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TNF-α基因转染对胃癌细胞系的生长抑制效应 被引量：7
1
作者 邹卫 王丽君 张乃蘅 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1997年第1期47-50,共4页
本工作以逆转录病毒为载体将TNF-α基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823,经筛选获阳性克隆MKN28-TNF和BCC823-TNF.对TNF基因在肿瘤细胞中的表达及其对肿瘤细胞的作用进行了探讨.证明外源TNF基因在肿瘤细胞中获得表达;肿瘤细胞生长速度明显... 本工作以逆转录病毒为载体将TNF-α基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823,经筛选获阳性克隆MKN28-TNF和BCC823-TNF.对TNF基因在肿瘤细胞中的表达及其对肿瘤细胞的作用进行了探讨.证明外源TNF基因在肿瘤细胞中获得表达;肿瘤细胞生长速度明显减慢,生长抑制率分别达71%和 66%.HTdR掺入率在TNF基因转染细胞明显降低.转染后的肿瘤细胞丧失了裸鼠体内成瘤能力.实验结果表明TNF基因导入胃癌细胞后,细胞生长及致癌能力受到明显抑制,为TNF最终能用于临床胃癌基因治疗提供了有意义的资料. 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤坏死因子 基因疗法
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含人脑钠素多拷贝基因原核系列表达载体的构建 被引量：5
2
作者 任运生 马康涛 张乃蘅 《药物生物技术》 CAS CSCD 1996年第3期129-132,共4页
根据人脑钠素（ＨｕｍａｎＢｒａｉｎＮａｔｒｉｕｒｅｔｉｃＰｅｐｔｉｄｅ，ｈＢＮＰ）的ｃＤＮＡ序列，化学合成四条ＤＮＡ片段，经ＰＣＲ延伸扩增，获得全长ＢＮＰ之ｃＤＮＡ。依ＥｃｏＲⅠ和ＰｓｔⅠ位点插入ＰＢＶ２２１表达质粒... 根据人脑钠素（ＨｕｍａｎＢｒａｉｎＮａｔｒｉｕｒｅｔｉｃＰｅｐｔｉｄｅ，ｈＢＮＰ）的ｃＤＮＡ序列，化学合成四条ＤＮＡ片段，经ＰＣＲ延伸扩增，获得全长ＢＮＰ之ｃＤＮＡ。依ＥｃｏＲⅠ和ＰｓｔⅠ位点插入ＰＢＶ２２１表达质粒，构建成ＰＢＶ２２１／ＢＮＰ重组体。依据ｃＤＮＡ片段中ＢｇｌⅡ和ＢａｍＨⅠ切点的共同粘性末端，依次构建成ＰＢＶ２２１／２ＢＮＰ，ＰＢＶ２２１／３ＢＮＰ………ＰＢＶ２２１／８ＢＮＰ等系列克隆，分别含有不同拷贝首尾串联的ＢＮＰｃＤＮＡ，经ＤＮＡ测序，证实了所构建串联基因的顺序准确性。 展开更多
关键词 脑钠素 多拷贝基因 聚合酶链反应
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多串重组BNP蛋白的裂解、复性及活性测定 被引量：4
3
作者 任运生 马康涛 张乃蘅 《汕头大学医学院学报》 1995年第2期5-7,共3页
在脑钠素编码ｃＤＮＡ的５＇和３＇端分别引入色氨酸密码子，构建成首尾串联的多拷贝基因，经温控表达后，获得由色氨酸连接的多串重复ＢＮＰ蛋白，用色氨酸特异的裂解剂２－硝基酚硫代苯－３－甲基－溴吲哚（ＢＮＰＳ－Ｓｋａｔｏｌｅ... 在脑钠素编码ｃＤＮＡ的５＇和３＇端分别引入色氨酸密码子，构建成首尾串联的多拷贝基因，经温控表达后，获得由色氨酸连接的多串重复ＢＮＰ蛋白，用色氨酸特异的裂解剂２－硝基酚硫代苯－３－甲基－溴吲哚（ＢＮＰＳ－Ｓｋａｔｏｌｅ）和ＤＭＳＯ／ＨＢｒ两种方法裂解，得到ＢＮＰ单体蛋白，经谷胱甘肽氧化还原对复性后测活，检测到了ＢＮＰ较强的舒张血管活性。 展开更多
关键词 脑钠素 BNP 生物活性测定 利钠多肽 基因表达 蛋白裂解
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神经细胞核蛋白质与淀粉样前体蛋白基因启动子IL-Ⅰ反应元件相互作用研究 被引量：2
4
作者 王少文 马康涛 +2 位作者 宋宇蓓 张风云 张乃蘅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第1期52-56,共5页
研究发现与ＩＬ－１诱导反应相关的ＡＰＰ启动子－４８８／－３０３片段，可与ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞核抽提物中的核蛋白发生结合作用，并且在ＩＬ－Ⅰ刺激前后有量的变化，ＩＬ－Ⅰ刺激后其结合作用明显加强．冷竞争实验表明，此结合作用... 研究发现与ＩＬ－１诱导反应相关的ＡＰＰ启动子－４８８／－３０３片段，可与ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞核抽提物中的核蛋白发生结合作用，并且在ＩＬ－Ⅰ刺激前后有量的变化，ＩＬ－Ⅰ刺激后其结合作用明显加强．冷竞争实验表明，此结合作用具有特异性．同时发现ＡＰＰ启动子－４８８／－３０３片段中的ＡＰ－Ⅰ作用位点及ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞核抽提物中的ＡＰ－Ⅰ作用因子可能与此结合反应无关，而一个９０ｋＤ蛋白质与此结合反应有关． 展开更多
关键词 老年性疾呆 白细胞介素I 神经细胞核
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Alzheimer病与相关淀粉样前体蛋白 被引量：1
5
作者 王少文 马康涛 张乃蘅 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 1996年第3期190-192,共3页
Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病与相关淀粉样前体蛋白王少文，马康涛，张乃蘅（北京医科大学分子生物学中心，北京１０００８３）Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）是造成老年性痴呆的主要原因之一，占发病率的６０％以上。ＡＤ患者的神经病理学特征... Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病与相关淀粉样前体蛋白王少文，马康涛，张乃蘅（北京医科大学分子生物学中心，北京１０００８３）Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）是造成老年性痴呆的主要原因之一，占发病率的６０％以上。ＡＤ患者的神经病理学特征是脑组织萎缩，出现大量的淀粉样斑块... 展开更多
