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耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药性及分子机制研究 被引量:7
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作者 安童童 赵志军 +4 位作者 李刚 刘学雷 杨宁爱 贾伟 《宁夏医科大学学报》 2019年第1期19-23,共5页
目的探讨耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药性及其分子机制。方法采用WHONET 5.6软件对某三甲综合教学医院2014-2016年分离的肠杆菌科中耐亚胺培南的细菌进行初筛,采用肉汤稀释法检测碳青霉烯类抗生素对细菌的最低抑菌浓度(MIC),用PCR方... 目的探讨耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药性及其分子机制。方法采用WHONET 5.6软件对某三甲综合教学医院2014-2016年分离的肠杆菌科中耐亚胺培南的细菌进行初筛,采用肉汤稀释法检测碳青霉烯类抗生素对细菌的最低抑菌浓度(MIC),用PCR方法检测blaNDM、blaKPC-2、blaCTX-M-15、blaOXA-48等耐药基因;利用测序方法鉴定blaNDM亚型。结果共筛选出92株耐药菌,标本来源主要为胆汁、痰和无菌中段尿,92株耐药菌主要分离自肝胆外科、ICU和血管外科。药敏试验表明92株耐药菌对阿米卡星的敏感率最高(88%),对其他抗生素敏感率均较低,对头孢呋辛、头孢唑啉和亚胺培南的敏感率低至0。应用PCR检测耐药基因,其中blaNDM、blaCTX-M-15、blaTEM和blaSHV检出率较高,分别为64.1%、64.1%、91.3%和72.8%;blaKPC-2和blaVIM阳性率较低,分别为13.0%和3.3%,未检测出blaOXA-48耐药基因;测序发现59株blaNDM阳性菌中有35株为blaNDM-1,24株为blaNDM-5。结论耐碳青霉烯的肠杆菌科细菌耐药基因检出率高;宁夏地区首次发现blaNDM-5亚型;blaNDM型耐药基因的阳性率高,应加强对基因的监测,控制其在医院内的传播流行。 展开更多
关键词 肠杆菌科 碳青霉烯酶 新德里金属-β-内酰胺酶-1 耐药基因
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慢性阻塞性肺疾病小鼠肠道免疫球蛋白A包被微生物组成及基因功能分析
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作者 李秋洁 +3 位作者 邱卓然 续超 贾伟 汪澎涛 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2676-2689,共14页
【背景】小气道免疫球蛋白A(immunoglobulinA,IgA)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructivepulmonarydisease,COPD)的病理生理学中发挥着重要作用。然而肠黏膜来源的IgA在COPD病程中的作用及包被微生物群尚不明确。【目的】探讨COPD小... 【背景】小气道免疫球蛋白A(immunoglobulinA,IgA)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructivepulmonarydisease,COPD)的病理生理学中发挥着重要作用。然而肠黏膜来源的IgA在COPD病程中的作用及包被微生物群尚不明确。【目的】探讨COPD小鼠肠来源IgA包被肠道微生物组成、丰度及菌群基因功能变化。【方法】采用鼻腔滴入脂多糖和熏香烟法相结合建立COPD小鼠模型。收集COPD小鼠和野生型小鼠粪便样品各12份,IgA磁珠分选IgA包被的肠道微生物菌群,16S rRNA基因高通量测序分析其组成及功能。【结果】通过比较两组肺组织切片染色、平均内衬间隔(meanlinearintercept,mLI)和肺泡灌洗液炎症因子浓度证实COPD模型鼠建模成功。OTU和主成分分析(principal component analysis,PCA)均发现两组间粪便样品中肠来源IgA包被微生物群落差异大,具有可比性。α多样性分析显示两组间物种多样性无显著统计学差异(P>0.05)。物种组成分析显示:两组肠来源IgA包被的菌群结构和菌群差异具有统计学意义(P<0.05)。COPD组的菌群结构中显著富集的菌目是:蛭弧菌目(Bdellovibrionales)、梭菌目(Clostridiales)和双歧杆菌目(Bifidobacteriales);科层面分类中富集的主要是:普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)、梭菌科(Clostridiaceae)、类芽孢杆菌科(Paenibacillaceae)、蛭弧菌科(Bdellovibrionaceae)及双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae);菌属层面分类上主要富集拟普雷沃氏菌属(Alloprevotella)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、狭义梭菌属(Clostridium-sensu-stricto)、苏黎世杆菌属(Turicibacter)、粪杆菌属(Faecalibacterium)、吸血弧菌属(Vampirovibrio)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)。菌群差异基因通过京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)数据库通路富集分析结果显示COPD组细胞生长与死亡、核苷酸代谢以及消化系统相关通路明显上调,而膜运输相关通路显著下调。【� 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 免疫球蛋白A包被肠道微生物 16S rRNA基因测序
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酵素源乳酸菌的益生功能及抑菌特性评价 被引量:2
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作者 肖仔君 钟瑞敏 +2 位作者 陆伟东 林丽芳 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2023年第8期62-68,共7页
