验生物学报》 CSCD 1989年第1期99-110,共12页

我们由E.coli AS1.76克隆了青霉素G酰化酶的基因,并且测定了其全部核苷酸序列。青霉素G酰化酶结构基因是由下述功能片段组成的:(1)编码信号肽(26个氨基酸残基)的78个碱基对;(2)编码α-亚基(209个氨基酸残基)的627个碱基对;(3)编码间隔肽... 我们由E.coli AS1.76克隆了青霉素G酰化酶的基因,并且测定了其全部核苷酸序列。青霉素G酰化酶结构基因是由下述功能片段组成的:(1)编码信号肽(26个氨基酸残基)的78个碱基对;(2)编码α-亚基(209个氨基酸残基)的627个碱基对;(3)编码间隔肽(54个氨基酸残基)的162个碱基对;(4)编码β亚基(557个氨基酸残基)的1671个碱基对。此外,我们还发现起始密码子(ATG)前有个核糖体结合位点和启动子序列以及在终止密码子(TAA)之后有个转录终止信号。与最近发表的青霉素G酰化酶基因的DNA序列比较,同源性达99.7%。 展开更多

关键词 青霉素G 酰化酶基因 核苷酸

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大肠杆菌葡萄糖异构酶基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达 被引量：5

2

作者 谭华荣 何松 +2 位作者 庄增辉 薛禹谷 张其玖 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1990年第5期390-397,共8页

本文用穿梭质粒载体pSE-3,进行了大肠杆菌葡萄糖异构酶基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达。把含有1.6kb葡萄糖异构酶基因的pX1200(4.3kb)质粒与pGEM-3(2.9kb)质粒分别用EcoRI酶解,T4DNA连接酶连接,转化E.Coli HB101(Xy1^-,Neo(?)),得到... 本文用穿梭质粒载体pSE-3,进行了大肠杆菌葡萄糖异构酶基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达。把含有1.6kb葡萄糖异构酶基因的pX1200(4.3kb)质粒与pGEM-3(2.9kb)质粒分别用EcoRI酶解,T4DNA连接酶连接,转化E.Coli HB101(Xy1^-,Neo(?)),得到的重组质粒被命名为pX1203(7.2kb);将pX1203与穿梭质粒载体pSE-3分别用HindⅢ酶解,T_4DNA连接酶连接,转化E.Coli HB101,在含有新霉素的木糖培养基上筛选到转化重组体,其重组质粒被命名为pSE×100(10.6kb);把pSE×100转化变铅青链霉菌TK54的原生质体,在硫链丝菌肽(50μg/ml)和新霉素(50μg/ml)的平皿上得到了重组体。经质粒提取,酶切分析,再转化和葡萄糖异构酶活性测定,结果表明,大肠杆菌的葡萄糖异构酶基因确实已在链霉菌中克隆和表达。 展开更多

关键词 基因克隆 葡萄糖异构酶 全连霉菌

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巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶基因的克隆和表达 被引量：4

3

作者 张兰芳 李忠伟 张其玖 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期47-53,共7页

我们分离到了一株产生分泌型青霉素G酰化酶的巨大芽孢杆菌(Bacillus megateriumBM1)。用pBR322作载体,将该菌的青霉素G酰化酶基因克降到大肠杆菌(Escherichia coliMC1061)中,得到含有9.9kb插入片段的重组质粒pBmPA4。分析了该质粒的限... 我们分离到了一株产生分泌型青霉素G酰化酶的巨大芽孢杆菌(Bacillus megateriumBM1)。用pBR322作载体,将该菌的青霉素G酰化酶基因克降到大肠杆菌(Escherichia coliMC1061)中,得到含有9.9kb插入片段的重组质粒pBmPA4。分析了该质粒的限制酶酶切图谱,并经体外缺失获得含4.9kb插入片段的质粒pBmPA5。pBmPA4和pBmPA5在E.coliMC1061中均能表达,表达受苯乙酸诱导。 展开更多

关键词 PGA 巨大芽孢杆菌 基因克隆 表达

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一步法纯化青霉素G酰化酶 被引量：3

4

作者 陈红 颜茂恭 +2 位作者 张其玖 郭尧君 江潮洪 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期463-465,共3页

本文报导了用水平等电聚焦电泳技术由粗酶液一步纯化制得纯青霉素G酰化酶.

