目的探究硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对吸烟诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC)表型转化及自噬的影响。方法在PASMC上,加入不同浓度(1%~10%)香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE),用四甲...目的探究硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对吸烟诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC)表型转化及自噬的影响。方法在PASMC上,加入不同浓度(1%~10%)香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE),用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞增殖,用蛋白质印迹法测定增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),测定平滑肌蛋白22α(smooth muscle protein 22α,SM22α)水平反映细胞表型转化,测定微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)水平反映自噬变化;加入不同浓度(50~400μmol/L)的硫氢化钠(sodium hydrosulfide,Na HS),研究H2S对CSE诱导的细胞增殖、表型转化及自噬的影响。结果与对照组相比,5%CSE组细胞增殖增加了77.6%(P<0.01);与5%CSE组相比,10%CSE组细胞增殖下降了60.7%(P<0.01)。与对照组相比,5%CSE组PCNA表达增加了90.9%(P<0.05),SM22α表达下降了48.9%(P<0.05),5%CSE组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著升高(P<0.05)。与对照组相比,5%CSE组、5%CSE+50μmol/L Na HS组、5%CSE+100μmol/L Na HS组、5%CSE+200μmol/L Na HS组PASMC增殖均显著增加(P_均<0.01)。与5%CSE组相比,5%CSE+100μmol/L Na HS组CSE诱导的PASMC增殖显著减少(P<0.05);5%CSE+400μmol/L Na HS组对CSE诱导的PASMC增殖抑制作用最强,较5%CSE组下降29.4%(P<0.01)。H2S对CSE诱导的PASMC PCNA表达增加具有抑制作用,5%CSE+200μmol/L Na HS组较5%CSE组抑制了40.9%(P<0.05);5%CSE+400μmol/L Na HS组H2S抑制PCNA表达增加的作用最显著,抑制了59.5%(P<0.01)。5%CSE+400μmol/L Na HS组SM22α表达较5%CSE组增加了53.4%(P<0.05);与对照组相比,5%CSE组PCNA表达显著增加(P<0.05),SM22α表达显著减少(P<0.05)。与5%CSE组相比,5%CSE+400μmol/L Na HS组CSE诱导的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高抑制了45.7%(P<0.01);与对照组相比,5%CSE组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著升高(P<0.05)。结论 H2S能够抑制CSE引起的PASMC增殖和表型转化,其作用机制可能与自噬相关。展开更多
文摘目的探究硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对吸烟诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC)表型转化及自噬的影响。方法在PASMC上,加入不同浓度(1%~10%)香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE),用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞增殖,用蛋白质印迹法测定增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),测定平滑肌蛋白22α(smooth muscle protein 22α,SM22α)水平反映细胞表型转化,测定微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)水平反映自噬变化;加入不同浓度(50~400μmol/L)的硫氢化钠(sodium hydrosulfide,Na HS),研究H2S对CSE诱导的细胞增殖、表型转化及自噬的影响。结果与对照组相比,5%CSE组细胞增殖增加了77.6%(P<0.01);与5%CSE组相比,10%CSE组细胞增殖下降了60.7%(P<0.01)。与对照组相比,5%CSE组PCNA表达增加了90.9%(P<0.05),SM22α表达下降了48.9%(P<0.05),5%CSE组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著升高(P<0.05)。与对照组相比,5%CSE组、5%CSE+50μmol/L Na HS组、5%CSE+100μmol/L Na HS组、5%CSE+200μmol/L Na HS组PASMC增殖均显著增加(P_均<0.01)。与5%CSE组相比,5%CSE+100μmol/L Na HS组CSE诱导的PASMC增殖显著减少(P<0.05);5%CSE+400μmol/L Na HS组对CSE诱导的PASMC增殖抑制作用最强,较5%CSE组下降29.4%(P<0.01)。H2S对CSE诱导的PASMC PCNA表达增加具有抑制作用,5%CSE+200μmol/L Na HS组较5%CSE组抑制了40.9%(P<0.05);5%CSE+400μmol/L Na HS组H2S抑制PCNA表达增加的作用最显著,抑制了59.5%(P<0.01)。5%CSE+400μmol/L Na HS组SM22α表达较5%CSE组增加了53.4%(P<0.05);与对照组相比,5%CSE组PCNA表达显著增加(P<0.05),SM22α表达显著减少(P<0.05)。与5%CSE组相比,5%CSE+400μmol/L Na HS组CSE诱导的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高抑制了45.7%(P<0.01);与对照组相比,5%CSE组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著升高(P<0.05)。结论 H2S能够抑制CSE引起的PASMC增殖和表型转化,其作用机制可能与自噬相关。