为筛选到发酵性能稳定且高效的功能性菌株,以韶关紫背桃源生产的酵素中分离出的12株乳酸菌为试验菌株,测定其益生特性。分别对12株乳酸菌进行了自聚集性、耐酸性,以及对胆盐、胃蛋白酶、胰蛋白酶与抗生素的耐受性和对肠道致病菌的拮抗... 为筛选到发酵性能稳定且高效的功能性菌株,以韶关紫背桃源生产的酵素中分离出的12株乳酸菌为试验菌株,测定其益生特性。分别对12株乳酸菌进行了自聚集性、耐酸性,以及对胆盐、胃蛋白酶、胰蛋白酶与抗生素的耐受性和对肠道致病菌的拮抗作用实验,结果表明:12株受试乳酸菌均表现出良好的自聚集性;除XZJ07外,其他11株菌株在pH值为2.5的模拟胃液中培养3 h存活率仍达75%以上;在人工模拟胃液以及肠液中对胃蛋白酶和胰蛋白酶孵育2、3 h存活率仍超过75%;在含有胆盐浓度为3 g/L MRS培养基中培养3 h后,活菌数仍达10^(6)CFU/mL,另外,受试菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有一定的抑制作用,对大肠杆菌抑菌圈直径均大于15 mm,对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径均大于17 mm;受试菌株对氨苄青霉素敏感,对四环素、红霉素、土霉素较为耐受。研究结果预示着受试菌株具有作为优质益生性发酵剂的潜在能力。 展开更多
关键词 乳酸菌 益生性 耐受性
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一株定植ST23-K1型耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌的耐药性及全基因组分析
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作者 邱卓然 +3 位作者 汪澎涛 郭琴琴 李秋洁 贾伟 《宁夏医科大学学报》 2024年第3期236-244,249,共10页
目的分析肺炎克雷伯菌临床分离株K63[第63号耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)]的毒力耐药情况及全基因组特征。方法收集分离自宁夏某医院新生儿重症监护室男性患儿痰液标本的肺炎克雷伯菌K63株,通过VITEK 2 Compact对其进行鉴定和药物敏... 目的分析肺炎克雷伯菌临床分离株K63[第63号耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)]的毒力耐药情况及全基因组特征。方法收集分离自宁夏某医院新生儿重症监护室男性患儿痰液标本的肺炎克雷伯菌K63株,通过VITEK 2 Compact对其进行鉴定和药物敏感性试验。PCR法检测菌株毒力基因(ybtS、iutA、iucA、iroB、rmpA2、fimH、mrkD、peg344)和耐药基因(bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(NDM)、bla_(IMP)、bla_(OXA-48)、bla_(VIM))。PacBio RSⅢ和illuminate高通量测序平台对其进行全基因组测序、基因组组装及生物信息学分析,获得菌株基因组特征。结果成功从呼吸窘迫和新生儿肺部感染患儿痰液标本中分离出一株CRKP,命名为K63。药敏结果显示其对碳青霉烯类、磺胺类、头孢菌素类、β-内酰胺类、β-内酰胺酶抑制剂复合物等抗生素均耐药。PCR结果显示,毒力基因ybtS、iucA、iutA、rmpA2、iroB、fimH、mrkD、peg344为阳性,同时携带bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(NDM)及bla_(VIM)耐药基因。全基因组测序及组装得到1条完整的基因组序列及1条质粒序列,其基因组大小为5880871 bp,序列比对结果显示K63菌株为ST23-K1型。在染色体基因组基因鉴定中,发现有8种毒力基因,有7种耐药相关基因。质粒携带有bla_(SHV-66)、bla_(SNDM-5)、sul1、mphA和aph(3’)-Ia、tetC、vanA和mexe等耐药基因。clb(ABCDFGHIJKLMNOPQS)、glf、pilW、ibeB等毒力基因也被注释。同时,水平转移区域预测结果显示质粒pVir-CR-63-1具有转移的潜力。基因富集及功能分析显示主要富集于代谢相关通路。结论分离定植的K63株可能为高毒力耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,有潜在传播风险,临床上应予以高度重视。 展开更多
关键词 碳青霉烯耐药 肺炎克雷伯菌 全基因组测序 耐药性 毒力 抗生素
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脓毒症早期发生血流感染患者的临床特点及危险因素分析 被引量:4
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作者 景佩 刘勤富 +3 位作者 杨明月 赵志军 杨晓军 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期608-613,共6页
目的分析宁夏医科大学总医院重症医学科脓毒症患者早期发生血流感染(BSI)的临床特点、发生的危险因素及预后情况。方法采用前瞻性观察研究,纳入2019年11月1日至2021年8月31日宁夏医科大学总医院重症医学科收治的脓毒症患者,脓毒症诊断2... 目的分析宁夏医科大学总医院重症医学科脓毒症患者早期发生血流感染(BSI)的临床特点、发生的危险因素及预后情况。方法采用前瞻性观察研究,纳入2019年11月1日至2021年8月31日宁夏医科大学总医院重症医学科收治的脓毒症患者,脓毒症诊断24 h内留取血培养。记录患者的一般资料、诊断脓毒症24 h内实验室检查指标、血培养结果,随访患者并观察患者预后相关指标,包括机械通气时间、重症监护病房(ICU)住院时间及28 d存活情况。根据患者血培养结果分为BSI组和非BSI组,对两组患者的一般临床特征进行单因素和多因素Logistic回归分析,筛选脓毒症患者早期发生BSI的危险因素。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),评价各危险因素对脓毒症患者早期发生BSI的预测价值。结果共纳入脓毒症患者202例,其中BSI组62例,非BSI组140例。BSI组患者以合并腹腔感染为主(61.3%),非BSI组以合并肺部感染为主(49.3%)。BSI组脓毒症患者共分离出菌株76株,主要病原菌从多到少依次为大肠埃希菌26株(34.2%)、肺炎克雷伯菌11株(14.4%)、肠球菌7株(9.2%)、脆弱拟杆菌6株(7.9%)和金黄色葡萄球菌6株(7.9%)。BSI组与非BSI组之间的机械通气时间、ICU住院时间、28 d病死率比较差异均无统计学意义。单因素分析显示,两组间体温、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)、入ICU前使用抗菌药物、腹腔感染、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、血肌酐(SCr)、总胆红素(TBil)、血小板计数(PLT)、血乳酸(Lac)及高降钙素原(PCT)水平比例比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素Logistic分析显示,低PLT〔优势比(OR)=1.004,P=0.019〕、高Lac(OR=1.314,P=0.002)、高体温(OR=1.482,P=0.027)、合并腹腔感染(OR=2.354,P=0.040)、入ICU前未使用抗菌药物(OR=2.260,P=0.049)是脓毒症患者早期发生BSI的独立危险因素。ROC曲线分析显示,PLT、Lac、体温、腹腔感染及入ICU前� 展开更多