关键词 ALZHEIMER病 病理 淀粉样前体蛋白
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二甲基苯蒽对小鼠皮肤表皮鸟氨酸脱羧酶和转化生长因子βmRNA水平的影响
6
作者 孙士勇 张乃蘅 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第1期21-24,共4页
本文利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析技术研究了完全致癌物二甲基苯蒽（ＤＭＢＡ）对小鼠表皮鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）ｍＲＮＡ和转化生长因子β（ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ水平的影响。ＤＭＢＡ在１５μｇ和９００μｇ剂量下一次涂用于小鼠皮... 本文利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析技术研究了完全致癌物二甲基苯蒽（ＤＭＢＡ）对小鼠表皮鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）ｍＲＮＡ和转化生长因子β（ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ水平的影响。ＤＭＢＡ在１５μｇ和９００μｇ剂量下一次涂用于小鼠皮肤，可使表皮ＯＤＣｍＲＮＡ和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达增加。ＯＤＣｍＲＮＡ为单一的２．０ｋｂ大小的条带，其表达在在３６ｈ时最为明显。而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ大小为２．５ｋｂ和１．９ｋｂ，其表达在３６ｈ时最高，到４８ｈ几乎降至正常，但在７２ｈ又有增加。ＯＤＣ和ＴＧＦ－β可能在ＤＭＢＡ诱癌过程中起重要作用。 展开更多
关键词 二甲基苯蒽 致癌物 鸟氨酸脱羧酶
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心钠素多拷贝基因的原核表达及其产物的纯化与测定
7
作者 任运生 张乃蘅 《药物生物技术》 CAS CSCD 1996年第1期1-4,共4页
将含八拷贝心钠素（Ｃａｒｄｉｏｎａｔｒｉｎ，ＣＮ）ｃＤＮＡ的质粒转化大肠杆菌，在ｌａｃ启动子控制下经化学诱导表达。表达的多串蛋白之间由不存在于心钠素序列的赖氮酸相互分开。经分离纯化后，得到８ＣＮ蛋白，电泳表现为单一条... 将含八拷贝心钠素（Ｃａｒｄｉｏｎａｔｒｉｎ，ＣＮ）ｃＤＮＡ的质粒转化大肠杆菌，在ｌａｃ启动子控制下经化学诱导表达。表达的多串蛋白之间由不存在于心钠素序列的赖氮酸相互分开。经分离纯化后，得到８ＣＮ蛋白，电泳表现为单一条带。经赖氨酸酶Ｃ和羧肽酶Ｂ酶切及复性处理后，检测到较强的心钠素放免和生物学活性。 展开更多
关键词 心钠素 大肠杆菌 CDNA 多拷贝基因 纯化
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人APP基因C-末端片段在PC12细胞中的稳定表达及其对细胞生长和发育的影响
8
作者 乌永中 马康涛 张乃蘅 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期9-9,共1页
APP在AD病因学中是一个重要的分子，但到目前为止尚缺乏良好的动物和细胞模型用来探讨APP在AD发病中的作用。本研究旨在建立过表达人APP基因C－末端片段的遗传工程细胞系。将人APP695cDNA中编码C－末端105个氨基酸的片段重组到真核表达... APP在AD病因学中是一个重要的分子，但到目前为止尚缺乏良好的动物和细胞模型用来探讨APP在AD发病中的作用。本研究旨在建立过表达人APP基因C－末端片段的遗传工程细胞系。将人APP695cDNA中编码C－末端105个氨基酸的片段重组到真核表达载体pDORneo中形成重组质粒pDORneo－CT，然后用脂质体将其转染到大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）中。用800μg／mlG418筛选获得了在mRNA和蛋白质水平均表达相应片段的稳定细胞系。细胞形态学观察和MTT，LDH分析表明，该片段在细胞内的表达未能对NGF处理的PC12细胞产生明显的毒性作用。 展开更多
关键词 反转录病毒 表达载体 APPC105 老年性痴呆
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鸟氨酸脱羧酶mRNA在佛波酯刺激的小鼠表皮和化学性诱发的小鼠皮肤肿瘤中的高表达
9
作者 孙士勇 张乃蘅 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期269-269,共1页
巴豆油及其有效成份十四烷酰佛波醋酸酯(12-O-tetradecanoylphorbol—13-acetate,TPA)是目前已知的具有强促癌作用的物质,为当前研究癌变过程,阐明肿瘤促癌机理的一类重要的工具药。将它们局部应用于小鼠皮肤时,一个非常显著的特征就是... 巴豆油及其有效成份十四烷酰佛波醋酸酯(12-O-tetradecanoylphorbol—13-acetate,TPA)是目前已知的具有强促癌作用的物质,为当前研究癌变过程,阐明肿瘤促癌机理的一类重要的工具药。将它们局部应用于小鼠皮肤时,一个非常显著的特征就是小鼠表皮鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC) 展开更多
关键词 皮肤肿瘤 小鼠皮肤 佛波酯 鸟氨酸 化学性 脱羧酶 高表达 mRNA表达 巴豆油 局部应用
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