关键词 青霉素酰化酶 纯化 一步法

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一种快速检测β－半乳糖苷酶活性的试纸方法 被引量：2

5

作者 袁素莉 付立 张其玖 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1994年第3期271-273,共3页

建立了一种检测β－半乳糖苷酶活性的５－溴－４－氯－３－吲哚－β－半乳糖苷（Ｘ－ｇａｌ）试纸方法，其原理在于酶色原底物Ｘ－ｇａｌ在β－半乳糖苷酶作用下产生蓝色５－溴－４－氯－吲哚．此方法Ｘ－ｇａｌ用量少、操作简便、省时... 建立了一种检测β－半乳糖苷酶活性的５－溴－４－氯－３－吲哚－β－半乳糖苷（Ｘ－ｇａｌ）试纸方法，其原理在于酶色原底物Ｘ－ｇａｌ在β－半乳糖苷酶作用下产生蓝色５－溴－４－氯－吲哚．此方法Ｘ－ｇａｌ用量少、操作简便、省时．适用于基因克隆的检定． 展开更多

关键词 β 半乳糖苷酶 基因克隆 试纸法

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青霉素G酰化酶α亚基Ser177的突变对酶活性的影响 被引量：2

6

作者 王敏 费俭 +1 位作者 郭礼和 张其玖 《实验生物学报》 CSCD 1991年第1期51-54,共4页

用盒式突变和定点突变对大肠杆菌青霉素G酰化酶α亚基177位ser进行了突变研究,结果发现所挑选的突变体均无酶的活力,这一结果可能可以用来解释Ser 177附近肽段和一些青霉素结合蛋白青霉素结合区在一级结构上保持同源性的原因。

关键词 青霉素酰化酶 Α亚基 点突变

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大肠杆菌AE109青霉素G酰化酶的分离纯化及性质研究 被引量：2

7

作者 张其玖 颜茂恭 +1 位作者 陈红 赵武玲 《生物化学杂志》 CSCD 1990年第4期327-333,共7页

由发酵培养液所得大肠杆菌AE109菌体,先经高渗休克处理,继经D-苯甘氨酸-Sepharose 4B和DEAE-纤维素柱层析分离纯化得到青霉素G酰化酶,酶制品在非变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈一条区带,而且可以结晶。在SDS变性条件下解离为α和... 由发酵培养液所得大肠杆菌AE109菌体,先经高渗休克处理,继经D-苯甘氨酸-Sepharose 4B和DEAE-纤维素柱层析分离纯化得到青霉素G酰化酶,酶制品在非变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈一条区带,而且可以结晶。在SDS变性条件下解离为α和β两个亚基。 酶性质的研究结果表明,由大肠杆菌工程菌AE109菌株所得青霉素G酰化酶与其亲本大肠杆菌AS1.76菌株所得青霉素G酰化酶性质相同。 展开更多

关键词 大肠杆菌 青霉素酰化酶 分离 纯化

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大肠杆菌青霉素G酰化酶Trp^(572)残基的定点突变研究 被引量：1

8

作者 费俭 张懋弧 +2 位作者 王应魁 郭礼和 张其玖 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1992年第10期939-942,共4页

大肠杆菌青霉素G酰化酶(PGA,EC3、5、1、11)催化青酶素G侧链的水解,是半合成抗生素工业中的重要应用酶。生物合成的PGA由一个α亚基和一个β亚基共同组成,它的一级结构已全部搞清,但其空间结构尚未见报道。