关键词 脓毒症 血流感染 重症监护病房 危险因素 预后
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耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌分子流行病学特征及耐药性 被引量:3
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作者 兰敏 赵志军 +5 位作者 王艺璇 李佳铭 刘春兰 马慧慧 贾伟 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1053-1059,共7页
目的探讨耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的分子流行病学特征,研究CRE耐药特点及同源性。方法收集宁夏某医院2018年1月—2021年5月临床分离的158株非重复CRE,采用聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因,应用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合EDT... 目的探讨耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的分子流行病学特征,研究CRE耐药特点及同源性。方法收集宁夏某医院2018年1月—2021年5月临床分离的158株非重复CRE,采用聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因,应用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)进行表型确证,采用质粒接合试验分析bla_(NDM)水平转移情况,运用多位点序列分型(MLST)进行同源性分析。结果158株CRE主要为肺炎克雷伯菌(61株,38.61%),其次是阴沟肠杆菌(37株,23.42%)和大肠埃希菌(23株,14.56%),检出CRE最多的科室为ICU和烧伤整形科,CRE标本来源排名前四的分别是痰、脓性分泌物、引流液和无菌中段尿,检出耐药基因以新德里金属-β-内酰胺酶(NDM)为主。23株大肠埃希菌mCIM联合eCIM试验阳性率达95.65%,质粒接合试验成功将20株大肠埃希菌中15株菌株的bla_(NDM)基因转移到大肠埃希菌J53AZ^(R),接合子菌株对亚胺培南、美罗培南和头孢菌素类抗生素的耐药性较受体菌增强。MLST结果显示,23株大肠埃希菌中检出14种ST型,以ST10和ST410为主。结论该院CRE多来源于ICU,以携带bla_(NDM)基因为主,对临床常用抗菌药物具较高耐药性,医院应当加大抗菌药物使用监管力度,指导临床合理用药。该地区NDM酶亚型逐渐变化,应持续监测以及时发现新亚型。 展开更多
关键词 耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌 分布 耐药性 大肠埃希菌 新德里金属β-内酰胺酶 质粒接合
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Differentiation of qualified tea beverages from spoiled ones by the LC-MS-based analysis of their polycarboxylic acids
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作者 李城华 +2 位作者 李慧茹 栗婧 蒋可志 《Food Quality and Safety》 SCIE CSCD 2023年第1期138-144,共7页
Polycarboxylic acids(PACs)are important metabolic products in almost all living bodies,yet current analytical methods for detection of PACs in tea beverages are still unsatisfactory due to the complex matrix and physi... Polycarboxylic acids(PACs)are important metabolic products in almost all living bodies,yet current analytical methods for detection of PACs in tea beverages are still unsatisfactory due to the complex matrix and physicochemical properties of PACs.In this work,a rapid method was developed for the simultaneous determination of 7 PACs,including tartaric acid,α-ketoglutaric acid,malic acid,malonic acid,cis-aconitic acid,succinic acid,and fumaric acid,in beverages,based on selective removal of the matrix in combination with liquid chromatography–mass spectrometry(LC-MS)analysis.By stirring with activated carbon and the Na2CO3 solution,the matrix in beverages was selectively removed,and PACs were almost retained in the supernatant of diluted Na2CO3 solution.Under optimized parameters,the limit of quantitation for the PACs was in the range of 1–50 ng/mL,and the content of the PACs in 8 beverages was determined with the recovery range of 72.2%–122.5%.The contents of malic acid,malonic acid,and succinic acid in tea beverages were found to be greater than those in non-tea beverages.Moreover,the concentration of these PACs in beverages was found to be multiplied many times in their deterioration period,especially for fumaric acid andα-ketoglutaric acid.These results indicated that PACs can be selected as a criterion to differentiate qualified tea beverages from spoiled beverages. 展开更多
关键词 Tea beverage DETERIORATION polycarboxylic acid simultaneous determination liquid chromatography-mass spectrometry
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慢性阻塞性肺疾病患者肠道微生物组成及基因功能分析 被引量:3
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作者 苏雅静 +4 位作者 乔霞 汪澎涛 杨宁爱 赵志军 贾伟 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2022年第10期1122-1128,共7页
目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肠道微生物组成、丰度及差异基因功能变化。方法收集我院呼吸科10例确诊COPD患者(COPD组)和10例对照受试者(对照组)粪便样品进行宏基因组高通量测序分析。结果PCA分析组间比较发现2组研究对象粪便样... 目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肠道微生物组成、丰度及差异基因功能变化。方法收集我院呼吸科10例确诊COPD患者(COPD组)和10例对照受试者(对照组)粪便样品进行宏基因组高通量测序分析。结果PCA分析组间比较发现2组研究对象粪便样品微生物群落差异大,具有可比性。物种组成分析显示:对照组粪便样品中高度富集的菌科主要包括毛螺菌科、理研菌科、韦荣球菌科、优杆菌科、臭杆菌科、氨基酸球菌科、乳杆菌科等,属层面富集的主要包括罗斯菌属、胃瘤球菌属、小杆菌属、真杆菌属、拟杆菌属、粪球菌属、双歧杆菌属等;COPD组粪便样品富集菌群主要包括紫单胞菌科、Selenomonadaceae、巨单胞菌属和韦荣球菌属。物种多样性分析与对照组相比,COPD组多样性更低,差异有统计学意义(W=87,P=0.0039)。物种相关性网络图分析显示与其他门类菌群相比,拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门与其他物种的关联性最强(size=52.07、18.87、14.01)。组间差异基因进行GO功能显著性富集分析,差异基因均富集在如细胞学过程、刺激应答、生物学黏附及调节、代谢过程及信号通路等。KEGG功能显著性富集分析显示差异基因主要富集途径包括代谢途径、次生代谢物合成、淀粉和蔗糖的合成、抗生素的合成等。结论COPD患者肠道内存在菌群及基因功能失调。 展开更多
关键词 肠道微生物组 慢性阻塞性肺疾病 宏基因组测序
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基于GIS技术的中国地区牛源弓形虫流行病学及空间分布特征研究
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作者 苏雅静 林雪 +3 位作者 乔霞 王亮 薛頔 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期998-1008,1023,共12页
目的了解我国牛源弓形虫的流行现状及空间分布特征,以期为牛源弓形虫疾病监测和预防策略提供科学依据。方法检索中国知网、百度学术和PubMed数据库,搜集我国区域近40年(1985—2022年)的牛源弓形虫相关文献,应用地理信息系统(Geographica... 目的了解我国牛源弓形虫的流行现状及空间分布特征,以期为牛源弓形虫疾病监测和预防策略提供科学依据。方法检索中国知网、百度学术和PubMed数据库,搜集我国区域近40年(1985—2022年)的牛源弓形虫相关文献,应用地理信息系统(Geographical information systems,GIS)对我国牛源弓形虫的流行情况进行空间定位与表达。结果我国牛源弓形虫血清抗体总阳性率为11.08%(8139/73480,95%CI:10.96%~11.20%)。南方地区比北方地区的牛源弓形虫病问题严重,南方地区牛源弓形虫感染率为14.74%(4332/29383,95%CI:13.46%~16.02%),而北方地区感染率为9.23%(4294/46501,95%CI:8.97%~9.49%),但两者间无统计学差异(χ^(2)=27.964,P>0.05)。牛源弓形虫血清抗体阳性率较高的省份有浙江(27.64%,76/275,95%CI:22.34%~32.94%)、重庆(27.25%,94/345,95%CI:22.57%~31.93%)、西藏(21.97%,76/346,95%CI:22.57%~26.35%)和湖南(20.26%,487/2404,95%CI:12.93%~36.13%)。江西、湖北、香港地区、澳门地区和台湾地区尚未见对牛弓形虫病的流行病学调查。我国牛源弓形虫流行病学调查主要集中在青海、河南、云南、新疆和甘肃等省份,尤其青海地区,涉及的地级县市高达20个。我国牦牛弓形虫血清抗体总阳性率为16.27%(1469/9029,95%CI:15.51%~17.03%)。牦牛弓形虫阳性率较高的省份有四川(33.73%,85/252,95%CI:30.75%~36.71%),西藏(26.96%,62/230,95%CI:21.23%~32.67%)和甘肃(22.53%,639/2836,95%CI:21.00%~24.06%)。与1985—2004年采集的牛源和牦牛源弓形虫感染率相比,2005—2022年我国牛源和牦牛源弓形虫总感染率明显降低(χ^(2)=1393.914,P<0.05)。结论应用GIS技术可视化展现了我国牛源弓形虫的空间分布特征;牛源弓形虫在我国广泛传播,流行周期稳定,且不同地区间的弓形虫阳性率差异很大,应加强对牛源弓形虫感染的监测和防控。 展开更多
关键词 弓形虫病 GIS技术 流行病学 中国
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短链脂肪酸对THP-1细胞和COPD小鼠炎症反应的影响 被引量:2
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作者 张桐 汪澎涛 +3 位作者 杨宁爱 赵志军 贾伟 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期361-367,共7页