关键词 青霉素 酰化酶 定点突变 PGA

原文传递

化学修饰对青霉素G酰化酶活性的影响 被引量：1

9

作者 陈红 颜茂恭 张其玖 《生物化学杂志》 CSCD 1991年第6期667-670,共4页

为进一步阐明大肠杆菌AE 109青霉素G酰化酶(PA,E.C.3.5.1.11)的结构与功能关系,研究了数种修饰剂对酶活性的影响;同时测定了四种作用物存在下对各修饰剂修饰酶的影响。结果表明Ser残基处于酶的活性部位,Met残基可能处于与底物结合的部位... 为进一步阐明大肠杆菌AE 109青霉素G酰化酶(PA,E.C.3.5.1.11)的结构与功能关系,研究了数种修饰剂对酶活性的影响;同时测定了四种作用物存在下对各修饰剂修饰酶的影响。结果表明Ser残基处于酶的活性部位,Met残基可能处于与底物结合的部位,His和Cys残基与酶的活性无关。 展开更多

关键词 青霉素酰化酶 PA 化学修饰 酶活性

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利用高梁酒糟固体发酵生产单细胞蛋白饲料的研究

10

作者 熊绿芸 何照范 +2 位作者 王乃亮 张其玖 吴立夫 《贵州农学院学报》 1994年第1期59-63,共5页

在高梁酒糟中接种优质饲料酵母菌种发酵４８小时，烘干粉碎，生产出单细胞蛋白酒糟粉，比原酒糟粉纯蛋白质含量提高２７％～３６％，各种氨基酸平均提高３２％左右，其中赖氨酸提高近８０％，富含维生素和矿质元素。最佳发酵条件为：尿... 在高梁酒糟中接种优质饲料酵母菌种发酵４８小时，烘干粉碎，生产出单细胞蛋白酒糟粉，比原酒糟粉纯蛋白质含量提高２７％～３６％，各种氨基酸平均提高３２％左右，其中赖氨酸提高近８０％，富含维生素和矿质元素。最佳发酵条件为：尿素最适添加量占鲜糟的０．６％，转化成菌体蛋白的转化率为９８．６％；在堆积厚度５ｃｍ浅层固体发酵条件下，培养基最初含水范围６０％～７０％对菌体生长影响无明显差异；温度２８°～３０℃，ｐＨ值４．０～４．５，发酵时间４８小时。添加０．８％的农用过磷酸钙，以满足微生物生长需要及补充单细胞蛋白酒糟粉中钙的不足；添加０．０８％的糖化酶，以水解酒糟残存淀粉。 展开更多

关键词 酒糟 固体发酵 单细胞蛋白 饲料

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大肠杆菌D-木糖异构酶基因的序列分析 被引量：1

11

作者 侯永敏 张其玖 王书锦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期300-306,共7页

大肠杆菌D-木糖异构酶基因由含D-木糖操纵子的质粒pXO100被克隆到pWR13质粒上。以Bal31核酸酶逐步缩短DNA片段的方法,获得了若干个含有不同大小DNA片段的亚克隆,并在质粒上直接测定序列,从中获得了1.6kbDNA片段的核苷酸全序列。其中包... 大肠杆菌D-木糖异构酶基因由含D-木糖操纵子的质粒pXO100被克隆到pWR13质粒上。以Bal31核酸酶逐步缩短DNA片段的方法,获得了若干个含有不同大小DNA片段的亚克隆,并在质粒上直接测定序列,从中获得了1.6kbDNA片段的核苷酸全序列。其中包括长度为1320bp编码440个氨基酸的蛋白质。此外,在其5'端尚有209个核苷酸和3'端82个核苷酸,它们分别含有核糖体结合位点SD序列和D-木糖异构酶基因转录终止区。 展开更多

关键词 D-木糖异构酶 酶基因 序列分析

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青霉素G酰化酶基因Ser177的定点突变 被引量：1

12

作者 彭天剑 张其玖 郭礼和 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1994年第2期155-160,共6页