目的探讨短链脂肪酸在人单核细胞白血病(THP-1)细胞和慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)中的抗炎作用及意义。方法采用qRT-PCR、ELISA、Western blotting、HE染色、天狼星染色实验方法检测短链脂肪酸处理... 目的探讨短链脂肪酸在人单核细胞白血病(THP-1)细胞和慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)中的抗炎作用及意义。方法采用qRT-PCR、ELISA、Western blotting、HE染色、天狼星染色实验方法检测短链脂肪酸处理前、后的THP-1细胞和COPD小鼠炎症因子变化。结果ELISA和qRT-PCR检测结果表明,COPD患者血清中炎症因子白介素6(interleukin-6,IL-6)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA表达和浓度高于健康人群;THP-1细胞系在LPS刺激后这些炎症因子高表达,经过短链脂肪酸处理后,丁酸盐比乙酸盐和丙酸盐能更好降低这些炎症因子的表达。在COPD小鼠饮水中加入丁酸盐后,通过qRT-PCR和ELISA检测发现,小鼠肺组织炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达降低,外周血炎症因子IL-6和IL-1β浓度降低,但TNF-α浓度并无统计学差异;Western blotting检测蛋白结果表明,转录因子kappa B(NF-κB)磷酸化表达降低,丁酸盐可能通过抑制NF-κB信号通路而抑制炎症因子的表达。结论短链脂肪酸中的丁酸盐能够抑制由LPS诱导的THP-1细胞炎症反应,并对COPD小鼠的炎症起到一定抑制作用。 展开更多
关键词 短链脂肪酸 人单核细胞白血病细胞 炎症反应 慢性阻塞性肺疾病小鼠
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短链脂肪酸对NR8383肺泡巨噬细胞炎性反应的影响 被引量:3
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作者 赵志军 +3 位作者 安童童 刘学雷 杨宁爱 贾伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第6期691-696,共6页
目的探讨短链脂肪酸(SCFAs)在大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383细胞中的抗炎作用。方法将3种短链脂肪酸(乙酸盐、丙酸盐及丁酸盐)与NR8383细胞共孵育,然后分别用LPS刺激及肺炎克雷伯杆菌感染NR8383细胞,采用Western blot检测炎性相关蛋白的表达... 目的探讨短链脂肪酸(SCFAs)在大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383细胞中的抗炎作用。方法将3种短链脂肪酸(乙酸盐、丙酸盐及丁酸盐)与NR8383细胞共孵育,然后分别用LPS刺激及肺炎克雷伯杆菌感染NR8383细胞,采用Western blot检测炎性相关蛋白的表达,q-PCR检测炎性相关蛋白mRNA的表达。结果 LPS刺激组丁酸盐预孵育可显著增加NR8383细胞抗炎因子IL-10在3 h及6 h的表达量,以及12 h的TGF-β的表达量,丙酸盐可降低3 h、12 h的iNOS和NF-κB的表达,同时促炎因子TNF-的表达量在LPS刺激6 h后显著降低;q-PCR检测显示,丁酸盐和丙酸盐分别可增加3 h、6 h IL-10 mRNA的表达量(t=4.912,P<0.05),且丁酸盐组表达量>丙酸盐组。与其他两种短链脂肪酸相比丙酸盐降低TNF-mRNA表达的作用更显著(t=13.26,P<0.05)。Kpn刺激组中,与对照组相比丙酸盐可显著增加6 h时抗炎因子IL-10及TGF-β的表达量;丁酸盐可降低3 h和6 h时NF-κB蛋白表达;同时3种短链脂肪酸都可降低6 h的TNF-的表达,以丁酸盐的效应显著;q-PCR检测显示,丁酸盐可显著增加3 h和6 h时IL-10 mRNA的表达量(t=4.41,P<0.05),丙酸盐可显著增加6 h时IL-10 mRNA的表达量(t=5.616,P<0.05)。3种短链脂肪酸都可降低TNF-mRNA的表达,以丁酸盐的效果更显著(t=100.3,P<0.05)。结论短链脂肪酸在NR8383细胞中发挥一定的抗炎效应,尤以丙酸盐和丁酸盐的抗炎效应更显著。 展开更多
关键词 短链脂肪酸 NR8383 抗炎效应
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黄芪甲苷对急性髓系白血病HL60细胞系增殖和凋亡的影响 被引量:2
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作者 杨红 贾伟 +7 位作者 周云花 杨宁爱 苏雅静 乔霞 汪澎涛 赵志军 《宁夏医科大学学报》 2021年第6期590-594,602,共6页
目的探讨不同浓度黄芪甲苷对急性髓系白血病HL60细胞系增殖和凋亡的影响。方法用含不同浓度黄芪甲苷的培养液培养HL60细胞,CCK-8实验和台盼蓝染色法检测细胞增殖及生长情况;流式细胞术和Hochest 33258染色实验检测细胞凋亡情况;Real tim... 目的探讨不同浓度黄芪甲苷对急性髓系白血病HL60细胞系增殖和凋亡的影响。方法用含不同浓度黄芪甲苷的培养液培养HL60细胞,CCK-8实验和台盼蓝染色法检测细胞增殖及生长情况;流式细胞术和Hochest 33258染色实验检测细胞凋亡情况;Real time PCR和Western blot方法检测细胞Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平变化情况。结果与对照组相比,160μmol·L^(-1)和320μmol·L^(-1)黄芪甲苷均可降低HL60细胞存活率(P均<0.01)。经10、20、40、80μmol·L^(-1)黄芪甲苷干预72 h后,HL60细胞凋亡比率逐渐升高(P<0.01),细胞出现核固缩、核碎裂等凋亡形态变化越明显。Real time PCR和Western blot实验结果发现,细胞凋亡促进因子Bax的基因转录水平和蛋白表达水平均升高(P均<0.05),细胞凋亡抑制因子Bcl-2的基因转录水平和蛋白表达水平均下降(P均<0.05)。结论一定药物浓度干预下,黄芪甲苷可抑制急性髓系白血病HL60细胞增殖并诱导其发生凋亡。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 急性髓系白血病 增殖 凋亡
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免疫球蛋白、轻链及比值在慢性肾脏疾病中的应用价值 被引量:2
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作者 唐秀英 李莉 +3 位作者 蔡永梅 苏荣 席向红 《宁夏医学杂志》 CAS 2018年第3期237-239,共3页
目的探讨免疫球蛋白IgG、IgA、IgM,补体C3、免疫球蛋白轻链κ/λ比值变化在慢性肾衰竭与肾病综合征患者诊断中的价值。方法在特种蛋白分析仪上通过免疫散射比浊法检测58例CRF患者、43例NS患者及50例健康体检者血清免疫球蛋白IgG、IgA、I... 目的探讨免疫球蛋白IgG、IgA、IgM,补体C3、免疫球蛋白轻链κ/λ比值变化在慢性肾衰竭与肾病综合征患者诊断中的价值。方法在特种蛋白分析仪上通过免疫散射比浊法检测58例CRF患者、43例NS患者及50例健康体检者血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM,补体C3、免疫球蛋白轻链κ、λ含量并计算κ/λ值,同时利用全自动生化分析仪检测24 h TP-U含量。结果与正常组比较,CRF患者免疫球蛋白IgM、C3显著降低(P<0.05),κ/λ比值增高(P<0.05),但免疫球蛋白IgG、IgA差异无统计学意义(P>0.05),与正常组比较,NS患者免疫球蛋白IgG、C3降低(P<0.05),IgM、κ/λ比值增高(P<0.05),但IgA差异无统计学意义(P>0.05);比较NS组与CRF组,NS组IgM较CRF组显著增高(P<0.05),IgG较CRF组显著降低(P<0.05),C3较CRF组降低不明显,但IgA、κ/λ与CRF组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性肾脏疾病患者免疫球蛋白、免疫球蛋白轻链、补体、尿蛋白及轻链比值都有一定的变化规律可寻,可以作为慢性肾脏损害疾病的无创伤指标,对临床诊疗、监测及预后具有重要意义。 展开更多
关键词 免疫球蛋白 轻链 κ/λ比值
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弓形虫感染对THP-1巨噬细胞极化影响的研究 被引量:2
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作者 刘学雷 王云杰 +5 位作者 杨宁爱 安童童 贾伟 苏雅静 赵志军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期902-907,共6页
目的探讨弓形虫感染对体外诱导的人外周血单核细胞(Human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)极化特点的影响。方法用佛波酯(PMA)诱导THP-148h使之由悬浮的单核细胞诱导为贴壁的巨噬细胞,体外选择不同时间点感染弓形虫,用Diff... 目的探讨弓形虫感染对体外诱导的人外周血单核细胞(Human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)极化特点的影响。方法用佛波酯(PMA)诱导THP-148h使之由悬浮的单核细胞诱导为贴壁的巨噬细胞,体外选择不同时间点感染弓形虫,用Diff染色分析弓形虫在细胞内的增殖情况。Western blot检测极化相关蛋白,Q-PCR检测mRNA的表达情况。结果成功诱导得到贴壁的巨噬细胞模型,感染弓形虫后,M1型巨噬细胞标志性蛋白iNOS及M2型巨噬细胞标志型蛋白Arg-1 36h表达量与对照组差异明显(t=10.23,P<0.05)。Q-PCR的结果显示不同的处理组IL-1、IL-12、iNOS和TNF-α逐渐减少,而IL-10、Arg-1呈逐渐增加,到36h达到顶峰(t=9.587,P<0.05)。结论弓形虫RH株感染THP-1巨噬细胞后可以在胞内生长增殖,THP-1细胞感染后向M2型巨噬细胞方向极化。 展开更多
关键词 THP-1 弓形虫感染 巨噬细胞极化
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弓形虫RH株调节JAK1-STAT6信号通路诱导人原代肺泡巨噬细胞极化的研究 被引量:2
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作者 刘学雷 杨宁爱 +5 位作者 杨红 周云花 苏雅静 赵志军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第9期1005-1009,共5页
目的探讨弓形虫感染人原代肺泡巨噬细胞的特点以及调节JAK1-STAT6信号通路对人肺泡巨噬细胞极化的影响。方法收集肺癌患者肺泡灌洗液,分离纯化肺泡巨噬细胞并作细胞爬片处理,体外选择1∶1的比例感染弓形虫并设置不同感染时间,Diff染色... 目的探讨弓形虫感染人原代肺泡巨噬细胞的特点以及调节JAK1-STAT6信号通路对人肺泡巨噬细胞极化的影响。方法收集肺癌患者肺泡灌洗液,分离纯化肺泡巨噬细胞并作细胞爬片处理,体外选择1∶1的比例感染弓形虫并设置不同感染时间,Diff染色分析巨噬细胞内弓形虫的增殖情况。分别在不同感染时间收集细胞,提取全蛋白,Western blot检测信号通路蛋白的表达;Trizol法提取mRNA,反转录为cDNA后采用Real-time PCR检测相关mRNA的表达。结果成功分离并纯化得到肺泡巨噬细胞并感染弓形虫。Diff染色显示弓形虫可在肺泡巨噬细胞生存繁殖,从24 h开始弓形虫繁殖力较为明显增强,36 h时弓形虫数量显著增多并且从细胞内释放到细胞外。Western blot检测M1型巨噬细胞信号通路蛋白STAT1、P-STAT1和P-NF-κB呈先增高后降低的趋势,以P-NF-κB先升高后增加的趋势尤为明显;M2型巨噬细胞信号通路JAK1、STAT6和P-STAT6信号通路蛋白也呈现逐渐升高的趋势,iNOS的表达呈显著降低的趋势,Arg-1的表达量在6 h时较高(t=9.35,P<0.05)。Real-time PCR检测TNF mRNA相对表达量逐渐降低,iNOS mRNA相对表达量在6 h时升高,之后降低;Arg-1 mRNA相对表达量的相对表达量逐渐升高,48 h时表达量升高尤为显著(t=4.27,P<0.05)。结论弓形虫感染能诱导巨噬细胞表达M2型细胞炎性因子,并抑制M1型细胞因子的表达,可通过JAK1-STAT6信号通路调节人原代肺泡巨噬细胞向M2型巨噬细胞偏移。 展开更多
关键词 JAK1-STAT6信号通路 巨噬细胞极化 弓形虫
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鲍曼不动杆菌abaI基因的克隆表达分析、同源建模及分子对接分析 被引量:1
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作者 乔霞 苏雅静 +2 位作者 汪澎涛 贾伟 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2886-2893,共8页