本研究用缺口双链法对大肠杆菌青霉素Ｇ酰化酶（ＰＧＡ）基因Ｓｅｒ１７７进行寡核苷酸定点突变。通过ＮＩＰＡＢ（２－硝基－５－苯乙酰胺苯甲酸）试纸法筛选和测序鉴定，获得突变体Ｃｙｓ１７７，Ｇｌｙ１７７，Ａｒｇ１７７和Ａｓｎ... 本研究用缺口双链法对大肠杆菌青霉素Ｇ酰化酶（ＰＧＡ）基因Ｓｅｒ１７７进行寡核苷酸定点突变。通过ＮＩＰＡＢ（２－硝基－５－苯乙酰胺苯甲酸）试纸法筛选和测序鉴定，获得突变体Ｃｙｓ１７７，Ｇｌｙ１７７，Ａｒｇ１７７和Ａｓｎ１７７。它们的ＰＧＡ活性均已丧失。酶蛋白电泳分析表明突变体蛋白在体内正常表达。推测ＰＧＡＳｅｒ１７７很可能位于酶底物结合中心，是酶活性所必需，不能被置换。 展开更多

关键词 青霉素 G酰化酶 基因 定点突变

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青霉素G酰化酶β亚基Ser^(579)、Arg^(580)的定点突变研究

13

作者 费俭 林庆聪 +5 位作者 蔡国强 张懋弧 黄勤 王应魁 郭礼和 张其玖 《实验生物学报》 CSCD 1992年第3期289-293,共5页

比较青霉素酰化酶(PGA)和青霉素结合蛋白的一级结构,我们推测PGAβ亚基中565～595肽段可能和酶的底物结合功能有关。为此我们将2.6 kb 长的完整的PGA 基因克隆到pTz 18 U 中构建成质粒pTZGA,并用定点突变的技术对Ser^(579)。和Arg^(580... 比较青霉素酰化酶(PGA)和青霉素结合蛋白的一级结构,我们推测PGAβ亚基中565～595肽段可能和酶的底物结合功能有关。为此我们将2.6 kb 长的完整的PGA 基因克隆到pTz 18 U 中构建成质粒pTZGA,并用定点突变的技术对Ser^(579)。和Arg^(580)两个氨基酸残基进行了突变研究。在所得到的四种突变子中·Ser^(579)→Gly^(579),Arg^(580)→Gly^(580),Arg^(580)→Glu^(580),Arg^(580)→Lys^(580))Glu^(580)和Gly^(580)没有酶活力,Lys^(580)约有30%的酶活力,Gly^(579)约有70%的酶活力。用ELISA 方法检测了四种突变子和野生型酶蛋白表达量,没有显著差异,这表明Arg^(580)对酶活性有重要意义,是酶活力中心的重要组成部分,可能与催化活性有关。 展开更多

关键词 青霉素 酰化酶 定点突变

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青霉素G酰化酶制备,晶体生长及初步晶体学研究

14

作者 伍伯牧 陈红 +1 位作者 袁素莉 张其玖 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期702-704,共3页

用基因工程菌Ｅ．ＣｏｌｉＡＥ１０９生产了青霉素Ｇ酰化酶，该酶经分离纯化后，摸索了晶体生长条件。用ＰＥＧ８０００作为沉淀剂以两种方法获得了晶体。晶体衍射能力超过２．０，初步晶体学研究显示晶胞参数ａ＝５２．１９，ｂ＝６９... 用基因工程菌Ｅ．ＣｏｌｉＡＥ１０９生产了青霉素Ｇ酰化酶，该酶经分离纯化后，摸索了晶体生长条件。用ＰＥＧ８０００作为沉淀剂以两种方法获得了晶体。晶体衍射能力超过２．０，初步晶体学研究显示晶胞参数ａ＝５２．１９，ｂ＝６９．３５，ｃ＝７３．９０，α＝６８．８０°，β＝７１．４０°，γ＝７４．２０°，空间群Ｐ１，收集了一套２．５分辨率的数据。 展开更多

关键词 青霉素G酰化酶 晶体生长 X射线衍射

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