高丝氨酸内脂合成酶(homoserine lactone synthase,abaI)是导致鲍曼不动杆菌生物被膜形成的关键酶之一,对其结构功能的研究有助于我们对抑制生物被膜形成有很大帮助。本研究通过Genebank查找abaI(A1S_0109)蛋白序列,运用分子技术对其进... 高丝氨酸内脂合成酶(homoserine lactone synthase,abaI)是导致鲍曼不动杆菌生物被膜形成的关键酶之一,对其结构功能的研究有助于我们对抑制生物被膜形成有很大帮助。本研究通过Genebank查找abaI(A1S_0109)蛋白序列,运用分子技术对其进行表达分析,应用生物分析软件ExPASy、ESPript、MEG5.0、SWISS-MODEL等对其进行结构分析,使用分子对接软件分析抑制剂的关键结合位点。结果显示,在含有pET28a-abaI重组质粒BL21菌株与野生BL21菌株相比生物被膜形成能力以及运动性显著增高。从生成生物膜被膜的定义上,BL21从不产生物被膜菌株,变成了产膜菌株。预测其结构蛋白与TofI蛋白高度相似,通过分子对接首次揭示abaI蛋白抑制剂与abaI蛋白相互作用关系。研究结果显示abaI在BL21中能够促使生物被膜的形成和增强细菌的运动,分子对接揭示了abaI蛋白的相互作用位点,为进一步研究其活性以及抑制剂提供了重要的参考信息。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 abaI 生物被膜 克隆与表达 分子对接
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一株杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子分型及肠毒素检测
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作者 苏雅静 乔霞 +4 位作者 汪澎涛 杨宁爱 贾伟 赵志军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第6期649-653,659,共6页
目的 对宁夏某医院临床分离的1株杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(PVL^(+) MRSA)菌株进行分子分型和肠毒素检测分析,以了解该菌株的遗传学特征。方法 按AxyPrep质粒小量制备试剂盒说明书提取细菌DNA,利用葡萄球菌染色体基因... 目的 对宁夏某医院临床分离的1株杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(PVL^(+) MRSA)菌株进行分子分型和肠毒素检测分析,以了解该菌株的遗传学特征。方法 按AxyPrep质粒小量制备试剂盒说明书提取细菌DNA,利用葡萄球菌染色体基因盒mec(staphylococcal cassette chromosome mec,SCCmec)分型、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)以及金黄色葡萄球菌表面蛋白A基因多态性分型(staphylococcus protein A,Spa)技术对PVL^(+) MRSA分离株进行分子分型。采用PCR法检测金黄色葡萄球菌7个管家基因(arcC,aroE,tpi,pta,glpF,gmk和yqiL),将测序结果与MLST数据库进行比对。采用微孔板酶联免疫法(ELISA)检测PVL^(+) MRSA分离株中5种传统肠毒素(staphylococcal enterotoxins A-E,SEA-SEE)的表达情况。结果 对PVL^(+) MRSA分离株进行SCCmec基因的多重PCR扩增,扩增产物经测序比对分析,确定该菌株为SCCmecⅣa型。PCR扩增金黄色葡萄球菌7个管家基因后测序比对,获得PVL^(+) MRSA分离株的序列型(sequence types,STs)为ST 3191。PCR扩增spa基因并测序,测序结果与Spa Serve数据库比对,未检出PVL^(+) MRSA分离株的Spa型别(non-typeable,NT)。ELISA检测PVL^(+) MRSA分离株产B和C混合型葡萄球菌肠毒素。结论 PVL^(+) MRSA分离株的分子型为ST 3191-MRSA-SCCmecⅣa型,且产B和C混合型葡萄球菌肠毒素,属于社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 分子分型 PCR 肠毒素
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弓形虫Ⅱ型ROP16蛋白对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383炎性反应的影响
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作者 党甜甜 贾伟 +6 位作者 陈梅 潘亚菲 杨宁爱 苏雅静 汪澎涛 赵志军 《宁夏医科大学学报》 2022年第4期360-366,共7页
目的探讨弓形虫Ⅱ型ROP16蛋白对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383炎性反应的影响。方法实验设置空白对照组(正常NR8383细胞)、空载组(pHBLV-CMV)和ROP16过表达组(pHBLV-CMV ROP16),构建ROP16过表达慢病毒载体并转染至NR8383细胞中,经筛选得到稳... 目的探讨弓形虫Ⅱ型ROP16蛋白对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383炎性反应的影响。方法实验设置空白对照组(正常NR8383细胞)、空载组(pHBLV-CMV)和ROP16过表达组(pHBLV-CMV ROP16),构建ROP16过表达慢病毒载体并转染至NR8383细胞中,经筛选得到稳转细胞系,利用RT-PCR和Western blot法验证慢病毒在ROP16过表达组是否转染成功;免疫荧光法确定ROP16蛋白在NR8383细胞中的定位;Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、核转录因子κB(NF-κB)、磷酸化核转录因子κB(P-NF-κB)、信号转导与转录激活因子1(STAT1)及磷酸化转录活化蛋白1(P-STAT1)蛋白的表达情况;RT-PCR检测iNOS、Arg-1及炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β、IL-10 mRNA水平的表达情况;ELISA检测培养上清中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β、IL-10的含量。结果ROP16过表达慢病毒成功稳转NR8383细胞,镜下可观察到明显绿色荧光;免疫荧光结果显示,ROP16蛋白定位于NR8383细胞核中;Western blot结果显示,ROP16过表达组中M1型巨噬细胞表面标志蛋白iNOS的表达高于空白对照组,其通路蛋白NF-κB、P-NF-κB、STAT1、P-STAT1的表达均高于空白对照组(P均<0.05),而M2型巨噬细胞表面标志蛋白Arg-1表达低于空白对照组(P<0.05);RT-PCR结果显示,ROP16过表达组iNOS及促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA均升高(P均<0.01),而Arg-1及抗炎因子TGF-β、IL-10 mRNA均下降(P均<0.05);ELISA结果显示,过表达组中促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-12含量均高于空白对照组(P均<0.05),而抗炎因子TGF-β和IL-10的表达均低于空白对照组(P均<0.05)。结论弓形虫Ⅱ型ROP16定位于NR8383巨噬细胞核中并稳定表达,同时向M1型巨噬细胞方向极化,引发促炎反应。 展开更多
关键词 Ⅱ型ROP16蛋白 NR8383细胞 巨噬细胞极化
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弓形虫毒力相关效应分子ROP16Ⅲ诱导人肺腺癌A549细胞的基因表达谱 被引量:1
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作者 苏雅静 乔霞 +4 位作者 汪澎涛 杨宁爱 贾伟 赵志军 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2021年第4期473-479,486,共8页
目的利用生物信息学方法分析刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白16Ⅲ(ROP16Ⅲ)重组表达载体转染人肺腺癌A549细胞后的基因表达谱,筛选致病候选基因。方法构建真核表达载体pEGFP-N1-ROP16Ⅲ。将A549细胞分为未转染组、pEGFP-N1组、... 目的利用生物信息学方法分析刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白16Ⅲ(ROP16Ⅲ)重组表达载体转染人肺腺癌A549细胞后的基因表达谱,筛选致病候选基因。方法构建真核表达载体pEGFP-N1-ROP16Ⅲ。将A549细胞分为未转染组、pEGFP-N1组、pEGFP-N1-ROP16Ⅲ组,后两组分别用pEGFP-N1、pEGFP-N1-ROP16Ⅲ质粒进行瞬时转染,48 h后收集各组细胞,提取总RNA,纯化后进行芯片杂交分析,筛选差异表达基因(DEG)。将DEG进行基因本体(GO)功能富集分类和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。利用ToppGene从DEG中筛选弓形虫ROP16Ⅲ致病候选基因。利用STRING在线分析软件对候选基因所编码的蛋白质进行蛋白间相互作用(PPI)网络分析。结果pEGFP-N1-ROP16Ⅲ转染A549细胞后共有566个基因表达差异显著,其中382个基因上调,184个基因下调。对DEG进行生物信息学分析,共获得997条GO注释和50条KEGG信号通路。这些DEG参与了多种生物学过程,包括防御反应、I型干扰素信号通路、先天免疫应答、对外界生物刺激的反应等;参与的信号通路主要集中在抗原处理及呈递,细胞质DNA传感通路,Toll样受体信号通路,NOD样受体信号通路等。ToppGene筛选共获得14个弓形虫ROP16Ⅲ致病候选基因,其中C-X-C基序趋化因子配体11(CXCL11)、Toll样受体3(TLR3)、C-C基序趋化因子26(CCL26)、人类白细胞抗原-E(HLA-E)、早幼粒白血病基因(PML)及信号转导子与转录激活因子2(STAT2)等6个基因在弓形虫方面的研究尚未见报道。PPI网络构建分析发现,DEG编码的蛋白质PPI网络由376个节点(蛋白质)和1152条边(相互作用关系)组成,STAT2、HLA-E和PML位于PPI网络的中心节点处,删除这些关键节点后PPI网络结构涣散。通路富集分析结果显示,CXCL11等6个基因共涉及12条信号通路,主要与趋化因子信号通路、Toll样受体信号通路、程序性坏死、内吞作用及细胞因子-细胞因子受体相互作 展开更多
关键词 弓形虫ROP16Ⅲ 表达谱 生物信息学 蛋白互作网络
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弓形虫Ⅰ型ROP16蛋白对THP-1细胞炎性反应的影响及其机制研究
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作者 陈梅 贾伟 +6 位作者 党甜甜 潘亚菲 杨宁爱 苏雅静 汪澎涛 赵志军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第12期1420-1424,1453,共6页
目的探究弓形虫Ⅰ型ROP16蛋白对THP-1细胞炎性反应的影响及相关机制。方法构建过表达ROP16(pHBLV-CMV ROP16)和空载体(pHBLV-CMV)慢病毒,转染THP-1细胞,建立稳定过表达ROP16细胞组、空载体及未转染的空白对照,转染72 h后荧光显微镜下观... 目的探究弓形虫Ⅰ型ROP16蛋白对THP-1细胞炎性反应的影响及相关机制。方法构建过表达ROP16(pHBLV-CMV ROP16)和空载体(pHBLV-CMV)慢病毒,转染THP-1细胞,建立稳定过表达ROP16细胞组、空载体及未转染的空白对照,转染72 h后荧光显微镜下观察绿色荧光表达情况,采用RT-PCR与Western blot检测ROP16 mRNA及蛋白在THP-1细胞中的表达,验证转染情况;稳转细胞采用RT-PCR检测炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-12(IL-12)mRNA表达水平;通过免疫荧光法检测ROP16蛋白在THP-1细胞中的定位;采用Western blot检测THP-1细胞中炎性小体NLRP3、Caspase-1蛋白的表达水平。结果构建的过表达ROP16重组慢病毒成功稳转THP-1细胞,可观察到表达的绿色荧光蛋白;免疫荧光法检测ROP16蛋白定位于THP-1细胞核;pHBLV-CMV ROP16过表达慢病毒载体转染THP-1细胞后ROP16mRNA表达水平较未转染组上调(t=43.63,P<0.01),促炎细胞因子IL-1β、IL-18及炎性小体NLRP3 mRNA表达水平上调(t值分别为12.91、25.61、30.26,均P<0.05),而IL-12 mRNA下调(t=42.35,P<0.01),抗炎细胞因子IL-10 mRNA上调(t=91.39,P<0.05);Western blot显示,pHBLV-CMV ROP16过表达组ROP16蛋白相对表达量高于空白组和空载体组(t值分别为15.67、15.13,P<0.05),炎性小体NLRP3与Caspase-1蛋白相对表达量高于空载体组和空白组(t=22.22、11.29,P<0.05)。结论构建的过表达ROP16重组慢病毒可在THP-1细胞内稳定表达ROP16蛋白,且定位于THP-1细胞核。该蛋白通过调节NLRP3炎性小体进一步促进细胞炎性反应的发生。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 ROP16 THP-1细胞 炎性反应
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